Practica de Farma 5 Ratones

7/27/2019 Practica de Farma 5 Ratones

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Laboratorio de Farmacologa 1Practica 5:

Determinacin Experimental DeLa Dosis Efectiva 50 Sedante

En Ratones

OBJETIVOS Determinar la DE50 para el efecto sedante del pentobarbital y etanol en ratn, utilizando el

modelo del cilindro de Exploracin en ratones. Aplicar los conocimientos que obtuvimos en la primera practica. Calcular la potencia relativa

HIPTESIS Si aumentamos la dosis de pentobarbital entonces se observarn menos levantamientos por

que el animal se sedar y perder vivacidad e inters por la exploracin. En el caso del etanol, a dosis bajas esperaramos ver una conducta ms viva ya que es

estimulante en esas cantidades, as que es probable que los levantamientos aumenten, peroal ir aumentando la dosis se observar un aletargamiento y nuevamente se esperaranobservar menos levantamientos.

INTRODUCCINLa ansiedad es una sensacin desagradable de tensin, aprensin o incomodidad, unmiedo que parece proceder de un origen desconocido. Los sintomas de la ansiedad graveson similares a los del miedo (como taquicardia, sudacin, temblores y palpitaciones) yconllevan la activacin del sistema simptico. Cuando los sntomas de la ansiedad songraves, crnicos y debilitantes, se requiere terapia con frmacos ansiolticos, con o sin unaterapia psicolgica o conductal en forma concomitante. Debido a que todos los frmacosansiolticos causan cierta sedacin, los mismos agentes se emplean para inducir el sueo(hipnticos).

El pentobarbital usado en la prctica pertenece a la familia de los barbitricos queconstituyeron el tratamiento bsico para sedacin, as como para induccin y

mantenimiento del sueo. Los barbitricos son depresores no selectivos del sistemanervioso central con efectos que oscilan entre la sedacin y la reduccin de la ansiedad a lainconsciencia y la muerte por insuficiencia respiratoria y cardiovascular. Por tanto, sonpeligrosos en caso de sobredosis. Actan en parte potenciando la accin del GABA parapermitir la entrada de cloro a la neurona, el flujo de iones de cloro hacia el interior de laclula provoca hiperpolarizacin leve que aleja al potencial postsinptico de su umbral deemisin e inhibe la formacin de potenciales de accin.

El etanol tiene acciones ansiolticas y sedantes pero su potencial de toxicidadsobrepasa estos beneficios, no pertenece a la familia de los barbitricos. Los principalesefectos del etanol se ejercen en el SNC, donde sus acciones depresoras son similares a lasde los anestsicos voltiles. En las clulas, el efecto del etanol es puramente depresor,

aunque aumenta la actividad de los impulsos (probablemente por deshinibicin) en algunaspartes del SNC.

El etanol potencia la accin del GABA, actuando sobre los receptores GABAA demanera semejante a las benzodiacepinas y barbitricos. Sin embargo, su efecto es menor ymenos constante que el de estas sustancias txicas y no se ha demostrado que ejerza unefecto claro en la transmisin sinptica inhibidora en el SNC.

El principal efecto cardiovascular del etanol es la vasodilatacin cutnea, de origencentral, que produce una sensacin de calor, pero que en realidad aumenta la prdida decalor. El etanol incrementa la secrecin salival y gstrica, en parte como efecto reflejoproducido por el sabor y la accin irritante del alcohol. La diuresis es un conocido efecto deletanol, debida a la inhibicin de la secrecin de hormona antidiurtica; la tolerancia aparece


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con rapidez, por lo que este incremento de diuresis no se mantiene. Los grandes bebedoressufren una degeneracin neurolgica con demencia y neuropatas perifricas, su consumoproduce a largo plazo una hepatopata que progresa a la cirrosis y la insuficiencia heptica.

El etanol se metaboliza fundamentalmente en el hgado, primero por accin de laalcohol deshidrogenasa, que lo transforma en acetaldehdo, y despus por la aldehdodeshidrogenasa, que lo transforma en acetato.

Los anlisis biolgicos se disean para medir la potencia relativa de dospreparaciones, normalmente una estndar de referencia y otra desconocida. Por supuesto,

el patrn de referencia idneo es la sustancia pura, pero a menudo hay que establecerpreparaciones estndar de distintas hormonas, productos naturales y antisueros frente a losque se pueden calibrar las muestras de laboratorio, an cuando las preparaciones estndarno son qumicamente puras.

