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TECNICAS MOLECULARES DE ADN FORENSE

La Hemogenética Forense nace a principios de siglo, cuando KarlLandsteiner describe el sistema ABO de los hematíes y Von Durgen y Hirschfelddescubren su transmisión hereditaria !sta ciencia surgió como una rama de la"riminalística cuyo ob#eti$o era la identi%cación gen&tica tanto en casos de

in$estigación criminal como en estudios biológicos de la paternidad'nicialmente, las in$estigaciones se centraban en el estudio de antígenoseritrocitarios (sistema ABO, )h, *+, proteínas s&ricas, en-imas eritrocitarias ysistema HLA "on el estudio de dichos marcadores podía incluirse o e.cluirseuna persona como posible sospechoso por poseer una combinación gen&ticaigual o diferente a la del $estigio biológico hallado en el lugar de los hechos/ero fue a mediados de siglo cuando gracias al descubrimiento del AD+ y de suestructura y al posterior a$ance en las t&cnicas de an0lisis de dicha mol&cula laHemogen&tica 1orense e$olucionó considerablemente hasta el punto de 2uehoy en día puede hablarse de una nue$a subespecialidad dentro de la *edicina1orense3 la Genética Forense Dicha ciencia estudia b0sicamente unasregiones del AD+ 2ue presentan $ariabilidad entre los distintos indi$iduos, es

decir, estudia regiones polimór%cas del AD+ Así, anali-ando un determinadon4mero de regiones polimór%cas, la probabilidad de 2ue dos indi$iduos seangen&ticamente iguales es pr0cticamente nula (e.cepto en el caso de gemelosuni$itelinosAun2ue la "iencia poseía las herramientas necesarias para el estudio del AD+,su aplicación en la resolución de casos #udiciales no se produ#o hasta 5678,cuando el *inisterio del 'nterior Brit0nico solicitó la ayuda de Alec 9 9e:reys,profesor de ;en&tica de la <ni$ersidad de Leicester Los primeros casos de"riminalística fueron resueltos gracias a la t&cnica de los RFLPs(1ragmentos de)estricción de Longitud /olimór%ca 9e:reys descubrió la e.istencia de unasregiones minisat&lites hiper$ariables dispersas por el genoma humano 2ue alser tratadas con en-imas de restricción generaban fragmentos de longitud

$ariable !studios posteriores reali-ados el mismo 9e:reys demostraron 2ue lasdiferencias en el tama=o de estos fragmentos se debían a 2ue estas regionesconsistían en un determinado n4mero de repeticiones en t0ndem de unasecuencia central, el cual $ariaba de unos indi$iduos a otros!l primer locus de AD+ polimór%co fu& descubierto por >yman y >hite en567? usando una sonda de AD+ arbitraria De esta manera obser$aronfragmentos de m0s de 58 longitudes diferentes en una pe2ue=a muestra deindi$iduos /osteriormente se encontraron otros loci hiper$ariables como en lasecuencia del gen de la insulina humana, en el oncogen @ras, en el pseudogende la -etaglobina y en el gen de la mioglobina !stos loci hiper$ariablesconstaban de repeticiones en t0ndem de una secuencia de oligonucleótidos (55a C? pb, de manera 2ue las diferentes longitudes de los fragmentos originados

dependían del n4mero de dichas repeticiones y se lesdenominó VNTR (@Variable +umber of andem )epeat

 ras el descubrimiento de los primeros V+)s se $io 2ue &stos podían seraplicados a la medicina forense y sustituir a los marcadores cl0sicos!n un principio la manera de estudiar dichos marcadores se hi-o por medio dela t&cnica llamada hibridación con sondas o Southern blot  !sta t&cnicaconsta b0sicamente de las siguientes etapas3

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5 Digestión del AD+ con en-imas de restricción tras conseguir e.traer unAD+ de alta molecularidad

E Feparación de los fragmentos obtenidos por medio deuna electroforesis en gel de agarosa

G Desnaturalización de los fragmentos separados y cortados Transferencia de las cadenas simples a una membrana de nitrocelulosa

o nylon y %#ación de las mismas por medio de calor (7?I"8 Prehibridación con sondas de AD+ inespecí%co para blo2uear los

lugares de unión inespecí%cos 2ue pudiera haber en la membranaC Marcaje de la sonda con nucleótidos radioacti$os (GE / normalmenteJ Hibridación de la sonda marcada y desnaturali-ada con los fragmentos

de AD+ %#ados a la membrana, y la$ado de la membrana para eliminarel e.ceso de sonda o a2uellas 2ue hayan hibridado mal

