7/27/2019 Practica de Farma 5 Ratones
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Laboratorio de Farmacologa 1Practica 5:
Determinacin Experimental DeLa Dosis Efectiva 50 Sedante
En Ratones
OBJETIVOS Determinar la DE50 para el efecto sedante del pentobarbital y etanol en ratn, utilizando el
modelo del cilindro de Exploracin en ratones. Aplicar los conocimientos que obtuvimos en la primera practica. Calcular la potencia relativa
HIPTESIS Si aumentamos la dosis de pentobarbital entonces se observarn menos levantamientos por
que el animal se sedar y perder vivacidad e inters por la exploracin. En el caso del etanol, a dosis bajas esperaramos ver una conducta ms viva ya que es
estimulante en esas cantidades, as que es probable que los levantamientos aumenten, peroal ir aumentando la dosis se observar un aletargamiento y nuevamente se esperaranobservar menos levantamientos.
INTRODUCCINLa ansiedad es una sensacin desagradable de tensin, aprensin o incomodidad, unmiedo que parece proceder de un origen desconocido. Los sintomas de la ansiedad graveson similares a los del miedo (como taquicardia, sudacin, temblores y palpitaciones) yconllevan la activacin del sistema simptico. Cuando los sntomas de la ansiedad songraves, crnicos y debilitantes, se requiere terapia con frmacos ansiolticos, con o sin unaterapia psicolgica o conductal en forma concomitante. Debido a que todos los frmacosansiolticos causan cierta sedacin, los mismos agentes se emplean para inducir el sueo(hipnticos).
El pentobarbital usado en la prctica pertenece a la familia de los barbitricos queconstituyeron el tratamiento bsico para sedacin, as como para induccin y
mantenimiento del sueo. Los barbitricos son depresores no selectivos del sistemanervioso central con efectos que oscilan entre la sedacin y la reduccin de la ansiedad a lainconsciencia y la muerte por insuficiencia respiratoria y cardiovascular. Por tanto, sonpeligrosos en caso de sobredosis. Actan en parte potenciando la accin del GABA parapermitir la entrada de cloro a la neurona, el flujo de iones de cloro hacia el interior de laclula provoca hiperpolarizacin leve que aleja al potencial postsinptico de su umbral deemisin e inhibe la formacin de potenciales de accin.
El etanol tiene acciones ansiolticas y sedantes pero su potencial de toxicidadsobrepasa estos beneficios, no pertenece a la familia de los barbitricos. Los principalesefectos del etanol se ejercen en el SNC, donde sus acciones depresoras son similares a lasde los anestsicos voltiles. En las clulas, el efecto del etanol es puramente depresor,
aunque aumenta la actividad de los impulsos (probablemente por deshinibicin) en algunaspartes del SNC.
El etanol potencia la accin del GABA, actuando sobre los receptores GABAA demanera semejante a las benzodiacepinas y barbitricos. Sin embargo, su efecto es menor ymenos constante que el de estas sustancias txicas y no se ha demostrado que ejerza unefecto claro en la transmisin sinptica inhibidora en el SNC.
El principal efecto cardiovascular del etanol es la vasodilatacin cutnea, de origencentral, que produce una sensacin de calor, pero que en realidad aumenta la prdida decalor. El etanol incrementa la secrecin salival y gstrica, en parte como efecto reflejoproducido por el sabor y la accin irritante del alcohol. La diuresis es un conocido efecto deletanol, debida a la inhibicin de la secrecin de hormona antidiurtica; la tolerancia aparece
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con rapidez, por lo que este incremento de diuresis no se mantiene. Los grandes bebedoressufren una degeneracin neurolgica con demencia y neuropatas perifricas, su consumoproduce a largo plazo una hepatopata que progresa a la cirrosis y la insuficiencia heptica.
El etanol se metaboliza fundamentalmente en el hgado, primero por accin de laalcohol deshidrogenasa, que lo transforma en acetaldehdo, y despus por la aldehdodeshidrogenasa, que lo transforma en acetato.
Los anlisis biolgicos se disean para medir la potencia relativa de dospreparaciones, normalmente una estndar de referencia y otra desconocida. Por supuesto,
el patrn de referencia idneo es la sustancia pura, pero a menudo hay que establecerpreparaciones estndar de distintas hormonas, productos naturales y antisueros frente a losque se pueden calibrar las muestras de laboratorio, an cuando las preparaciones estndarno son qumicamente puras.
