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UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR FACULTAD DE CIENCIAS MÉDICAS CARRERA DE LABORATORIO CLÍNICO E HISTOTECNOLÓGICO “DETERMINACIÓN POR MICROELISA DE ANTICUERPOS IgM CONTRA EL VIRUS DEL DENGUE, EN DONANTES DE SANGRE DE LA PROVINCIA DEL GUAYAS, EN EL HEMOCENTRO DE LA CRUZ ROJA ECUATORIANA, EN EL PERIODO OCTUBRE – DICIEMBRE 2015” Trabajo de fin de carrera previo a la obtención del Título de Licenciada en Laboratorio Clínico e Histotecnológico AUTORA: Villamarin Hidalgo Evelin Yesenia TUTOR: Msc. Mercedes Elisabeth Tapia Cadena QUITO, ABRIL 2016
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UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE CIENCIAS MÉDICAS
CARRERA DE LABORATORIO CLÍNICO E HISTOTECNOLÓGICO
“DETERMINACIÓN POR MICROELISA DE ANTICUERPOS IgM
CONTRA EL VIRUS DEL DENGUE, EN DONANTES DE SANGRE DE LA
PROVINCIA DEL GUAYAS, EN EL HEMOCENTRO DE LA CRUZ ROJA
ECUATORIANA, EN EL PERIODO OCTUBRE – DICIEMBRE 2015”
Trabajo de fin de carrera previo a la obtención del Título de Licenciada en
Laboratorio Clínico e Histotecnológico
AUTORA: Villamarin Hidalgo Evelin Yesenia
TUTOR: Msc. Mercedes Elisabeth Tapia Cadena
QUITO, ABRIL 2016
ii
DEDICATORIA
El presente trabajo quiero dedicarlo primeramente a Dios,
quién supo guiarme por el buen camino, darme fuerzas para seguir
adelante y no desmayar en los problemas que se presentaban,
enseñándome a encarar las adversidades sin perder nunca la
dignidad ni desfallecer en el intento.
A mis padres y abuelitos por todo su amor y apoyo
incondicional.
A mi hermana por su cariño y comprensión y a mi abuelito
Jorge que ha sido también mi motivo de orgullo.
A todos ellos mi gratitud porque sirvieron como fuente de
inspiración para la culminación de la misma.
iii
AGRADECIMIENTO
Me complace, a través de este trabajo exteriorizar mi sincero
agradecimiento a la Universidad Central del Ecuador, sobre todo a
la Carrera de Laboratorio Clínico y en ella a los distinguidos
docentes, quienes con su profesionalismo y ética, puesto de
manifiesto en las aulas, enrumban a cada uno de los que acudimos,
con sus conocimientos que nos servirán para ser útiles a la sociedad.
Al Doctor Marco Herdoiza y a la Msc. Mercedes Tapia quien con
sus experiencias, han sido la guía idónea, durante el proceso de
realización de esta tesis, ya que me han brindado el tiempo
necesario así como la información para que este anhelo llegue a su
meta final.
Con cariño
EVELIN VILLAMARIN
iv
AUTORIZACIÓN DE LA AUTORÍA INTELECTUAL
Yo, Villamarin Hidalgo Evelin Yesenia, en calidad de autora del Trabajo de
Investigación o Tesis realizada sobre: “DETERMINACIÓN POR MICROELISA DE
ANTICUERPOS IGM CONTRA EL VIRUS DEL DENGUE, EN DONANTES DE
SANGRE DE LA PROVINCIA DEL GUAYAS, EN EL HEMOCENTRO DE LA
CRUZ ROJA ECUATORIANA, EN EL PERIODO OCTUBRE – DICIEMBRE
2015”, por la presente autorizo a la UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR, hacer
uso de todos los contenidos que me pertenecen o de parte de los que contiene esta obra,
con fines estrictamente académicos o de investigación.
Los derechos que como autor me comprenden, con excepción de la presente
autorización, seguirán vigentes a mi favor, de conformidad con lo establecido en los
artículos 5, 6, 8, 19 y demás de la Ley de Propiedad Intelectual y su Reglamento.
Quito, 01 de Febrero del 2016
Evelin Yesenia Villamarin Hidalgo
CI: 172103244-7
Telf: 0995232816
E-mail: [email protected]
v
INFORME DE APROBACIÓN DEL TUTOR
En mi carácter de Tutor del Trabajo de Grado, presentada por la señorita Villamarin
Hidalgo Evelin Yesenia, para optar el Título de Grado de Licenciada en Laboratorio
Clínico e Histotecnológico, cuyo título es de “DETERMINACIÓN POR
MICROELISA DE ANTICUERPOS IGM CONTRA EL VIRUS DEL DENGUE, EN
DONANTES DE SANGRE DE LA PROVINCIA DEL GUAYAS, EN EL
HEMOCENTRO DE LA CRUZ ROJA ECUATORIANA, EN EL PERIODO
OCTUBRE – DICIEMBRE 2015”, considero que dicho Trabajo reúne los requisitos y
méritos suficientes para ser sometido a la presentación pública y evaluación por parte del
jurado examinador que se designe.
En la ciudad de Quito, el día 01 del mes de Febrero del 2016.
Firma
Msc. Mercedes Tapia
vi
ÍNDICE DE CONTENIDOS
Dedicatoria ...................................................................................................................ii
Agradecimiento .......................................................................................................... iii
Listado de anexos ........................................................................................................ ix
Listado de tablas ........................................................................................................... x
Listado de gráficos ...................................................................................................... xi
Resumen ejecutivo .....................................................................................................xii
Introducción ................................................................................................................. 1
Capítulo I ...................................................................................................................... 3
Planteamiento del problema ......................................................................................... 3
1.1 Formulación del problema .................................................................................. 5
1.2 Delimitación del problema ................................................................................. 5
1.3 Objetivos del problema....................................................................................... 5
1.3.1 Objetivo general ........................................................................................... 5
1.3.2 Objetivos específicos ................................................................................... 5
1.4 Justificación ........................................................................................................ 6
1.5 Hipótesis ............................................................................................................. 8
1.6 Alcance y limitaciones ....................................................................................... 8
Capítulo II .................................................................................................................... 9
Marco teórico ............................................................................................................... 9
2.1 Antecedentes....................................................................................................... 9
2.2 Fundamentación teórica.................................................................................... 10
Dengue ................................................................................................................ 10
Epidemiología ..................................................................................................... 11
vii
Características del vector .................................................................................... 15
Agente causal ...................................................................................................... 16
Componentes del virus del Dengue .................................................................... 17
Ciclo viral intracelular ........................................................................................ 18
Susceptibilidad e inmunidad ............................................................................... 20
Factores de riesgo en la aparición del Dengue. .................................................. 21
Viremia y transmisión ......................................................................................... 22
Clasificación del Dengue .................................................................................... 25
Manifestaciones clínicas ..................................................................................... 27
Impacto en los donantes de sangre ..................................................................... 27
Diagnóstico de laboratorio .................................................................................. 29
Elisa indirecto ..................................................................................................... 32
Detección de IgM anti Dengue ........................................................................... 33
Tratamiento ......................................................................................................... 36
Inmunización ...................................................................................................... 36
Capítulo III ................................................................................................................. 37
3. Marco legal............................................................................................................. 37
3.1 Marco legal institucional .................................................................................. 41
Capítulo IV ................................................................................................................. 43
4. Marco metodológico .............................................................................................. 43
4.1 Tipo de investigación ....................................................................................... 43
viii
4.2 Diseño de la investigación ............................................................................. 43
4.3 Población y muestra ......................................................................................... 43
4.4 Técnicas e instrumentos de recolección de datos ............................................. 44
4.5 Técnicas para procesamiento de datos y análisis de resultados. ...................... 45
4.6 Criterios de inclusión ........................................................................................ 45
4.7 Criterios de exclusión ....................................................................................... 45
4.8 Operacionalización de las variables ................................................................. 46
4.9 Procedimientos y métodos de diagnóstico ....................................................... 49
4.10 Preparación del ensayo ............................................................................... 50
4.11 Aspectos administrativos ................................................................................ 55
4.11.1 Recursos humanos ................................................................................... 55
4.11.2 Recursos físicos ....................................................................................... 55
Capitulo V .................................................................................................................. 57
Análisis e interpretación de resultados ....................................................................... 57
5.1 Discusión .......................................................................................................... 66
5.2 Conclusiones..................................................................................................... 68
5.3 Recomendaciones ............................................................................................. 69
Bibliografía ................................................................................................................ 70
Anexos........................................................................................................................ 78
ix
LISTADO DE ANEXOS
Anexos 1. Muestras de la provincia del Guayas ........................................................ 78
Anexos 2. Muestras y kit de ELISA para procesar en el Laboratorio ........................ 78
Anexos 3. Diluciones de las muestras, para su posterior procesamiento ................... 78
Anexos 4. Fase de Incubación .................................................................................... 79
Anexos 5. Fase de lavado ........................................................................................... 79
Anexos 6. Fase de Conjugado .................................................................................... 79
Anexos 7. Fase de Substrato (TMB) .......................................................................... 80
Anexos 8. Espectrofotómetro ELISA ........................................................................ 80
Anexos 9. Formato de consentimiento para los donantes .......................................... 81
Anexos 10. Hoja de recolección de datos .................................................................. 82
Anexos 11. Vocabulario ............................................................................................. 83
x
LISTADO DE TABLAS
Tabla 1. Enfermedades Transmitidas por Vectores. DENGUE, Ecuador, SE 1 – 53 /
2015 ............................................................................................................................ 11
Tabla 2. Casos de Dengue por cantones.................................................................... 13
Tabla 3. La circulación de serotipos virales de Dengue fue actualizado el lunes 05 de
junio del 2013. ............................................................................................................ 14
Tabla 4. Operacionalización de Variables Independientes ........................................ 46
Tabla 5. Operacionalización de Variables Dependientes ........................................... 47
Tabla 6. Operacionalización de Variables Intervinientes .......................................... 48
Tabla 7. Cronograma de actividades .......................................................................... 56
Tabla 8. Frecuencia de donantes según edad ............................................................. 58
Tabla 9. Frecuencia de donantes según género .......................................................... 59
Tabla 10. Frecuencia de donantes según ocupación .................................................. 60
Tabla 11. Frecuencia de donantes según las provincias del Ecuador ........................ 61
Tabla 12. Frecuencia de los donantes según la zona poblacional .............................. 62
Tabla 13. Frecuencia de donantes según resultados de anticuerpos IgM .................. 63
Tabla 14. Distribución de anticuerpos IgM anti - Dengue según la zona
poblacional………………………………………………………………………….64
Tabla 15. Frecuencia de donantes según el lugar de procedencia de la provincia de
Guayaquil ................................................................................................................... 65
xi
LISTADO DE GRÁFICOS
Gráfico 1. Mapa del Ecuador ..................................................................................... 12
Gráfico 2. Comparación de los casos de Dengue ....................................................... 13
Gráfico 3. Virus de Dengue ....................................................................................... 16
Gráfico 4. Representación esquemática del genoma del virus del Dengue ............... 17
Gráfico 5. Los mosquitos nacen libres de virus ......................................................... 23
Gráfico 6. El virus ...................................................................................................... 23
Gráfico 7. Clasificación de Dengue ........................................................................... 26
Gráfico 8. Métodos diagnósticos para Dengue .......................................................... 30
Gráfico 9. Elisa Indirecto ........................................................................................... 33
Gráfico 10. Escala logarítmica utilizado en el Hemocentro de la CRE (No Reactivo –
Reactivo) .................................................................................................................... 42
Gráfico 11. Frecuencia de donantes según muestras rechazadas o aceptadas ........... 57
Gráfico 12. Frecuencia de donantes según edad ........................................................ 58
Gráfico 13. Frecuencia de donantes según género ..................................................... 59
Gráfico 14. Frecuencia de donantes según la ocupación ........................................... 60
Gráfico 15. Frecuencia de donantes según las provincias del Ecuador ..................... 61
Gráfico 16. Frecuencia de donantes según la zona poblacional ................................. 62
Gráfico 17. Frecuencia de donantes según resultados de anticuerpos IgM ............... 63
Gráfico 18. Distribución de anticuerpos IgM contra el Dengue según la zona
poblacional ................................................................................................................. 64
xii
UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE CIENCIAS MÉDICAS
CARRERA DE LABORATORIO CLÍNICO E HISTOTECNOLÓGICO
TEMA: “DETERMINACIÓN POR MICROELISA DE ANTICUERPOS IGM
CONTRA EL VIRUS DEL DENGUE, EN DONANTES DE SANGRE DE LA
PROVINCIA DEL GUAYAS, EN EL HEMOCENTRO DE LA CRUZ ROJA
ECUATORIANA, EN EL PERIODO OCTUBRE – DICIEMBRE 2015”
AUTORA: Villamarin Hidalgo Evelin Yesenia
TUTOR: Msc. Mercedes Elisabeth Tapia Cadena
RESUMEN
Las enfermedades infecciosas emergentes son una amenaza para la población
humana en general. El dengue se ha expandido rápidamente a nuevas áreas y ha
causado brotes importantes, esto afecta a la disponibilidad del suministro de sangre
a medida que más donantes de sangre se difieren debido a la infección del Dengue.
El objetivo de este estudio es detectar la presencia de anticuerpos IgM anti-dengue
en donantes asintomáticos para determinar la posible existencia de la transmisión
del dengue a través de transfusiones a través de ELISA. Este trabajo se realizó en
ciento ochenta y dos donantes de la provincia de Guayas, fueron informados sobre
el estudio y las muestras fueron procesadas en el Banco de Sangre de la CRE. Los
títulos de anticuerpos IgM obtenidos en el estudio fue de 1,10% del donante
reactivo, mientras que los donantes eran 4,40% zona gris, y 94.51% son donantes
no reactivos para estos anticuerpos.
Palabras claves: DENGUE / IgM / DONANTES DE SANGRE / TRANSFUSIÓN
xiii
UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
SCHOOL OF MEDICAL SCIENCES
CLINICAL LABORATORY
Topic: "DETERMINATION MICROELISA OF IGM ANTIBODIES AGAINST
DENGUE VIRUS IN BLOOD DONORS IN GUAYAS PROVINCE, AT THE
BLOOD BANK ECUADORIAN RED CROSS IN THE PERIOD OCTOBER -
DECEMBER 2015"
Author: Villamarin Hidalgo Evelin Yesenia
Tutor: Msc. Mercedes Elisabeth Tapia Cadena
ABSTRACT
Emerging infectious diseases are a threat to the human population in general.
Dengue has rapidly expanded to new areas and caused major outbreaks, this affects
the availability of the blood supply as more blood donors are deferred due to
dengue infection. The aim of this researching is to detect the presence of IgM anti-
dengue antibodies in asymptomatic donors to determine the possible existence of
dengue transmission by transfusion through ELISA. This studying was done in
hundred and eighty-two donors of Guayas province, were informed about the study
and the samples were processed at the Blood Bank of CRE. IgM antibody titers
obtained in the study was 1.10% of reactive donor, while donors were 4.40% gray
area, and 94.51% are nonreactive donors for these antibodies.
Keywords: DENGUE / IgM / BLOOD DONORS / TRANSFUSION
I CERTIFY that the above and foregoing is a true and correct translation of the
original document in Spanish.
_______________________
María Augusta Arroyo
Certified Translator
ID: 1714887245
1
INTRODUCCIÓN
El virus del Dengue (DENV), de la familia Flavivirus, es responsable de la
morbilidad y la mortalidad, causando aproximadamente 50 millones de infecciones
cada año, existe un número asintomático relativamente alto en la sangre y puede ser
transmitida a través de transfusiones. Por lo tanto, es un riesgo importante para los
sistemas de sangre a nivel mundial.(Siegel et al , 2007)
El Dengue es una enfermedad infecciosa causada por el virus del Dengue, del género
flavivirus y es transmitida por mosquitos, principalmente por el mosquito Aedes aegypti
causado por cuatro serotipos estrechamente relacionadas (DENV-1, DENV -2, DENV E-3
y DENV -4).
El virus del Dengue (DENV) se produce en las regiones tropicales y subtropicales
del mundo donde es un problema de salud pública. La infección con cada uno de los cuatro
serotipos (DENV 1-4) es capaz de causar la fiebre del Dengue, así como Dengue grave.