7 Reelado en placa radiogr0%ca e inter!retación de los resultados

!l tipo de sondas utili-adas puede ser de dos tipos3Sondas Mono-locus (SLP)3 son especí%cas para una región de undeterminado cromosoma Fe unen a secuencias largas de nucleótidos y

presentan mayor $ariabilidad 2ue las sondas multilocus "omo resultado seobser$an una o dos bandas por indi$iduo, seg4n sea homocigoto oheterocigoto !l patrón de bandas obtenido con estas sondas se denominaper%l unilocus de AD+ o “DNA prol!n"#Sondas Mul$!-locus (MLP)3 hibridan con secuencias minisat&lites presentesen $arios loci de diferentes cromosomas Fon sondas de 5? a 58 nucleótidos2ue se repiten m4ltiples $eces y tras el re$elado se obser$an de 5? a E?bandas por persona !ste patrón de m4ltiples bandas se conoce como huellagen&tica multilocus o “DNA n"%rpr!n$#& 

Las sondas multi y monolocus presentan una serie de $enta#as eincon$enientes con respecto a una serie de par0metros como son3

In'orac!n apor$ada3 las sondas multilocus tienen una mayor capacidad

discriminati$a al aparecer m4ltiples bandas +o obstante, las monolocus sonm0s especí%cas ya 2ue el fragmento de AD+ con el 2ue hibridan es de mayortama=oCan$!dad * cal!dad d%l ADN3 cuando se usan sondas multilocus sere2uiere apro.imadamente un microgramo de AD+ sin degradar mientras2ue en el caso de las monolocus se necesita menos de 5?? ng y este AD+no necesariamente debe estar en perfecto estado, siempre y cuando elfragmento complementario a la sonda est& intactoEsp%c!c!dad %n$r% %sp%c!%s3 las sondas multilocus permiten su usosobre el AD+ humano y de cientos de animales superiores, mientras 2ue lasmonolocus son e.clusi$as de AD+ humano

A pesar de 2ue el an0lisis FL/ ha sido y es bastante 4til en estudios depaternidad no puede decirse lo mismo de su aplicación a la "riminalística ya2ue presenta una serie de incon$enientes como son3

La can$!dad d% ADN 2ue se necesita est0 entre E? y 5?? ng, cantidad difícilde conseguir en casos de criminalística en los 2ue los indicios biológicosencontrados son mínimos!n cuanto a la cal!dad d%l ADN, en la pr0ctica forense es muy difícilencontrar en estado no degradado toda la cantidad de AD+ 2ue se necesitapara un an0lisis con sondas monolocus

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!l tiempo re2uerido para este tipo de an0lisis es de dos o tres días!l hecho de 2ue se re2uieran cantidades ele$adas de AD+ hacen 2uenormalmente, con el primer an0lisis se consume la totalidad de la muestra,con lo 2ue se di%cultan contrapericias y una posterior re$isión del caso

 odas estas limitaciones fueron superadas gracias a la aplicación en ;en&tica1orense de una t&cnica, la R%acc!n %n Cad%na d% la Pol!%rasa (@/"),

2ue supuso una re$olución en muchos campos de la Biología y de la *edicina!l estudio de indicios biológicos por /") ha permitido la resolución de un grann4mero de casos en "riminalística 2ue hasta entonces eran desestimados porno poseer la su%ciente cantidad de muestra para su an0lisis por )1L/ "on eluso de la /") muestras tan mínimas como pueden ser un !elo con ra"z# unamin$scula mancha de sangre o semen e incluso cas!a  son su%cientes enmuchos casos para lle$ar a cabo un an0lisis de identi%cación gen&tica

+& An,l!s!s por la r%acc!n %n cad%na d% la pol!%rasa (PCR)+& .%n%ralLa reacción en cadena de la polimerasa (conocida como PCR por sus siglas eningl&s, Pol%merase &hain Reaction permite ampli%car m0s de un millón de