Segn el modelo de los dos estados, la eficacia refleja la afinidad relativa delcompuesto por los receptores en reposo y activados. Los agonistas son selectivos por elestado activado; los antagonistas no muestran selectividad alguna.
DIAGRAMA DE FLUJO
A) Efecto sedante de pentobarbital.
INICIO
Pesado y marcaje de animales.
Cada grupo de trabajo recibi seis
ratones. Marcamos a nuestros
animales con el marcador de tinta
indeleble en la base de la cola, los
pesamos y registramos el peso de
Administracin del frmaco
Asignamos aleatoriamente las dosis
recibi cada ratn. Administramos po
va intraperitoneal 0.1 ml de la
disolucin correspondiente del frma
o de la disolucin salina por cada 10
Desarrollo del experimeto
1) Nos cercioramos de que el cilindro de vidrio
estuviera seco y limpio.
2) Colocamos el cilindro sobre un trozo de papel
balnco mayor al dimetro del cilindro
3)Treinta minutos despus de haber administrado el
frmaco o la solucin salina introducimos al animal
en el cilindro de exploracin.
4)Pusimos a funcionar el cronmetro y registramos el
nmero de levantamientos que realiz el animal en
un perodo de 5 minutos. Solo una persona cuantific
esta conducta para que fueran analizados bajo el
mismo criterio.
5)Limpiamos con una solucin hidroalcohlica el
Preparacin de las disoluciones de
pentobarbital sdico
Rotulamos seis frascos viales con las
siguientes leyendas 0, 2.5, 5, 10, 15
30 mg/kg. Agregamos la cantidad
indicada del cuadro que viene en el
manual de la disolucin de pentobarb
de 3mg/ml y de disolucin salina al 0
FIN
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B) Efecto sedante de etanol
RESULTADOS
Pentobarbital sdico
Dosis(mg/Kg)
levantamientos efecto %efecto
0 27 0 0
2.5 200.259259
2625.92592
59
Algoritmo de clculo
259.027
201 =
calculo de DE50
Kgmg/4718.130284.0
1174.05.0=
INICI
O
Pesado y marcaje de animales.
Cada grupo de trabajo recibi seis
ratones. Marcamos a nuestros
animales con el marcador de tinta
indeleble en la base de la cola, los
pesamos y registramos el peso de
Administracin del frmaco
Asignamos aleatoriamente las dosis
recibi cada ratn. Administramos p
va intraperitoneal 0.1 ml de la
disolucin correspondiente del frma
o de la disolucin salina por cada 10
Preparacin de las soluciones de etaabsoluto.Rotulamos seis matraces aforados d10 ml con las siguientes leyendas 0,500, 1000, 2000, 2500 y 3000 mg/kAgregamos la cantidad indicada en e
Desarrollo del experimeto
1) Nos cercioramos de que el cilindro de vidrio
estuviera seco y limpio.
2) Colocamos el cilindro sobre un trozo de papel
balnco mayor al dimetro del cilindro
3)Treinta minutos despus de haber administrado el
frmaco o la solucin salina introducimos al animalen el cilindro de exploracin.
4)Pusimos a funcionar el cronmetro y registramos el
nmero de levantamientos que realiz el animal en
un perodo de 5 minutos. Solo una persona cuantific
esta conducta para que fueran analizados bajo el
mismo criterio.
5)Limpiamos con una solucin hidroalcohlica el
FIN
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5 190.29629
6329.62962
96
10 170.37037
03737.03703
7
15 100.62962
96362.96296
3
30 20.92592
59392.59259
3Tabla1. pentobarbitol sdico: modelo
lineal
Pentobarbitol Sdico: modelo lineal
y = 0.0284x + 0.1174
R2 = 0.9414
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1
1.2
0 10 20 30 40
Dosis (mg/Kg)
efecto
(decim
efecto
Lineal (efecto )
Grafica 1, pentobarbitol sdico: modelo lineal
log D (mg/Kg) Efecto0.397940009 0.259259260.698970004 0.2962963
1 0.370370371.176091259 0.629629631.477121255 0.92592593
Tabla 2. pentobarbitol sdico: modelo lineal logartmico
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Pentobarbitol Sdico: modelo lineal logartmico
y = 0.6169x - 0.0898
R2 = 0.8464
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1
0 0.5 1 1.5 2
Dosis (mg/Kg)
Efecto(decimal
Serie1
Lineal (Serie1)
Grafica 2 pentobarbitol sdico: modelo lineal logartmico
log D (mg/Kg) log efecto0.397940009 -0.586265720.698970004 -0.52827378
1 -0.431363761.176091259 -0.200914841.477121255 -0.03342376
Tabla 3. pentobarbitol sdico: modelo delefecto mximo.