La Organización Mundial de la Salud (OMS) estima que casi la mitad de la
población mundial vive en países donde el Dengue es endémico. Durante los últimos 50
años, la incidencia de Dengue a nivel mundial se ha incrementado en 30 veces. Este rápido
crecimiento de enfermedades infecciosas se proyecta para causar de 50-100 millones de
infecciones nuevas cada año en más de 100 países endémicos, lo que lleva a la mitad de un
millón de hospitalizaciones.
Según el Ministerio de Salud Pública, la persistencia de la transmisión de la
enfermedad está asociada a determinantes sociales, económicos, ambientales y culturales
que en mayor o menor magnitud están presentes en aproximadamente el 70% de la
extensión territorial del país, donde se estima habitan 8´220.000 habitantes que están en
riesgo de enfermar por esta patología y su vez ser transmitidas a través de transfusiones.
Los análisis de laboratorio en general detectan el Dengue una vez aparecidos los
síntomas, pero en otros casos existen personas asintomáticas portadoras del virus y que al
momento de donar pueden transmitir la enfermedad a los receptores.
2
Las pruebas de antígenos y detección de anticuerpos son ampliamente utilizados
para la confirmación de la infección por Dengue. Sin embargo, el rendimiento de las
pruebas depende de la especificidad y la sensibilidad de los kits de prueba
utilizados. Una alta especificidad es importante si las pruebas se utilizan para confirmar
el Dengue como la causa del brote mientras que la sensibilidad es muy importante si las
pruebas se van a utilizar para apoyar el diagnóstico clínico y para el manejo de casos.
Además, una sola detección serológica de IgM es meramente indicativa de una
infección reciente y no debe ser interpretado como confirmatoria. (Mahapatra et al,
2014)
3
CAPÍTULO I
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
El Dengue es una infección vírica transmitida por mosquitos. La infección causa
síntomas gripales, otras son asintomáticas y en ocasiones evoluciona hasta convertirse
en un cuadro potencialmente mortal llamado Dengue grave.
En las últimas décadas ha aumentado enormemente la incidencia de Dengue en el
mundo. Alrededor de la mitad de la población del mundo corre el riesgo de contraer esta
enfermedad. En las últimas décadas ha aumentado enormemente la incidencia de Dengue
en el mundo. (OMS, 2015)
El Dengue según el Ministerio de Salud Pública en el Ecuador el Dengue representa
un prioritario y creciente problema de salud pública en el contexto de las enfermedades
transmitidas por vectores, mostrando un comportamiento endemo-epidémico desde su
aparición a finales de 1988; año a partir del cual, de manera progresiva y en concordancia
con la dispersión del vector y la circulación de nuevos serotipos virales, se han registrado
varios ciclos epidémicos representando una significativa carga social y económica para el
Estado.
No existe una ley Ecuatoriana para la detección de anticuerpos IgM anti – Dengue en
donantes de sangre. Por ello se corre el riesgo de que los voluntarios donen sangre
infectada y ésta se transfunda, por lo que esta situación es motivo de investigación.
Entre los flavivirus transmitidos por vectores, el virus del Dengue constituyen los
patógenos más frecuentemente observadas, con impacto en la salud pública en regiones
endémicas de todo el mundo. (Tezcan et al, 2014)
Las infecciones por el virus del Dengue transmitida por mosquitos siguen
aumentando, poniendo en peligro la salud de las personas en más de cien países en todo el
mundo. La falta de control eficaz de los mosquitos, vacunas contra el Dengue con licencia
o terapias específicas para el tratamiento de infecciones de Dengue presenta desafíos para
reducir la carga de esta enfermedad. (Hermann et al, 2014)
4
Los factores de riesgo de infección por Dengue han sido objeto de numerosos
estudios, sobre todo en América del Sur y el Sudeste Asiático. La mayoría de los factores
de riesgo identificados son aquellos favorables a la cría de vectores, en particular el
crecimiento sin planificación ni control de los centros urbanos asociados a la
infravivienda, sistema de suministro de agua inadecuada, sistema de gestión de residuos
mal funcionamiento en contextos de alta densidad de vivienda. Por lo tanto, la dimensión
socio-económica es un personaje importante de transmisión del virus. Los factores de
riesgo individuales como el sexo y la raza han sido identificados, pero parecen solicitar la
susceptibilidad a la enfermedad en lugar de la infección. (Demanou et al, 2014)
La transmisión de los agentes infecciosos y contagiosos a través de la transfusión de
hemoderivados y componentes se caracteriza por reacciones adversas tardías que
aumentan los riesgos para los beneficiarios. La sangre segura es garantizada por acciones
que reduzcan al mínimo la posibilidad de transmitir enfermedades por transfusión
incluyendo la proyección clínica y epidemiológica de los donantes y las pruebas
serológicas. Se espera que el virus del Dengue pronto sea incluido en la serología de los
bancos de sangre en las regiones con climas tropicales y subtropicales. (Ribas y Ahmad,
2012)
Existe estudios que se ha comprobado que la transmisión del virus por el Aedes
aegypti no es la única opción, también se puede transmitir por otras vías sin la necesidad
de un mosquito vector. En este caso puede ser por transfusiones de sangre, trasplantes de
órganos, transmisión vertical (transmisión neonatal), transmisión nosocomial y transmisión
mucocutánea, es decir que cualquier agente infeccioso que se encuentre en la sangre de un
individuo puede transmitirse por un accidente o bien mediante transfusiones o trasplantes
de órganos.
Los individuos asintomáticos pueden introducir el virus en el suministro de sangre
por donación, mientras que los receptores pueden sufrir graves consecuencias. Los brotes
de Dengue han dado lugar a respuestas de sangre en los servicios de transfusión que
pueden informar una planificación futura. Informes de transmisión de enfermedades
infecciosas por transfusión demuestran las consecuencias potencialmente fatales de la falta
de hemovigilancia. (Gan et al, 2014)
5
1.1 FORMULACIÓN DEL PROBLEMA
¿Será posible encontrar anticuerpos IgM anti Dengue en donantes de sangre, que
provengan de una provincia endémica?
1.2 DELIMITACIÓN DEL PROBLEMA
El problema se analizará a través del desarrollo de una investigación, junto con la
parte práctica, usando conocimientos acerca de las enfermedades transmisibles por
vectores a través de transfusiones de sangre, buscando como beneficio obtener
hemocomponentes de mayor calidad y evitar fututas complicaciones para el receptor.
1.3 OBJETIVOS DEL PROBLEMA
1.3.1 OBJETIVO GENERAL
Analizar la frecuencia de anticuerpos IgM contra el virus del Dengue, encontrados
en muestras de donantes altruistas de la provincia del Guayas, mediante la técnica de
inmunoensayo en el Hemocentro de la Cruz Roja Ecuatoriana.
1.3.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS
Demostrar si es posible la transmisión de Dengue mediante transfusiones
durante la fase de viremia.
Establecer mediante un control de calidad hemocomponentes sanguíneos
seguros.
Describir los mecanismos de transmisión del Dengue y cómo puede afectar a
los suministros de sangre.
Determinar cuáles son los factores de riesgo para adquirir el virus del Dengue
en los donantes.
6
1.4 JUSTIFICACIÓN
El virus del Dengue ha producido grandes brotes en diversos países. Durante estas
epidemias, los individuos asintomáticos infectados podrían donar sangre y servir como
fuente de difusión del virus en la comunidad. Se necesitan más estudios para determinar el
riesgo de infección por el Dengue como consecuencia de la transfusión en especialmente
durante los períodos epidémicos. (Dias et al, 2012)
El Dengue causa infecciones asintomáticas mucho más frecuentes que los casos
sintomáticos, a veces multiplicando el número real de infecciones, por lo que es razonable
argumentar que al menos una proporción de casos asintomáticos podría alcanzar niveles de
viremia suficiente para infectar a los mosquitos vectores competentes. Además, un número
de nuevas formas de contaminación en el hombre por los virus del Dengue se describió
recientemente como transfusión de sangre, trasplante de médula ósea, y las infecciones
nosocomiales que pueden ser digno de consideración. (Chastel, 2012)
El virus del Dengue es el virus transmitido por artrópodos más importante en
términos de morbilidad y mortalidad humana en América. Un estudio realizado en México,
halló una alta prevalencia de donantes anti-Dengue positivas con manifestaciones
asintomáticas, por lo que la viremia reciente en donantes de sangre sugiere que esta vía de
transmisión podría ser posible.(Rodríguez et al, 2009)
La transmisión del virus del Dengue a través de transfusiones de sangre es un acto
raro. Durante un brote de Dengue en la ciudad de São Paulo, un donante regular de
plaquetaféresis informó al banco de sangre de ser diagnosticado unos días después de la
donación. El receptor fue hospitalizado y se muestra síntomas y pruebas de laboratorio del
Dengue para Dengue después de la transfusión. Este caso trae evidencia adicional de que
el Dengue es realmente transmisible por transfusión de sangre.(Levi et al, 2009)
La prueba de amplificación del ácido nucleico del virus del Dengue en donaciones
de sangre durante las epidemias en lugares endémicos, ha sugerido un posible riesgo de
transmisión transfusional de tamaño considerable.(Petersen et al, 2012)
7
La principal vía de transmisión parece ser por el mosquito vector, sin embargo, se ha
informado de la transmisión por lesiones con agujas, el trasplante de médula ósea y de la
transmisión vertical durante el parto. Informes recientes han demostrado la viremia del
Dengue en donantes de sangre de Honduras, Brasil, Australia y Puerto Rico, que son áreas
endémicas para la infección por Dengue. Técnicamente, es posible que el Dengue se
transmita a través de transfusiones de sangre debido a que los cursos de la enfermedad con
una viremia transitoria después de la infección puedan ser asintomáticos o tener síntomas
leves.(Rodríguez et al, 2009)
Analizar la sangre para identificar antígenos de Dengue en los países endémicos
sería costoso y por lo tanto debe ser recomendado sólo después de una cuidadosa
evaluación de riesgo para la infección durante brotes endémicos..(Wilder et al, 2009)
Este estudio es motivo de investigación, ya que al determinar anticuerpos IgM puede
apuntar a una infección en curso lo que sugiere que el donante está en un estado de
portador del virus. Es concebible que la sangre de tales donantes puede transmitir la
infección a los destinatarios. Como las unidades de sangre no se someten rutinariamente
para el Dengue, unidades reactivas, posiblemente, pueda transmitir la enfermedad. Tal
estudio sirve para poner atención en la práctica transfusional considerando al Dengue
como una amenaza potencial para la seguridad de las transfusiones.(Nurdianah, F., 2014)
8
1.5 HIPÓTESIS
Los donantes de sangre asintomáticos de la provincia del Guayas, por pertenecer a
una zona endémica del Dengue están expuestos a ser infectados por enfermedades
vectoriales y ser transmisibles por transfusiones, riesgo que puede ser controlado por una
mejor Hemovigilancia y capacitación del personal de los Bancos de sangre.
1.6 ALCANCE Y LIMITACIONES
El alcance de este estudio es tratar de solucionar el problema mediante una mejor
Hemovigilancia hacia los donantes, obteniendo sangre y hemoderivados de forma segura y
eficaz, aportando más conocimientos sobre del Dengue, así como también otras
enfermedades de transmisión vectorial, que pueden ser transmitidas por transfusiones.
Las limitaciones de este estudio sería la presencia de falsos IgM reactivos ya que
podría resultar debido a reacciones cruzadas con otros Flavivirus, contaminación durante
el procesamiento de muestras o reactivos, que son evidenciados en los resultados.
9
CAPÍTULO II
MARCO TEÓRICO
2.1 ANTECEDENTES
La primera referencia de un caso de Dengue, aparece en una enciclopedia médica
china donde describe una especie de “agua envenenada” asociada a insectos voladores, que
tras su picadura provocaban unas fiebres muy elevadas (Emerging Infectious Diseases,
2006)
El Dengue, se extendió fuera de África entre los siglos XV y XIX, debido al
desarrollo de la marina mercante y la creciente migración de personas, especialmente en
los siglos XVIII y XIX, lo que ocasionó que las ciudades portuarias crecieran y se
urbanizaran, creando condiciones ideales para el hábitat del mosquito vector, Aedes
aegypti. (Gubler, 2006)
Se pensaba que el Dengue era una enfermedad leve y no mortal, que afectaba a las
personas que visitaban las áreas tropicales. En la actualidad son más frecuentes las
epidemias causadas por serotipos múltiples (hiperendemicidad).(Centros para el control y
la prevención de enfermedades, 2010)
En el caso de Ecuador el Dengue representa un prioritario y creciente problema de
salud pública en el contexto de las enfermedades transmitidas por vectores, mostrando un
comportamiento endémico desde su aparición a finales de 1988; año a partir del cual, de
manera progresiva y en concordancia con la dispersión del vector y la circulación de
nuevos serotipos virales, se han registrado varios ciclos epidémicos.
La ciudad de Guayaquil sufrió epidemia al DEN-1 por primera vez en 1988, que
luego con el de los años se infectó con otros serotipos anteriormente descritos por lo que se
podría pensar que la epidemia que hubo en año 2000 haya sido dada debido, a la
introducción de los serotipos DEN-2 Asiático y DEN-3 los mismos que no existían en
nuestro País. A partir del año 2000, los virus que ingresaron a la ciudad de Guayaquil, se
han ido dispersando con el pasar del tiempo a la provincia del Guayas, ya para el año
2001, se viene monitoreando los casos de Dengue Hemorrágico, obteniéndose para este
año el mayor número de casos confirmados en la ciudad de Guayaquil de la provincia del
Guayas, así como la confirmación de casos en las provincias de Los Ríos, Manabí, El Oro,
Pichincha, Bolívar y Pastaza con 54 casos en el año 2003 se han confirmado 453
casos.(Aguirre, 2004)
10
2.2 FUNDAMENTACIÓN TEÓRICA
DENGUE
El Dengue es un problema de salud pública que afecta a más de la mitad de la
población mundial, es la principal causa de hospitalización y muerte, especialmente para
aquellos que viven en países endémicos.(Naish et al, 2014)
El Dengue es una enfermedad vírica transmitida por mosquitos hembra
principalmente por la especie Aedes aegypti y, en menor grado, por el Aedes albopictus.
(OMS, 2015)
El Dengue es una infección cuyo reservorio y su huésped definitivo es el hombre.
Aparece en regiones tropicales de todo el mundo, principalmente en áreas urbanas, y en los
últimos decenios se ha convertido en un importante problema de salud pública
internacional al aumentar de manera espectacular su incidencia a nivel mundial.