Segn el modelo de los dos estados, la eficacia refleja la afinidad relativa delcompuesto por los receptores en reposo y activados. Los agonistas son selectivos por elestado activado; los antagonistas no muestran selectividad alguna.

DIAGRAMA DE FLUJO

A) Efecto sedante de pentobarbital.

INICIO

Pesado y marcaje de animales.

Cada grupo de trabajo recibi seis

ratones. Marcamos a nuestros

animales con el marcador de tinta

indeleble en la base de la cola, los

pesamos y registramos el peso de

Administracin del frmaco

Asignamos aleatoriamente las dosis

recibi cada ratn. Administramos po

va intraperitoneal 0.1 ml de la

disolucin correspondiente del frma

o de la disolucin salina por cada 10

Desarrollo del experimeto

1) Nos cercioramos de que el cilindro de vidrio

estuviera seco y limpio.

2) Colocamos el cilindro sobre un trozo de papel

balnco mayor al dimetro del cilindro

3)Treinta minutos despus de haber administrado el

frmaco o la solucin salina introducimos al animal

en el cilindro de exploracin.

4)Pusimos a funcionar el cronmetro y registramos el

nmero de levantamientos que realiz el animal en

un perodo de 5 minutos. Solo una persona cuantific

esta conducta para que fueran analizados bajo el

mismo criterio.

5)Limpiamos con una solucin hidroalcohlica el

Preparacin de las disoluciones de

pentobarbital sdico

Rotulamos seis frascos viales con las

siguientes leyendas 0, 2.5, 5, 10, 15

30 mg/kg. Agregamos la cantidad

indicada del cuadro que viene en el

manual de la disolucin de pentobarb

de 3mg/ml y de disolucin salina al 0

FIN


3/10

B) Efecto sedante de etanol

RESULTADOS

Pentobarbital sdico

Dosis(mg/Kg)

levantamientos efecto %efecto

0 27 0 0

2.5 200.259259

2625.92592

59

Algoritmo de clculo

259.027

201 =

calculo de DE50

Kgmg/4718.130284.0

1174.05.0=

INICI

O

Pesado y marcaje de animales.

Cada grupo de trabajo recibi seis

ratones. Marcamos a nuestros

animales con el marcador de tinta

indeleble en la base de la cola, los

pesamos y registramos el peso de

Administracin del frmaco

Asignamos aleatoriamente las dosis

recibi cada ratn. Administramos p

va intraperitoneal 0.1 ml de la

disolucin correspondiente del frma

o de la disolucin salina por cada 10

Preparacin de las soluciones de etaabsoluto.Rotulamos seis matraces aforados d10 ml con las siguientes leyendas 0,500, 1000, 2000, 2500 y 3000 mg/kAgregamos la cantidad indicada en e

Desarrollo del experimeto

1) Nos cercioramos de que el cilindro de vidrio

estuviera seco y limpio.

2) Colocamos el cilindro sobre un trozo de papel

balnco mayor al dimetro del cilindro

3)Treinta minutos despus de haber administrado el

frmaco o la solucin salina introducimos al animalen el cilindro de exploracin.

4)Pusimos a funcionar el cronmetro y registramos el

nmero de levantamientos que realiz el animal en

un perodo de 5 minutos. Solo una persona cuantific

esta conducta para que fueran analizados bajo el

mismo criterio.

5)Limpiamos con una solucin hidroalcohlica el

FIN


4/10

5 190.29629

6329.62962

96

10 170.37037

03737.03703

7

15 100.62962

96362.96296

3

30 20.92592

59392.59259

3Tabla1. pentobarbitol sdico: modelo

lineal

Pentobarbitol Sdico: modelo lineal

y = 0.0284x + 0.1174

R2 = 0.9414

0

0.2

0.4

0.6

0.8

1

1.2

0 10 20 30 40

Dosis (mg/Kg)

efecto

(decim

efecto

Lineal (efecto )

