CARRERA DE INGENIERIA AMBIENTALLABORATORIO DE FUNDAMENTOS DE MICROBIOLOGIA

PRACTICA N.- 1

NOMBRE: KATHERINE VARGAS

EQUIPO N.-“C”

FECHA: 4 JULIO DEL 2012 NOTA INDIVIDUAL:

TEMA: BIOSEGURIDAD Y PREPARACIÓN DE MATERIALES Y MEDIOS DE CULTIVO.

**OBJETIVO:

1.- Concientizar al alumno la importancia de la Bioseguridad en el Laboratorio.2.- Conocer los equipos y materiales que se utilizan en el Laboratorio de Microbiología.3.- Aplicar la técnica adecuada para preparar el área de trabajo y evitar contaminantes.4.- Aprender el procedimiento para empacar diversos materiales de uso en microbiología así como el procedimiento de la esterilización por el valor seco y calor húmedo.5.- Organizar el material para su fácil manejo de identificación.6.- Preparación de medios de cultivo, y manipular adecuadamente los cultivos puros.

**GRÁFICOS Y RESULTADOS:

MATERIALES:

CÁMARA DE FLUJO LAMINAR.

-Cabinas de flujo laminar: Las cabinas de flujo laminar horizontal son adecuadas para una buena protección del producto, pero no para el trabajo con materiales peligrosos o con algún tipo de riesgo pues el operador queda completamente expuesto. En las cabinas de flujo laminar vertical, se consigue una buena protección del producto, y, dependiendo de su diseño se puede En el caso de que el proceso no requiera una laminaridad en el flujo de aire pero sí un correcto barrido de una zona localizada, se puede optar por un módulo de flujo turbulento, con un importante ahorro en el coste inicial

MICROSCOPIO.

El microscopio (de micro-, μικρο, pequeño, y scopio, σκοπεω, observar) es un instrumento que permite observar objetos que son demasiado pequeños para ser vistos a simple vista. El tipo más común y el primero que se inventó es el microscopio óptico. Se trata de un instrumento óptico que contiene dos o más lentes que permiten obtener una imagen

aumentada del objeto y que funciona por refracción. La ciencia que investiga los objetos pequeños utilizando este instrumento se llama microscopía.

BALANZA ANALÍTICA.

La balanza analítica es un instrumento utilizado en el laboratorio, que sirve para medir la masa. Su característica más importante es que poseen muy poca incertidumbre, lo que las hace ideales para utilizarse en mediciones muy precisas. Las balanzas analíticas generalmente son digitales, y algunas pueden desplegar la información en distintos sistemas de unidades. Por ejemplo, se puede mostrar la masa de una sustancia en gramos, con una incertidumbre de 0,00001g. (0,01 mg)

ESTUFA.Armario metálico, aislado térmicamente, que se calienta mediante resistencias eléctricas reguladas por un termostato. Se utiliza para el secado de sólidos y de objetos.

PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO.

-Antes de prepara cualquier medio leer cuidadosamente el rótulo del envase y fijarse la fecha de vencimiento.

-Calcular la cantidad de polvo, de acuerdo a las instrucciones del rótulo del envase y el volumen total que se desee preparar.

-De acuerdo a las instrucciones indicadas, preparar:

MEDIOS SÓLIDOS: Se preparan añadiendo un agar a un medio. El agar es una sustancia inerte polisacárida (hidrato de carbono) que se extrae de las algas. Como esta sustancia no es digerida por las bacterias no constituye ningún elemento nutritivo. Estos medios hay que Esterilizar o “calentar” a una temperatura considerable. Y los que se necesite se calienta con el agitador para disolver el polvo a su máxima expresión, y así no se sedimenten.Luego estos pueden ser vertido en placas de Petri o en tubos de ensayo y presentan la posibilidad de aislar y diferenciar bacterias,“estos procesos antes no eran posibles en medios líquidos”.

Mc Conkey: Volumen: 120 mL. Dato del envase: 50g – 1 LSaburó: Volumen: 60 mL. Dato del envase: 65 g – 1 LAgar nutriente: Volumen: 60mL. Dato del envase: 23g – 1 L

MEDIOS LÍQUIDOS: Se denominan caldos y contienen los nutrientes en solución acuosa.Verde Brillante Bilis: Volumen 135 mL. Dato del envase: 40g - 1 LCaldo de Peptona: Volumen: 144 mL Dato del envase: 25,5g – 1 L

-Pesar sobre papel de aluminio loa cantidad de medio a preparar y se vuelca en el recipiente en el que será preparada.

-Medir el volumen de líquido en otro recipiente auxiliar limpio y graduado, y verter sobre el recipiente con el medio pesado.

-Agita vigorosamente hasta obtener una suspensión o solución (si es caldo) homogénea. Los caldos suelen dar soluciones transparentes que no necesitan calentamiento ni ninguna otra manipulación antes de ser llevados al autoclave. Las soluciones con agar sin embargo, requieren calentamiento casi hasta ebullición con agitación constante y a fuego suave (o baño María o microondas) para lograr su solubilización completa.

-Observar la solución durante el calentamiento ya que una vez que aparecieron las primeras burbujas tiende a desbordar por ebullición.

-Dosificar los medios preparados teniendo en cuenta el uso que se les dará.

