Post on 27-Jun-2015
BACILOS GRAM POSITIVOS
Universidad de AntofagastaTecnología Médica
Año 2007TM Alicia Marcoleta R.
BACILOS GRAM (+)
AEROBIOS O ANAEROBIOS FACULTATIVOS
ANAEROBIOS
NO ESPORULADOS NO ESPORULADOSESPORULADOS ESPORULADOS
Listeria
Corynebacterium
Erisipelothrix
Nocardia
Brochothrix thermosphacta
Bacillus Lactobacillus
Propionibacterium
Bifidobacterium
Actinomyces
Eubacterium
Mobiluncus
Clostridium
Género Corynebacterium
Género Corynebacterium Bacilos Gram positivos (a
veces se tiñen irregularmente).
Pequeños y pleomórficos (configuraciones de “V” o “Y”).
Extremos redondeados. Disposición en empalizada
o letras chinas.
Género Corynebacterium
Pueden presentar corpósculos metacromáticos (tinción de azul de metileno).
Ubicuo (plantas, animales) y colonizan normalmente piel, tracto respiratorio superior, digestivo y genitourinario humanos.
46 especies descritas más de 30 asociadas a enfermedades humanas.
Inmóviles. Catalasa +. Fermentan los hidratos de
carbono ácido láctico. Cepas lipofílicas
necesitan medios con suplementos especiales para crecer.
Género Corynebacterium
Género Corynebacterium
La mayoría se presenta como patógenos oportunistas (endocarditis, infecciones pulmonares), siendo pocas especies asociadas con mayor frecuencia a
patologías:
Principales manifestaciones clínicas del Género Corynebacterium
Inf. del tracto respiratorio, endocarditis.C. pseudodiphteriticum
ITUs (pielonefritis, cistitis con litiasis alcalina), endocarditis, inf. de heridas.
C. urealyticum (grupo D2)
Septicemia, endocarditis, inf. de heridas, inf. asociadas a cuerpo extraño, infecciones oportunistas (en inmunocomprometidos)
C. jeikeium (grupo JK)
Endocarditis, ArtritisC. xerosis
DifteriaC. diphtheriae
MANIFESTACION CLINICAESPECIE
El más conocido es Corynebacterium diphtheriae, agente etiológico de la
difteria.
Corynebacterium diphtheriae
Historia Corynebacterium diphtheriae se le conoce también como
bacilo de Klebs-Loeffler. Fue descubierto en 1883 por Theodor Albrecht Edwin
Klebs en Zurich. Ese mismo año, Loeffler pudo cultivar el germen in vitro
y reproducir en cobayos una infección acompañada de síntomas similares a los de la enfermedad humana.
El hecho de que Loeffler demostrase que algunos animales eran inmunes a la difteria fue fundamental para que Emil von Behring desarrollara luego la antitoxina.
Corynebacterium diphtheriae Bacilos Gram positivos pleomórficos. Tamaño: 0.3-0.8 x 1.0-8.0 μm. Anaerobio facultativo. Modelo clásico de virulencia bacteriana. Agente etiológico de la Difteria:
Infección localizada en las mucosas o en la piel. Forma una pseudomembrana característica.
Se clasifica en biotipos según la morfología de la colonia: mitis, intermedius y gravis.
No necesita penetrar al torrente circulatorio para producir sintomas
sistémicos de la enfermedad.
Virulencia Exotoxina A-B:
Codificado por gen toxse introduce por un fago lisogénico a cepas de C. diphtheriae.
Inhibe la síntesis de proteínas al inactivar el factor de elongación 2.
Induce: Estimulación respuesta inmune Lesiones degenerativas
miocardio, riñón, hígado, glándulas suprarrenales y tejido nervioso.
ESCISION DE
PUENTES DISULFURO
REGION CATALITICA
Manifestaciones clínicas
Difteria cutánea Difteria respiratoria
Sin incidencia estacional
Difteria respiratoria Período de incubación: 2-6 días. Daño local primario en células epiteliales de
la faringe. Síntomas: malestar general, dolor de
garganta, faringitis exudativa y febrícula. Formación de pseudomembrana dificil de
desprender sangrado caracteristico.