Pentobarbitol Sdico: modelo del efecto mximo
y = 0.5316x - 0.861
R2 = 0.9127
-0.7
-0.6
-0.5
-0.4
-0.3
-0.2
-0.1
0
0 0.5 1 1.5 2
log D (mg/Kg)
logE(decim
Serie1
Lineal (Serie1)
Grafica 3. pentobarbitol sdico: modelo del efecto mximo.
log D (mg/Kg) log efecto0.397940009 -0.586265720.698970004 -0.52827378
1 -0.431363761.176091259 -0.200914841.477121255 -0.03342376
Tabla 4. pentobarbitol sdico: modelo del efectomximo sigmoideo
calculo de DE50
KgmgDS /460.6^10 6169.00.05.0
50==
calculo de DS50
mgDE b 2610.7101050 861.0 ===
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Pentobarbitol Sdico: modelo del efecto mximo
sigmoide
y = 0.5316x - 0.861
R2 = 0.9127
-0.8
-0.6
-0.4
-0.2
0
0 0.5 1 1.5 2
log D (mg/Kg)
logE(de
cimal
Serie1Lineal (Serie1)
Grafica 4. pentobarbitol sdico: modelo del efecto mximo sigmoideo.
Etanol
Dosis(mg/Kg)
levantamientos efecto %efecto
0 21 -0.14285714 -
500 24 0.19047619 -14.2857143
1000 17 0.33333333 19.047619
2000 14 0.95238095 33.3333333
2500 1 0.95238095 95.2380952
3000 1 0.95238095 95.2380952
Tabla 5. etanol: modelo lineal
Etanol: modelo lineal
y = 0.0004x - 0.3007
R2 = 0.8199
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1
1.2
0 1000 2000 3000 4000
Dosis(mg/Kg)
Efecto(decimal
Serie1
Lineal (Serie1)
Grafica 5. etanol: modelo lineal
log D (mg/Kg) Efecto-- 0.25925926
2.698970004 0.29629633 0.37037037
3.301029996 0.629629633.397940009 0.95238095
Tabla 6. etanol: modelo lineal logartmico
calculo de DS50
Kgmg
DE mb
/6196.1
10105316.0/861.0/
50
=
==
Algoritmo de calculo
333333..021
171 =
calculo de DS50
Kgmg/75.20010004.0
3007.05.0=
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Etanol: modelo lineal logartmico
y = 1.6792x - 4.9242
R2 = 0.7575
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1
2.8 3 3.2 3.4 3.6
Log D (mg/Kg)
Efecto
(decim
Serie1
Lineal (Serie1)
Grafica 6. etanol: modelo lineal logartmico
log D (mg/Kg) log efecto
2.698970004 -0.142857143 0.19047619
3.301029996 0.33333333
3.397940009 0.95238095
2.698970004 0.95238095
Tabla 7. etanol: modelo delefecto mximo.
Modelo del efecto mximo: etanol
y = 1.5465x - 3.4042
R2 = 0.862
0
0.5
1
1.5
2
2.5
2.8 3 3.2 3.4 3.6
Log D(mg/Kg)
LogEfecto(decimale
Serie1
Lineal (Serie1)
Grafica 7. etanol: modelo del efecto mximo.
