“La modulación de la vía de señalización mTOR por

miRNAs podría estar implicada en la respuesta a

corticoides en pacientes con colitis ulcerosa activa”

Naves, Juan Enrique1; Manyé, Josep1; Loren, Violeta1; Mañosa, Miriam1; Moret, Inés 2; García-Jaraquemada, Arce1;

Bastida, Guillermo2; Beltran, Belén2; Cabré, Eduard1; Domènech, Eugeni1.

PI11/01691

• Los glucocorticoides (GC) son el tratamiento de elección de

los brotes moderados y severos de colitis ulcerosa (CU).

• Sin embargo, alrededor de un 40% de pacientes presentará

una respuesta inadecuada a los mismos.

• Existen variables clínicas y analíticas que aplicadas al tercer

día de tratamiento permiten predecir una mala respuesta, pero

no conocemos completamente los mecanismos moleculares

subyacentes responsables de refractariedad.

Colitis ulcerosa y glucocorticoides

Mecanismos de acción de los GC

Proteínas pro-inflamatorias

Mecanismos de acción de los GC

GC

GC GC

X Proteínas

pro-inflamatorias

miRNA

5’ 3’ RNAm

miRNAs (miR) y respuesta a GC

Proteínas pro-inflamatorias

miRNA

5’ 3’ RNAm

miRNAs (miR) y respuesta a GC

Proteínas pro-inflamatorias

miRNA

5’ 3’ RNAm RNAm miRNA

RNAm

RNAm

RNAm

RNAm

miRNA

miRNA

miRNA

miRNA

miRNAs (miR) y respuesta a GC

Proteínas pro-inflamatorias

• Estudiar el transcriptoma (miRNA- RNAm) de mucosa

rectal de pacientes con CU activa respondedores

(RE) y no respondedores (noRE) a GC.

Objetivo

Esteroides

1mg/Kg/día

Basal

Brotes moderados y severos de CU

Biopsias recto

3er día

Material y Métodos

Biopsias recto

Esteroides

1mg/Kg/día

Basal 7mo día Respondedores GC

Montreal S0 o S1

No respondedores GC

Montreal S2 o S3

Brotes moderados y severos de CU

Biopsias recto

3er día

Material y Métodos

Esteroides

1mg/Kg/día

Biopsias recto

Esteroides

1mg/Kg/día

Basal 7mo día Respondedores GC

Montreal S0 o S1

No respondedores GC

Montreal S2 o S3

Brotes moderados y severos de CU

Biopsias recto

3er día

Material y Métodos

Esteroides

1mg/Kg/día

Biopsias recto

24 pacientes

(48 muestras)

Esteroides

1mg/Kg/día

Basal 7mo día Respondedores GC

Montreal S0 o S1

No respondedores GC

Montreal S2 o S3

Brotes moderados y severos de CU

Biopsias recto

3er día

RIN > 8

30 muestras miRNA

RNAm Microarray

(+ PCR)

Material y Métodos

Esteroides

1mg/Kg/día

Secuenciación

Biopsias recto

RIN > 7

32 muestras

Expresión diferencial:

• p ajust < 0,05

•FC ≥1,5

24 pacientes

(48 muestras)

Flujo de trabajo

Respondedores basal

(n=8)

No respondedores 3 día

(n=6)

Respondedores 3 día

(n=9)

No respondedores basal

(n=7)

infraexpresado

sobreexpresado

Expresión diferencial de miR (secuenciación)

miR-1246

miR-183-5p

miR-5701

miR-625-3p

miR-3607-3p

miR-1246

miR-1291

miR-625-3p

miR-5701

miR-1246

miR-449a,b,c

miR-4770

Resultados

P ajustada < 0,05 FC ≥1,5

miR-1246

miR-4770

miR-449a

miR-145-3p

miR-1291

Respondedores basal

(n=8)

No respondedores 3 día

(n=6)

Respondedores 3 día

(n=9)

No respondedores basal

(n=7)

infraexpresado

sobreexpresado

Expresión diferencial de miR (secuenciación)

miR-1246

miR-183-5p

miR-5701

miR-625-3p

miR-3607-3p

miR-1246

miR-1291

miR-625-3p

miR-5701

miR-1246

miR-449a,b,c

miR-4770

Resultados

P ajustada < 0,05 FC ≥1,5

miR-1246

miR-4770

miR-449a

miR-145-3p

miR-1291

Respondedores basal

(n=8)

No respondedores 3 día

(n=6)

Respondedores 3 día

(n=9)

No respondedores basal

(n=7)

infraexpresado

sobreexpresado

Expresión diferencial de miR (secuenciación)

miR-1246

miR-183-5p

miR-5701

miR-625-3p

miR-3607-3p

miR-1246

miR-1291

miR-625-3p

miR-5701

miR-1246

miR-449a,b,c

miR-4770

Resultados

P ajustada < 0,05 FC ≥1,5

miR-1246

miR-4770

miR-449a

miR-145-3p

miR-1291

Respondedores basal

(n=8)

No respondedores 3 día

(n=6)

Respondedores 3 día

(n=9)

