Practica N° 6.- BANCO DE SANGRE: TRANSFUSION SANGUINEA, REACCIONES ADVERSAS, CONTROL DE CALIDAD, PRUEBAS DE COMPATIBILIDAD, PRUEBA DE COOMBS DIRECTO E INDIRECTO.

Preparación y Procesamiento de los Componentes: Tipificación ABO de todas las unidades recolectadas. Tipificación Rh de todas las unidades recolectadas (anti – D). Si anti -D es negativo, detectar

D débil. Detección de Anticuerpos Irregulares clínicamente significativos dirigidos contra Antígenos

eritrocitarios en donantes. Pruebas para Prevenir la Transmisión de Enfermedades por Donaciones: determinar

HBsAg, anti-HBc, anti-HCV,anti-VIH 1-2, anti-HTLV I-II, Chagas y Sífilis. Aceptabilidad de los Componentes antes del Etiquetado Final.

Solicitudes de Transfusión información para identificar en forma individual y única al receptor, incluyendo dos identificadores independientes y del médico que la ha prescrito, así como las razones médicas en las que basa su indicación.

El Centro de Hemoterapia o Banco de Sangre aceptará solamente aquellas solicitudes completas y legibles

Mecanismo para identificar de manera fehaciente a la persona que extrae la muestra y la fecha de extracción.

Pruebas de Compatibilidad:

Confirmación serológica de ABO y Rh:La prueba de confirmación se realizará en una muestra obtenida de un segmento adjunto. Las discrepancias se resolverán antes de la emisión de la sangre para transfusión.

Liberación de Sangre y Componentes:Inspeccionar inmediatamente antes de su liberación. En ningún caso debe autorizarse la liberación de sangre o componentes si las bolsas no están intactas o su apariencia no es normal.

Identificación: etiqueta : Nombres y Apellidos del receptor y un identificador independiente (número de historia clínica, autogenerado, número de cama u otros: documento de identidad, etc.) Grupo sanguíneo ABO y Rh del receptor. El número de identificación de la unidad. La interpretación de las pruebas de compatibilidad.

Unidades devueltas a Banco de Sangre:La sangre y componentes que hayan sido devueltos al Centro de Hemoterapia o Banco de Sangre se reemitirán solamente si se cumplen las siguientes condiciones:

1. La integridad de la bolsa no ha sido perturbada. 2. No se ha permitido que la unidad de Sangre Total o Glóbulos Rojos se haya calentado por

encima de 10°C o enfriado por debajo de 1ºC. 3. Al menos uno de los segmentos sellados del tubo integral de la bolsa ha permanecido

unido a la bolsa. 4.Los registros indican que la unidad de sangre ha sido inspeccionada y es aceptable para

re-despacharla

Necesidad Urgente de Sangre1. Los receptores cuyo grupo ABO y Rh se desconocen, recibirán Glóbulos Rojos del grupo O Rh negativo, o en su defecto Grupo O Rh positivo.2. Si se emite sangre antes de completar las pruebas de compatibilidad, los receptores cuyo grupo ABO se ha determinado de acuerdo al criterio sobre Determinación de Grupo ABO recibirán sólo sangre total del grupo ABO específico o componentes compatibles de Glóbulos Rojos.3. La etiqueta de la bolsa indicará que no se ha completado la prueba de compatibilidad al momento de la emisión.4. El análisis de compatibilidad se completará en un plazo breve de tiempo utilizando una muestra del paciente, recolectada tan pronto como sea posible en la secuencia de la transfusión.5. Los registros incluirán una manifestación firmada del médico solicitante indicando que la situación clínica era suficientemente urgente para requerir la emisión de la sangre antes de completar la prueba de compatibilidad.

Administración de sangre:1. Identificación del Receptor y de la bolsa de sangre: Inmediatamente antes de la transfusión, el transfusionista verificará que toda la información que identifica la bolsa de sangre con el receptor prospectivo ha sido comprobada en presencia del receptor, elemento por elemento.2. Toda la información de identificación adjunta a la bolsa permanecerá adjunta a la misma hasta que la transfusión haya terminado.3. Paciente o familiar debe haber firmado el consentimiento informado.

