Prácticas de Bioquímica .

Daza Arango, Liliana María 1

UNIVERSIDAD CATÓLICA DEL TÁCHIRA

FACULTAD DE HUMANIDADES Y EDUCACIÓN ESCUELA DE EDUCACIÓN

MENCIÓN: Biología y Química Facilitador: Lcda. Liliana M. Daza Arango ASIGNATURA: Bioquímica

PRACTICA # 02

ESTUDIO CELULAR

Objetivo General: Observar que los seres vivos están constituidos por células

Identificar partes principales de células vegetales. Diferenciar las estructuras básicas de las células vegetal y animal. Conocer distintos componentes celulares y sus funciones. Analizar la importancia que reviste el estudio de la célula como pilar fundamental en conocimiento de la

estructura humana.

I. ACTIVIDAD DE INICIO Seguidamente tienes una cyberguide procede a desarrollarla.

INICIO

CYBERGUIDE

LA CÉLULA El sector industrial en todo el mundo ha ido de la mano con la tecnología, y con todos los avances de la ciencia.

Actualmente predominan las fábricas automatizadas, se automantiene y funcionan en su mayoría con poca o ningún

tipo de intervención humana. Con el paso del tiempo, las fábricas se han pareciendo cada vez más a una célula viva.

Como muchas fábricas, la célula con núcleo posee una organización muy bien definida, donde cada departamento y

miembro sabe las funciones a desempeñar; posee vehículos para el transporte interno de materia prima; una dirección

general y departamentos de energía, de elaboración y de empaquetamiento y distribución. Igual que la fábrica, la

célula usa energía y materia prima provenientes del exterior para mantener su funcionamiento y elaborar productos. Y también como ella produce desechos.

El ser humano, como todos los seres

vivos, está formado de células, unos

100 billones, unidas entre sí por

estructuras intercelulares de sostén.

Las mismas células se comportan

como pequeños seres vivos porque

realizan idénticas funciones vitales

que los organismos pluricelulares:

Prácticas de Bioquímica .

Daza Arango, Liliana María 2

necesitan nutrirse para asegurar su vida, utilizan los principios inmediatos y el oxígeno para obtener energía,

responden a determinados estímulos y tienen capacidad para reproducirse. Podemos dividir las células en

procarióticas y eucarióticas.

Para poder comprender ¿cómo funciona el cuerpo humano sano?, ¿cómo se desarrolla y envejece? y ¿qué falla en

caso de enfermedad?, es imprescindible conocer las células que lo constituyen.

ACTIVIDAD Cada equipo de laboratorio (los que se formaron al inicio de año académico), procederá a ejecutar las actividades que

se les sugieren, y responderán las siguientes interrogantes, (en el cuaderno de trabajo) con la finalidad de realizar

una plenaria antes de comenzar la actividad de práctica.

1.- ¿Porque se dice que la célula es la unidad vital, anatómica, fisiológica y genética de todo ser vivo?

2.- ¿Qué rama de la biología estudia la célula?

3.- ¿Cuáles fueron los tres investigadores que sentaron las bases de la teoría celular?

4.- ¿Cuál es la importancia del microscopio en el descubrimiento de las células?

5.- Establezca diferencias entre los tipos de células.

5.- Relaciona cada investigador con su aporte al establecimiento de la teoría celular:

Investigador Aporte

( ) Janssen 1. Primero en observar células vivas

( ) Malpighi 2. Primero en utilizar el microscopio en medicina

( ) Hooke 3. Descubrió la célula

( ) Leeuwenhoek 4. Descubrió el núcleo celular

( ) Brown 5. Descubrió el protoplasma

( )Purkinje 6. Fabricó el prime microscopio.

Realizar un mapa conceptual de la célula, donde se refleje, su estructura, su(s) funciones, tipos, importancia para la vida humana.

PRODUCTO Una vez consultado el material sugeridos, y apoyados en sus conocimientos previos sobre el tema, cada alumno

construirá un mapa conceptual de la célula, y responderá las interrogantes planteadas al inicio en tu cuaderno de

trabajo, las cuales se discutirán antes del inicio del respectivo laboratorio.