Grafica 1, pentobarbitol sdico: modelo lineal

log D (mg/Kg) Efecto0.397940009 0.259259260.698970004 0.2962963

1 0.370370371.176091259 0.629629631.477121255 0.92592593

Tabla 2. pentobarbitol sdico: modelo lineal logartmico


5/10

Pentobarbitol Sdico: modelo lineal logartmico

y = 0.6169x - 0.0898

R2 = 0.8464

0

0.2

0.4

0.6

0.8

1

0 0.5 1 1.5 2

Dosis (mg/Kg)

Efecto(decimal

Serie1

Lineal (Serie1)

Grafica 2 pentobarbitol sdico: modelo lineal logartmico

log D (mg/Kg) log efecto0.397940009 -0.586265720.698970004 -0.52827378

1 -0.431363761.176091259 -0.200914841.477121255 -0.03342376

Tabla 3. pentobarbitol sdico: modelo delefecto mximo.

Pentobarbitol Sdico: modelo del efecto mximo

y = 0.5316x - 0.861

R2 = 0.9127

-0.7

-0.6

-0.5

-0.4

-0.3

-0.2

-0.1

0

0 0.5 1 1.5 2

log D (mg/Kg)

logE(decim

Serie1

Lineal (Serie1)

Grafica 3. pentobarbitol sdico: modelo del efecto mximo.

log D (mg/Kg) log efecto0.397940009 -0.586265720.698970004 -0.52827378

1 -0.431363761.176091259 -0.200914841.477121255 -0.03342376

Tabla 4. pentobarbitol sdico: modelo del efectomximo sigmoideo

calculo de DE50

KgmgDS /460.6^10 6169.00.05.0

50==

calculo de DS50

mgDE b 2610.7101050 861.0 ===


6/10

Pentobarbitol Sdico: modelo del efecto mximo

sigmoide

y = 0.5316x - 0.861

R2 = 0.9127

-0.8

-0.6

-0.4

-0.2

0

0 0.5 1 1.5 2

log D (mg/Kg)

logE(de

cimal

Serie1Lineal (Serie1)

Grafica 4. pentobarbitol sdico: modelo del efecto mximo sigmoideo.

Etanol

Dosis(mg/Kg)

levantamientos efecto %efecto

0 21 -0.14285714 -

500 24 0.19047619 -14.2857143

1000 17 0.33333333 19.047619

2000 14 0.95238095 33.3333333

2500 1 0.95238095 95.2380952

3000 1 0.95238095 95.2380952

Tabla 5. etanol: modelo lineal

Etanol: modelo lineal

y = 0.0004x - 0.3007

R2 = 0.8199

0

0.2

0.4

0.6

0.8

1

1.2

0 1000 2000 3000 4000

Dosis(mg/Kg)

Efecto(decimal

Serie1

Lineal (Serie1)

Grafica 5. etanol: modelo lineal

log D (mg/Kg) Efecto-- 0.25925926

2.698970004 0.29629633 0.37037037

3.301029996 0.629629633.397940009 0.95238095

Tabla 6. etanol: modelo lineal logartmico

calculo de DS50

Kgmg

DE mb

/6196.1

10105316.0/861.0/

50

=

==

Algoritmo de calculo

333333..021

171 =

calculo de DS50

Kgmg/75.20010004.0

3007.05.0=


7/10

Etanol: modelo lineal logartmico

y = 1.6792x - 4.9242

R2 = 0.7575

0

0.2

0.4

0.6

0.8

1

2.8 3 3.2 3.4 3.6

Log D (mg/Kg)

Efecto

(decim

Serie1

Lineal (Serie1)

Grafica 6. etanol: modelo lineal logartmico

log D (mg/Kg) log efecto

2.698970004 -0.142857143 0.19047619

3.301029996 0.33333333

3.397940009 0.95238095

2.698970004 0.95238095

Tabla 7. etanol: modelo delefecto mximo.