log D (mg/Kg) log efecto2.698970004 -0.14285714
3 0.19047619
3.301029996 0.33333333
3.397940009 0.95238095
2.698970004 0.95238095
Tabla 8. etanol: modelo del efectomximo sigmoideo
Algoritmo de calculo
calculo de DS50
mgDS /9850.1^10 6792.10.05.0
50==
Algoritmo de calculo
calculo de DS50
mDE B 14.25101050 4042.3 ===
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Modelo del efecto mximo sigmoideo: etanol
y = 1.5465x - 3.4042
R2 = 0.862
0
0.5
1
1.5
2
2.5
2.8 3 3.2 3.4 3.6
Log D(mg/Kg)
LogEfect
o(deci
Serie1
Lineal (Serie1)
Grafica 8. etanol: modelo del efecto mximo sigmoideo
Clculo de la potencia relativa del Etanol:
00673.0/75.2001
/4718.13
tanPr
50
50===
Kgmg
Kgmg
olEDE
alpetobarbitDEEtOH
ANLISIS Y DISCUSIN DE RESULTADOS
Para calcular el efecto sedante del Pentobarbital, se us el modelo lineal pues fue elmodelo con el que obtuvimos mejor correlacin y por lo tanto la DE50= 13.4718mg/kg; en cambio, para el Etanol, se utiliz el modelo del efecto mximo sigmoide,obteniendo una DE50= 2001.75 mg/kg, lo cual nos indica que el Pentobarbital es mspotente y por lo tanto ms peligroso que el Etanol, ya que con una menor dosis seobtiene la DE50.
Tambin pudimos observar que al realizar la determinacin de las DE50 del etanol,en la primer dosis administrada (500 mg/kg) no se observ el efecto queesperbamos (efecto sedante de los depresores del Sistema Nervioso Central) sinoel contrario, ya que hubo mayor nmero de levantamientos del ratn al estar dentro
del cilindro de vidrio, esto sucedi, porque el etanol, a bajas concentraciones tieneefecto estimulante, no inhibitorio, pues produce efecto estimulante sobre el receptorserotonrgico y por lo tanto libera neurotransmisores como la dopamina, el cual esprecursor en la sntesis de catecolaminas (como la adrenalina y noradrenalina), estoquiere decir, que dicho efecto del aumento del nmero de levantamiento fue unefecto normal. Pero posteriormente con mayores dosis, si se present la respuestaesperada como desde un principio con el Pentobarbital, pues facilita la interaccndel GABA con los receptores GABAA lo cual causa depresin del SNC, e igualmentese aumenta el tiempo de apertura de los canales de Cloro lo cual causa unahiperpolarizacin y no es poible la transmisin de potenciales de accin causando
calculo de DS50
Kgmg
DE mb
/94.158
10105665.1/4042.3/
50
=
==
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mayor inhibicin del SNC. El pentobarbital es ms potente que el Etanol porque dejalos canales de Cloro mayor tiempo abiertos.
La potencia relativa del Etanol= 0.00673, el clculo se realiz comparndolo con lapotencia del Pentobarbital, el valor obtenido es un nmero muy pequeo, lo cual nosindica que la potencia del Etanol es mucho menor comparada con la delPentobarbital, lo cual pudimos comprobar al calcular la DE50 para cada uno.
CONCLUSIONES
Se comprob que a mayor dosis de pentobarbital menos levantamientos delratn, por tanto mayor sedacin del animal y como consecuencia mayordepresin del sistema nervioso central.
Tambin se pudo comprobar el efecto estimulante del etanol al observar enun principio que con dosis bajas de dicho alcohol el ratn presentaba mayornmero de levantamientos y a dosis altas se present el efecto sedante,observando en este caso un menor nmero de levantamientos del ratn.
La determinacin de la DE50 nos permite saber la toxicidad que pueda tenerun frmaco puesto que a menor DE50 ms rpido se produce el efectoteraputico deseado y por tanto el frmaco es ms potente. En esta prcticael pentobarbital es ms potente que el etanol puesto que tiene una DE 50menor.
La potencia relativa entre dos sustancias nos ayuda a saber cul de estas esms potente.
Los mecanismos de accin del etanol y del pentobarbital son parecidos puestoque potencian la accin del GABA y tienen como funcin inhibir algunaspartes del SNC, sin embargo el efecto del etanol es menor y menos constantepuesto que el pentobarbital deja los canales de cloro ms tiempo abiertos.
En la eleccin de un modelo para determinar la DE50 se considera el mejor elque tenga una regresin lineal ms cercana a 1.
BIBLIOGRAFA
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