(González, 2011)
Estudios previos indican que el clima y el comportamiento humano interactúan para
influir en el virus del Dengue y del vector (Aedes aegypti). (Stewart et al, 2013)
Se conocen cuatro serotipos distintos, pero estrechamente emparentados, del virus:
DENV-1, DENV-2, DENV-3 y DENV-4. Cuando una persona se recupera de la infección
adquiere inmunidad de por vida contra el serotipo en particular. Las infecciones
posteriores causadas por otros serotipos aumentan el riesgo de padecer el Dengue
grave.(OMS, 2015)
La infección es un espectro de afecciones clínicas que van desde una infección
asintomática, fiebre indiferenciada, la fiebre hemorrágica del Dengue (FHD) hasta el
síndrome de shock por Dengue (SCD).(Teo et al, 2009)
El Dengue se está extendiendo rápidamente a nuevas áreas y con el aumento de la
frecuencia de brotes importantes. Esto afectará la disponibilidad de suministro de sangre a
medida que más donantes de sangre se difieren debido a la infección del Dengue o la
11
exposición a la infección. El riesgo de transmisión a través de transfusiones de sangre de
donantes con viremia asintomáticos también aumentará. (Teo et al, 2009)
EPIDEMIOLOGÍA
El Dengue es el resultado de un problema generado por un desorden ambiental, ya
que ha ido aumentando en numerosas regiones del mundo, por lo que es considerada una
enfermedad infecciosa emergente y un problema de salud pública global. (Ortiz, Z, 2009)
Los factores que han contribuido a la dramática expansión del Dengue incluyen el
crecimiento demográfico, la urbanización, la gestión inadecuada del agua, la falta de
control eficaz contra los mosquitos y viajes globales. En los últimos años, los cambios en
los patrones climáticos pueden haber contribuido a la expansión en el rango del hábitat del
mosquito vector.(Teo et al, 2009)
Dengue según el MSP
Tabla 1. Enfermedades Transmitidas por Vectores. DENGUE, Ecuador, SE 1 –
53 / 2015
Fuente: Casos confirmados de Dengue sin signos de alarma (DSSA), Dengue con signos de alarma
(DCSA) y Dengue grave (DG), por provincias. Ecuador SE 1 – 53 del 2015. MSP, 2015
12
En la semana 1 a la semana 53 del 2015, se confirmaron y reportaron 42.681 casos
de Dengue. De estos 41.003 (96,12%), corresponde a casos de Dengue sin signos de
alarma, 1.622 (3,74%) casos de Dengue con signos de alarma y 56 (0.13%), casos de
Dengue grave. Las provincias con mayor cantidad de casos confirmados son: Manabí,
Guayas, El Oro y Esmeraldas que acumulan el 83,81% (35.738), del total de casos a nivel
nacional.(MSP, 2015)
Gráfico 1. Mapa del Ecuador
Fuente: Total casos de Dengue, por provincias. Ecuador SE 1 – 53 / 2015. MSP, 2015
En la semana 53 se han notificado 63 casos. Del total de casos hasta la semana 53 la
provincia de: Manabí acumula el 30,9% (13.191casos), seguida de Guayas con el 30.30%
(12.902casos), El Oro 14,46% (6.167casos) y Esmeraldas con el 8,1% (3.478casos). Los
Ríos con el 6.05% (2.603casos). Se han notificado hasta la fecha 8 casos de fallecidos por
Dengue. (MSP, 2015)
13
Gráfico 2. Comparación de los casos de Dengue
Fuente: Comparación de los casos de Dengue hasta la semana 1 – 53 del 2015. Nivel Nacional. MSP, 2015
Tabla 2. Casos de Dengue por cantones
Fuente: Casos de Dengue por cantones. GUAYAS hasta SE 53 / 2015. MSP, 2015
14
Circulación de los serotipos Dengue 2012 – 2013
En Ecuador se ha confirmado la circulación de los cuatro serotipos de virus del
Dengue. Las provincias con mayor número de defunciones por Dengue (Guayas y
Manabí), se han identificado los serotipos 1, 2 y 4 y en Santo Domingo de los Tsáchilas el
serotipo 2. La circulación simultánea de varios serotipos genera mayor preocupación, pues
diferentes estudios asocian esta situación y al DENV 2 con la mayor frecuencia de Dengue
hemorrágico (actualmente Dengue grave) y por ende mayor riesgo de mortalidad. (MSP,
2015)
Tabla 3. La circulación de serotipos virales de Dengue fue actualizado el lunes
05 de junio del 2013.
Provincias Serotipos 2012 Serotipos 2013
DEN 1 DEN 2 DEN 3 DEN 4 DEN 1 DEN 2 DEN 3 DEN 4
Bolívar X X
X X X
Cotopaxi X
X
El oro X X
X
X
Esmeraldas X
Galápagos X
X
Guayas X X
X X X
X
Los Ríos X X
X
X
Manabí X X
X
X
X
Cañar
X X
Napo X
X
Santa Elena X X
X X X
X
Santo Domingo
X
X
Tungurahua X
Sucumbíos X X
X X
Zamora Chinchipe X
X
Fuente: SIVE – Alerta. MSP, 2013
Dengue según la OMS
En las últimas décadas ha aumentado enormemente la incidencia de Dengue en el
mundo. Según una estimación reciente, se producen 390 millones de infecciones por
Dengue cada año (intervalo creíble del 95%: 284 a 528 millones), de los cuales 96
millones (67 a 136 millones) se manifiestan clínicamente (cualquiera que sea la gravedad
15
de la enfermedad).En otro estudio sobre la prevalencia del Dengue se estima que 3900
millones de personas, de 128 países, están en riesgo de infección por los virus del Dengue.
Antes de 1970, solo nueve países habían sufrido epidemias de Dengue grave. Sin
embargo, ahora la enfermedad es endémica en más de 100 países de las regiones de
África, las Américas, el Mediterráneo Oriental, Asia Sudoriental y el Pacífico
Occidental. Las regiones más gravemente afectadas son el Asia Sudoriental y el
Pacífico Occidental.
Cada año, unas 500 000 personas que padecen Dengue grave, en especial niños
en una gran proporción necesitan hospitalización. Aproximadamente un 2,5%
fallecen.(OMS, 2015)
CARACTERÍSTICAS DEL VECTOR
El mosquito vector
El Aedes aegypti es un mosquito vector doméstico, que vive en estrecha asociación
con los seres humanos, incluso cuando otros huéspedes están disponibles, se encuentran
comúnmente en países tropicales y subtropicales. Es considerada una de las especies de
mosquitos vectores más importantes del mundo, debido a su alto grado de susceptibilidad a
la infección por el virus y es un vector epidémico eficiente de varias enfermedades
humanas, incluyendo la fiebre del Dengue, el chikungunya, la fiebre amarilla y el zika.
(Sivan et al, 2015)
Además del Aedes aegypti existe otro mosquito, el Aedes albopictus que ingresó a
nuestro continente, pero su capacidad de transmitir el Dengue por el momento está
descartada en esta región. (Ortiz, Z, 2009)
El Aedes aegypti son artrópodos de clase Insecta, orden Diptera, familia Culicidae y
subfamilia Culicinae, que incluye los géneros Aedes y Culex. A menudo permanece en la
misma casa o lugar donde emergió siempre que disponga de huéspedes y sitios de reposo
adecuados, por lo que se suele afirmar que el mosquito que pica es el mismo que uno ha
criado. (Montero, 2009)
16
Comportamiento del Aedes aegypti
Según Joubert Alarcón, coordinador de Entomología del Servicio Nacional de
Control de Enfermedades Transmitidas por Vectores Artrópodos (SNEM), explica que
siempre hay humanos que son más atractivos para los mosquitos y que esto depende de los
olores que emanan. “Ellos se acercan básicamente por el olor, el sudor y el anhídrido
carbónico que la persona exhala; de ahí los otros factores hormonales o bioquímicos que
influyen dependen de la persona porque hay mosquitos que se acercan más a unos y menos
a otros. No es por la sangre, sino porque (la persona) es atractiva para el mosquito”. El
Laboratorio de Entomología Médica de Florida informa que el dióxido de carbono (CO2)
es su principal imán. Mientras, el Departamento de Agricultura de Estados Unidos señala
que cuando necesitan comida de sangre “buscan una variedad de sustancias químicas
emitidas por los mamíferos, incluyendo el dióxido de carbono, el ácido láctico, el
amoníaco y el octenol”.(Ortiz, Z, 2009)
AGENTE CAUSAL
El virus del Dengue
El virus del Dengue, es una partícula esférica de alrededor de 40 a 50nm de
diámetro, conformado por 3 proteínas estructurales (cápside, envoltura y de membrana) y
7 no estructurales (NS). Posee una envoltura de la que surgen unas finas proyecciones
hacia la superficie que constituyen las proteínas estructurales de envoltura (E) y de
membrana (M). El material genético está contenido dentro de una nucleocápside (C) de
forma poliédrica de aproximadamente 25-30nm de diámetro. Entre la envoltura y la
nucleocápside existe una bicapa lipídica, cuyos lípidos se piensa que provengan de la
membrana de la célula huésped.(Zambrano, B , 2010)
Gráfico 3. Virus de Dengue
Fuente: Virus del Dengue. MedicoblastosFacMed, 2015
17
Taxonomía del virus del Dengue: El Dengue es una enfermedad vectorial, provocada
por el virus del mismo nombre, que pertenece a la Familia:Flaviviridae, Género Flavivirus
y Especie Dengue. (Juárez, J., 2008)
El genoma de ARN es una cadena lineal simple, y de polaridad positiva, de
aproximadamente 11.000 pares de bases de longitud y codifica a 10 proteínas, tres de ellas
estructurales (Cápside, Envoltura y pre-Membrana) en un extremo amino terminal (región
no codificante 5’) del genoma y siete no estructurales (NS1, NS2A, NS2B, NS3, NS4A,
NS4B y NS5) en el extremo carboxilo terminal (región no codificante 3`) del genoma
viral.(Zambrano, B , 2010)
Gráfico 4. Representación esquemática del genoma del virus del Dengue
Fuente:Zambrano, 2010.
COMPONENTES DEL VIRUS DEL DENGUE
Proteínas estructurales
Nucleocápside (C)
La proteína de la cápside, también conocida como proteína core o de cubierta, pesa
11 kDa, aproximadamente. La nucleocápside o proteína de la cápside (C) tiene forma
icosaédrica, cubre y protege al material genético y está cargada positivamente, lo que
parece neutralizar la carga negativa del ARN viral. (Zambrano, B , 2010)
18
Pre-Membrana (pre-M) y Membrana (M)
La proteína precursora de membrana (prM) está presente en los viriones inmaduros y
junto con la proteína M. (Velandia y Castellanos, 2011)
La proteína pre-Membrana (pre-M) es el precursor glicosilado de la proteína de
Membrana (M). Parece funcionar como chaperona para la proteína E (de Envoltura)
durante el proceso de maduración viral, ayudándola a mantener su estructura y
protegiéndola de las acciones de un medio con pH ácido, hasta que se complete el
ensamblaje y el virión pueda salir de la célula invadida por medio de vesículas exocíticas.
Proteína de Envoltura (E)
Se ha descrito a la proteína E como el antígeno viral más importante, está asociada
con la unión al receptor celular, que permiten iniciar el ciclo de replicación viral
intracelular, también está asociada a la hemaglutinación de eritrocitos y a la inducción de
anticuerpos neutralizantes relacionados con la respuesta inmune protectora. (Zambrano, B
, 2010)
Proteínas No Estructurales (NS)
Se ha sugerido que las proteínas no estructurales (NS) están involucradas en el
proceso de replicación viral. Es probable que la proteína NS1 tenga un rol en la
maduración viral, ya que está asociada con la proteína E inmadura dentro del retículo
endoplásmico. Las proteínas NS2A, NS2B, NS4A y NS4B constituyen un grupo de
proteínas estructurales pequeñas y su función no ha sido bien dilucidada. El conocimiento
detallado de la estructura del virus ha sido de gran importancia para la búsqueda de un
diseño adecuado de vacuna contra el Dengue.(Zambrano, B , 2010)
CICLO VIRAL INTRACELULAR
Como ocurre con otros virus, el primer paso en la infección por Dengue requiere la
interacción entre la partícula viral y el complejo receptor presente en la superficie de la
célula huésped. La glicoproteína E es la proteína viral más expuesta y ella interacciona con
19
el complejo receptor a través de su dominio III localizado hacia el extremo
carboxiterminal de la proteína.(Crill y Roehring, 2001)
Estudios in vitro han demostrado que el Dengue es capaz de infectar un gran número
de células humanas, entre ellas células dendríticas, monocitos, macrófagos, células B y T,
células endoteliales, hepatocitos, células neuronales. (Anderson, 2003)
Sin embargo, in vivo solo se ha encontrado a monocitos, macrófagos y células
dendríticas como blancos primarios de las infecciones por Dengue. (Jessie et al, 2004)
Se ha demostrado que, para favorecer la entrada del virus a las células, participan los
glucosaminoglucanos o proteoglucanos presentes en la matriz extracelular o que están
asociados a las proteínas de superficie de las células. Los proteoglucanos como el heparán
sulfato (HS), por su alta carga negativa, pueden actuar como un receptor primario para
favorecer el acercamiento de las partículas virales a la superficie celular y, una vez
establecido este acercamiento, facilitarían la interacción de la proteína E con proteínas de
la superficie para favorecer la endocitosis del virus.(Chen et al, 1997)
Secuestro de la maquinaria de la célula huésped por el virus del Dengue
El virus del Dengue utiliza varios mecanismos para secuestrar la maquinaria de la
célula huésped para facilitar la replicación viral. Además, el virus del Dengue induce la
autofagia y regula el metabolismo de lípidos para mejorar la replicación, y la maduración
de los virus y la producción de viriones infecciosos. (Guzman y Harris, 2015)
La respuesta inmune innata y estrategias de evasión viral
En una infección viral, el sistema inmune innato (interferones, células fagocíticas y
células natural killer (NK) principalmente, actúa como la primera línea de defensa e
interviene inmediatamente para contrarrestar la replicación viral. Mientras tanto, las
células presentadoras de antígeno, células dendríticas y macrófagos, participan en la
inducción de la respuesta inmune adaptativa, tanto de tipo celular como humoral, que es
altamente específica. (Castro et al, 2013)
20
SUSCEPTIBILIDAD E INMUNIDAD
La susceptibilidad es universal. Aunque todos los serotipos puedan estimular la
formación de anticuerpos específicos, la inmunidad inducida por un serotipo es poco
protectora contra otro serotipo, mientras que es permanente para el serotipo que causó la
infección. La respuesta inmunológica frente a la infección aguda por Dengue puede ser
primaria o secundaria. En la respuesta primaria los individuos no expuestos previamente al
virus del Dengue los títulos de anticuerpos aumentan lentamente no siendo muy elevados,
mientras que en la respuesta secundarialas personas presentan una infección aguda por
Dengue, por una infección anterior (otro serotipo) aquí los títulos de anticuerpos se elevan
rápidamente a niveles altos. (Vignoli et al, 2013)
Dos variantes genéticas vinculadas a la susceptibilidad de un individuo de sufrir
Dengue.
Estudios en el pasado habían sugerido que ciertas poblaciones eran más susceptibles
a las formas más severas del Dengue, lo cual implicaría que factores genéticos podrían
estar involucrados en esta susceptibilidad.
Una de las complicaciones más peligrosas del Dengue, particularmente es la que
provoca un estado en el que el plasma sanguíneo es capaz de "filtrarse" por los vasos
sanguíneos hacia tejidos circundantes. Para comprobar si la genética está vinculada a la
susceptibilidad de Síndrome de Choque por Dengue (SCD), los científicos del Instituto
Wellcome Trust, la Universidad de Oxford, en el Reino Unido y la Agencia para la
Ciencia, Tecnología e Investigación de Singapur. ”El estudio confirma la evidencia
epidemiológica de que algunas personas son naturalmente más susceptibles que otras a las
formas más severas de la enfermedad". Los investigadores identificaron cambios en el
ADN de dos genes en el cromosoma 6 y el cromosoma 10 vinculados a una mayor
susceptibilidad de sufrir síndrome de choque por Dengue.
Se sabe que uno de los genes, llamado MICB, juega un papel en el sistema inmune y
los científicos creen que una variante de este gen parece afectar la activación de las células
T encargadas de combatir las infecciones virales. Si estas células no funcionan de forma
apropiada, queda bloqueada su capacidad para deshacerse del virus del Dengue en el
organismo.
21
Las mutaciones que se vieron en el segundo gen, llamado PLCE1, ya habían sido
vinculadas a una enfermedad llamada síndrome nefrótico, una enfermedad caracterizada
por problemas en las funciones de filtrado de las células renales.
Los científicos creen que la variante en el PLCE1 también puede afectar las
funciones normales del endotelio, la capa de células que recubre el interior de los vasos
sanguíneos, lo cual predispone al individuo a un "escape" de plasma en los vasos, la
principal característica del SCD.(Simmons, 2014)
FACTORES DE RIESGO EN LA APARICIÓN DEL DENGUE.
Hay muchos factores que intervienen en la aparición de nuevas enfermedades
infecciosas o la reaparición de "viejas" enfermedades infecciosas. Los factores que
han contribuido a estos cambios son el crecimiento demográfico, la migración desde
las zonas rurales a las ciudades, el transporte aéreo internacional, la pobreza, las
guerras y los cambios ecológicos destructivos debido al desarrollo económico y uso de
la tierra.
El cambio climático es uno de los factores principales en la aparición de
enfermedades infecciosas, ya que las enfermedades pueden propagarse a nuevas zonas
geográficas. La infección por Dengue ocurre predominantemente en climas tropicales
y subtropicales de todo el mundo principalmente en las zonas urbanas y semi-urbanas,
y por lo general durante la temporada de lluvias, ya que es el momento en que estas
regiones están habitadas por un gran número de mosquitos que portan el virus.