Modelo del efecto mximo: etanol

y = 1.5465x - 3.4042

R2 = 0.862

0

0.5

1

1.5

2

2.5

2.8 3 3.2 3.4 3.6

Log D(mg/Kg)

LogEfecto(decimale

Serie1

Lineal (Serie1)

Grafica 7. etanol: modelo del efecto mximo.

log D (mg/Kg) log efecto2.698970004 -0.14285714

3 0.19047619

3.301029996 0.33333333

3.397940009 0.95238095

2.698970004 0.95238095

Tabla 8. etanol: modelo del efectomximo sigmoideo


calculo de DS50

mgDS /9850.1^10 6792.10.05.0

50==


calculo de DS50

mDE B 14.25101050 4042.3 ===


8/10

Modelo del efecto mximo sigmoideo: etanol

y = 1.5465x - 3.4042

R2 = 0.862

0

0.5

1

1.5

2

2.5

2.8 3 3.2 3.4 3.6

Log D(mg/Kg)

LogEfect

o(deci

Serie1

Lineal (Serie1)

Grafica 8. etanol: modelo del efecto mximo sigmoideo

Clculo de la potencia relativa del Etanol:

00673.0/75.2001

/4718.13

tanPr

50

50===

Kgmg

Kgmg

olEDE

alpetobarbitDEEtOH

ANLISIS Y DISCUSIN DE RESULTADOS

Para calcular el efecto sedante del Pentobarbital, se us el modelo lineal pues fue elmodelo con el que obtuvimos mejor correlacin y por lo tanto la DE50= 13.4718mg/kg; en cambio, para el Etanol, se utiliz el modelo del efecto mximo sigmoide,obteniendo una DE50= 2001.75 mg/kg, lo cual nos indica que el Pentobarbital es mspotente y por lo tanto ms peligroso que el Etanol, ya que con una menor dosis seobtiene la DE50.

Tambin pudimos observar que al realizar la determinacin de las DE50 del etanol,en la primer dosis administrada (500 mg/kg) no se observ el efecto queesperbamos (efecto sedante de los depresores del Sistema Nervioso Central) sinoel contrario, ya que hubo mayor nmero de levantamientos del ratn al estar dentro

del cilindro de vidrio, esto sucedi, porque el etanol, a bajas concentraciones tieneefecto estimulante, no inhibitorio, pues produce efecto estimulante sobre el receptorserotonrgico y por lo tanto libera neurotransmisores como la dopamina, el cual esprecursor en la sntesis de catecolaminas (como la adrenalina y noradrenalina), estoquiere decir, que dicho efecto del aumento del nmero de levantamiento fue unefecto normal. Pero posteriormente con mayores dosis, si se present la respuestaesperada como desde un principio con el Pentobarbital, pues facilita la interaccndel GABA con los receptores GABAA lo cual causa depresin del SNC, e igualmentese aumenta el tiempo de apertura de los canales de Cloro lo cual causa unahiperpolarizacin y no es poible la transmisin de potenciales de accin causando

calculo de DS50

Kgmg

DE mb

/94.158

10105665.1/4042.3/

50

=

==


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mayor inhibicin del SNC. El pentobarbital es ms potente que el Etanol porque dejalos canales de Cloro mayor tiempo abiertos.

La potencia relativa del Etanol= 0.00673, el clculo se realiz comparndolo con lapotencia del Pentobarbital, el valor obtenido es un nmero muy pequeo, lo cual nosindica que la potencia del Etanol es mucho menor comparada con la delPentobarbital, lo cual pudimos comprobar al calcular la DE50 para cada uno.

CONCLUSIONES

Se comprob que a mayor dosis de pentobarbital menos levantamientos delratn, por tanto mayor sedacin del animal y como consecuencia mayordepresin del sistema nervioso central.

Tambin se pudo comprobar el efecto estimulante del etanol al observar enun principio que con dosis bajas de dicho alcohol el ratn presentaba mayornmero de levantamientos y a dosis altas se present el efecto sedante,observando en este caso un menor nmero de levantamientos del ratn.

La determinacin de la DE50 nos permite saber la toxicidad que pueda tenerun frmaco puesto que a menor DE50 ms rpido se produce el efectoteraputico deseado y por tanto el frmaco es ms potente. En esta prcticael pentobarbital es ms potente que el etanol puesto que tiene una DE 50menor.

La potencia relativa entre dos sustancias nos ayuda a saber cul de estas esms potente.

Los mecanismos de accin del etanol y del pentobarbital son parecidos puestoque potencian la accin del GABA y tienen como funcin inhibir algunaspartes del SNC, sin embargo el efecto del etanol es menor y menos constantepuesto que el pentobarbital deja los canales de cloro ms tiempo abiertos.

En la eleccin de un modelo para determinar la DE50 se considera el mejor elque tenga una regresin lineal ms cercana a 1.

BIBLIOGRAFA

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