RECURSOS: Seguidamente se presentan los vínculos de las páginas web recomendadas con la finalidad de ejecutar la tarea.

http://www.naturalezadearagon.com/historianatural/biologiageneral2.php

http://es.geocities.com/que_es_la_celula/index.htm

http://members.tripod.com/MilenaVIllamizar/celula.html

http://www.ferato.com/wiki/index.php/C%C3%A9lula

DESEMPEÑO Y EVALUACIÓN Una vez consultadas las páginas Web sugeridas registra en tu cuaderno de laboratorio, las cuales se discutirán antes

de iniciar el desarrollo de la práctica., y recuerda que representa un % de la evaluación acumulativa.

II. DESARROLLO DEL LABORATORIO

Material y Reactivos

Microscopio Portaobjetos y

cubreobjetos

Pinzas Hojilla Jabón antibacterial.

Cuchilla Corcho Gotero pinza Papa pequeña

Lanceta y aguja enmangada

Azul de metileno (o yodo)

Algas filamentosas

Tomate maduro pequeño

Prácticas de Bioquímica .

Daza Arango, Liliana María 3

Palillo de dientes Mechero Agua destilada Lugol Cebolla cabezona

pequeña

Actividad # 1: Observación De Células De Corcho (Células Muertas)

1. Con la ayuda de una hojilla, prepara cortes de corcho muy finos, para permitir que la luz ase a través de ellos.

2. Coloca el corte en un portaobjeto, sobre una gota de agua. Cúbrelo con un cubreobjeto.

3. Obsérvalo al microscopio con el objetivo de menor aumento; para ello, debes recordar como realizar el enfoque. Mira a lo largo de los bordes más finos de la muestra para ver mejor la estructura del corcho.

4. Observa el corcho con mayor aumento.

5. Dibuja lo observado.

Menor Mayor aumento

A. Células del Reino Vegetal.

En todos los casos, observe el núcleo (forma, tamaño, localización).

Actividad # 2: Estudio De Cloroplastos, Cromoplastos y Leucoplastos

Los plastos son orgánulos citoplasmáticos típicamente vegetales. Pueden estar coloreados por pigmentos

liposolubles o ser incoloros. En el primer caso se incluyen cloroplastos y cromoplastos y en el segundo los

leucoplastos.

Los cloroplastos son los responsables de la asimilación fotosintética del carbono en las plantas verdes, los

cromoplastos lo son del color anaranjado o rojizo de distintas estructuras vegetales (flores, frutos, etc.). Los

leucoplastos pueden almacenar almidón, y se denominan amiloplastos; éstos se encuentran en diferentes órganos de

reserva (rizomas, tubérculos).

Procedimiento:

a) Observación de Cloroplastos en Células de Hydrilla:

Tome un portaobjetos y coloque una gota de agua.

Desprenda una hoja de Hydrilla del tallito y toma unos filamentos del alga, y colóquela sobre la gota de

agua y protegela con un cubreobjetos.

Prácticas de Bioquímica .

Daza Arango, Liliana María 4

Se observa al microscopio con un objetivo de pocos aumentos para localizar la zona que se observe mejor.

Pasar a mayores aumentos.

Las células de Hydrilla tienen forma rectangular; alrededor de ellas se aprecia fuertemente delineada la

pared celular. Los cloroplastos de las células de Hydrilla se aprecian como incontables vesículas

redondeadas de color verde, dentro de cada célula.

Nota: La forma y tamaño de los cloroplastos es variable, pudiendo ser acintados, estrellados, etc.

Observación

b) Observación de Cromoplastos en Células de Tomate:

Tome un portaobjetos y coloque una gota de agua.

Realice un corte bien delgado de la pulpa de tomate, mediante

una navaja afilada.

Coloque el corte de tejido sobre la gota de agua. Coloque un

cubreobjetos comprimiendo suavemente la preparación con los

pulgares.