(Virología Molecular y Microbiología, 2013)
Los macrofactores determinantes de la transmisión del Dengue son los factores de
riesgo ambiental y social, los cuales pueden dividirse de la forma siguiente:
a) Ambientales: aumento de tasas de proliferación a temperaturas más altas, humedad
relativa de moderada a alta, cambios en los equilibrios ecológicos, y la migración
relacionada con el clima de vectores y reservorios.
b) Sociales: Densidad de la población de moderada a alta, viviendas con desagües
obstruidos por desechos, agua almacenada por más de siete días, ausencia de
abastecimiento de agua corriente individual, disponibilidad intermitente y uso de
22
depósitos destapados, recolección de desechos sólidos, mal estado socioeconómico,
periodos inactivos en la casa durante el día, desconocimiento acerca del Dengue.
Los microfactores determinantes de la transmisión son los factores de riesgo del
huésped, el agente y el vector: factores del huésped (sexo, edad, grado de inmunidad,
condiciones de salud específicas y ocupación), factores del agente (cepas y nivel de
viremia), factores del vector (focos de proliferación del mosquito, densidad de hembras
adultas, edad de las hembras, frecuencia de alimentación, preferencia de huéspedes,
disponibilidad de huéspedes y susceptibilidad innata a la infección).(Hoyos et al, 2010)
VIREMIA Y TRANSMISIÓN
El vector principal del Dengue es el mosquito Aedes aegypti. El virus se transmite a
los seres humanos por la picadura de mosquitos hembra infectadas. Tras un periodo de
incubación del virus, que es el tiempo transcurrido entre la infección y la aparición de la
enfermedad, que dura entre 4 y 10 días, un mosquito infectado puede transmitir el agente
patógeno durante toda la vida. (OMS, 2015)
La picadura de las hembras se relaciona directamente con la reproducción ya que se
requiere de sangre cuando están por poner los huevos, antes de succionar sangre las
hembras primero inyectan saliva que contiene sustancias anticoagulantes y es en ese
momento en el que pueden transmitir la enfermedad. (Ortiz, Z, 2009)
Después de la picadura de un mosquito infectado, el virus del Dengue entra en el
cuerpo y se replica dentro de las células del linaje fagocítico mononuclear. El período de
viremia corresponde aproximadamente al período de la fiebre, alcanzando un máximo en
el momento de o poco después de la aparición de la enfermedad (típicamente 2-7
días).(Teo et al, 2009).
Los síntomas aparecen 3–14 días (promedio de 4 – 7 días), después de la picadura
infectiva. El Dengue es una enfermedad similar a la gripe que afecta a lactantes, niños
pequeños y adultos. (OMS, 2015)di
23
Gráfico 5. Los mosquitos nacen libres de virus
Fuente: Los mosquitos nacen libres del virus del Dengue entonces para que exista transmisión en las
hembras primero deben ingerir sangre de una persona infectada. Ortiz, Z. 2009)
La infección genera inmunidad de larga duración contra el serotipo específico del
virus. No protege contra otros serotipos y posteriormente, esto es lo que puede dar lugar a
la forma de Dengue hemorrágico. (Stramer SL, 2009)
Gráfico 6. El virus
Fuente: El virus debe atravesar las paredes del tubo digestivo y multiplicarse vía sistema circulatorio
en distintas partes del cuerpo del insecto como, por ejemplo, en las glándulas salivales.Ortiz, Z. 2009
El tiempo intrínseco de transmisibilidad corresponde al de la viremia de la persona
infectada. Comienza un día antes del inicio de la fiebre y se extiende hasta el sexto u
octavo día de la enfermedad. El virus se multiplica en el epitelio intestinal del mosquito
24
hembra infectado, ganglios nerviosos, cuerpo graso y glándulas salivales, el que
permanece infectado toda su vida. Luego de 7 a 14 días se da el tiempo de incubación
extrínseco, donde la saliva del mosquito se convierte en infeccioso y puede infectar al
hombre por nueva picadura. (Chiparelli, H; Schelotto, F, 2012)
Transmisión del virus del dengue sin un mosquito vector
En estudios con voluntarios humanos durante la década de 1920, clínicamente
aparente de la fiebre del Dengue resultó que el 25% de los experimentos que el mosquito
puede picar en 1 o 2 días antes del inicio de la fiebre, lo que indica que las personas
infectadas pueden transmitir el virus 2 días antes de los síntomas a desarrollar. La
transmisión vertical se ha informado, con la transmisión intraparto en al menos dos casos
en que la aparición de la enfermedad neonatal desarrolló en el primer día de vida y un caso
de una madre que fue diagnosticada con Dengue hemorrágico. También se ha descrito la
transmisión nosocomial a través de lesiones por pinchazos, como fue confirmado en
Inglaterra con el caso de una enfermera que se punzó con la aguja con que acababa de
inyectar a un paciente africano con dengue. (Hernández, F. 2002) y la exposición
mucocutánea, como en el caso de un trabajador involucrado en la salud desarrolló la
infección por Dengue después de que un viajero infectado haya salpicado sangre en la
cara.(Teo et al, 2009)
Prácticamente, cualquier agente infeccioso que se encuentre en la sangre de un
individuo puede transmitirse por un accidente que involucre contaminación con sangre o
bien mediante transfusión.
También se puede transmitir de persona a persona, mediante transfusiones de
cualquier componente sanguíneo o trasplantes de órganos. Hay como un 57% de personas
a las que les pica el mosquito y no tiene síntomas inmediatos, pero sí en ese periodo esa
persona va y dona sangre, es portadora del virus.(Endi, 2014)
En algunos países como Singapur, donde el Dengue es endémico, el riesgo estimado
de transmisión por transfusiones sanguíneas está entre 1,6 y 6 por cada 10.000
transfusiones (Teo D, 2009)
25
Transmisión del virus a los mosquitos a partir de personas asintomáticas
Los científicos del Instituto Pasteur de Camboya, el Instituto Pasteur de París y del
CNRS (Centro Nacional para la Investigación Científica) proporcionan pruebas de que las
personas infectadas por el virus del Dengue, que no muestran síntomas clínicos en realidad
pueden infectar a los mosquitos que los pican. Parece que estas personas asintomáticas
que, junto con los pacientes ligeramente sintomáticos, representan tres cuartas partes de
todas las infecciones de Dengue y podrían estar involucrados en la cadena de transmisión
del virus.
Estimaciones indican que las personas que no presentan síntomas clínicos son lo
suficientemente graves como para ser detectados por los sistemas de atención de salud.
Antes se pensaba que estas infecciones asintomáticas o levemente sintomáticas no
alcanzan un nivel suficientemente alto de la viremia (la concentración del virus en la
sangre) para infectar a los mosquitos.
"Este hallazgo plantea la posibilidad de que las personas con pocos o ningún síntoma
en otras palabras, en realidad puede estar contribuyendo a la propagación del virus sin
darse cuenta". Por otra parte, las personas que son prácticamente o totalmente afectados
por el virus están potencialmente expuestas a más mosquitos durante sus rutinas diarias
que los que están gravemente enfermos, postrado en cama u hospitalizado. (Duong et al,
2015)
CLASIFICACIÓN DEL DENGUE
Durante tres décadas, la Organización Mundial de la Salud (OMS) ha reconocido y
recomendado la clasificación del Dengue en: fiebre del Dengue y fiebre hemorrágica por
Dengue con o sin síndrome de shock por Dengue.
La OMS auspició un estudio internacional, llamado DENCO (Dengue Control), cuyo
objetivo principal fue encontrar una forma mejor de clasificar la enfermedad e identificar
los signos de alarma útiles para mejorar el manejo de casos de Dengue.(Ministerio de
Salud, 2013)
26
Los grupos expertos de consenso en América Latina (Habana, Cuba, 2007), Asia
Suroriental (Kuala Lumpur, Malasia, 2007), y en las oficinas principales de la OMS en
Ginebra, Suiza en 2008 acordaron que: “El Dengue es una sola enfermedad con
presentaciones clínicas diferentes y a menudo con evolución clínica y resultados
impredecibles”. (OMS, 2009)
El estudio DENCO, también permitió identificar algunos signos y síntomas que
estaban presentes en los enfermos un día antes de agravarse que permiten identificar
tempranamente al enfermo que va a evolucionar a Dengue grave, reconociendo qué
enfermos se beneficiarían con la reposición precoz de líquidos por vía intravenosa,
mejorando sustancialmente el pronóstico del paciente. (Ministerio de Salud, 2013)
Gráfico 7. Clasificación de Dengue
Fuente: Clasificación del Dengue. Ministerio de Salud, 2013
27
MANIFESTACIONES CLÍNICAS
La infección por Dengue puede ser clínicamente inaparente o puede causar una
enfermedad de variada intensidad, aunque una alta proporción de las personas infectadas
cursarán de manera asintomática. El Dengue es una enfermedad sistémica y muy dinámica,
en la que en pocas horas un paciente puede pasar de un cuadro leve a un cuadro grave. Al
inicio de la fiebre, no es posible predecir si el paciente tendrá síntomas y signos leves todo
el tiempo, o si evolucionará a una forma grave de la enfermedad. Por lo tanto, el equipo de
salud debe realizar un seguimiento estricto del paciente, y éste junto a su grupo familiar
deben estar atentos a los signos de alarma, controlando a todo paciente con Dengue hasta
al menos 48 horas de finalizada la etapa febril.(Ministerio de Salud, 2013)
La infección asintomática
Diversos estudios han demostrado la presencia de la infección asintomática o
subclínica, que puede ir desde 77-87% dependiendo de la población estudiada. En un
estudio de 329 voluntarios sanos en una provincia en Tailandia, con alta tasa de infección
por Dengue, (88%) tuvieron una muestra de suero positivo para Dengue IgM, de los cuales
dos muestras dieron positivo para el ARN viral. Estudios de muestreo en Indonesia
detectaron ocho infecciones asintomáticas del Dengue de 785 voluntarios durante un
período de 2 años, de los cuales dos demostraron viremia por RT-PCR. (Teo et al, 2009)
El tiempo en que la infección adquirida puede transmitirse coincide con la viremia
en el paciente, la cual comienza el día anterior a la aparición de la fiebre y dura hasta una
semana después que los síntomas desaparecen. Estudios realizados en zonas endémicas
para Dengue mostraron que durante brotes, hasta tres de cada 1000 donantes pueden ser
portadores del virus al momento de la donación. No hay ni tratamiento antiviral ni vacunas
específicas contra el Dengue. Aunque la infección por uno de los serotipos puede generar
inmunidad para ese serotipo específico, la persona puede contraer cualquiera de los otros
tres serotipos de Dengue y enfermarse. (OMS, 2009)
IMPACTO EN LOS DONANTES DE SANGRE
El Dengue se está propagando rápidamente en nuevas áreas, y brotes importantes
están ocurriendo con mayor frecuencia. Más de la mitad del mundo es ahora endémico
28
para el Dengue, y cada vez hay más probabilidad de que los donantes de sangre de estos
países sean infectados o expuestos a la infección. Como los números siguen aumentando,
el efecto en la asistencia de los donantes de sangre llegará a niveles suficientes para tener
un impacto significativo en el suministro de sangre. En la mayoría de los países, los
donantes que han sido infectadas con el virus del Dengue se difieren por períodos de hasta
6 meses o incluso más tiempo si han recibido transfusiones de sangre. Los donantes de
sangre que donan regularmente se verán especialmente afectadas, incluidos los donantes
de aféresis que pueden donar tan a menudo como 12 o 13 veces al año. Donantes sanos no
infectados cuyos familiares o compañeros de trabajo están infectados con Dengue también
es probable que se aplace de donar sangre. Estos donantes también tendrían menos tiempo
para donar sangre, ya que tendrían que cuidar a familiares enfermos o asumir mayores
responsabilidades de trabajo como resultado de una enfermedad más trabajo.(Teo et al,
2009)
Riesgo de Dengue, transmitida por transfusión
El aumento de la prevalencia en la población aumenta el riesgo de que la sangre se
obtenga de un donante durante la fase virémica asintomática o subclínica de la infección.
Los servicios de sangre en los países que sufren epidemias de Dengue tendrán que decidir
si se necesitan medidas más enérgicas para proteger el suministro de sangre.Durante los
brotes de enfermedades infecciosas como el Dengue, el síndrome respiratorio agudo
severo (SARS) y la enfermedad de chikungunya, la mayoría de los países han adoptado
estrategias de reducción de riesgos que se centran en exclusión de donantes que pueden
estar en mayor riesgo de infección o que puedan estar exhibiendo síntomas tempranos de
la infección. En el caso del Dengue, esto se ha basado principalmente en el
cuestionamiento de la donante para un antecedente reciente de viaje a zonas de brotes y
para los síntomas de fiebre, sarpullido o malestar general.(Teo et al, 2009)
Además, a menudo hay un efecto negativo en el donante de ser diferida, y muchos
donantes no vuelven incluso si el aplazamiento es temporal.Los estudios hasta la fecha
sugieren que hay al menos un periodo de 1-2 días de la infectividad antes del desarrollo de
los síntomas. La presencia de viremia del Dengue en personas asintomáticas, incluidos los
donantes de sangre, está bien documentada durante las epidemias de Dengue. (Teo et al,
2009)
29
La eficiencia de la transmisión depende de una combinación de factores: cantidad y
la estabilidad de virus, volumen de sangre transfundida viremia y el estado inmunológico
del receptor. El riesgo de infección también dependerá del tamaño de la población
expuesta a la infección y la inmunidad debido a una infección previa. La infección puede
no ocurrir si la mayoría de las personas han sido previamente infectado y desarrollado
anticuerpos protectores. Dengue lleva una pesada carga económica para la sociedad, en
términos de los costos médicos y medidas de control, así como la reducción de la
productividad laboral. En los países en desarrollo con recursos limitados, la decisión de
implementar una estrategia de reducción del riesgo costoso en el suministro de sangre debe
tener en cuenta la relación costo-eficacia en la reducción de la morbilidad de la
enfermedad en relación con la situación general de la salud en el país. (Teo et al, 2009)
Impacto sobre el suministro de sangre
En las zonas donde los servicios de sangre están menos desarrollados y hay una falta
de especialistas en transfusión, la falta de conocimiento se convierte en un factor
importante que conduce al uso inadecuado de sangre y productos sanguíneos.
Lamentablemente, en muchos países en desarrollo, las zonas rurales carecen de ese
acceso, y las instalaciones de suministro de sangre a menudo son muy básicas y con
escasos recursos. Como el Dengue se propaga a las zonas rurales, el desafío de
proporcionar un suministro suficiente de sangre y componentes sanguíneos seguros
colocará un uso intensivo de los servicios de sangre en estos países. (Teo et al, 2009)
DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO
En los pacientes con fiebre en los que se considere la posibilidad de Dengue como
diagnóstico, los estudios de laboratorio deben incluir lo siguiente.
Cuadro hemático completo inicial:
El hematocrito determinado en la fase febril temprana representa el valor
basal del paciente. - Un descenso en el número de leucocitos hace más
probable el diagnóstico de Dengue.
30
Una disminución rápida en el número de plaquetas, concurrente con un
hematocrito que aumenta en relación con el basal, es sugestiva de
progresión a la fase crítica de extravasación plasmática.
• Pueden considerarse estudios adicionales:
Pruebas de funcionamiento hepático, glucemia, albúmina, electrolitos
séricos, urea y creatinina séricos, bicarbonato o lactato séricos, enzimas
cardiacas, examen parcial de orina o, en su defecto, densidad urinaria.
(OMS, 2010)
El diagnóstico para la identificación de una infección por el virus del Dengue
también está basado en pruebas de determinación de anticuerpos y en la detección directa
del virus.(Ospina, M, 2004)
Gráfico 8. Métodos diagnósticos para Dengue
Fuente: Cardosa, J. Recuperado de: http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0103-
40142008000300004
Métodos Directos:
• Aislamiento viral: Se realiza a partir de sangre, derivados u otros tejidos. Cuatro
sistemas de aislamiento viral han sido usados para el virus Dengue, inoculación
intracerebral en ratones de 1-3 días de edad, cultivos de células de mamíferos,
31
inoculación intratorácica de mosquitos adultos y el uso de cultivos de células de
mosquitos.
• Identificación viral: El aislamiento viral sirve para caracterizar la cepa viral y esta
información es crítica para la vigilancia del virus y los estudios patogénicos. El
aislamiento del virus del Dengue procedente de suero humano, depende de varios
factores: de la forma en que el suero fue manipulado y almacenado y del nivel de
viremia que varía considerablemente dependiendo de los días de evolución de la
enfermedad. La viremia usualmente tiene un pico corto antes del inicio de la
enfermedad y puede ser detectable en promedio entre los días 4-5. Conforme
aumentan los títulos de IgM, el virus tiende a desaparecer.