Supervisión: Las transfusiones se prescribirán y se administrarán bajo la dirección de un médico.

Condiciones de la Transfusión1. Protocolo de la Transfusión

Habrá un protocolo para administración de sangre y componentes, incluyendo el uso de aparatos de infusión y equipos auxiliares.

La transfusión de sangre y componentes se realizará con un equipo de transfusión estéril y libre de pirógenos, con un filtro diseñado para retener partículas potencialmente dañinas para el receptor.

Los Registros Médicos de la Transfusión incluirá el número de identificación de la unidad o de las unidades mezcladas (pool), la fecha y hora de transfusión, signos vitales previos y posteriores a la transfusión, la cantidad transfundida, la identificación del transfusionista y si se aplica las reacciones a la transfusión.

2. Adición de Medicamentos y Soluciones: A excepción del cloruro de sodio al 0.9%, no se añadirá ninguna otra sustancia a la sangre o componentes.

Control de Calidad de Sangre Total: La extracción de sangre para la preparación de componentes requiere: de un sistema del

bolsas múltiples conectadas en circuito cerrado, (con el objeto de evitar la contaminación durante el proceso de separación).

La donación debe ser no mayor de 12 minutos. La unidad de sangre es conservada entre 2 a 8º C. En el refrigerador. La vida útil de la sangre total depende del preservativo usado. Volumen 450 – 500 ml. De

sangre (200 – 300 de eritrocitos, 200 ml de plasma y 63 de anticoagulante). Hematocrito : 35 – 45 %.

CC: Debe controlarse el volumen del 1% de las unidades procesadas.

CONTROL DE CALIDAD DE CONCENTRADOS PLAQUETARIOS En la recolección de sangre para preparar plaquetas se deben observar las siguientes

recomendaciones: La punción venosa debe ser limpia, atraúmatica. El tiempo de recolección no debe ser mayor de 12 minutos (tiempo optimo de 8 minutos).

Procesamiento a 20 – 24°C dentro de las primeras 6 horas de haber sido extraída la sangre. Control Diario: Verificar. Volumen adecuado 50 – 60 ml./u. Contaminación con glóbulos rojos Agregación plaquetaria Las plaquetas deben estar en relación y almacenadas entre 20 a 22°C. Control Mensual: Recuento de plaquetas. Deben hallarse entre > ‘o = 5.5 x 10 10 . Determinar el PH del medio, este de estar por debajo de 6;

CONTROL DE CALIDAD DE PLASMA FRESCO CONGELADO Almacenado a < -18°C. Conservándose el factor VIII por un año. Su control de calidad es de: Calcular el volumen 200 ml ± 10 (70% ± 10 ml) Cada dos meses dosificar fc VIII de 6 u.conservadas durante 1 mes

CONTROL DE CALIDAD DE CRIOPRECIPITADOS Contiene la mayor parte del factor VIII y cierta cantidad de fibrinógeno. Almacenamiento a < - 70ºC, previo al uso descongelar en baño maría a una temperatura 30

a 37°C, en menos de 15 minutos. Control mensual 6 bolsas de crioprecipitados, dopaje del factor VIII. Resultados Esperados: Volumen 10 – 20 ml. Factor VIII: ≥ 70 UI/U Fibrinógeno: 150mg / unidad.

CONTROL DE CALIDAD DE REACTIVOS ANTISUEROS: Realizar una selección de Reactivos (de título aceptable adecuado).

ESPECIFICIDAD: Verificar si el reactivo es puro.RESULTADO: Es el procedimiento por el cual el Ac (antisuero) reacciona solamente con su determinante Ag (hematíe).AVIDEZ: Es la velocidad con que un Ac se combina y se estabiliza con su Ag correspondiente, dando rápidamente una fuerte reacción de aglutinaciónSeleccionar o determinar un reactivo (Ac) que tenga gran avidez por sus hematíes (Ag específico).