Identifica los distintos organelos celulares y dibuja lo que observas.

Observe al microscopio iniciando con 10x.

Observa con mayor aumento.

c) Observación de Leucoplastos en Células de Papa:

Tome un portaobjetos y coloque una gota de agua más una gota de lugol diluido (lugol que se aprecie de color

amarillo claro) y mezcle.

Realice un corte bien delgado de papa, mediante una navaja afilada (tan delgado que se puedan leer las letras

de la navaja a través de éste).

Coloque el corte de tejido sobre el líquido que está sobre el portaobjetos (agua + lugol).

Coloque un cubreobjetos.

Observe al microscopio iniciando con 10x. Los leucoplastos se verán como cuerpos ovoides blancos formados

de láminas concéntricos; cuando se tiñen con el lugol, se observan de color oscuro (pardo o violeta,

dependiendo de la concentración del lugol).

El reactivo lugol, que se utiliza para observar estas estructuras, es a la vez una fijador (agente químico que

destruye las células sin modificar su estructura) y un colorante de algunos tejidos vegetales (celulósicos, lignificados

Prácticas de Bioquímica .

Daza Arango, Liliana María 5

y suberificados), así como de sustancias de reserva (almidón), siendo de gran interés para el reconocimiento de

diferentes especies vegetales, pues cada especie, dentro del mismo género, presenta distinta organización de los

tejidos y almacena el almidón de forma diferente.

Observación:

Actividad # 2: Observación del Núcleo en Células de Cebolla:

1. Con la ayuda de una cuchilla y unas pinzas, separe una de las capas de la cebolla y, con mucho cuidado, levante

la superficie interna de la epidermis (membrana delgada) un corte de tejido translúcido correspondiente a la zona

cóncava de la tercera o cuarta escama de la cebolla, tal como se muestra en la figura. y colocarla extendida en un

portaobjetos; a continuación se coloca el cubreobjetos y se observa al microscopio óptico

2. Toma un portaobjeto, coloca una pequeña muestra de la epidermis.

Cloroplastos

Leucoplastos

Cromoplastos

Los leucoplastos se verán como cuerpos ovoides blancos (los gránulos de almidón), que se tiñen de color

azul-violeta intenso por el yodo presente en el lugol (o pardo dependiendo de la concentración del lugol).

Se pueden observar las capas de crecimiento excéntricas, que presentan los gránulos de almidón alrededor

de un punto central o "hilo".

Prácticas de Bioquímica .

Daza Arango, Liliana María 6

3. Agrega encima de la muestra una gota de agua; a continuación se coloca el cubreobjetos y se observa al

microscopio óptico.

4. Obsérvalo al microscopio con el objetivo de menor aumento, se examinará la preparación entera. ¿Qué observas?: _____________________________________________________________________________________

______________________________________________________________________________________________

5. Ahora agrega la preparación una gota del colorante (yodo o azul de metileno) en uno de bordes del cubreobjetos

y en el otro extremo coloca un trozo de papel absorbente, de modo que el líquido fluya debajo del cubreobjetos.

6. Coloca la preparación al microscopio y examínala, primero con menor aumento, luego mediano y por ultimo

mayor aumento. ¿Qué observas? ___________________________________________________________________

______________________________________________________________________________________________

7. Dibuja lo observado.

Existe diferencia entre las células observadas:_________________________________________________________

______________________________________________________________________________________________

______________________________________________________________________________________________

B. Células del Reino Animal.

Actividad # 3. Observación de células del epitelio de la mucosa bucal

Este epitelio está constituido por células de un contorno irregular, prácticamente incoloras a la luz blanca, por

lo que, para su observación es preciso realizar un proceso previo de tinción, en este caso con azul de metileno, que

permitirá observar un citoplasma granulado y un núcleo claramente diferenciado.

Procedimiento: 1. Lavarse las manos bien con jabón antibacterial.