• TR-PCR (Reacción de cadena de polimerasa-transcriptasa reversa): es un método
rápido, sensible, simple y reproducible con los adecuados controles. Es usado para
detectar el RNA viral en muestras clínicas de humanos, tejido de autopsia y
mosquitos.
• Sonda de Hibridación: la sonda de hibridación detecta ácidos nucleicos virales. No
es un método usado rutinariamente. Su ventaja es que puede ser usado en tejidos de
autopsia y muestras clínicas humanas. Es menos sensible que la TR-PCR, pero más
que la PCR.
• Inmunohistoquímica: Con los nuevos métodos de inmunohistoquímica, es ahora
posible detectar el antígeno viral en una gran variedad de tejidos. Estos nuevos
métodos involucran la conjugación enzimática con fosfatasas y peroxidasas en
conjunto con anticuerpos mono y policlonales (Faingezicht y Avila, 1999)
Métodos indirectos:
• Elisa IgM: Es la prueba más ampliamente usada para el diagnóstico serológico de
la infección aguda por el virus del Dengue. Se han detectado anticuerpos IgM en el
quinto día de inicio de los síntomas. (Ospina, M, 2004)
• Elisa IgG: Los anticuerpos IgG aparecen a partir del quinto día de inicio de los
síntomas en las infecciones primarias, aumentan gradualmente y permanecen
detectables durante muchos años. En infecciones secundarias, estos anticuerpos
32
están por lo general presentes en la fase aguda y los títulos aumentan rápidamente
en pocos días.
La respuesta inmune al Dengue varía en primaria, infecciones secundarias y de
persona a persona; por lo tanto, varias técnicas se utilizan a menudo en combinación para
confirmar un caso de Dengue, utilizando métodos tales como el aislamiento viral,
transcripción inversa-PCR, detección de antígenos en la fase aguda y la medición de los
títulos de IgG en muestras durante la fase convaleciente. Recientemente, diagnósticos
rápidos, tales como tarjetas inmunocromatográficas se han desarrollado, pero aún no se
han evaluado a fondo en términos de costo, eficiencia y precisión de uso generalizado en
los países donde el Dengue es endémico. (Balmaseda et al, 2003)
Técnicas inmunoenzimáticos
Los ensayos que usan como marcador de enzimas presentan extraordinarias ventajas
aún no superadas, tales como:
• Elevada sensibilidad, detectabilidad y especificidad.
• Equipamiento relativamente barato.
• Procedimientos técnicos rápidos y sencillos.
• Alta precisión y exactitud.
• Reactivos relativamente baratos y de larga vida.
• Gran variedad de substratos y cromógenos que incrementa su versatilidad.
ELISA INDIRECTO
El principio de ensayo indirecto, se basa en la captura antígeno anticuerpo, donde su
reacción se evidencia por el conjugado anti-inmunoglobulina-enzima. La cantidad de
enzima enlazada indica la cantidad de anticuerpos en el suero y puede ser medida por la
degradación de su substrato. Los ensayos indirectos presentan una alta detectabilidad que
depende de la densidad de epítopos de relevancia diagnóstica en la fase sólida. (Ochoa R,
2012)
33
Gráfico 9. Elisa Indirecto
Fuente: Sánchez J, 2004
DETECCIÓN DE IGM ANTI DENGUE
A partir de la década de los 80 se comenzaron a desarrollar los sistemas
inmunoenzimáticos conocidos como ELISA, los cuales han sido de gran utilidad en el
diagnóstico serológico del virus de Dengue. Hasta el presente, este sistema es un
invaluable método para la vigilancia de la FD y FHD/SCD, considerándose los anticuerpos
IgM un importante marcador serológico de las infecciones por Dengue. La detección de la
inmunoglobulina-Dengue específica M (IgM), es un ensayo de inmunoabsorción ligado a
enzimas (ELISA) que se utiliza ampliamente en el diagnóstico, ya que tiene una buena
sensibilidad y es rápida y fácil de realizar.(Teo et al, 2009)
La titulación de anticuerpos mediante ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas
(ELISA) o el "estándar de oro", es útil. La detección de IgM, usando ELISA de captura de
IgM en una sola muestra, es el ensayo de diagnóstico más comúnmente utilizado. Sin
embargo, esto resulta en un caso "probable" y no un "confirmado" caso del
Dengue.(Nurdianah, F. , 2014)
Los ensayos de captura IgM deben usarse en el diagnóstico de enfermedades
infecciosas. (Ochoa R, 2012)
La respuesta de anticuerpos en la infección aguda por Dengue puede ser: primaria o
secundaria. Las personas que nunca han estado infectadas por un flavivirus desarrollan una
respuesta primaria, en el cual los anticuerpos son principalmente de tipo IgM, mientras
aquellas que han estado en contacto o han sufrido previamente una infección por algún
flavivirus desarrollan una respuesta secundaria con predominio de anticuerpos IgG,
aunque también los IgM están presentes.(Ospina, M, 2004)
34
Los títulos de anticuerpos IgM en infección primaria, son significativamente
mayores que en infecciones secundarias.(Faingezicht y Avila, 1999)
Uno de los mecanismos de respuesta inmune durante la infección por el virus del
Dengue es la humoral con producción de anticuerpos. En el 5to día del período febril de la
infección empiezan a aparecer los anticuerpos IgM específicos que alcanzan su pico
máximo a las dos semanas. Estos niveles caen hacia la cuarta semana, hasta no ser
detectables entre 2 y 3 meses después de la infección, aunque pueden permanecer aún
después de la enfermedad. (Restrepo et al., 2009)
La elevada IgM en una muestra es indicativa de una infección activa o
reciente. Además, existe reactividad cruzada con otros flavivirus incluyendo el virus del
Nilo Occidental (VNO), St. Louis virus de la encefalitis (SLE), el virus de la encefalitis
japonesa (JEV) y el virus de la fiebre amarilla (VFA), el Zika y el Chikungunya. De
acuerdo con las directrices de la Organización Panamericana de la Salud (OPS) el 80% de
todos los casos de Dengue tienen anticuerpos IgM detectables por el quinto día de la
enfermedad, y el 93-99% de los casos tienen detectable la IgM desde el día seis a diez de
la enfermedad, que luego puede permanecer detectable hasta noventa días.(CDC, 2012)
El diagnóstico rápido del Dengue es crucial para la atención adecuada de los
pacientes. El anticuerpo IgM aparece temprano durante el curso de la enfermedad, su
detección es una herramienta valiosa para el diagnóstico rápido.(Sathish, N., 2003)
El método de ELISA está basado en la captura de IgM presente en la muestra por
anticuerpos anti-IgM unidos a la superficie de poliestireno. Las inmunoglobulinas no
unidas son eliminadas en el proceso de lavado. En un paso posterior el antígeno conjugado
con peroxidasa reacciona con las IgM capturadas y el que no se une es eliminado por los
lavados; el antígeno unido reacciona con el sustrato Tetramethylbenzidine (TMB), para dar
una reacción de color azul, que cambia a amarillo tras la adición de la solución de
parada.(Teo et al, 2009)
35
Reacciones cruzada con otros Flavivirus
La reacción cruzada con otros flavivirus circulantes, tales como encefalitis japonesa,
encefalitis de Saint Louis y fiebre amarilla, no parece ser un problema, aunque se pueden
obtener falsos positivos. Se deben tener en cuenta estas limitaciones cuando se usen
pruebas en regiones donde estos patógenos circulan concomitantemente. En el caso de
Ecuador el MSP ha confirmado que no existen casos registrados.(OMS, 2009)
Aunque el virus del Chikungunya y el virus del Zika son similares también al
Dengue y han sido reportados en Ecuador, ya que se transmite por el mismo mosquito
Aedes aegypti, causante de la enfermedad del Dengue.(BBC Mundo, 2015.)
En la práctica a nivel mundial, el Dengue y Chikungunya son similares en su
presentación clínica, especialmente en áreas donde ambos virus circulan simultáneamente
pudiendo confundirse clínicamente e incluso coexistir en el mismo paciente.
Por otro lado, la frecuencia de reacción cruzada en la técnica de ELISA hace a este
diagnóstico no muy específico para efectos de obtener un resultado confirmatorio.
Mediante la técnica de PCR se ha podido diagnosticar Dengue desde el primer día de
enfermedad. (Yábar et al, 1999)
Zona gris
Se refiere al tiempo entre la primera infección y el momento en el que la prueba ya
puede detectar la infección. En pruebas basadas en anticuerpos, este periodo es
dependiente del tiempo que se toma la seroconversión, es decir, el momento en el que el
estado de anticuerpos de una persona cambia de negativo a positivo. La zona gris puede
también deberse a que posiblemente el donante puede estar comenzando o finalizando un
cuadro de Dengue asintomático.
La importancia de este periodo es epidemiológica durante una donación de
sangre u órganos, ya que en este tiempo, no es posible detectar la infección a la persona,
pero el contagio a otros entra en las posibilidades. (Glosario de InfoSIDA, 2015)
36
TRATAMIENTO
No hay tratamiento específico para el Dengue. En el caso del Dengue grave, la
asistencia prestada por médicos y enfermeras que tienen experiencia con los efectos y la
evolución de la enfermedad puede salvar vidas y reducir las tasas de mortalidad de más del
20%. Es decisivo mantener el volumen de los líquidos corporales.(OMS, 2015)
INMUNIZACIÓN
No hay vacuna que proteja contra el Dengue. Sin embargo, se han registrado grandes
progresos en ese sentido, tanto contra el Dengue como el Dengue grave. Se están
elaborando tres vacunas vivas atenuadas tetravalentes que se encuentran en fase II y fase
III de los ensayos clínicos, y hay otras tres vacunas candidatas (basadas en virus inactivado
purificado) en etapas más tempranas de la investigación clínica. La OMS brinda asistencia
técnica y orientación a los países y asociados privados para apoyar las investigaciones y
evaluaciones en torno a una vacuna.(OMS, 2015)
37
CAPÍTULO III
3. MARCO LEGAL
En la sección séptima de la salud en el art.32 dice:
Art. 32.- La salud es un derecho que garantiza el Estado, cuya realización se vincula
al ejercicio de otros derechos, entre ellos el derecho al agua, la alimentación, la educación,
la cultura física, el trabajo, la seguridad social, los ambientes sanos y otros que sustentan el
buen vivir.
En la Sección segunda de salud dice
Art. 358.- El sistema nacional de salud tendrá por finalidad el desarrollo, protección
y recuperación de las capacidades y potencialidades para una vida saludable e integral,
tanto individual como colectiva, y reconocerá la diversidad social y cultural. El sistema se
guiará por los principios generales del sistema nacional de inclusión y equidad social, y
por los de bioética, suficiencia e interculturalidad, con enfoque de género y generacional.
Art. 359.- El sistema nacional de salud comprenderá las instituciones, programas,
políticas, recursos, acciones y actores en salud; abarcará todas las dimensiones del derecho
a la salud; garantizará la promoción, prevención, recuperación y rehabilitación en todos los
niveles; y propiciará la participación ciudadana y el control social.
Art. 360.- El sistema garantizará, a través de las instituciones que lo conforman, la
promoción de la salud, prevención y atención integral, familiar y comunitaria, con base en
la atención primaria de salud; articulará los diferentes niveles de atención; y promoverá la
complementariedad con las medicinas ancestrales y alternativas.
38
La red pública integral de salud será parte del sistema nacional de salud y estará
conformada por el conjunto articulado de establecimientos estatales, de la seguridad social
y con otros proveedores que pertenecen al Estado, con vínculos jurídicos, operativos y de
complementariedad.
Art. 361.- El Estado ejercerá la rectoría del sistema a través de la autoridad sanitaria
nacional, será responsable de formular la política nacional de salud, y normará, regulará y
controlará todas las actividades relacionadas con la salud, así como el funcionamiento de
las entidades del sector.
Art. 362.- La atención de salud como servicio público se prestará a través de las
entidades estatales, privadas, autónomas, comunitarias y aquellas que ejerzan las
medicinas ancestrales alternativas y complementarias. Los servicios de salud serán
seguros, de calidad y calidez, y garantizarán el consentimiento informado, el acceso a la
información y la confidencialidad de la información de los pacientes.
Los servicios públicos estatales de salud serán universales y gratuitos en todos los
niveles de atención y comprenderán los procedimientos de diagnóstico, tratamiento,
medicamentos y rehabilitación necesarios.
Art. 363.- El Estado será responsable de:
1. Formular políticas públicas que garanticen la promoción, prevención, curación,
rehabilitación y atención integral en salud y fomentar prácticas saludables en los ámbitos
familiar, laboral y comunitario.
2. Universalizar la atención en salud, mejorar permanentemente la calidad y ampliar
la cobertura.
39
3. Fortalecer los servicios estatales de salud, incorporar el talento humano y
proporcionar la infraestructura física y el equipamiento a las instituciones públicas de
salud.
4. Garantizar las prácticas de salud ancestral y alternativa mediante el
reconocimiento, respeto y promoción del uso de sus conocimientos, medicinas e
instrumentos.
5. Brindar cuidado especializado a los grupos de atención prioritaria establecidos en
la Constitución.
6. Asegurar acciones y servicios de salud sexual y de salud reproductiva, y garantizar
la salud integral y la vida de las mujeres, en especial durante el embarazo, parto y
postparto.
7. Garantizar la disponibilidad y acceso a medicamentos de calidad, seguros y
eficaces, regular su comercialización y promover la producción nacional y la utilización de
medicamentos genéricos que respondan a las necesidades epidemiológicas de la población.
En el acceso a medicamentos, los intereses de la salud pública prevalecerán sobre los
económicos y comerciales.
8. Promover el desarrollo integral del personal de salud.
Art. 364.- Las adicciones son un problema de salud pública. Al Estado le
corresponderá desarrollar programas coordinados de información, prevención y control del
consumo de alcohol, tabaco y sustancias estupefacientes y psicotrópicas; así como ofrecer
tratamiento y rehabilitación a los consumidores ocasionales, habituales y problemáticos.
40
En ningún caso se permitirá su criminalización ni se vulnerarán sus derechos
constitucionales.
Art. 366.- El financiamiento público en salud será oportuno, regular y suficiente, y
deberá provenir de fuentes permanentes del Presupuesto General del Estado. Los recursos
públicos serán distribuidos con base en criterios de población y en las necesidades de
salud.
El Estado financiará a las instituciones estatales de salud y podrá apoyar
financieramente a las autónomas y privadas siempre que no tengan fines de lucro, que
garanticen gratuidad en las prestaciones, cumplan las políticas públicas y aseguren calidad,
seguridad y respeto a los derechos. Estas instituciones estarán sujetas a control y
regulación del Estado.
41
3.1 MARCO LEGAL INSTITUCIONAL
HEMOCENTRO DE LA CRUZ ROJA ECUATORIANA
Reseña Histórica
El Hemocentro fue creado por la Cruz Roja Ecuatoriana a un costo de tres millones
de dólares, financiados por el Ministerio de Salud Pública. La edificación se ubica en
Carapungo, al norte de la capital. Este es la matriz de los bancos existentes a nivel nacional
y, además, será el encargado de validar el producto sanguíneo antes de su utilización, para
lo cual cuenta con un moderno equipamiento. Las unidades sanguíneas se destinarán a los
bancos de sangre dependientes del ministerio.
El beneficiado directo será el usuario, quien ya no tendrá que pagar cantidades que
superan los cien dólares por unidad (pinta), sino que obtendrá el producto en casi la mitad
del valor anotado.
Su maquinaria puede realizar 400 pruebas, 75 tipificaciones por hora y tiene
capacidad para recibir hasta 200 donantes. “De esta manera se cumple con los procesos
obligatorios, que son tipificación directa, inversa, rastreo e identificación de anticuerpos
irregulares”.
Los bancos de sangre del país deberán seguir captando donantes, pero todo el
producto recaudado llegará a la nueva institución para su aprobación. “El Hemocentro
recibirá una muestra de la sangre para evaluarla; luego se envía el informe que indica que
puede ser despachada o debe ser desechada”.
