Presentaciones PPT ASE 3

INSTITUTO PARA LA CALIDAD 2011. Prohibida su reproduccin total o parcial sin permiso del autor y del Instituto para la Calidad de la Pontificia Universidad Catlica del Per.

ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD DE LOS

METODOS MICROBIOLOGICOS

ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD ANALITICA


CONTROL DE LA CALIDAD ANALITICA DE LOS ENSAYOS MICROBIOLOGICOS

OBJETIVOS:

- Establecer tipos de de control por niveles- Utilizacin de grficos de control-Aplicar los criterios mediante talleres.


TEMARIO

-Controles de primer nivelInoculaciones en paraleloRecuento de colonias en diferentes diluciones Control para ensayos de agua (Criterio de Precision)

-Controles de segundo nivelRecuento duplicadoDuplicado ciego Muestra adicionada

-Controles de tercer nivel Ensayos de Aptitud Ensayos interlaboratorios


CONTROLES DE PRIMER NIVEL


Controles de primer nivel

El primer nivel es el control que ejecuta y evala el tcnico analista encargado del procedimiento, como una medida de autocontrol

Debe establecerse los criterios de aceptacin


Parmetros de control

Inoculaciones en paralelo

Blancos

Muestras control positivas

Muestras control negativas

Muestras adicionadas


Controles establecidos

Inoculaciones en paralelo: Se inocula por duplicado o triplicado,etc. un

determinado volumen de la suspensin final utilizada para el anlisis


Ref. Alicia I.Cuesta Consultora FAO


Blancos: Se someta a todas las etapas de procedimiento un

liquido estril Blanco de dilutor Blanco de medio de cultivo

La esterilidad se puede evaluar despus del proceso de autoclavado o filtracin, por lote.



Muestras control positivas: Se analiza una muestra estable y homognea, que

se supone presenta un recuento medio dentro de un determinado orden de magnitud, de una cepa representativa de los microorganismos diana que se pretende determinar en el anlisis. Pueden ser cultivos puros o muestras naturalmente contaminadas.

Ensayo cualitativo: cepas (de trabajo) Ensayo cuantitativo: ?????



Muestras control negativas: Se analiza una muestra estable y homognea que

se supone presenta una concentracin adecuada de una cepa o una mezcla de cepas, representativa de los organismos no diana.

Ensayo cualitativo: cepas (de trabajo)

Ensayo cuantitativo: ?????



Muestras adicionadas: Se aade a una muestra que se va a analizar una

muestra control positiva o negativa, posteriormente se evala la recuperacin de los organismos diana.

Aplicado a cualitativos.




La seleccin de muestras que van a ser duplicadas, debe seguir un procedimiento planificado y preestablecido.

Ejm. La muestra n de cada serie


El numero de replicados para cada muestra en paralelo no suele ser superior a dos o tres.

Teniendo en cuenta la distribucin aleatoria de los microorganismos, entre los replicados, se puede calcular el

INDICE DE DISPERSION DE POISSON (D2)

o su coeficiente de ajuste logartmico equivalente (G2)



ndice de Dispersin D2 Es una medida de la homogeneidad de la

muestra. Para comprobar si existe sobre dispersin, se

calcula el estadstico D2 a partir del cual se puede asumir que las muestras siguen la distribucin de Poisson

El estadstico de dispersin para n medidas individuales xi, es el ndice de dispersin D2:

n

D2= (xi x)2i=1 x


En caso se comparen dos resultados, se aplicara:

D2 = (A - B)2 / (A + B)

En caso de utilizar resultados de muestras diludas, se aplicara:

D2 = (C1 - 10 C2)2 / 10 (C1 + C2)

ndice de Dispersin D2


ndice de Dispersin D2

El valor 3.84 es un valor estadstico obtenido en tablas.

Se aceptan valores que sean 3.84


Metodologa utilizada en el Standard Methods para anlisis de agua

Para recuento de hetertrofos Definir y utilizar el Criterio de Precisin CP

Para recuento como NMP Control de duplicados / verificacin con limites de

la tabla de NMP


CONTROL DE PRECISION DE METODOS CUANTITATIVOS

A)Realizar anlisis duplicados en las primeras 15 muestras positivas. Registrar los resultados como D1 y D2

B) Calcular el logaritmo de cada resultado. Si el resultado es 0, agregar 1 a cada resultado.