2. Tome un portaobjetos limpio y un palillo de dientes.

3. Deslice suavemente el extremo ancho del palillo de dientes sobre la superficie interna de la boca (mejilla).

4. Preparar Frotis: deslice el palillo de dientes (la parte que tiene la muestra de mucosa bucal) sobre el

portaobjetos, de forma que la muestra quede esparcida sobre él.

5. Deje secar la muestra.

6. Fijación de la muestra con calor: la fijación consiste en calentar suavemente el portaobjetos para que la

muestra se adhiera al vidrio, y al mismo tiempo provoca que las células bacterianas mueran. En el caso

particular de este laboratorio, encienda el plato de calentamiento, y cuando esté caliente, efectúe 2 ó 3

contactos del portaobjetos sobre el plato de calentamiento (o sea, permita el contacto de la cara del portaobjetos opuesta a la que tiene la muestra con la superficie del plato de calentamiento por 1 segundo (1s).,

Prácticas de Bioquímica .

Daza Arango, Liliana María 7

retírela del calor y repita seguidamente 1 ó 2 veces más). No mantenga ese contacto por más de 1 segundo,

porque se “quema” la muestra.

También se puede fijar la muestra a la llama para estabilizar las estructuras y adherirla al portaobjetos.

Para ello, se pasa la cara inferior del portaobjetos por encima de la llama brevemente, con cuidado de no

quemar las células.

7. Deje refrescar a temperatura ambiente por 1 minuto.

8. Técnica de Tinción Simple Positiva: Coloque 1-2 gotas del tinte (puede ser azul de metileno, violeta de

cristal, violeta genciana, verde malaquita, safranina u otro) en la superficie del portaobjetos (en la superficie

que tiene la muestra) y permita que se extienda por toda la superficie de éste; deje teñir por 75 segundos.

9. Una vez transcurre el tiempo de tinción, lavar suavemente la preparación para eliminar el exceso de colorante.

Para ello, colocar el portaobjetos en pendiente bajo el grifo y dejar caer lentamente un chorro fino de agua. 10. Escurra y deje secar a temperatura ambiente hasta que la superficie del portaobjetos se vea opaca.

11. Coloque una gota de aceite de inmersión y observe, por medio del microscopio, con el objetivo de inmersión

(no debe colocar cubreobjetos). Recuerde que luego de colocar la muestra en la platina debe bajar suavemente

el objetivo 100x (mediante el tornillo macrométrico) hasta que toque el aceite; justo en el momento de

contacto del lente objetivo con el aceite, debe comenzar a enfocar con el tornillo micrométrico, girándolo

hacia delante o atrás hasta que aparezca una imagen nítida.

12. Dibuje lo observado y haga anotaciones. Aprecie la forma de la célula (aprecie el borde de la célula: la

membrana celular) y su núcleo. Trate de identificar algún otro organelo.

Actividad #4. Observación de Bacterias del Yogurt (Tinción Simple Positiva):

1. Tome un portaobjetos limpio (al que llamaremos #1) y un gotero. 2. Extraiga un poco de yogurt de la superficie del recipiente, mediante el gotero, y coloque una gota cerca del

borde izquierdo del portaobjetos.

3. Preparar Frotis: Tome otro portaobjetos (al que llamaremos # 2), colóquelo en contacto con la gota de

yogurt (del lado izquierdo de la gota), incline este portaobjetos en ángulo de 45º con respecto a aquel que tiene

la gota de yogurt (# 1). Deslice el portaobjetos (# 2) de forma que arrastre y esparza la gota de muestra sobre

el otro portaobjetos (# 1); esto debe hacerse rápida y uniformemente, de modo que la muestra quede esparcida

como una fina capa uniforme sobre el portaobjetos (# 1).

4. Deje secar la muestra a temperatura ambiente hasta que la superficie del portaobjetos (# 1) se aprecie opaca

sin brillo.

5. Fijación de la muestra con calor: Tal como se describió en la actividad 3 paso 6, efectúe 2 ó 3 contactos del

portaobjetos sobre el plato de calentamiento.