Los caldos se dosifican en los tubos, colocando 9 mL en cada uno de ellos y, 90 mL en los frascos con tapa esterilizada.

-Los medios sólidos se esterilizan en el mismo envase que se los preparó.

- En las pipetas graduadas de 1ml,2mL y 5mL,colocar en la punta superior algodón luego empacar estas pipetas.

GRÁFICOS:

1.-Pesando la cantidad de agar. 2.-Medios de Cultivo y Caldos.

3.-Dosificados los medios tanto de: 4.-Esterilizados los medios sólidos Peptona, verde Brillante bilis, y dosificados los medios líquidos.agar nutritivo, saburó.

**CÁLCUOS

MEDIOS SÓLIDOS:

*MACONQUI.

Dato: 50 g – 1 L

Preparar: 120 mL.

50 g *0,12 L = 6 g de soluto. 1 L

*SABURÓ:

Dato: 65,0 g – 1 L

Preparar: 60 mL

MEDIOS LÍQUIDOS:

*PEPTONA.

En 6 tubos colocar 9 mL. Y 90 mL en un vaso de precipitación.

Dato: 25,5 g – 1L

Preparar: 144 mL

*VERDE BRILLANTE BILIS.

En 15 tubos colocar 9 mL.

Dato: 40g- 1L

Preparar: 135 mL

CONCLUSIONES

1.-

2.-

3.-

4.-

CUESTIONARIO

65 g *0,60 L = 3,9 g de soluto. 1 L

25,5 g * 0,144 L = 3,672 g de soluto 1 L

40 g * 0,135 L = 5,4 g de soluto 1L

1.- Investigue sobre las señales de seguridad y su importancia. Realice un cuadro sobre ellas.

ROMBO DE SEGURIDAD.Es el empleado por norma para identificar el tipo de sustancia y riesgos que representa

2.- Cálcule cuantos gramos de agar-agar se necesitan para preparar 125 mL de medio de cultivo sólido. ¿Qué porcentaje P/V se utilizó?

Dato del envase: 23g -1LPreparas: 125mL125mL * 1L =0,125 L 1000mL23 g * 0,125 L = 2,875 g de soluto1L

%P = m soluto * 100% V V solución

%P = 2,875 g soluto * 100% V 0,125 L %P = 2300% V

3.- ¿Por qué el medio MC Conkey puede ser considerado un medio selectivo y diferencial? Para el aislamiento de qué tipo de bacterias se lo emplea?.Anote la composición y diga que función cumple el rojo neutro.

4.- ¿En qué momento se esteriliza un medio de cultivo y porqué?

Una vez preparada los medios de cultivo se procede a esterilizar.Esterilización significa la eliminación de toda forma de vida de un medio o material, lo que se lleva a cabo generalmente por medios físicos, por ejemplo, filtración, o por muerte de los organismos por calor, productos químicos u otra vía. Esta definición excluye por lo tanto cualquier técnica que resulte solamente en un daño a los microorganismos o atenuación de la actividad de cualquier tipo.

Métodos de esterilizaciónLos métodos de esterilización pueden ser de 3 tipos: *Por destrucción total de microrganismos.*Por muerte o inactivación; y*Por eliminación con medios físicos.

Por destrucción total se entiende un proceso muy violento, que casi siempre implica calentamiento apreciable del material, como ocurre con la aplicación de una llama, que es lo que hacemos en el laboratorio cuando flameamos un ansa de platino o las bocas de tubo de ensayo o erlenmeyers. Otra manera de destruir contaminantes es con el uso de poderosos agentes oxidantes. Por supuesto ésta metodología, aunque es efectiva, está muy restringida en su empleo.

La muerte o inactivación significa la eliminación de microrganismos sin que exista necesariamente desintegración de las células. Se puede efectuar por calentamiento, seco o húmedo, por radiaciones o por agentes químicos. El calor húmedo, generalmente en forma de vapor bajo presión, es muy útil y de gran valor en la esterilización en el laboratorio, que se efectúa en autoclave, o en la industria cuando se esterilizan los medios de cultivo y los equipos de fermentación.

La eliminación física está restringida a la esterilización de gases líquidos, y es fundamentalmente llevada a cabo por filtración mediante filtros absolutos o filtros fibrosos.Los filtros absolutos son de materiales cerámicos, de vidrio o de metal sinterizado con poros tan pequeños que la penetración de los microrganismos no es posible.Los filtros fibrosos no son absolutos y el material filtrante puede ser lana de vidrio, amianto y esteres de celulosa, siendo las fibras de un diámetro variable de 0.5 a 15 micrones.

5.- Antes del agar–agar se utilizó otro componente para solidificar los medios de cultivo.¿ de qué componente se trata y qué inconvenientes presentaba su uso?

6.-¿ Por qué es importante conocer medidas de seguridad para el trabajo en un laboratorio?Indique 5 medidas que adoptaría para un accidente en el laboratorio.

BIBLIOGRAFIA1.- Departamento de Química Analítica http://www.uv.es/=gammmm/Subsitio%20Operaciones/3%20material%20de%20uso%20frecuente%20COMPLETO.htm, 2 Julio del 2012,14:30.2.-TORTORA,G.( 30/06/2007).Introducción a la Microbiología.Buenos Aire:Editorial: Médica Americana.3.-4.-