PSEUDOMEMBRANA DIFTERICA Enfermedad aguda de las amígdalas, faringe, laringe y nariz.
Se caracteriza por una o varias placas de membranas
grisáceas adherentes confluentes e invasoraspseudomembrana
Letalidad: 5-10%
Difteria cutánea Contacto directo. Patógeno llega al tejido subcutáneo:
PAPULAULCERA
QUE NO CURA +MEMBRANA GRISACEA
EXOTOXINA
SIGNOS SISTEMICOS
Epidemiología Difteria Distribución universal mantenida por portadores
asintomáticos y huéspedes no vacunados. Puede causar epidemias:
1944 gran epidemia en la Unión Soviética: 48.000 casos y 1746 muertes.
Humanos: único reservorio conocidoorofaringe y piel.
Transmisión persona a persona Contacto cutáneo o aerosoles.
Control Se basa en las siguientes medidas:
prevención primaria de la enfermedad con un alto nivel de cobertura de inmunización;
prevención secundaria de la propagación mediante la investigación rápida de contactos cercanos, a fin de que reciban tratamiento oportuno;
prevención terciaria de las complicaciones y las defunciones mediante el diagnóstico temprano y la atención adecuada y oportuna. En Chile, durante 1997 y 1998 no se han
notificado casos de difteria.
Tratamiento Uso precoz de antitoxina diftérica para
neutralizar la exotoxina. El tratamiento de la toxina con formaldehido la convierte en
un toxoide La inmunización con el toxoide diftérico origina la
producción de anticuerpos (antitoxinas).
Penicilina. Vacuna diftérica en población susceptible.
Difteria en Chile:
Fuente: Minsal Chile.
Se considera BROTE la presencia de 2 o más casos con vinculación epidemiológica
Diagnóstico
Diagnóstico Muestras:
Difteria: Tórula faríngea. Otras infecciones: Sangre, Orina, secreciones.
MEDIOS DE CULTIVO:
-Agar Sangre
-Agar Sangre-Telurito
-Agar Tinsdale modificado
-Caldo fermentación con indicador Andrade
•Glucosa, maltosa, sacarosa, manitol,
Xilosa, trealosa•Ureasa
•Gelatinasa
TINCION DE GRAM: Informe preliminar
“Bacilos gram positivos difteromórficos”
INCUBAR37ºC
18-24 HRS.*Telurito: 48 hrs.
Colonias:PAS: -tamaño mediano 1-2 mm-color gris
PATEL(Agar Sangre Telurito):-Negro grisáceas-Opacas por reducción de telurito a teluro.
Biotipos:•Gravis: grandes, planas gris-negras.•Mitis: más pequeñas, brillantes.•Intermedius: muy pequeñas, pueden o no ser brillantes.
AGAR TINSDALE MTM
Colonias:
Café
Producción de halo negro alrededor de la colonia:
Reducción de Telurito de potasio a telurito metálico
Pruebas bioquímicas
Diagnóstico definitivo: Determinación de producción de toxina diftérica
de la cepa ya sea “in vivo”, por inoculación experimental o “in vitro” por Test de Elek.
PCR
En caso de C. diphtheriae notificar inmediatamente al clínico tratante.
Tira impregnada con antitoxina+inóculo grueso. Incubación x 24 hrs. Si la cepa es toxigénica = formación de linea de
rx Ag-Ac:
Sensibilidad antibiótica C diphtheriae: sensible a:
Penicilina, eritromicina, etc. No hacer ATB
Corynebacterium sp.: ATB en agar MH 5% sangre Vancomicina, ciprofloxacino, norfloxacino, tetraciclina,
gentamicina, cloranfenicol, penicilina.