$eces un AD+ obtenido a partir de una región seleccionada del genoma,siempre y cuando se cono-ca una parte de su secuencia de nucleótidos !stat&cnica fue ideada en 5676 por Kary B *ullis 2ue obtu$o el premio +obel deuímica en 566G por dicho in$ento/ara la /") se utili-an dos oligonucleótidos sint&ticos de unos 58E?nucleótidos 2ue son complementarios a las -onas an2ueantes de la región2ue se 2uiere ampli%car !stos oligonucleótidos (habitualmente conocidos porsu nombre en ingl&s, MprimersM act4an como cebadores para la síntesis in $itrode AD+ la cual est0 habitualmente catali-ada por una en-ima llamada Taq

 polimerasa Dicha en-ima se aísla de una bacteria termó%la,denominada Thermus Aquáticus, 2ue es capa- de crecer a temperaturasele$adas (J6 78 I " A esta temperatura dicha en-ima es capa- de mantener

una media de e.tensión de m0s de C? nucleótidos por segundo en regionesricas en uniones ;" La temperatura optima a la 2ue act4a la Taq

 polimerasa  permite el uso de ele$adas temperaturas para la unión de losprimers y para la e.tensión, de esta manera se aumenta el ni$el de e.igenciade la reacción y se reduce la e.tensión de los primers unidos inespecí%camenteal AD+La reacción se lle$a a cabo en una serie de ciclos cada uno de los cualesincluye tres fases o pasos3

5 D'S()T*R)+,-)&,.(3 /ara 2ue comience la reacción es necesario2ue el AD+ molde se encuentre en forma de cadena sencilla !sto seconsigue aplicando temperaturas de 6? a 68I" 2ue producen la roturade los puentes de hidrógeno intercatenarios y por lo tanto la separaciónde ambas cadenas /ara conseguir la completa separación de las hebrasde toda la muestra esta temperatura debe mantenerse unos minutos Fiel AD+ solo se desnaturali-a parcialmente &ste tender0 a renaturali-arser0pidamente, e$itando así una e%ciente hibridación de los primers y unaposterior e.tensión

E H,/R,D)&,.(3 !sta fase se denomina tambi&n fase de @annealing ode empare#amiento <na $e- 2ue el AD+ est0 desnaturali-ado sedisminuye la temperatura hasta un rango comprendido entre los ? y los

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C?I" para 2ue se pueda producir la unión de los primers a las secuenciasan2ueantes del fragmento 2ue se $a a ampli%car La temperatura defusión o annealing (m, @melting temperature depende de $ariosfactores y es relati$amente especí%ca para cada primer La longitud delos primers y la secuencia son críticas en la designación de lospar0metros de una ampli%cación, una fórmula simple para calcular la m

es la siguiente3T / 0(.1C) 1 + (A1T)&+o obstante, cada primer e.ige una serie de estudios e.perimentalespara determinar su temperatura de annealing especí%ca ya 2ue si latemperatura es muy ba#a la unión se har0 de forma inespecí%ca y si esmuy alta no se producir0 una unión completa

G '0T'(S,.(2  Durante este paso la Taq polimerasa incorporanucleótidos en el e.tremo GN del primer utili-ando como molde la cadenade AD+ pre$iamente desnaturali-ada La temperatura a la 2ue se lle$a acabo este paso suele ser de JEI" ya 2ue es la temperatura a la 2uela Taq polimerasa alcan-a su m0.ima acti$idad +ormalmente unae.tensión de E? segundos es su%ciente para fragmentos menores

de 8?? pb, y ? segundos para fragmentos por encima de 5EKb<n factor importante en el transcurso de las diferentes fases es el $!%po d%rapa !ste se de%ne como el tiempo in$ertido en pasar de una temperatura aotra y depende del dise=o y de las características del aparato donde se reali-aautom0ticamente este proceso, el termociclador !n las nue$as generacionesde termocicladores este factor se ha ido optimi-ando para hacerlo mínimo+&+ Copon%n$%s d% la PCR12123 /*FF'R D' )MP+,F,&)&,.(Los bu:er de /") 2ue se utili-an normalmente contienen K"l, ris y*g"lE !l M"Cl+ es el componente 2ue m0s inuye en la especi%cidad yrendimiento de la reacción ya 2ue los iones *gEson necesarios para laacti$idad de la Taq polimerasa, es decir, act4an como cofactores de la

polimerasaLa concentración óptima de *g"lE  est0 en torno a 58 m* si se empleanconcentraciones de E?? m* de cada uno de los d+/s +o obstante, a $eces esnecesario probar con diferentes cantidades de *g ya 2ue un e.ceso del mismoorigina una acumulación de productos inespecí%cos y una cantidad insu%cientehace 2ue disminuya el rendimiento de la ampli%cación12121 PR,M'RSA la hora de elegir unos primers para ampli%car un determinado fragmento deAD+ hay una serie de reglas a seguir3