C) Calcular el Rango R para cada par de duplicados transformados y el promedio de esos rangos.

Metodologa utilizada en el Standard Methodspara anlisis de agua


CONTROL DE PRECISION DE METODOS CUANTITATIVOS

D) Determinar el CRITERIO DE PRECISION = 3.27 R (prom)

E) Analizar por duplicado el 10% de las muestras de rutina. Calcular el rango R. Si el rango R es mayor que 3.27 R prom, entonces existe una probabilidad mayor del 99% de que la variabilidad del laboratorio es excesiva.

F) Tomar acciones correctivasG) Actualizar el criterio peridicamente.



PARA MTODOS DE FERMENTACIN DE TUBOS MLTIPLES NMP

En agua de bebida, si las muestras son usualmente negativas, ensayar una muestra positiva por lo menos 3 veces al ao para verificar la respuesta correcta de los medios de cultivo.



PARA MTODOS DE FILTRO DE MEMBRANA

Para coliformes totales, repicar mas de 5 colonias tpicas y 5 atpicas de muestras positivas, en M-ENDO.

Para coliformes fecales, verificar mensualmente las positivas, repicando por lo menos 10 colonias azules de una muestra positiva. Verificar en caldo Lauryl triptosa y caldo EC.

Verificar colonias atpicas para determinar falsos negativos.



DATOS PARA EL TALLER


COMPARACION DE PARALELOS D2 (Limite = 3.84)

D2 = (A - B)2 / (A + B)

Ensayo No. Resultado 1 Resultado 2 D2

1 80 68 0.972 47 45 0.043 52 50 0.044 100 120 1.825 100 128 3.446 100 130 3.917 345 325 0.608 560 548 0.139 3400 3500 1.45

10 25000 24000 20.41



D2

D2 0.97 0.04 0.04 1.82 3.44 3.91 0.60 0.13

0.001.002.003.004.005.006.007.008.009.00

10.00

Paralelos D2

D2

3.84



COMPARACION DE DILUCIONES D2 (Limite = 3.84)

D2 = (C1 - 10 C2)2 / 10 (C1 + C2)

Ensayo No. Resultado C1Resultado

C2 D2

1 80 7 0.112 47 4 0.103 52 5 0.014 100 12 0.365 100 15 2.176 100 18 5.427 345 32 0.178 560 54 0.079 3400 35 270.82

10 25000 2400 3.65



1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

Series1 0.11 0.10 0.01 0.36 2.17 5.42 0.17 0.07 270.82 3.65

0.00

1.00

2.00

3.00

4.00

5.00

6.00

7.00

8.00

9.00

10.00

D2

Diluciones D2

3.84



ESCALA DE MAC FARLAND

La utilidad de la escala es poder realizar suspensionesbacterianas ajustadas a un patrn, generalmente se sueleusar el 0,5 Mc Farland, para esto se toma una muestra delcultivo bacteriano y se inocula en un tubo con solucinsalina.En el momento en que se produzca un poco de turbidez seria igual al 0,5 de la escala. La lectura es visual.

El principio radica en la relacin entre una precipitacin qumica y una suspensin bacteriana


Se elaboran crean 10 estndares(ver tabla) y porespectrofotometra, se crea unarecta patrn, de forma que sepueda detectar la concentracinde las diluciones bacterianas (demanera aproximada, ya quedepende de factores como eltamao de la bacteria, laformacin de agregados, etc). Laescala se basa en la capacidad deprecipitacin del cloruro de barioen presencia de cido sulfrico



TUBO Cl2Ba 1% SO4H2 1% u.f.c/ml

1 0,1 9,9 3,0x108

2 0,2 9,8 6,0x108

3 0,3 9,7 9,0x108

4 0,4 9,6 1,2x109

5 0,5 9,5 1,5x109

6 0,6 9,4 1,8x109

7 0,7 9,3 2,1x109

8 0,8 9,2 2,4x109

9 0,9 9,1 2.7x109

10 1,0 9,0 3,0x109



CONTROLES DE SEGUNDO NIVEL


Controles de segundo nivel

Se deben llevar a cabo peridicamente y sern efectuados por una persona independiente del tcnico analista. (Puede ser el director tcnico o el director de calidad).