Género Listeria
Género Listeria Bacilos gram positivos. Tamaño pequeño: 0.4-0.5 x 0.5 x 2 μm. Aislados, pares o cadenas cortas. Anaerobios facultativos. Toleran alta concentración de sales. No capsulados.
Género Listeria Móviles a Tº ambiente (flagelos perítricos) Inmóviles a 37ºC. Crecen en amplios rangos de pH ( 5.5-9.5) y Tº (3-
42ºC).
Género Listeria Formado por 7 especies:
Listeria monocytogenes: único patógeno humano. Listeria ivanovii* Listeria seeligeri* Listeria welshimeri Listeria innocua Listeria grayi
Listeria monocytogenes
Bacilos gram positivos. Disposición: en diplo. Anaerobio facultativo. β-hemólisis leve. Móviles a Tº ambiente. Crecen a 4ºC. Resistente a
refrigeración, disecación y calentamiento.
Listeria monocytogenes
La patogenia de L. monocytogenes se basa en su habilidad para sobrevivir y multiplicarse
dentro de la célula huésped fagocítica.
Patógeno facultativo intracelular evita la opsonización.
Mortalidad alta: 20-30%
Virulencia Proceso patogénico:
Internalización: Internalinas (In1A,
In1B,In1C) Ruptura de la vacuola:
Listeriolisina O 2 fosfolipasas C (PlcA,
PlcB) Movimiento intracelular:
polimerización de actina ActA:
Ruptura de membrana: Fosfolipasa
DOSIS MINIMA INFECCIOSANO HA SIDO DETERMINADA
“Listeria monocytogenes: a multifaceted model”, Mélanie Hamon, Hélène Bierne and Pascale Cossart, NATURE REVIEWS MICROBIOLOGY, JUNE 2006, VOLUME 4.
ActA
PlcA
PlcB
Listeriolisina O
In1A,In1B, In1C
Fosfolipasa
Causa la enfermedad alimenticia listeriosis en personas susceptibles:
Poblaciones susceptibles Niños pequeños y ancianos Mujeres embarazadas (tercer trimestre) Neonatos Inmunodeprimidos (SIDA) Terapia inmunosupresivas para malignidad o
transplante de órganos Predisposición a enfermedades (alcoholismo,
diabetes, cirrosis del hígado)
Manifestaciones clínicas
El período de incubación de la listeriosis es en promedio de 3 a 4 semanas (3 a 90 días).
Listeriosis neonatal Comienzo precoz (in utero) o Granulomatosis infantiséptica.
Alta tasa de mortalidad sino recibe tratamiento. Abcesos + granulomas diseminados.
Comienzo tardío (post-parto). Meningitis o Meningoencefalitis con septicemia. Sintomas/signos no exclusivos.
•Recién nacido de 39 semanas y 3400 grs. con septicemia por Listeria monocytogenes.
Decaimiento, hepatoesplenomegalia, monocitosis, fiebre.
Escasa participación pulmonar y circulatoria.
Obsérvense lesiones cutáneas.
Listeriosis en adultos inmunocomprometidos Meningitis forma más frecuente. Signos/Síntomas inespecificos, pero
sospechar en caso de pacientes transplantados, con cáncer, embarazadas, etc.
Epidemiología Ubicuo: agua, suelo, alimentos, tubo
digestivo de animales y hombre. Fuente de infección: alimentos
contaminados: productos lácteos y cecinas. Transmisión nosocomial: maternidades. Mayor incidencia en meses más cálidos.
Listeria monocytogenes aislada de alimentosSantiago, Chile. 1990 - 1997. ISP
a Incluidos 443 embutidos (20 contaminados), 160 patés ( 2 ) y 31 jamones (1 )
77 ( 3.6)2145Total
31 (11.6)268Mariscos
23 (3.6)634Cecinasa
0229Biberones
0155Quesos duros
2 (0.8)256Quesos blandos
21 (3.5)603Helados
PositivasN° MuestrasAlimento
Tratamiento y Control Penicilina o Ampicilina
solas o asociadas a Gentamicina.