No respondedores basal

(n=7)

infraexpresado

sobreexpresado

Expresión diferencial de miR (secuenciación)

miR-1246

miR-183-5p

miR-5701

miR-625-3p

miR-3607-3p

miR-1246

miR-4770

miR-449a

miR-145-3p

miR-1291

miR-1246

miR-1291

miR-625-3p

miR-5701

miR-1246

miR-449a,b,c

miR-4770

Resultados

P ajustada < 0,05 FC ≥1,5

Respondedores basal

(n=8)

No respondedores 3 día

(n=6)

Respondedores 3 día

(n=9)

No respondedores basal

(n=7)

infraexpresado

sobreexpresado

Expresión diferencial de miR (secuenciación)

miR-1246

miR-183-5p

miR-5701

miR-625-3p

miR-3607-3p

miR-1246

miR-4770

miR-449ª

miR-145-3p

miR-1291

miR-1246

miR-1291

miR-625-3p

miR-5701

miR-1246

miR-449a,b,c

miR-4770

Resultados

P ajustada < 0,05 FC ≥1,5

Estudio in silico de miRNAs

miR-1246

miR-625

miR-1291

(*) Target Human Scan database (http://www.targetscan.org)

Potenciales targets (*)

miR-183

miR-3607

miR-145

miR-4770

miR-449

Estudio in silico de miRNAs

miR-1246

miR-625

miR-1291

3745 RNAm

(*) Target Human Scan database (http://www.targetscan.org)

Potenciales targets (*)

6658 RNAm

5618 RNAm

miR-183 4239 RNAm

miR-3607 6142 RNAm

miR-145 5464 RNAm

miR-4770 5497 RNAm

miR-449 5646 RNAm

Estudio in silico de miRNAs

miR-1246

miR-625

miR-1291

(*) Target Human Scan database (http://www.targetscan.org)

(**) GeneCodis web (http://www.genecodis.cnb.csic.es)

Potenciales targets (*) Potenciales vías enriquecidas (**)

miR-183

miR-3607

MAPKinasa; regulación del citoesqueleto; endocitosis.

MAPKinasa; endocitosis; vía de señalización del calcio.

MAPKinasa; regulación del citoesqueleto; endocitosis.

MAPKinasa; endocitosis; vía de señalización de insulina.

MAPKinasa; regulación del citoesqueleto; endocitosis.

miR-145 MAPKinasa; endocitosis; regulación del citoesqueleto.

miR-4770 Interacción citoquina-receptor; adhesión focal; endocitosis.

miR-449 MAPKinasa; adhesión focal; endocitosis.

3745 RNAm

6658 RNAm

5618 RNAm

4239 RNAm

6142 RNAm

5464 RNAm

5497 RNAm

5646 RNAm

Respondedores basal

(n=9)

No respondedores 3 día

(n=8)

Respondedores 3 día

(n=9)

No respondedores basal

(n=6)

DDIT4 o REDD1

ns

ns

ns

Expresión diferencial de RNAm (microarrays)

Resultados

P ajustada < 0,05 FC ≥1,5

Resultados de microarrays validados por PCR

Resultados

R2 lineal = 0,841

Validación de microarrays mediante PCR

secuenciación microarrays

Resultados

miR-1246

miR-625

miR-1291

miR-183

miR-3607

miR-145

miR-4770

miR-449

DDIT4 REDD1

DDIT4 REDD1

miR-1246

miR-625

miR-1291

miR-183

miR-3607

miR-145

miR-4770

miR-449

secuenciación microarrays

Resultados

miR-3607 miR-625 miR-183

DDIT4 / REDD1

Resultados

DDIT4 / REDD1 y la vía mTOR

DDIT4 / REDD1 y la vía mTOR

miR-625 miR-183 miR-3607

miR-183 miR-145

miR-183 miR-145

miR-183

miR-145

miR-145

miR-145

miR-145

miR-145

miR-1246 miR-183 miR-145 miR-449a

miR-1246 miR-1291 miR-4770 miR-3607

miR-1246 miR-1291 miR-625

miR-1246

miR-1246 miR-1291 miR-3607

miR-1246 miR-145

miR-1291 miR-625 miR-183 miR-4770 miR-1291

miR-625 miR-4770

miR-1291 miR-183 miR-625

miR-1291 miR-3607

miR-1291 miR-183 miR-145

miR-1291 miR-625 miR-3607

miR-1291

miR-625 miR-4770

miR-625 miR-1246

miR-625 miR-145

miR-625 miR-183 miR-3607

miR-145

miR-3607

miR-3607

DDIT4 / REDD1 y la vía mTOR

miR-1291

• Existe un perfil diferencial de miR en la mucosa rectal de

pacientes con CU activa RE y noRE a GC, incluso antes de

iniciar el tratamiento.

• La regulación de la expresión génica por miR podría

desempeñar un importante papel en la respuesta a GC.

• Los miR diferenciales entre RE y noRE podrían modular

diferentes genes de la vía mTOR, que podría a su vez estar

implicada en la respuesta a GC.

• Serán necesarios más estudio para confirmar estos hallazgos.

Conclusiones