Entre las innovaciones está la exportación del producto sanguíneo. Dentro del
proceso de fraccionamiento de la sangre se obtiene el plasma, cuya duración puede ser de
hasta un año si se lo refrigera adecuadamente, mientras que la sangre tiene una duración
máxima de 40 días. El Hemocentro Nacional trabaja con un sistema informatizado con los
bancos de sangre a escala nacional, en donde verifican el tipo de donante. La sangre es
sometida a un proceso de purificación y luego se garantiza el uso.
Visión
Al 2019, la Cruz Roja Ecuatoriana forma parte de las comunidades, alcanzando con
ellas, su bienestar y su desarrollo sostenible.
42
Misión
Es proveer en cantidades suficientes y de forma oportuna hemocomponentes seguros
para mejorar la calidad de vida de personas vulnerables; cumpliendo estándares nacionales
e internacionales, con un desarrollo tecnológico continuo, marcando la diferencia en lo que
hacemos a nivel nacional.
Política de Calidad
El Hemocentro Nacional proveerá sangre y hemocomponentes para satisfacer a sus
clientes, cumpliendo los estándares de calidad nacionales e internacionales, con el soporte
de personal competente, la optimización de recursos y la mejora continua de sus procesos.
Objetivos de calidad
Mantener la satisfacción del cliente
Cumplir con los controles internos y externos
Disminuir la cantidad de Producto No Conforme
Aumentar la donación voluntaria, altruista y repetitiva de sangre.
Gráfico 10. Escala logarítmica utilizado en el Hemocentro de la CRE (No
Reactivo – Reactivo)
Fuente: La escala logarítmica se basa en la relación 2:1. Hemocentro de la CRE
MUESTRAS (SUERO)
NO REACTIVO
ACEPTADA
REACTIVO
REACTIVO
PUNTO DE CORTE
NO REACTIVO
REACTIVO NO
REACTIVO
43
CAPÍTULO IV
4. MARCO METODOLÓGICO
Este estudio contiene el principio básico del respeto individual a cada uno de los
donantes reservando su derecho a la autodeterminación y el derecho a tomar decisiones
informadas, incluyendo la participación en la investigación, así como mantener la
confidencialidad de sus resultados expuestas en esta investigación.
4.1 TIPO DE INVESTIGACIÓN
En la presente investigación se realizó un estudio de tipo descriptivo, el cual permite
describir cómo se distribuye una enfermedad o evento en cierta población y durante un
período de tiempo determinado; cuál es su frecuencia y cuáles son los determinantes o
factores asociados, es también es transversal porque mide a la vez la prevalencia de la
exposición y del efecto en una muestra poblacional en un solo momento temporal; es
decir, permite estimar la magnitud y distribución de una enfermedad en un momento dado,
por lo que el estudio se realizó en un tiempo determinado de 3 meses y finalmente es de
tipo Bibliográfica documental porque se utilizó varios artículos científicos y estudios
previos para el sustento teórico.
4.2 DISEÑO DE LA INVESTIGACIÓN
La determinación de anticuerpos IgM en donantes es de tipo No Experimental, ya
que no se manipula deliberadamente las variables y se observan los fenómenos tal y como
se dan en su contexto natural para posteriormente analizarlos.
4.3 POBLACIÓN Y MUESTRA
Una vez definido el tipo y diseño de la investigación, se describe a continuación la
población o universo objeto de este estudio.
Según lo señala Balestrini (1997) por población se entiende “un conjunto finito o
infinito de personas, cosas o elementos que presentan características comunes y para el
cual serán validadas las conclusiones obtenidas en la investigación”.
44
Población: La población consta de todos los donantes que decidieron participar de
forma voluntaria en el estudio, expresando su consentimiento por escrito, y que acudieron
a la CRE de la Junta Provincial del Guayas, durante el periodo Octubre – Diciembre del
2015. El tamaño de la población fue de 182 donantes .El presente estudio se realizó en el
Hemocentro de la Cruz Roja Ecuatoriana (Quito)
Muestra: No se calculó muestra, porque se utilizó toda la población de donantes,
cuyas muestras fueron procesadas en el laboratorio de serología del Hemocentro de la
Cruz Roja Ecuatoriana, entre las edades de 18 a 58 años.
4.4 TÉCNICAS E INSTRUMENTOS DE RECOLECCIÓN DE DATOS
Las técnicas de recolección de datos pueden considerarse como la forma o
procedimiento que utiliza el investigador para recolectar la información necesaria en el
diseño de la investigación. Dentro de las técnicas de recolección de información que se
usaron fueron:
Revisión Documental: Para esto se identificaron las fuentes documentales, las cuales
están representadas por información bibliográfica, ya que se utilizó varios artículos
científicos y estudios previos a más de información que se pudo recolectar en el transcurso
de la investigación, para dar respuesta a las necesidades planteadas.
Registro de observación: Es una técnica utilizada en la investigación documental,
que permite al observador plasmar en un registro de forma clara y precisa toda la
información obtenida para facilitar su posterior análisis.
En cuanto el instrumento se utilizó un sistema informático de Banco de Sangre
llamado Delphyn, el cual es una herramienta flexible de gestión de datos, permitiendo una
informatización completa de todas las actividades llevadas a cabo por los bancos de sangre
(donante y receptor), lo que permite a los usuarios un control de componentes sanguíneos
fácil. Este sistema está diseñado para el manejo, control e impresión de la información
generada en un Banco de sangre tal como datos personales, antecedentes, diagnóstico, para
diferentes donantes, pre donantes y receptores.
45
4.5 TÉCNICAS PARA PROCESAMIENTO DE DATOS Y ANÁLISIS DE
RESULTADOS.
Para la detección de anticuerpos IgM, se utilizó una hoja de recolección de datos,
sobre los antecedentes de los donantes, edad, género, ocupación, código y lugar de
vivienda.
Una vez recolectada la información, fue preciso seguir una serie de pasos a fin de
organizarla e intentar dar respuesta a los objetivos planteados en la investigación. Los
datos empíricos obtenidos después de aplicar las técnicas e instrumentos de recolección, se
clasificaron, registraron y tabularon para su posterior análisis e interpretación.
Los datos fueron sometidos a las técnicas de registro y tabulación, lo que permitió la
reducción y sintetización de los mismos en función de su posterior interpretación. Así
mismo, se recurrió a un proceso de selección y orden del material encontrado durante las
revisiones bibliográficas, hemerográficas e internet.
Los datos se ingresaron a través de hojas de cálculo con el programa de puntuación
Microsoft Excel, creado exclusivamente para esta investigación, usando los mismos
códigos que proporcionan el Hemocentro de la CRE.
4.6CRITERIOS DE INCLUSIÓN
Donantes hombres o mujeres
Edad comprendida entre 18 y 58 años de edad.
Participar de manera voluntaria al estudio. (Formato)
4.7CRITERIOS DE EXCLUSIÓN
Muestras inadecuadas (lipémicas, hemolizadas o serología positiva)
46
4.8 OPERACIONALIZACIÓN DE LAS VARIABLES
Tabla 4. Operacionalización de Variables Independientes
VARIABLES DEFINICIÓN
CONCEPTUAL
DEFINICIÓN
OPERACIONAL
INDICADORES UNIDAD DE
ANÁLISIS
TÉCNICA E
INSTRUMENTOS
Variable
Independiente
Determinación por
Microelisa de
anticuerpos IgM
anti -Dengue
Técnica de inmunoensayo
indirecta, en el cual se utiliza
dos anticuerpos, uno primario
contra el antígeno y uno
secundario marcado contra el
primario, que sirve para
detectar la presencia de
anticuerpos séricos contra el
virus del Dengue.
Aplicación de la Técnica
de Microelisa Indirecto en
donantes de sangre
asintomáticos provenientes
de la provincia del
Guayas, zona endémica al
Dengue.
Reactivo
No Reactivo
Zona Gris
Donantes
asintomáticos
Aplicación de la
Técnica de Microelisa
Espectrofotómetro
47
Tabla 5. Operacionalización de Variables Dependientes
VARIABLES DEFINICIÓN
CONCEPTUAL
DEFINICIÓN
OPERACIONAL
INDICADORES UNIDAD
DE
ANÁLISIS
TÉCNICA E
INSTRUMENTOS
Variable
Dependiente
Virus del Dengue
Enfermedad infecciosa
producida por el virus del
Dengue y transmitido por el
mosquito Aedes aegypti que
puede producir infecciones
asintomáticas, febriles o
mortales.
Transmisión del virus del
Dengue por transfusiones
de sangre a partir de
donantes sin síntomas
procedentes de una zona
endémica al Dengue.
(Guayas)
Infecciones
asintomáticas
Donantes de
18 – 58 años
de edad.
Hoja de recolección de
datos.
Programa Delphyn
Consentimiento
informado
48
Tabla 6. Operacionalización de Variables Intervinientes
VARIABLE
DEFINICIÓN CONCEPTUAL
INDICADOR
ESCALA
FUENTE DE VERIFICACIÓN
VALOR
Edad
Valor numérico que se obtiene por la
diferencia entre la fecha de
nacimiento y la presente fecha.
% Cuantitativa
continua
Hoja de recolección de
datos
18-28
28-38
38-48
48-58
Sexo Características biológicas que definen al ser
humano. % Nominal
Hoja de recolección de
datos
Femenino
Masculino
Lugar de
procedencia
Lugar en que se reside o se vive
habitualmente. % Nominal
Hoja de recolección de
datos
Guasmo
Durán
Coop. Montesinaí
Milagro
Ocupación Actividad que desarrollan % Nominal
Hoja de recolección de
datos
Ama de casa
Militar
Empleado privado
Tipo de
Donación
Es la acción de aceptar una extracción de
la propia sangre, por parte del personal
médico, de forma voluntaria sin exigir
ninguna compensación monetaria.
% Nominal
Hoja de recolección de
datos
Voluntaria
Compensatoria
49
PLAN DE ANALISIS ESTADISTICO
Base de datos: A través de los datos del programa Delphyn se realizó
gráficas y medidas estadísticas descriptivas para cada variable.
Estudio de anticuerpos IgM anti – Dengue: Se identificó todos los casos
reactivos, no reactivos y zona gris en la muestra estadística de las 182 donantes. En
razón de los escasos resultados positivos para anticuerpos IgM anti – Dengue, no se
utilizó la prueba de Chi cuadrado ya que existen restricciones para su uso cuando la
frecuencia es mínima.
4.9 PROCEDIMIENTOS Y MÉTODOS DE DIAGNÓSTICO
Toma y preparación de muestras
Para este estudio se utilizó sueros, las cuales se transfirieron a tubos estériles. Se
recogieron un total de 200 muestras de sangre periférica en tubos sin anticoagulante,
durante los meses Octubre a Diciembre del 2015, las cuales se descartaron 18 sueros
debido a muestras lipémicas, hemolizadas o tener algún resultado reactivo en las pruebas
de tamizaje con el fin de evitar interferencias en el ensayo. Finalmente se procesaron 182
muestras para el estudio, ya que cumplían con todos los requisitos necesarios para el
estudio.
Cada uno de los donantes recibió un consentimiento informado para su firma
respectiva. Los sueros fueron almacenados en congelación a -20°C hasta el momento del
procesar la muestra. A continuación se realizó la determinación empleando la Técnica de
ELISA con NovaLisa, NOVATEC Immundiagnóstica GMBH.
Principio del ensayo de ELISA NOVATEC
La determinación inmunoenzimática cualitativa de anticuerpos específicos contra los
Dengue-virus se basa en la técnica del ELISA (Enzymlinked Immunosorbent Assay). Las
50
tiras de micropocillos que se usan como fase sólida están recubiertas con antígenos
específicos del Dengue-virus. Los anticuerpos existentes en la muestra se unen a los
antígenos inmovilizados de la placa de microtitulación. El conjugado de anticuerpos IgM
anti humano con peroxidasa de rábano, se une con los complejos antígeno-anticuerpo en
muestras positivas. Estos complejos inmunológicos desarrollan una coloración azul
después de incubarlos con sustrato de Tetrametilbenzidina (TMB). Finalmente se añade
ácido sulfúrico para detener la reacción, causando un cambio de coloración de azul a
amarillo. La densidad óptica se mide con un lector de ELISA a 450nm a 630nm.
Estabilidad y almacenaje
El reactivo (kit) tiene que estar almacenado de 2 - 8°C. No se debe usar los reactivos
después de la fecha de caducidad, que se indicada en la etiqueta de las botellas y en el
exterior. Las muestras deben ser almacenadas a una temperatura de 2 – 8°C, si el ensayo se
realiza dentro de 5 días después de la toma de sangre, en caso contrario se almacena a una
temperatura de -20°C en tiempos prolongados.
4.10 PREPARACIÓN DEL ENSAYO
El procesamiento a realizarse es semiautomático. Utilizando un lavador e incubadora
automático, junto a un lector. Primeramente antes de proceder al procesamiento preparar la
solución de lavado diluyendo el buffer de lavado con una concentración de 1:20. Es decir,
añadir todo el contenido de la botella de buffer de lavado (50ml) en una probeta y
aforamos con un volumen de 1000 ml de agua destilada para las 96 determinaciones. Esta
solución de trabajo es estable por dos semanas a una temperatura de 15 – 30°C.
Dilución de las muestras
Agitar bien las muestras descongeladas antes de diluirlas. Los sueros tienen que estar
diluidas en relación 1+100 con el tampón de dilución para la muestra de IgM, por ejemplo
10µl de la muestra con 1ml de tampón. Se realiza diluciones para que no haya una
saturación de anticuerpos contra los antígenos fijados a la placa y haya una mejor unión
entre antígeno anticuerpo.
51
PASOS DE LA TÉCNICA DE ELISA
Usar la cantidad necesaria de tiras o pocillos en el soporte.
Dejar el pocillo A1 como celda del blanco.
1. Pipetear 100 µl del Control Negativo en el pocillo B1 (reactivo verde)
Pipetear100 µl del reactivo Cut - Off 1 en el pocillo C1 (reactivo azul)
Pipetear100 µl del reactivo Cut – Off 2 en el pocillo D1 (reactivo azul)
Pipetear100 µl del Control Positivo en el pocillo E1 (reactivo rojo)
2. Pipetear 100 µl de las muestras diluidas en los pocillos respectivos.
3. Recubrir los pocillos con los autoadhesivos suministrados.
4. Mezclar suavemente haciendo girar la placa en una mesa plana por 30 segundos.
5. Incubar 1 hora ± 5 minutos a 37°Centígrados.
6. Después de la incubación, retirar el autoadhesivo y lavarla tres veces con 300µl de
la solución de lavado. Evitar el rebosamiento de los pocillos. El tiempo entre cada
lavado y cada aspiración tiene que ser por lo menos de 5 segundos. Para sacar el
resto del líquido de las tiras, es conveniente sacudirlas sobre papel absorbente. Se
debe asegurar que todas las celdas hayan sido lavadas completamente y secadas.
Nota: un lavado inapropiado podría dar resultados falsos positivos.
7. Pipetear 100µl de conjugado anti-IgM (Dengue-virus) en cada pocillo con
excepción del blanco.
8. Cubrir con una lámina adhesiva e incubar 30 minutos a temperatura ambiente (20 -
25°C). Evitando la luz solar directa.
9. Repetir el paso número 6.
10. Pipetear 100µl de sustrato de TMB en todos los pocillos.
11. Incubar exactamente 15 minutos en oscuridad a temperatura ambiente (20 - 25 C).
Después de la incubación se va a desarrollar un color azul a las muestras positivas.
12. Pipetear en todos los pocillos 100µl de la solución de parada en el mismo orden y
mismo intervalo de tiempo. Toda coloración azul formada durante la incubación se
convierte en amarilla.
13. Medir la absorbancia de la solución en cada pocillo con 450/620nm.
52
Manejo del equipo de incubación
Encender el equipo
Dejar 5 minutos para que se regule la temperatura.
Modificar la temperatura a 37°C por 1 hora.
Introducir la microplaca en la porta placas.
Pulsar la tecla de Start.
Manejo del equipo de lavadora
Encender el equipo
Asegurar de que la botella de desechos se encuentre vacía.
Pulsar la tecla de Program, y seleccionar el programa 1.
Modificar el wash read (cabezal), el wash row (fila), volumen, número de
ciclos y tiempo de espera para cada lavado.
Regresar con la tecla pre – wash back
Presionar la tecla RUN
Manejo del equipo de lectura
Encender el equipo y automáticamente se prende la impresora.
