LOS MEDIOS DE CULTIVO •El crecimiento de los microorganismos en el laboratorio se realiza en recipientes que contienen los nutrientes que en concentraciones adecuadas y en condiciones físicas óptimas permiten su desarrollo en corto tiempo.•Un medio de cultivo es un sustrato o una solución de nutrientes que permite el desarrollo de microorganismos.•En 1860 Louis Pasteur daba a conocer el primer medio semi- sintético: sales de amonio, restos de levadura y azúcar. • Spallanzani utilizó caldos de carne para refutar la teoría de la generación espontánea.• Otros científicos que crearon medios de cultivo: F. Cohn, Lord Lister.Lord Lister.

su desarrollo rápido.

• Un medio de cultivo es un sustrato o una solución de nutrientes que permite el desarrollo de

microorganismos.• Entre los requerimientos más importantes para su

desarrollo están el carbono, el oxígeno, nitrógeno, dióxido de carbono e hidrógeno. Muchas bacterias sin embargo necesitan del aporte extra de factores de crecimiento específicos en forma de suero, sangre y extracto de levadura entre otros.

• Robert Koch creó el primer medio sólido utilizando la superficie de una rodaja de patata cocida. Posteriormente utilizó la gelatina con sales de plata.

• También publicó los detalles de otro medio a base de suero espesado (suero de Loeffler).

• En 1882 introdujo el agar como solidificante , extraído de algas pardas y rojas (Gelidium).

• Ventajas: punto de fusión y enfriamiento, escaso valor nutritivo y no es tóxico.

• En 1887 Widal introdujo el primer medio diferencial en la distinción de E.coli y Salmonella.

• Wurtz (1892) introdujo el uso de indicadores de pH en los medios de cultivo

• Mac Conkey (1900) introdujo el primer medio diferencial sólido.

• Endo (1903) publicó otro medio de cultivo para el aislamiento de bacilos tifoideos.

• Desde 1898, Beijerinck estuvo desarrollando la técnica de “cultivo de enriquecimiento” para el aislamiento de microorganismos del suelo.

• Hasta los años de 1930 cada laboratorio preparaba sus propios medios de cultivo, a medida que se incrementa la demanda fue necesario que una dependencia centralizada en Londres distribuyera los medios en botellas con tapones roscados.

• A partir de 1950 se inició el desarrollo comercial de medios deshidratados: Oxoid

• El desarrollo futuro de los medios está dirigido a la formulación de medios más selectivos basado en el mayor conocimiento de los requerimientos nutritivos microbianos.

CLASIFICACIÓN

Por su origen:• Medios definidos o sintéticos. Se obtienen de

sustancias químicas puras, orgánicas y/o inorgánicas.

• Medios complejos, indefinidos o naturales. Son preparados a partir de sustancias naturales

(animales o vegetales). Su composición química exacta se desconoce. (infusiones o extractos).

• Medios semisintéticos. Es una mezcla de los anteriores.

Por su consistencia• Medios líquidos. Medio de cultivo fluido, libre de

agar. (“caldo”).• Medios sólidos. Contienen 15-20 g °/oo de agar.• Medios semisólidos. Contienen 2-5g°/oo de agar. Por su composición• Medios comunes. Aquellos cuya única finalidad

es el crecimiento de los microorganismos poco exigentes.

• Medios enriquecidos. Son los medios comunes a los que se le adicionan suplementos: sangre, suero, glucosa, hemoglobina, etc.)

• Medios de enriquecimiento: Son medios líquidos que permiten la multiplicación de unas bacterias inhibiendo a otras. Ejm.: APA, caldo selenito.

• Medios selectivos: Medios sólidos que incorporan ciertas sustancias que inhiben el crecimiento de ciertas bacterias, pero permiten el crecimiento de otras.

• Medios de identificación o diferenciales. Permiten distinguir a simple vista dos o más tipos de bacterias en función a algún nutriente del medio.

• Medios especiales. Para el cultivo de bacterias muy particulares: Lowenstein-Jensen, anaerobios.

PREPARACION• Los ingredientes deberán ser medidos en cantidad

exacta y en un recipiente limpio.• Agregar el volumen de agua destilada necesaria.• Si contiene agar, calentar a ebullición hasta

desaparición de gránulos de agar.• Enfriar a 50°C y ajustar pH a valores indicados en la

etiqueta del frasco.• Esterilizar en autoclave 15 lbs, 121°C, 15 minutos.• El medio debe sacarse del autoclave

inmediatamente después de la esterilización para evitar la modificación en la composición del medio.

CONSERVACIÓN• Los medios deben almacenarse en atmósfera fría y

húmeda (refrigeración) para evitar su deterioro y deshidratación.

• Guardar los medios en placas o en tubos dentro de bolsas plásticas selladas. Así se pueden conservar entre 2 semanas y 4 meses.

SEGURIDAD EN LA FABRICACIÓN Y USO DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

• Seguir los lineamientos y normativas para garantizar el uso seguro de los medios dentro de los términos de salud y bioseguridad.

• La hoja de seguridad comprende datos de formulación, pH antes de uso, lote, almacenamiento, evaluación con cepas de control certificadas, hoja de control de calidad, peligros por contacto con ingredientes tóxicos, nocivos e irritantes de algunos medios de cultivo: azida de sodio, selenito, cloruro de litio, telurito, desoxicolato, acido nalidíxico, verde de malaquita

GRACIAS