U.D. 3 imagenes EXTRACCIÓN Y PURIFICACIÓN DE … · PRETATAMIENTO DE LAS MUESTRAS BIOLÓGICAS ......
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3.1. EXTRACCIÓN Y PURIFICACIÓN. LA PRIMERA ETAPA 3.2. PRETATAMIENTO DE LAS MUESTRAS BIOLÓGICAS 3.2.1. SANGRE 3.2.2. CULTIVOS CELULARES 3.2.3. TEJIDOS ANIMALES O VEGETALES FRESCOS 3.2.4. TEJIDOS FIJADOS EN FORMOL E INCLUIDOS EN PARAFINA 3.2.5. OTRAS MUESTRAS 3.3. EXTRACCIÓN DE ÁCIDOS NUCLEICOS 3.3.1. LA SOLUCIÓN DE LISIS 3.3.2. TRATAMIENTOS EN CÉLULAS CON PARED CELULAR 3.3.3. VERIFICACIÓN DE LOS RESULTADOS DE LA LISIS 3.3.4. CONSIDERACIONES EN LA EXTRACCIÓN DE AND 3.4. PURIFICACIÓN DE LOS ÁCIDOS NUCLEICOS 3.4.1. PURIFICACIÓN CON SOLVENTES ORGÁNICOS 3.4.2. PRECIPITACIÓN CON SALES (SALTING-OUT) 3.4.3. CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO 3.4.4. CROMATOGRAFÍA DE ADSORCIÓN 3.4.5. PURIFICACIÓN MEDIANTE ESFERAS MAGNÉTICAS 3.4.6. ULTRAFILTRACIÓN 3.4.7. PURIFICACIÓN DE PLÁSMIDOS ÍNDICE: : EXTRACCIÓN Y PURIFICACIÓN DE ÁCIDOS NUCLÉICOS 3.5. AUTOMATIZACIÓN DEL PROCESO DE EXTRACCIÓN/PURIFICACIÓN 3.5.1. VENTAJAS DE LA AUTOMATIZACIÓN 3.5.2. TIPOS DE INSTRUMENTOS AUTOMÁTICOS 3.6. CALIDAD DE LOS ÁCIDOS NUCLEICOS PURIFICADOS 3.6.1. INTREGRIDAD DE LOS ÁCIDOS NUCLEICOS 3.6.2. PUREZA DE LOS ÁCIDOS NUCLEICOS 3.6.3. CONCENTRACIÓN DE LOS ÁCIDOS NUCLEICOS 3.6.4. FUNCIONALIDAD DE LOS ÁCIDOS NUCLEICOS PURIFICADOS 3.7. ALMACENAMIENTO DE LOS ÁCIDOS NUCLEICOS PURIFICADOS Extracción y purificación: PURIFICACIÓN ÁCIDOS NUCLEICOS SOLVENTES ORGÁNICOS PRECIPITACIÓN CON SALES (salting-out) CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO CROMATOGRAFÍA DE ADSORCIÓN ESFERAS MAGNÉTICAS ULTRAFILTRACIÓN PURIFICACIÓN PLÁSMIDOS
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3.1. EXTRACCIÓN Y PURIFICACIÓN. LA PRIMERA ETAPA
3.2. PRETATAMIENTO DE LAS MUESTRAS BIOLÓGICAS3.2.1. SANGRE3.2.2. CULTIVOS CELULARES3.2.3. TEJIDOS ANIMALES O VEGETALES FRESCOS3.2.4. TEJIDOS FIJADOS EN FORMOL E INCLUIDOS EN PARAFINA3.2.5. OTRAS MUESTRAS
3.3. EXTRACCIÓN DE ÁCIDOS NUCLEICOS3.3.1. LA SOLUCIÓN DE LISIS3.3.2. TRATAMIENTOS EN CÉLULAS CON PARED CELULAR3.3.3. VERIFICACIÓN DE LOS RESULTADOS DE LA LISIS3.3.4. CONSIDERACIONES EN LA EXTRACCIÓN DE AND
3.4. PURIFICACIÓN DE LOS ÁCIDOS NUCLEICOS3.4.1. PURIFICACIÓN CON SOLVENTES ORGÁNICOS3.4.2. PRECIPITACIÓN CON SALES (SALTING-OUT)3.4.3. CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO3.4.4. CROMATOGRAFÍA DE ADSORCIÓN3.4.5. PURIFICACIÓN MEDIANTE ESFERAS MAGNÉTICAS3.4.6. ULTRAFILTRACIÓN3.4.7. PURIFICACIÓN DE PLÁSMIDOS
ÍNDICE: : EXTRACCIÓN Y PURIFICACIÓN DE ÁCIDOS NUCLÉICOS
3.5. AUTOMATIZACIÓN DEL PROCESO DE EXTRACCIÓN/PURIFICACIÓN
3.5.1. VENTAJAS DE LA AUTOMATIZACIÓN3.5.2. TIPOS DE INSTRUMENTOS AUTOMÁTICOS
3.6. CALIDAD DE LOS ÁCIDOS NUCLEICOS PURIFICADOS
3.6.1. INTREGRIDAD DE LOS ÁCIDOS NUCLEICOS3.6.2. PUREZA DE LOS ÁCIDOS NUCLEICOS3.6.3. CONCENTRACIÓN DE LOS ÁCIDOS NUCLEICOS3.6.4. FUNCIONALIDAD DE LOS ÁCIDOS NUCLEICOS PURIFICADOS
3.7. ALMACENAMIENTO DE LOS ÁCIDOS NUCLEICOS PURIFICADOS
Extracción y purificación:
PURIFICACIÓN ÁCIDOS
NUCLEICOS
SOLVENTES ORGÁNICOS
PRECIPITACIÓN CON SALES (salting-out)
CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO
IÓNICO
CROMATOGRAFÍA DE ADSORCIÓN
ESFERAS MAGNÉTICAS
ULTRAFILTRACIÓN
PURIFICACIÓN PLÁSMIDOS
ProcedimientoP. SOLVENTES ORGÁNICOS:
ProcedimientoCROMATOGRAFÍA INTERCAMBIO IÓNICO:
MAE: Dimetilaminetanol Ácidos nucleicos
http://www.cultek.com/aplicaciones.asp?p=Aplicacion_AN_Purificacion&opc=tecnicas&idap=35
Fig. 3.14. Representación gráfica de la secuencia de elución de las moléculas presentes en un lisado celular desde una columna de intercambio iónico a medida que aumenta la concentración salina del tampón de lavado.
CROMATOGRAFÍA DE ADSORCIÓN
● Cuando al medio acuoso se le añade una salcaotrópica, esta atrae las moléculas de agua y retira la capa hidratante de ambas estructuras, creando un entorno hidrofóbico que permite la interacción entre la sílice y el ácido nucleico.
● Se utilizanmembranas de lanade vidrio o perlas de sílice empaquetadasen columnas de polipropileno que ajustan en tuboscolectores tipoeppendorf.
ULTRAFILTRACIÓN PURIFICACIÓN PLÁSMIDOS: GRADIENTE CsCl