La longitud de cada uno de los !rimers debe estar comprendida entre 57y E bases ya 2ue se ha comprobado 2ue primers de mayor longitud (G?G8bases no aumentan el rendimiento y los primers cortos carecen de su%cienteespeci%cidadAmbos primers deben tener una Tm similar (como mucho la diferencia entreambas temperatura debe ser de 8I"La relación bases !$ricas4 bases !irimid"nicas debe ser 535 (o comomucho ?C?P La secuencia de los !rimers debe comen-ar y terminar con 5E basesp4ricas/ara e$itar la formación de d"meros de !rimers es necesario comprobar

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2ue los primers no contengan secuencias complementarias entre síLos d"meros de !rimers consisten en fragmentos de doble cadena cuyalongitud es muy pró.ima a la de la suma de los primers y se producen cuandoun primer es e.tendido a continuación del otro !l mecanismo e.acto por el2ue se forman estos dímeros no est0 completamente determinado Laobser$ación de 2ue primers con los e.tremos GN complementarios fa$orecen su

formación sugiere 2ue el paso inicial se debe a interacciones transitorias 2ueapro.iman los e.tremos complementarios Algunas polimerasas, incluida la a2,han mostrado una d&bil acti$idad polimeri-adora no dirigida por un AD+patrón, la cual puede unir nucleótidos adicionales al doble e.tremo apareadoFi esta acti$idad puede producirse sobre una hebra sencilla deoligonucleótidos, resultaría una buena oportunidad para 2ue la e.tensiónformara un corto solapamiento en el e.tremo GN con el otro primer, su%cientepara promo$er la formación del dímero12125 D'S60,(*&+'.T,D6S TR,F6SF)T6SLas concentraciones de d+/s 2ue suelen usarse est0n en torno a E?? Q* paracada uno de ellos !n un $olumen de reacción de E8 Ql con esta concentraciónde d+/s se sinteti-arían entre CC8 Qg de AD+ La concentración de d+/s y

de *g"lE $a relacionadas ya 2ue el *g se une a los d+/s con lo 2ueconcentraciones ele$adas de d+/s inhibirían la reacción al no tener la Taq

 polimerasa su%ciente *g como para incorporar d+/s /ara una concentraciónde E?? Q* de cada d+/ se suele a=adir *g"lE a una concentración de 58 m*12127 T)89P6+,M'R)S)Las cantidades óptimas de Taq polimerasa necesarias para la síntesis de AD+est0n alrededor de E unidades en E8 Ql de $olumen %nal de reacción Laacti$idad de este en-ima se $e inuenciada por la concentración de d+/s, de*gE y de algunos iones mono$alentes de manera 2ue concentracionesele$adas de los mismos inhiben dicha acti$idad/or otro lado, pe2ue=as concentraciones de K"l estimulan la acti$idad sint&ticade la a2 en un 8?C?P con un m0.imo aparente cuando su concentración es

de 8? m* !.isten algunos datos relacionados con la inuencia de ciertosreacti$os 2ue se emplean antes de la ampli%cación y 2ue alteran la acti$idadde la a2 /or e#emplo concentraciones 5* de urea estimulan la acti$idad, elFDF a ba#as concentraciones 2ue la inhibe al igual 2ue concentracionesmayores del 5?P de etanol1212: )D( M6+D' 6 ;T'MP+)T'3!s el AD+ del cual 2ueremos copiar un determinado fragmento, es, por tanto,el AD+ 2ue la a2 polimerasa utili-a como molde para la síntesis de nue$ascadenas polinucleotídicas La cantidad de AD+ necesaria para la /") dependede $arios factores3Del marcador  2ue se $a a ampli%car3 hay marcadores cuyos primers son m0sespecí%cos o bien cuyas condiciones de ampli%cación est0n me#or optimi-adas2ue las de otros /or esta ra-ón puede darse el caso de 2ue cierta cantidad deAD+ (sobre todo cuando #ugamos con cantidades mínimas ampli%2ue paraunos marcadores pero no para otros /or ello, cuando en un laboratorio se $a autili-ar un nue$o marcador es necesario hacer un estudio de $alidación en &l2ue se incluye un estudio de sensibilidad De dicho estudio de sensibilidadpuede sacarse como conclusión cu0l es la mínima cantidad de AD+ 2ueampli%ca en condiciones est0ndar De manera general, para casi todos los F)