Objetivos:Garantizar la reproducibilidad entre diferentes analista o

diferentes equipos.Asegurar la competencia de analistas que se incorporan al

laboratorioPueden usarse como criterios para la autorizacin de ensayo

del analista y para hacer evaluaciones de seguimiento.


Controles de segundo nivel

Recuento duplicado

a) Debe aplicarse en forma sistemtica para que se considere una herramienta de control.

b) Puede aplicarse al mismo analista o a diferentes analistas , para el mismo recuento.

c) Debe tratar de independizar un recuento de su correspondiente duplicado.


Controles de 2do. Nivel: Procedimiento

a) Seleccionar las placas para el doble recuento.b) Considerar su almacenamiento en condiciones que no afecten

el recuentoc) Evitar o eliminar cualquier marca en la placa que ser

sometida al doble recuento.d) Registrar resultados y tendencias


Controles de 2do. Nivel: Clculos

Variable utilizada: DIFERENCIA RELATIVA RD

La diferencia relativa (RD) y la diferencia logartmica, proporcionan resultados aproximadamente iguales.Por lo tanto, se puede utilizar las siguientes expresiones:

C1 C2RD =C

Ln C1 ln C2_

C1 primer recuento; C2 segundo recuento; y la media de ambos.C_

La diferencia relativa se puede expresar en %


Criterio de aceptacin de RD

Referencias:

Histrico Hasta 5% para el mismo analistaHasta 10% entre dos analistas

Comit Nrdico Hasta 7.7 % para el mismo analistaHasta 18.2 % entre distintos analistas


Criterio de aceptacin de RD

No debe haber diferencias entre recuentos inferiores a 25 colonias

Un incremento de la variabilidad en el intervalo de recuentos altos, indica interacciones entre el medio, el analista y la poblacin microbiana.

Si hay variabilidad en el intervalo de recuentos bajos en medios selectivos, debera revisarse la competencia de los analistas en la interpretacin de la morfologia de las colonias.


Interpretacin de grafico

Ref. Lightfoot N.F. y Maier E.A. Edit. Analisis microbiologico de alimentos y aguas. Directrices para el aseguramiento de la calidad. Inst.Pasteur.. 2002.


DIFERENCIA RELATIVA RD

Otros controles de segundo nivel:

Muestras ciegas Muestras adicionadas

-Para ensayos cualitativos:

Muestras adicionadas : de preferencia mezcla de cepas


Controles de tercer nivel


Se realizan bajo responsabilidad de la organizacin (laboratorio) y son supervisados por el responsable

de la calidad.

Generalmente son organizados por entidades externas allaboratorio y se deben seguir los procedimientosestablecidos por estas organizaciones.

La evaluacion de resultados la realiza la entidadorganizadora.

GENERALIDADES

Pueden ser Ensayos de Aptitud o Uso de material de referencia certificado.


Ensayos de Aptitud

Es la evaluacion de desempeo de los participantes, con respecto a criterios previamente establecidos a travs de comparaciones interlaboratorio.

Comparaciones interlaboratorio:Organizacin, realizacin y evaluacion de ensayos sobre el mismo tem de ensayo o sobre tems de ensayo similares, por dos o mas laboratorios de acuerdo con condiciones predeterminadas.


Ensayos de Aptitud

El ensayo de aptitud suplementa los procedimientos de control interno de la calidad, propios de los laboratorios, al proporcionar una medida externa adicional de su capacidad de ensayo.

Mecanismo:Varios laboratorios analizan una o mas muestras que proceden de un lote homogneo y estable, distribuidas por la entidad organizadora. Los resultados son enviados al organizador quien los evala en comparacin con el resto de participantes.


Estan normados por la ISO IEC 17043:2010 Conformityassesment General requirements form proficiencytesting - (Evaluacion de la conformidad- requisitos

generales para los ensayos de aptitud)

Ensayos de Aptitud

Proveedores de ensayos de aptitud:


Materiales de referencia certificados

Son muestras de referencias homogneas y estables, en las que una o mas caractersticas o propiedades se han definido mediante un estudio interlaboratorio.El valor certificado usualmente solo es valido para el mtodo de ensayo aplicado.