Presionar la tecla de absorbancia
Escoger la absorbancia 2 (450)
Presionar enter
Escoger la absorbancia 4 (630)
Presionar enter
Presionar READ
Medición
Medir la extinción de todos los pocillos con una longitud de onda de 450 nm y 630
nm anotar los resultados de los controles y de las muestras en la hoja de resultados.
53
Criterios de validez del ensayo
El ensayo es válido si se cumplen los siguientes criterios:
Blanco en A1 extinción < 0.100
Control negativo en B1 extinción < 0.200 y <cut-off
Control cut-off en C1 y D1 extinción 0,150 – 1,30
Control positivo en E1 extinción >cut-off
Si estos criterios no se cumplen, la prueba no es válida y deberá repetirse.
Cálculo del valor de la medición
El cut-off se obtiene de los valores de la extinción de los dos controles Cut-off,
dividiendo para 2.
Interpretación de los resultados
Las muestras se consideran reactivas cuando el valor de la extinción es mayor al
10% del valor del cut-off.
Las muestras se consideran no reactivas si el valor de la extinción esta por lo bajo
del 10% del cut-off. A esta referencia se la llama Zona Gris.
Características del ensayo
Precisión: Es la capacidad de un instrumento de dar el mismo resultado en
mediciones diferentes realizadas en las mismas condiciones.
Especifidad: La especificidad del ensayo se define como la probabilidad que tiene el
ensayo de dar un resultado negativo en ausencia de la sustancia a analizar específicamente
(97.6 %).
Sensibilidad: La sensibilidad del ensayo se define como la probabilidad que tiene el
ensayo de dar un resultado positivo en presencia del analítico específico (90 %).
54
Interferencias
Las muestras lipémicas, ictéricas o hemolizadas pueden interferir con el equipo
ELISA.
Un mal lavado provoca una mala precisión y resultados erróneamente
argumentados.
Mal pipeteo de reactivo o muestras
Inadecuada temperatura de incubación
Inadecuado almacenamiento de reactivos (variabilidad de temperaturas)
Reactivos caducados
Mal almacenamiento de muestras
Congelaciones y descongelaciones repetidas, pueden interferir con el ensayo.
Inactivación por calor de las muestras.
Limitaciones del ensayo
La familia de los Flaviviridae forma los serotipos del virus del Dengue, el virus de la
fiebre amarilla, el virus de la encefalitis japonesa B entre otros. Se tiene que considerar
que reacciones cruzadas con otros Flavivirus son posibles. Se recomienda confirmar un
resultado positivo con un método secundario. Así como también probar una muestra
reactiva con un segundo método serológico (inmunocromatografía). (Hayes E, 1992)
Consideraciones éticas
Para la toma de muestras se contó con la autorización del donante a través de un
consentimiento informado e igualmente con la autorización y vigilancia del personal del
Hemocentro de la CRE bajo normas de manejo ético, moral y profesional.
55
4.11 ASPECTOS ADMINISTRATIVOS
4.11.1 RECURSOS HUMANOS
Para la recopilación de la información se necesitó la colaboración de personas
especializadas en el tema en este caso de la tutora de tesis Msc. Mercedes Tapia, del Dr.
Marco Herdoiza, Director Técnico del Hemocentro de la CRE y personal del Hemocentro.
4.11.2 RECURSOS FÍSICOS:
Computadora, base de datos del programa de Delphyn,
Incubadora
Lavador de microplacas
Lector de ELISA
Centrífuga
Tubos de ensayo
Gradillas
Marcador
Pipetas 1000ul, 100ul, 10ul
Puntas amarillas y azules
Papel A4
Agua destilada
Probeta
56
Tabla 7. Cronograma de actividades
57
CAPITULO V
ANALISIS E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
Los elevados títulos de anticuerpos IgM obtenidos en el estudio resultó en un
mínimo porcentaje, de las 182 muestras procesadas, 2donantes fueron reactivas para
anticuerpos IgM contra el virus del Dengue, que corresponden al 1.10% Los donantes
fueron una mujer de 32 años procedente de la Cooperativa Montesinaí (zona rural) y un
hombre de 20 años de edad procedente de la ciudad de Milagros (zona urbana). Ninguno
de los participantes, incluidos los seropositivos, manifestó haber tenido antecedentes de
Dengue en los últimos tres meses o fiebre en los últimos 7 días.
Mientras que 8 donantes con un 4,40% corresponden a la zona gris, fase en la cual
podrían estar finalizando o iniciando un cuadro de Dengue asintomático; estos donantes
provienen de la zona urbana, por lo que el Dengue es más prevalente en estas zonas que en
las rurales.
Gráfico 11. Frecuencia de donantes según muestras rechazadas o aceptadas
Fuente: Hoja de datos
Elaboración:Villamarin, E. (2015). HCRE. Quito, Ecuador.
Análisis parcial: Se observa que 200 muestras se recolectaron durante el periodo
estimado, las cuales 18 se descartaron debido a muestras inadecuadas que podrían afectar
al ensayo, como problemas por lipemia, hemolisis o por presentar algún resultado reactivo
(VDRL) durante el tamizaje, por lo que se procesó 182 muestras ya que reunían las
condiciones necesarias para dicho estudio.
200
18
182
Total de muestras recolectadas Muestras descartadas Muestras procesadas
58
Tabla 8. Frecuencia de donantes según edad
Fuente: Hoja de datos
Elaboración: Villamarin, E. (2015). HCRE. Quito, Ecuador.
Gráfico 12. Frecuencia de donantes según edad
Fuente: Hoja de datos
Elaboración: Villamarin, E. (2015). HCRE. Quito, Ecuador.
Análisis parcial: La mayoría de los donantes estuvieron entre los 18 a 28 años de
edad, con el 65,93%, seguido de los 28 a 38 años con el 20,88%, luego con la edad de 38 a
48 años y finalmente con el 8,79% que corresponde con las edades de 48 a 58 años, con un
promedio edad de 28,5 años y la edad media fue 30,51 ± 7,80 años.
4,40%
8,79%
20,88%
65,93%
48 - 58 AÑOS
38 - 48 AÑOS
28 - 38 AÑOS
18 - 28 AÑOS
Frecuencia %
18 - 28 años 120 65,93%
28 - 38 años 38 20,88%
38 - 48 años 16 8,79%
48 - 58 años 8 4,40%
Total 182 100,00%
59
59,89%
40,11%
Masculino Femenino
Tabla 9. Frecuencia de donantes según género
Fuente: Hoja de datos
Elaboración: Villamarin, E. (2015). HCRE. Quito, Ecuador.
Gráfico 13. Frecuencia de donantes según género
Fuente: Hoja de datos
Elaboración: Villamarin, E. (2015). HCRE. Quito, Ecuador.
Análisis parcial: Se observa que el 59, 89% de los donantes fueron de sexo
masculino y 40,11% corresponde al sexo femenino, con una diferencia significativa de
19.78%.
Frecuencia %
Masculino 109 59,89%
Femenino 73 40,11%
Total 182 100,00%
60
Tabla 10. Frecuencia de donantes según ocupación
Frecuencia %
Donantes sin datos 50 27%
Estudiantes 61 34%
Obrero 15 8%
Trabajadores 10 5%
Otras ocupaciones 46 26%
Fuente: Hoja de datos
Elaboración: Villamarin, E. (2015). HCRE. Quito, Ecuador.
Gráfico 14. Frecuencia de donantes según la ocupación
Fuente: Hoja de datos
Elaboración: Villamarin, E. (2015). HCRE. Quito, Ecuador.
Análisis parcial: Se observa que el predominio de las donaciones fueron por parte
de estudiantes que corresponden al34%, mientras que el 27% pertenece a donantes sin
información previa, el 8% corresponde a obreros, el 5% a trabajadores y el 26%
corresponde a otras ocupaciones menos frecuentes.
27%
34% 8%
5%
26%
Donantes sin datos Estudiantes Obreros
Trabajadores Otras ocupaciones
61
Tabla 11. Frecuencia de donantes según las provincias del Ecuador
Frecuencia %
Guayas 158 86,81%
El Oro 3 1,65%
Los Ríos 4 2,20%
Manabí 3 1,65%
Pichincha 1 0,55%
Santa Elena 8 4,40%
Donantes sin datos 5 2,75%
Total 182 100,00%
Fuente: Hoja de datos
Elaboración: Villamarin, E. (2015). HCRE. Quito, Ecuador.
Gráfico 15. Frecuencia de donantes según las provincias del Ecuador
Fuente: Hoja de datos
Elaboración: Villamarin, E. (2015). HCRE. Quito, Ecuador.
Análisis parcial: El 86,81% de los donantes provienen de la provincia del Guayas,
el 1,65% provienen de la provincia de El Oro al igual que la provincia de Manabí, el
2,20% corresponde a la provincia de Los Ríos, el 0,55% corresponde a la provincia de
Pichincha, el 4,40% proceden de la provincia de Santa Elena y el 2,75% son donantes sin
datos.
86,81%
1,65% 2,20% 1,65% 0,55% 4,40% 2,75%
Guayas El Oro Los Ríos Manabí Pichincha SantaElena
Donantessin datos
62
Tabla 12. Frecuencia de los donantes según la zona poblacional
Frecuencia %
Zona Urbana 149 81,87%
Zona Rural 28 15,38%
Donantes sin datos 5 2,75%
Total 182 100,00%
Fuente: Hoja de datos
Elaboración: Villamarin, E. (2015). HCRE. Quito, Ecuador.
Gráfico 16. Frecuencia de donantes según la zona poblacional
Fuente: Hoja de datos
Elaboración: Villamarin, E. (2015). HCRE. Quito, Ecuador.
Análisis parcial: Se observa que el 81,87% de los donantes corresponden a la zona
urbana, mientras que el 15, 34% de los donantes corresponden a la zona rural. El 2.75%
pertenece a donantes sin datos.
81,87%
15,38%
2,75%
Urbana Rural Donantes sin datos
63
94,51%
4,40% 1,10%
No Reactivo Zona Gris Reactivo
Tabla 13. Frecuencia de donantes según resultados de anticuerpos IgM
Frecuencia %
No reactivo 172 94,51%
Zona Gris 8 4,40%
Reactivo 2 1,10%
Total 182 100,00%
Fuente: Hoja de datos
Elaboración: Villamarin, E. (2015). HCRE. Quito, Ecuador.
Gráfico 17. Frecuencia de donantes según resultados de anticuerpos IgM
Fuente: Hoja de datos
Elaboración: Villamarin, E. (2015). HCRE. Quito, Ecuador.
Análisis parcial: Se observa que 172 donantes correspondientes al 94,51% fueron
no reactivos para anticuerpos IgM contra el virus del Dengue, 2 de los donantes
correspondiente al 1.10% fueron reactivos para IgM y 8 donantes, que pertenecen al
4.40% se encuentran dentro de la zona gris.
64
Tabla 14. Distribución de anticuerpos IgManti - Dengue según la zona
poblacional
Frecuencia %
No Reactivo/Rural 27 14,84%
No Reactivo/Urbano 140 76,92%
Reactivo/Rural 1 0,55%
Reactivo/Urbano 1 0,55%
Zona Gris/Rural 0 0,00%
Zona Gris/Urbano 8 4,40%
Donantes sin datos 5 2,75%
Total 182 100,00%
Fuente: Hoja de datos
Elaboración: Villamarin, E. (2015). HCRE. Quito, Ecuador.
Gráfico 18. Distribución de anticuerpos IgM contra el Dengue según la zona
poblacional
Fuente: Hoja de datos
Elaboración: Villamarin, E. (2015). HCRE. Quito, Ecuador.
Análisis parcial: El 14,84% de los no reactivos provienen de la zona rural, mientras
que el 76,92% pertenece a la zona urbana. El 0,55% de los reactivos provienen de la zona
rural al igual que la zona urbana. El 4,40% de los donantes que están dentro de la zona gris
corresponden a la zona urbana, mientras que el 2,75% son donantes sin datos. No
obtuvimos resultados sobre zona gris en el área rural.
14,84%
76,92%
0,55% 0,55% 0,00% 4,40% 2,75%
65
Tabla 15. Frecuencia de donantes según el lugar de procedencia de la provincia
de Guayaquil
Frecuencia %
Guasmo 13 7%
Milagro 36 20%
Bucay 4 2%
Sauces 4 2%
El Achiote 3 2%
Huancavilca 3 2%
Coop. Montesinaí 5 3%
Playones 8 4%
Yaguachi 3 2%
Duran 9 5%
Isla Trinidad 5 3%
La Prosperina 3 2%
La Ataroza 7 4%
Cdla. Primavera 2 9 5%
Los Girasoles 8 4%
Cdla. Santa Cecilia 8 4%
Barrio Las Fuentes 5 3%
Ventura 9 5%
Valle alto 3 2%
Barrio Santa Teresita 6 3%
Coop. Carlos Magno 7 4%
Recreo 3era Etapa 5 3%
Las Acacias 4 2%
Coop. Valle Hermoso 8 4%
Sedalana y García Moreno 2 1%
Donantes sin información 5 3%
Total 182 100%
Fuente: Hoja de datos
Elaboración: Villamarin, E. (2015). HCRE. Quito, Ecuador.
Análisis parcial: Este gráfico representa los lugares de procedencia de los donantes,
se observa que el 20% corresponde a la ciudad de Milagro, el 7% pertenece al barrio del
Guasmo, el 3% corresponde a donantes sin información.
66
5.1 DISCUSIÓN
El Dengue es una enfermedad de transmisión vectorial pero están descritos algunos
casos de transmisión por transfusión. Además, la mayoría de las infecciones pueden ser
subclínicas o asintomáticas que puedan propiciar que un donante en fase virémica de la
enfermedad o un caso asintomático puedan transmitir la enfermedad a un receptor.
En este estudio se observa que el 1,10% de los donantes asintomáticos fueron
reactivos para anticuerpos IgM anti-Dengue, lo que significa que estuvieron en contacto
reciente con el virus, dejando el 94,51% de donantes susceptibles a este virus, por el hecho
de que viven en una zona endémica para el Dengue. Existen estudios previos, que
coincide con las cifras encontradas en países endémicos al Dengue como Colombia, donde
se detectaron anticuerpos IgM en el 2 % de las muestras estudiadas.
El 4,40% corresponde a donantes en zona gris, fase en la cual se detecta los
anticuerpos IgM, pero no se los considera reactivos ni no reactivos, ya que pueden estar
finalizando una infección desapercibida o iniciar un cuadro de Dengue asintomática, como
ya se indicó anteriormente los títulos de los anticuerpos IgM, puede ser detectables hasta
un periodo de 2 a 3 meses después de la infección.
Otros estudios han reportado resultados superiores, por el hecho de que han tenido
un mayor número de donantes. También se han realizado la detección de antígeno viral
mediante técnicas de biología molecular, como por ejemplo en Puerto Rico fue detectado
RNA del virus del Dengue en uno de cada 1000 donantes de sangre. En Honduras y Brasil
fueron detectados en el 0,3% y 0,04% de los donantes de sangre respectivamente y en
Australia estuvo ausente en todos los donantes estudiados.
Los datos de este estudio mostraron un mayor porcentaje de donantes masculinos
59,89% y de 40,11% de donantes femeninas, la mayoría de los donantes 65,93% estaban
dentro de los rangos de 18 a 28 años de edad. Estos resultados son similares al estudio en
el Norte de la India que reportaron 63.8% de donantes masculinos como el predominio de
los donantes, al igual que el estudio realizado en Medellín Colombia, donde el 67% de la
población estudiada fueron hombres, la edad más frecuente fue 18 años y la mediana fue
28,5 años, (rango de 18 a 56 años).
67
En los países con alta prevalencia de Dengue, la introducción de una prueba de
detección o el proceso de reducción de patógenos, podría prevenir las infecciones por
transfusiones de sangre, pero la proporción sería muy baja, debido a infecciones
asintomáticas en comparación con el número total de infecciones con presencia de
síntomas. Debido a que habido casos de transmisión de Dengue por transfusiones, la
introducción de métodos serológicos cuantitativos o moleculares para determinar la
presencia de anticuerpos anti-Dengue o la detección del virus en donantes de sangre en las
regiones endémicas debe establecerse de manera que la calidad de las transfusiones esté
garantizada.
El Dengue lleva una pesada carga económica para la sociedad, en términos de los
costos médicos y las medidas de control, los enfoques alternativos necesitan ser exploradas
como la aplicación de una prueba de detección adecuada o reducción de patógenos, que
pueden ofrecer un nivel similar de la seguridad.