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utili-ados en ;en&tica 1orense la cantidad óptima de AD+ 2ue asegura unrendimiento adecuado est0 en torno a los 8 ng&alidad del )D(3 "uando se traba#a con AD+ cuya calidad es óptima no suelehaber problemas en la ampli%cación y cantidades del mismo por encima eincluso por deba#o de los 8 ng rinden buenos resultados !l problema aparececuando la calidad del AD+ obtenido no es la idónea, bien por2ue est&

degradado o bien por2ue dicho AD+ $aya ligado a una serie de contaminantes2ue pueden inhibir la acti$idad de la polimerasa Fi el AD+ est0 degradado porla acción de en-imas de restricción el 2ue obtengamos o no resultado en laampli%cación $a a depender de 2ue el fragmento a ampli%car haya sido da=adoo no !n el caso en el 2ue tengamos AD+ sin degradar pero unido a una seriede contaminantes habría 2ue intentar diluir al m0.imo la muestra paradisminuir dichos contaminantes, pero siempre dentro de un rango de AD+ 2ueno est& por deba#o del límite de sensibilidad de la /") !l problema de lascantidades mínimas de AD+ y la presencia de contaminantes o inhibidores dela a2 es un hecho habitual en "riminalística y re2uiere un estudiopormenori-ado de la muestra antes de la ampli%caciónAD4UVANTES DE LA PCR

Fon elementos 2ue me#oran el rendimiento y la especi%cidad de la /")Aun2ue algunos autores han recomendado el uso del DMSO  y del "l!c%rol, eladyu$ante m0s e.tendido y utili-ado es el5SA A concentraciones por encimade ?7 QgRQl el BFA incrementa la e%ciencia de la /") ya act4a como unaproteína captadora de iones 2ue pueden ser inhibidores de la a2 polimerasaLa /") ofrece una serie de $enta#as, frente al uso de las t&cnicas de an0lisisgen&tico utili-adas con anterioridad, como son3

Fu capacidad para obtener resultados en casos en los 2ue la cantidad deAD+ es 6n!a o en casos en los 2ue el AD+ est& parcialmente d%"radado;enera en un espacio corto de tiempo un %l%7ado n8%ro d% cop!as de lasecuencia de AD+ 2ue es ob#eto de estudio, lo cual permite utili-ar t&cnicasde $isuali-ación m0s sencillas y r0pidas 2ue el uso de sondas marcadas

radioacti$amente/ermite la determinación y agrupación al&lica en clas%s d!scr%$as, lo 2uefacilita la elaboración de bases de datos al ser la estandari-ación inmediata yposibilitar la aplicación de m&todos bioestadísticos y programas elaborados

!l uso de marcadores microsat&lites de pe2ue=o peso molecular aumenta lasprobabilidades de obtener resultados positi$os de ampli%cación cuando el AD+se encuentra degradado ya 2ue puede ser 2ue dichos fragmentos no hayansido digeridos !sta $enta#a es de gran importancia en "riminalística ya 2uenormalmente los indicios biológicos encontrados han estado sometidos adi$ersos factores (calor y humedad 2ue fa$orecen el crecimiento bacterianoFin embargo, una de las grandes $enta#as de la /") 2ue es su ele$adasensibilidad puede, en ocasiones, con$ertirse en un gran problema ya 2ue sepodría coampli%car un AD+ e.tra=o o a#eno al 2ue nos interesa +o obstante,en los laboratorios de ;en&tica 1orense las medidas de precaución 2ue setoman para e$itar problemas de contaminación por manipulación sone.tremas<na $e- ampli%cado el AD+, los fragmentos resultantes son separados enfunción de su tama=o por medio de un proceso de %l%c$ro'or%s!sActualmente se utili-an dos tipos de electroforesis en los laboratorios de;en&tica 1orense3

