OBJETIVOS

u  Diferenciar entre ciertos tipos de medios

u  Conocer actividades bioquímicas de las bacterias

u  Conocer los procesos bioquímicos de fermentación

u  Descibir los patrones de fermentación de carbohidratos de algunas bacterias y como algunos patrones resultan en producción de un ácido o de un ácido y un gas.

¿QUÉ CONTIENE UN MEDIO? Aquellos requerimientos nutricionales que los microorganismos necesitan

para crecer. Depende del ambiente en donde viven.

Algunos Requerimientos nutricionales: Carbono (C) Nitrógeno (N) Elementos no metálicos: §  azufre (S) y fósforo (P)

Elementos metálicos: §  Ca++, Na++, K+, Cu++, Mg++, Mn++, Fe+2,+3 y trazas de Zn++

Vitaminas H20

Factores físicos que afectan el crecimiento Temperatura pH §  ** ambas afectan las actividades enzimáticas Disponibilidad de oxígeno §  oxígeno atmosférico

§  Formación de ATP §  fermentación anaerobia

MEDIOS DE CULTIVO

Clasificación:

1. Físicamente Medio %Agar Ejemplo

Líquido 0 Caldo Nutritivo Semisólido 0.5 a 1 Medio Movilidad Sólido 1.5 a 2 Agar Nutritivo

2.  Químicamente Definido o Sintético: Composición quím. definida (Sales) Complejo o no Sintético: Composición quím. difícil de definir

(Peptona, Extracto de levadura,etc).

3. Uso §  Líquido (caldo):

§ Crecimiento gran # microorganismos § Estudios fermentación

§  Semisólido: § Crecimiento anaerobio (fermentación) § Motilidad

§  Sólido: § Crecimiento superficial § Cultivo puro (transferencia)

3. Uso §  Líquido (caldo):

§ Crecimiento gran # microorganismos § Estudios fermentación

§  Semisólido: § Crecimiento anaerobio (fermentación) § Motilidad

§  Sólido: § Crecimiento superficial § Cultivo puro (transferencia)

TIPOS DE MEDIOS

Selectivo: § Para aislar un grupo de bacteria específico.

Se incorporan sustancias químicas que ayudan al crecimiento de cierto organismo e inhiben el crecimiento de otros grupos de bacterias.

DIFERENCIAL

§ Distinguir entre grupos de organismos relacionados tanto morfológica como bioquímicamente.

Se le incorporan compuestos químicos que producen un cambio característico en el crecimiento de la bacteria y sus alrededores

ENRIQUECIDO

§ Posee características nutricionales específicas para estimular la producción de algún componente.

Staphylococcus spp.

Eosin Methylene Blue Agar

MacConkey Agar ( Selectivo y diferencial)

Bacilos entéricos Gram negativos

No fermentadores de lactosa (izq) fermentadores de lactosa (der)

Hemolisis Beta, Alfa y Gamma (observar propiedades hemolíticas)

Blood Agar

FERMENTACIÓN

Son reacciones bioquímicas que producen energía en la cual moléculas orgánicas sirven como aceptadores o donadores de electrones.

v  La habilidad de un organismo fermentar carbohidratos ayuda a la caracterización .

v  Un carbohidrato puede ser fermentado a numerosos productos dependiendo el organismo que este envuelto.

v  Los productos finales son característicos para ciertos grupos de bacterias v Alcoholes v Acidos v Gases v Otras moléculas orgánicas

DSMINUCION DE PH Si bacterias fermentadoras crecen en un medio de cultivo líquido conteniendo

glucosa , pueden producir ácidos orgánicos como intermedarios de la fermentación.

v  Estos ácidos son liberados en el medio y bajan el pH.

v  Indicadores de pH como rojo fenol o azul de bromocresol pueden ser incluidos en el medio (Cambio de medio de su color original a amarillo)

PRODUCCIÓN DE GAS

Gases prodcidos durante un proceso pueden ser detectados usando pequeños tubos invertidos llamados tubos Durham( Edward Durham,bacteriólogo) dentro del medio de cultivo.

v  Si gas es producido , el medio líquido dentro del tubo Durham será desplazado, entrando el gas en forma de una burbuja.

ENZIMA B- GALACTOSIDASA

Enzima para el metabolismo de la lactosa

Lactosa -----Galactosa y glucosa

E. COLI

•  Es un anaerobio facultativo

•  Bacilo Gran negativo

•  Produce ácido y gas catabolizando glucosa y otros carbohidratos.

•  β-galactosidasa positiva y puede usar lactosa como única fuente de carbono

PARTE EXPERIMENTAL

Seleccionar bacterias

Inocular en tubos con diferentes azúcares (glucosa, sucrosa y lactosa)

Observar bacteria a las 2 horas, 4 horas y 24 horas.

Anotar observaciones y comparar los resultados con la literatura.