La eficiencia de la transmisión depende de una combinación de factores: cantidad y
la estabilidad del virus, volumen de sangre transfundida, viremia y el estado inmunológico
del receptor. Aunque los títulos de viremia de Dengue en huéspedes vertebrados son
generalmente en el rango de 10 -10 95 copias / ml, es probable que los niveles más bajos y
más corta duración de la viremia se producen durante la infección asintomática en
comparación con la fiebre del Dengue o fiebre hemorrágica del Dengue.
Las enfermedades infecciosas emergentes representan una amenaza a la población
humana en general, incluyendo receptores de transfusiones de sangre. El Dengue se está
extendiendo rápidamente a nuevas áreas y con el aumento de la frecuencia de brotes
importantes. Analizar la sangre para detectar Dengue en donantes de países donde el
Dengue es endémico sería costoso, por lo tanto, se recomienda hacerlo solo después de un
brote epidémico. A parte los trabajadores de la salud deben ser conscientes de que la
transmisión del virus del Dengue puede ocurrir también por exposiciones mucocutánea, así
como también por la exposición a pinchazos de aguja. Esta puede ser especialmente
relevante para los trabajadores de la salud que atienden a pacientes con dengue con
hemorragia en zonas de escasos recursos en las que los guantes y el acceso a las buenas
medidas de control de infecciones son limitados.
68
5.2 CONCLUSIONES
Se demostró en este estudio de que es posible la transmisión del Dengue mediante
transfusiones de sangre, a partir de la detección de anticuerpos IgM, lo que significa que
en los últimos siete días estuvieron en contacto con el virus sin haber presentado síntomas
típicos de la enfermedad. En esta investigación se estableció que se necesita realizar una
mejor hemovigilancia hacia los donantes especialmente durante los brotes epidémicos,
tiempo en el cual es más propenso a producirse infecciones asintomáticas, con el propósito
de mejorar los hemocomponentes y que tengan un mayor grado de control de calidad.
Se describió los mecanismos por el cual se puede contraer el virus, aunque la
principal vía es a través de la picadura del vector (Aedes aegypti), aunque es posible
contraer por otras causas, mediante la transmisión vertical (transmisión intraparto),
transmisión nosocomial a través de lesiones por pinchazos y la exposición
mucocutánea. Esta enfermedad también se puede transmitir de persona a persona,
mediante transfusiones de cualquier componente sanguíneo o trasplantes de órganos. Esto
afectará la disponibilidad de suministro de sangre a medida que más donantes de sangre se
difieren debido a la infección del Dengue.
Se determinó en este estudio los posibles factores para que los donantes adquieran el
virus del Dengue, entre estos están que primeramente pertenezcan a una zona endémica,
que pertenezcan a zonas rurales o urbanas y también depende de la ocupación en que se
desempeñe el donante, ya que este será expuesto con mayor riesgo a la enfermedad. Uno
de los problemas a nivel mundial causante de esta enfermedad es el cambio climático
sobre todo en temporadas de lluvia ya que ha provocada que este virus se extienda a
nuevas regiones.
Estos hallazgos permitieron un primer acercamiento a este problema donde resulta
posible que los donantes de sangre asintomáticos puedan transmitir la infección a sus
receptores. Sin embargo, se deben realizar otros estudios determinando además de
anticuerpos IgM, la presencia del virus (biología molecular), para evaluar la seguridad de
la sangre en países donde el Dengue es endémico, pero en una muestra representativa de la
población de donantes y en diferentes momentos epidemiológicos.
69
5.3 RECOMENDACIONES
Realizar más estudios de serovigilancia, para determinar el comportamiento de los
donantes dentro de regiones endémicas.
Mejorar la hemovigilancia e implementar estrategias para prevenir la transmisión de
enfermedades por transfusiones, en general de infecciones contagiadas por vectores. En
personas que viajan a países en los que las infecciones zoonóticas son prevalentes, puede
exponer en forma inadvertida a infecciones por agentes patógenos que pueden producir
infecciones asintomáticas, que podrían transmitirse por transfusión. Los donantes
potenciales, que han realizado viajes a zonas endémicas o viven en una zona endémica,
deben ser diferidos por un año. Los Bancos de Sangre deben contar con un listado de
países, zonas y ciudades de enfermedades vectoriales endémicas para que puedan tomar
una decisión correcta.
Monitorizar la incidencia de la enfermedad y la circulación del virus, con el fin de
valorar el progreso hacia los objetivos de eliminación, evaluar la circulación de los
serotipos virales, proporcionar información para la planificación y estimación de
programas preventivos.
Efectuar futuros estudios en diferentes regiones geográficas del país durante la
temporada de transmisión del Dengue para establecer la incidencia máxima de donaciones
virémicas asintomáticas, las tasas de transmisión transfusional y consecuencias clínicas en
los receptores, para asegurar el mantenimiento de la transfusión de sangre segura, tomando
en cuenta los recursos económicos y las prioridades de salud del país.
70
BIBLIOGRAFÍA
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• Causas de tener bajas la IgG y la IgM. Recuperado de:
http://www.ehowenespanol.com/cuales-son-causas-igg-igm-info_182112/
78
ANEXOS
Anexos 1. Muestras de la provincia del Guayas
Fuente: Villamarin, E. (2015). HCRE. Quito, Ecuador.
Anexos 2. Muestras y kit de ELISA para procesar en el Laboratorio
Fuente: Villamarin, E. (2015). HCRE. Quito, Ecuador.
Anexos 3. Diluciones de las muestras, para su posterior procesamiento
Fuente: Villamarin, E. (2015). HCRE. Quito, Ecuador.
79
Anexos 4. Fase de Incubación
Fuente: Villamarin, E. (2015). HCRE. Quito, Ecuador.
Anexos 5. Fase de lavado
Fuente: Villamarin, E. (2015). HCRE. Quito, Ecuador.
Anexos 6. Fase de Conjugado
Fuente: Villamarin, E. (2015). HCRE. Quito, Ecuador.
80
Anexos 7. Fase de Substrato (TMB)
Fuente: Villamarin, E. (2015). HCRE. Quito, Ecuador.
Anexos 8. Espectrofotómetro ELISA
Fuente: Villamarin, E. (2015). HCRE. Quito, Ecuador.
81
Anexos 9. Formato de consentimiento para los donantes
UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
Fecha:……………………..
FORMULARIO DE CONSENTIMIENTO INFORMADO DE TESIS SOBRE
LA “DETERMINACIÓN POR MICROELISA DE ANTICUERPOS IgM CONTRA
EL VIRUS DEL DENGUE”
Estamos invitando a usted a participar de un proyecto de investigación científica que
permitirá entender mejor la enfermedad del DENGUE, su prevención y los posibles
riesgos de transmisión por transfusiones sanguíneas, para lo cual se utilizará las mismas
muestras extraídas durante la donación para este estudio.
La información obtenida es confidencial y anónima: en ningún lugar se hará público
el nombre de las personas participantes ni sus características. Sólo serán publicados datos
generales para el estudio de la tesis.
Su participación será muy agradecida y contribuirá a la prevención de Dengue y su
transmisión. Si usted acepta participar de este estudio, le agradeceremos que preste su
conformidad por escrito completando y firmando el Formulario.
Yo,…………………………..…. Autorizo que se realice los exámenes necesarios
para el proyecto de investigación y proveer información general para el estudio explicado
anteriormente, de cuyos objetivos fui informado y he comprendido en su totalidad.
Nombre y Apellido Nº. CI Firma
Fuente: Villamarin, E. (2015). HCRE. Quito, Ecuador.
82
Anexos 10. Hoja de recolección de datos
UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
“DETERMINACIÓN POR MICROELISA DE ANTICUERPOS IgM CONTRA EL
VIRUS DEL DENGUE”
CÓDIGO EDAD SEXO OCUPACIÓN LUGAR DE
PROCEDENCIA
TIPO DE
DONACIÓN
OBSERVACIONES
Fuente: Villamarin, E. (2015). HCRE. Quito, Ecuador.
83
Anexos 11. Vocabulario
1. Antropofílico: Se dice del organismo especialmente adaptado para parasitar o
infectar al hombre.
2. Astenia: Debilidad o fatiga general que dificulta o impide a una persona realizar
tareas que en condiciones normales hace fácilmente.
3. Autofagia: es un proceso celular que se encarga de la degradación y reciclaje de
componentes celulares.
4. Citocinas: Las citocinas (también denominadas citoquinas) son proteínas que
regulan la función de las células que las producen sobre otros tipos celulares. Son
los agentes responsables de la comunicación intercelular, inducen la activación de
receptores específicos de membrana, funciones de proliferación y diferenciación
celular, quimiotaxis, crecimiento y modulación de la secreción de
inmunoglobulinas.
5. Clatrinas: es una proteína que forma el recubrimiento de las microcavidades de
membranas celulares donde se sitúan receptores de lipoproteínas.
6. Cromógeno: Nombre dado a ciertas sustancias incoloras por sí mismas, pero
capaces, bajo diversas influencias (oxidación) de originar productos coloreados.
7. DENCO: es un proyecto investigativo, del cual fue el resultado de una
convocatoria a nivel mundial de los especialistas en los temas relacionados con el
Dengue: epidemiología, carga de la enfermedad y transmisión; manejo clínico,
prestación de servicios clínicos; manejo de vectores, dotación de servicios para el
control de vectores; diagnóstico de laboratorio, pruebas diagnósticas; vigilancia,
preparación y respuesta ante emergencias.
8. Distrés Respiratorio: es una insuficiencia respiratoria grave, debida a edema
pulmonar no cardiogénico, causado por aumento de la permeabilidad de la barrera
alvéolo - capilar y secundario a daño pulmonar agudo.
9. Eclosionar: Abrir o romper un huevo al nacer el animal que se ha desarrollado en
su interior.
10. Efusión pleural: es una colección de líquido entre el pulmón y la pared del tórax,
debido a una infección.
11. Endocitosis: es un proceso por el cual la célula introduce moléculas grandes o
partículas, y lo hace englobándolas en una invaginación de la membrana
84
citoplasmática, formando una vesícula que termina por desprenderse de la
membrana para incorporarse al citoplasma.
12. Endosoma: son unos compartimentos membranosos que presentan una forma
irregular, generalmente con aspecto de grandes "bolsas" y a veces también forman
túbulos membranosos.
13. Ensamblaje: es el al alineamiento y mezcla de múltiples fragmentos de una
secuencia de ADN mucho mayor para reconstruir la secuencia original.
14. Epistaxis: es toda hemorragia con origen en las fosas nasales.
15. Equimosis: es una lesión subcutánea caracterizada por depósitos de sangre
extravasada debajo de la piel intacta.
16. Especificidad: La especificidad de una prueba es la probabilidad de que un sujeto
sano tenga un resultado negativo en la prueba. La especificidad es el porcentaje de
verdaderos negativos o la probabilidad de que la prueba sea negativa si la
enfermedad no está presente. Los falsos positivos son sujetos sanos diagnosticados
como enfermos.
17. Espectrofotometría: es la medición de la cantidad de energía radiante que absorbe
o transmite un sistema químico en función de la longitud de onda; es el método de
análisis óptico más usado en las investigaciones químicas y bioquímicas.
18. Exacerbación: es el aumento transitorio de la gravedad de un síntoma o de una
enfermedad. Depende unas veces del curso propio de la afección y otras obedece a
verdaderas complicaciones.
19. Exactitud: es el grado de concordancia entre el valor verdadero y el experimental.
Un instrumento es exacto si las medidas realizadas con él son todas muy próximas
al valor verdadero de la magnitud medida.
20. Exantema: Erupción de la piel, de color rojizo y más o menos extensa, que suele ir
acompañada o precedida de fiebre.
21. Extravasación: Escape de líquidos desde el espacio intravascular hacia el
extravascular.
22. Glucosaminoglucanos o proteoglucanos: son unas estructuras glucídicas, que
suponen la fracción glucídica constituyente de los proteoglicanos, un tipo de
biomoléculas de función estructural presentes fundamentalmente en el tejido
conectivo, epitelial y óseo, así como en el medio intercelular.
23. Grávida: Hembra que está embarazada o preñada.
85
24. Helicasas: es una enzima vital en los seres vivos ya que participa en los procesos
de duplicación y reproducción celular, transcripción, recombinación y reparación
del ADN. Su misión es romper los puentes de hidrógeno que unen las bases
nitrogenadas, haciendo así posible que otras enzimas puedan copiar la secuencia
del ADN.
25. Hemaglutinación: es la aglutinación de los hematíes o glóbulos rojos, se trata de
una respuesta biológica común frente determinados microorganismos, como los
virus.
26. Hematemesis: Vómito de sangre procedente del aparato digestivo.
27. Hiponatremia: es una alteración primaria del balance hídrico por exceso relativo
de agua corporal en relación con los depósitos corporales de sodio.
28. Hipovolemia: es una disminución del volumen circulante de sangre o cualquier
otro líquido corporal debido a múltiples factores como hemorragia, deshidratación,
quemaduras, entre otros.
29. Holometabolia: aquellos que tienen metamorfosis completa o complicada es un
tipo de desarrollo característico de los insectos más evolucionados, en el que se
suceden las fases de embrión, larva, pupa e imago (adulto).
30. Homodímeros: Proteína compuesta por dos cadenas peptídicas idénticas.
31. INHMT: Instituto Nacional de Higiene y Medicina Tropical “Leopoldo Izquieta
Pérez”.
32. Lisosoma: son orgánulos relativamente grandes, formados por el complejo de
Golgi, que contienen enzimas hidrolíticas y proteolíticas que sirven para digerir los
materiales de origen externo (heterofagia) o interno (autofagia) que llegan a ellos.
33. Melena: es la expulsión de deposiciones negras, viscosas y malolientes debido a la
presencia de sangre degradada proveniente del tubo digestivo superior
34. Ontogénico: describe el desarrollo de un organismo, desde la fecundación de un
cigoto durante reproducción sexual hasta su senescencia, pasando por la forma
adulta.
35. Oviposición: es la expulsión de las ovas (huevos) por parte de la hembra.
36. Peridomicilio: se define como el área alrededor de una vivienda ya existente en
un radio de no más de cien metros.
37. Peroxidasa: son un conjunto de enzimas que pertenecen a la categoría
oxidorreductasas, que tiene grandes aplicaciones en técnicas inmunoquímicas y de
86
diagnóstico clínico debido a su gran estabilidad, facilidad de conjugación con
las inmunoglobulinas y sencillez para detectarla por métodos colorimétricos
utilizando un gran número de reactivos.
38. Petequias: Las petequias son pequeños derrames vasculares cutáneos de color
rojo, formadas por extravasación de un número pequeño de eritrocitos cuando se
daña un capilar.
39. Precisión: Es la capacidad de un instrumento de dar el mismo resultado en
mediciones diferentes realizadas en las mismas condiciones.
40. Proteasa: O peptidasas, son enzimas que rompen los enlaces peptídicos de las
proteínas.
41. Prurito: Picor que se siente en una parte del cuerpo o en todo él y que provoca la
necesidad o el deseo de rascarse; es un síntoma de ciertas enfermedades de la piel y
de algunas de tipo general.
42. Pupación: describe el desarrollo de un organismo, desde la fecundación de un
cigoto durante reproducción sexual hasta su senescencia, pasando por la forma
adulta.
43. Replicación: Proceso por el cual el ADN de una célula se duplica antes de la
división celular para que, después de esta, cada célula tenga la misma información
genética.
44. Replicasas: es una enzima que sintetiza RNA utilizando como templado otra hebra
de RNA.
45. Sensibilidad: es la probabilidad de clasificar correctamente a un individuo
enfermo, es decir, la probabilidad de que para un sujeto enfermo se obtenga en una
prueba diagnóstica un resultado positivo. La sensibilidad es el porcentaje de
verdaderos positivos o la probabilidad de que la prueba sea positiva si la
enfermedad está presente; los falsos negativos son sujetos enfermos diagnosticados
como sanos.
46. Substrato de Tetrametilbenzidina: es un cromógeno, cuya oxidación genera un
producto de color azul oscuro.
47. Traducción: es el segundo proceso de la síntesis proteica, ocurre tanto en el
citoplasma, donde se encuentran los ribosomas, como también en el retículo
endoplasmáticorugoso.