6. Deje refrescar a temperatura ambiente por 1 minuto. 7. Técnica de Tinción Simple Positiva: Coloque dos gotas del tinte (puede ser azul de metileno, violeta de

cristal, violeta genciana, verde malaquita, safranina u otro) en la superficie del portaobjetos (en la superficie

que tiene la muestra) y permita que se extienda por toda la superficie de éste; deje teñir por 75 segundos.

8. Enjuague ligeramente el portaobjetos, con un chorro suave de agua de la pluma, para retirar el tinte (3 s.).

9. Escurra y deje secara temperatura ambiente hasta que la superficie del portaobjetos se vea opaca.

10. Coloque una gota de aceite de inmersión y observe, por medio del microscopio, con el objetivo de inmersión

(no debe colocar cubreobjetos). El procedimiento de enfoque es igual al descrito en la actividad 3 paso 11.

11. Dibuje lo observado y haga anotaciones.

Prácticas de Bioquímica .

Daza Arango, Liliana María 8

III.- ACTIVIDADES DE CONCLUSIONES

1. Compare los rasgos característicos de las células vegetales y las células animales observadas.

Células Vegetales Células Animales

2. En la siguiente figura coloree y nombre las estructuras celulares presentes:

La estructura, aunque no se pueda observar en su totalidad con este procedimiento, es la típica de

una célula vegetal. El límite más externo es la pared celular, que rodea el material vivo de la célula: el protoplasma. La parte que rodea todo el protoplasma y que está en contacto con la

pared celular, es la membrana celular. Dicha membrana no es visible en estas células porque

está aprisionada contra la pared celular. Próxima a esta pared hay una capa irregular, granular,

que constituye el citoplasma. El núcleo aparece homogéneo.

Prácticas de Bioquímica .

Daza Arango, Liliana María 9

TE

ENTERATE:

Las células madre

Llamamos células madre a un tipo especial de células que tienen la capacidad de dividirse

indefinidamente y llegar a producir células especializadas.

Las células normales de un individuo adulto (nos estamos refiriendo al hombre y los

mamíferos superiores) no tienen capacidad de multiplicarse, salvo las células de médula

ósea y las de la piel. Si engordamos, no es que tengamos más células, en realidad tenemos

la misma cantidad de células, pero éstas han aumentado de tamaño.

Si una lagartija pierde la cola, le vuelve a crecer. En los mamíferos no ocurre así. Si un

individuo pierde un miembro, no lo vuelve a desarrollar. Las células normales adultas no

tienen, pues, capacidad de reproducirse. Las que tienen capacidad de reproducirse y generar

nuevos tejidos reciben el nombre de células madre.

Veamos ahora el desarrollo de un embrión para entender mejor qué son las células madre.

Desarrollo embrionario Un óvulo fecundado por un espermatozoide es una célula capaz de generar un nuevo

individuo completo. Se trata, pues, de una célula totipotente: capaz de producir un

espécimen completo con todos sus tejidos.

Entre los días primero al cuarto del desarrollo embrionario, la célula original va

dividiéndose en varias células más. Cada una de estas células, si es separada del resto, es

capaz de producir un individuo completo. Son también células totipotentes.

A partir del cuarto día del desarrollo embrionario humano se forma el blastocito. El

blastocito está formado por dos capas:

Capa externa: forma la placenta y los tejidos necesarios para el desarrollo fetal.

Capa interna: formará todos los tejidos del cuerpo humano.

Las células de un blastocito ya no son totipotentes, puesto que una sola de estas células ya

no es capaz de generar un individuo completo. Sí que son capaces de generar todos los

tejidos de un individuo adulto, pero no pueden generar la placenta ni otros tejidos

necesarios para el desarrollo del embrión. Estas células internas del blastocito se denominan

células pluripotentes.

Estas células pluripotentes del interior del blastocito generarán, a su vez, células madre

especializadas con una función concreta, como por ejemplo:

Células madre de médula ósea que producen células sanguíneas: glóbulos rojos, glóbulos

blancos, plaquetas