Evitar consumo de alimentos de origen de animal crudo o mal cocido, quesos no tratados, verduras crudas.
Diagnóstico
Identificación está basada en el buen aislamiento del organismo, caracterización
bioquímica y confirmación serológica.
Microscopía no es sensible. Cultivos requieren incubación prolongada o
enriquecimiento (frío). Identificación test bioquímicos y
serológicos: 13 serotipos: 1/2a, 1/2b y 4binfecciones
neonatos y adultos.
Diagnóstico
TINCION DE GRAM
Diagnóstico Muestras:
Sangre Secreción vaginal Loquios Heces Secreción gástrica Conducto auditivo externo Meconio
TRANSPORTE:Agua peptonada
0.1% a 4ºCdentro de 24 hrs.
Cultivo: Caldo tripticasa de soya Agar Sangre Agar Oxford Agar LPM
Colonias: 0,5 a 1, 5 mm Redondas Translúcidas β-hemólisis leve
Aislamiento en muestras clínicas contaminadas
Homogeneizar la muestra. Inocular 1 ml muestra en 9 ml caldo Tripticasa de soya con
extracto de levadura (TSAYE). Incubar a 4°C por 3 meses y subcultivar en PAS y
Agar Oxford
1º mes 2º mes 3º mes semanal quincenal quincenal
ENRIQUECIMIENTO EN FRIO
INCUBAR CALDO TSAYE A 30ºC X 7 DIAS
SUBCULTIVAR
AGAR LPM AGAR OXFORD
24 HRS 48 HRS 7 DIAS
Aislamiento en muestras clínicas contaminadas
METODO CORTO
1. Homogeneizar la muestra.
2. Inocular 1 ml muestra en 9 ml caldo TSAYE + inhibidores: ác. nalidíxico, cicloheximida, acriflavina.
3. Incubar a 30°C por 7 días
Colonias:
Verdosas café con halo de precipitación negro
Hidroliza esculina a esculetina y forma complejo con iones hierro.
Elimina flora acompañante
AGAR OXFORD
Recupera L. monocytogenes de muestras clínicas contaminadas.
Colonias:
-Observarlas bajo luz transmitida oblicua.
-Grises a azul brillante con aspecto de vidrio molido
AGAR LPM
Pruebas bioquímicas: Catalasa + Hidrólisis Esculina + Crecimiento NaCl 6,5% + Movilidad: agar semisólido/líquido ”paraguas”
+-
Identificacion bioquimica (API): Utilización de carbohidratos
Nitratasa Catalasa
Test de CAMP +Listeria monocytogenes Streptococcus agalactiae
DETERMINACION DE Listeria monocytogenes EN MUESTRAS DE
ALIMENTOS
25 G DE MUESTRA225 ML DE CALDO DE ENRIQUECIMIENTO
24 – 48 HORAS A 30ºC
AGAR OXA A 35ºC POR 24 – 48 HRSY
AGAR LPM A 30 ºC POR 24 – 48 HRS
5 COLONIAS TIPICASAGAR SOYA TRIPTICASA CON 0,6% DE
EXTRACTO DE LEVADURA 30ºC POR 24-48 HRS
ETAPA DE ENRIQUECIMIENTO
ETAPA DE AISLAMIENTO
• EXAMEN DE PLACAS TSA (ILUMINACION DE HENRY)• EXAMINAR COLONIAS CON LENTES DE INMERSION• CATALASA• TINCION GRAM• FERMENTACION DE CARBOHIDRATOS•REDUCCION DE NITRITOS• TEST DE CAMP
ETAPA DE IDENTIFICACION
Sensibilidad (in vitro)
Penicilina, Ampicilina Eritromicina Cloranfenicol Tetraciclina Rifampicina
Tratamiento de elección:
Penicilina , ampicilina asociado a un
aminoglicósido.
Características de las especies de Listeria
¡GRACIAS!