COOMBS: Test de Coombs o Prueba de Antiglobulina

COOMBS DIRECTO• Se basa en un sistema serológico de detección de Anticuerpos y/o Complemento

PRUEBA DE ANTIGLOBULINA DIRECTA (PAD) o TEST DE COOMBS DIRECTO (TCD)FINALIDAD

• Detección de GR sensibilizados in vivo. debido a Anticuerpos No Aglutinantes IgG, (Incompletos) y/o Complemento (Fracciones de Complemento) fijados en la membrana del GR en el torrente sanguíneo.

FUNDAMENTO del REACTIVO Anticuerpos Anti-Inmunoglobulina Humana Anticuerpos Anti-complemento

TÉCNICA 1.- 01 gota de GR (paciente) lavados, al 3-5%2.- 02 gotas de Suero Antiglobulina Humana (Poliespecífico o monoespecífico IgG)3.- Centrifugar según las normas4.- Lectura

APLICACIONES DEL TEST DE COOMBS DIRECTO (TCD)1.- Investigación de Reacc. Hemolíticas Transfusional.2.- Investigación de EHRN.3.- Investigación de Auto-anticuerpos.4.- Investigación de Anemias Hemolíticas Inmunes por Drogas.

PRUEBA DE ANTIGLOBULINA INDIRECTA (PAI) o TEST DE COOMBS INDIRECTO (TCI)FINALIDAD : Busqueda de Anticuerpos y/o Complemento libres en suero, los cuales se incuban con GR

TÉCNICA1.- 01 gota de GR (de laboratorio) lavados, al 3-5%.2.- 02 gotas de Suero (paciente).3.- Centrifugar según las normas, leer y anotar resultados.4.- Incubar a To Amb. por 15 min.5.- Centrifugar, leer y anotar resultados.6.- Añadir 02 gotas de Albúmina Bovina al 22%.7.- Centrifugar, leer y anotar resultados.8.- Incubar a 37o por 15 min.9.- Centrifugar, leer y anotar resultados.10.- Lavar 4 veces con SSF y decantar bien.11.- Añadir 02 gotas de Suero Antiglobulina Humana (poliespecífico o monoespecífico IgG)12.- Centrifugar, leer y anotar resultados. 13.- Células Control de Coombs, si fuera negativo

APLICACIONES DEL TEST DE COOMBS INDIRECTO (TCI)1.- Investigación y titulación de Anticuerpos.2.- Detección e Identificación de Anticuerpos contra GR, en suero. 3.- Fenotipificación de Antígenos de GR.4.- Pruebas de Compatibilidad.

TÍTULO Y SCORE DEL TEST DE COOMBS* Relación directa entre el Título de la prueba de Coombs y la cantidad de moléculas de Ig y complemento fijados en membrana del GR.

* GR de Laboratorio: GR de paquete globular

GR de genética conocida (Células Pantalla o Panel)

* Evaluación del grado de hemólisis o destrucción de GR en pacientes con AHI (AI).* Uso de reactivos policlonales y/o monoclonales.* Grado de Aglutinación Y Potencia del Ac (aprox.)* Score y Resultado más útil (Semicuantificación)* Uso del Título asociado al Score: - Evaluación de la respuesta al tratamiento. - Comparar la potencia de dos o más anticuerpos. Grado de Aglutinación Score

4 + 10 3 + 8 2 + 6 1 + 4

1/2 + visibles a simple vista 31/2 + visible al microscopio 1

0 o ausencia de aglutinación 0Pruebas CruzadasOBJETOControl final de la compatibilidad ABO entre el donante y el receptor. Demuestra la ausencia de anticuerpos irregulares que pudiera tener el receptor frente a los hematíes del donante.DESARROLLO

1.    Identificar las tarjetas con el nombre y apellidos del receptor y rotular cada pocillo con el número de la unidad a cruzar.

2.    Preparar una dilución con 50 ml de la unidad de concentrado de hematíes y 0.5 ml de Diluente, en un tubo rotulado con el Nº de la unidad de concentrado de hematíes.

3.   Depositar 50 ml de la dilución de hematíes en los pocillos de la tarjeta 4.    Depositar 25 ml de suero del receptor en el pocillo de la tarjeta.5.    Incubar durante 15 minutos, la tarjeta, 6.   Centrifugar la tarjeta .7.   Proceder a la lectura.