Requisitos para los participantes

El proveedor de ensayos de aptitud debe notificar a los participante con suficiente anticipacin, antes de enviar los tems de ensayos de aptitud.

a) Fecha probable de llegada de los tems de ensayob) Instrucciones detalladas para la preparacin o

acondicionamiento de tem de ensayo antes de realizar el ensayo

c) Requisitos de seguridad (si aplica)d) Condiciones ambientales especificas e) Instrucciones especificas sobre la manera de registrar e

informar los resultados del ensayo


Requisitos para los participantes

f) La fecha limite para que el proveedor reciba lso resultados de los ensayosg) La informacin sobre el contacto del proveedor de los ensayos de aptitud para preguntas.h) Las instrucciones sobre devolucin (o destino) de los itemsde ensayo de aptitud (cuando corresponda).


Informe de ensayos de aptitud

1. Deben ser claros y exhaustivos e incluir informacin sobre los resultados de todos los participantes junto con una indicacin del desempeo de los participantes individuales.

2. Deben incluir:a) Nombre y datos del proveedor de PTb) Nombre y datos del contacto del coordinadorc) Identificacin de las personas que autorizan el

informed) Indicacin de las actividades subcontratadas por el

proveedore) Fecha de emisin y estado del informe


f) Numero de paginas e indicacin del final del informeg) Declaracin del alcance lde la confidencialidad de

resultadosh) Numero del informe e identificacin clara del programa

de PTi) Descripcin clara de los tems del ensayoj) Resultados de los participantesk) Datos y resmenes estadsticos incluyendo valores

asignados y rango de resultados aceptablesl) Procedimiento asignados para establecer el valor

asignadom) Detalles de trazabilidad metrolgica e incertidumbre de

los valores asignados

Informe de ensayos de aptitud


Informe de ensayos de aptitudn) Procedimientos para establecer la desviacin estndar para

la evaluacion de aptitudo) Valores asignados y resmenes estadsticos para cada

mtodo de ensayo utilizadop) Comentarios del proveedor de PT sobre el desempeo de los

participantes.q) Informacin sobre el diseno y la implementacin del

programa de PTr) Procedimiento para el anlisis estadstico de los datoss) Asesoramiento sobre la interpretacin del anlisis estadsticot) Comentarios y/o recomendaciones, basados en los

resultados de la ronde de PT.


PROVEEDORES DE ENSAYOS DE APTITUD


Informes de PT

En linea.


Gracias

Nmero de diapositiva 1CONTROL DE LA CALIDAD ANALITICA DE LOS ENSAYOS MICROBIOLOGICOSTEMARIOCONTROLES DE PRIMER NIVELControles de primer nivelParmetros de controlControles establecidosNmero de diapositiva 8Controles establecidosControles establecidosControles establecidosControles establecidosInoculaciones en paraleloInoculaciones en paralelondice de Dispersin D2ndice de Dispersin D2ndice de Dispersin D2Metodologa utilizada en el Standard Methods para anlisis de aguaNmero de diapositiva 19Nmero de diapositiva 20Nmero de diapositiva 21Nmero de diapositiva 22Datos para el tallerNmero de diapositiva 24Nmero de diapositiva 25Nmero de diapositiva 26Nmero de diapositiva 27Nmero de diapositiva 28Nmero de diapositiva 29Nmero de diapositiva 30Nmero de diapositiva 31Controles de segundo nivelControles de segundo nivelControles de 2do. Nivel: ProcedimientoControles de 2do. Nivel: ClculosCriterio de aceptacin de RDCriterio de aceptacin de RDInterpretacin de graficoDIFERENCIA RELATIVA RDControles de tercer nivelNmero de diapositiva 41Ensayos de AptitudEnsayos de AptitudEnsayos de AptitudMateriales de referencia certificadosRequisitos para los participantesRequisitos para los participantesInforme de ensayos de aptitudInforme de ensayos de aptitudInforme de ensayos de aptitudNmero de diapositiva 51Nmero de diapositiva 52Informes de PTNmero de diapositiva 54Nmero de diapositiva 55Nmero de diapositiva 56Nmero de diapositiva 57

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