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El%c$ro'or%s!s %n "%l%s 7%r$!cal%s d% pol!acr!la!daEl%c$ro'or%s!s cap!lar

La %l%c$ro'or%s!s cap!lar es una t&cnica relati$amente no$edosa en el campode la ;en&tica 1orense pero 2ue est0 poco a poco sustituyendo a los sistemasde electroforesis $ertical !n este caso el proceso electrofor&tico es lle$ado acabo en un capilar de silica de unas 8? mm de di0metro, lo cual hace 2ue la

cantidad de calor generado sea menor y 2ue puedan aplicarse $olta#esmayores /ara 2ue puedan ser anali-ados por electroforesis capilar los primerso los dideo.inucleótidos (en el caso de la secuenciación deben ser marcadosuorescentemente con unas mol&culas denominadas uorocromos 2ue emitenuorescencia a una determinada longitud de onda cuando son e.citados porl0ser !l e2uipo en el 2ue se reali-a el proceso lle$a acoplado un ordenadorencargado de traducir los datos de emisiones uorescentes en secuencias ofragmentos con sus correspondientes alelos asignados La electroforesis capilarpresenta una serie de $enta#as frente a los sistemas de electroforesis $erticalcomo son3

Rap!d%93 ya 2ue permite el an0lisis simult0neo de $arios loci aun2ue &stosposean alelos con tama=os solapantes

S%ns!:!l!dad3 hace posible detectar cantidades muy pe2ue=as de AD+ampli%cado

;$$p2<<===&u"r&%s<>%!an%9<5!o$%cnolo"!a<'or%ns%$%c&;$

?ISTORIA DE ADN FORENSE

Desde 2ue Alec 9e:reys dio a conocer la huella gen&tica, el AD+ se hacon$ertido en una herramienta imprescindible para los in$estigadores delcrimen Fu poder para la identi%cación se fundamenta en la seguridad de 2ueel AD+ de cada perso na p rocede indudablemente de sus progenitores, siendo4nico e irrepetible Fin embargo la naturale-a puede generar alteraciones 2 ue

parecen contradecir esos preceptos, conduciendo a error a los e.pertosforenses !l 2uimerismo es un buen e#emplo Asimismo l as transfusiones,trasplantes de órganos así como las t&cnicas aplicadas en reproducciónhumana asistida, son capaces de generar unos resultados gen&ticos difíciles deinterpretar por un forense !n el presente traba#o se dedica a re$isar cómoestos procedimi entos se han con$ertido in$oluntariamente en una posiblefuente de error para in$estigadores del crimen

"ada $e- m0s, los a$ances en identi%cación gen&tica permiten la aplicación deestas t&cnicas a 0reas muy diferentes Los progresos cientí%cos y tecnológicosen las herramientas utili-adas en gen&tica forense han permitido nue$asaplicaciones de este campo en otras disciplinas !n este traba#o se pretendenabordar algunas de esas nue$as alternati$as La primera de ellas es la creaciónde bases de datos gen&ticas ci$iles 2ue ha permitido el desarrollo de dosprogramas de identi%cación de personas3 programa 1S+'T de identi%cación decad0$eres y restos humanos desaparecidos y la iniciati$a D+A/)OK'DF 2uelucha contra el tr0%co de seres humanos y pretende reunir a las $íctimas consus familias !n la 4ltima d&cada, cada $e- con m0s frecuencia aparece elan0lisis del AD+ en proyectos de historia, paleontología, !s en estos casosdonde nos encontramos con muestras antiguas /or tanto, una segunda

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aplicación es el traba#o con aD+A, del 2ue mostramos $arios e#emplos ;raciasa estas nue$as t&cnicas se han podido identi%car los restos de $ariospersona#es históricos, el Uar +icol0s '' de )usia, "ristóbal "olón y susfamiliares, Blanca de +a$arra y el /ríncipe de Viana y el general *iranda así como la recuperación de especies en peligro de e.tinción y la caracteri-aciónde elementos históricos /or 4ltimo, tienen gran importancia sus aplicacionesen biomedicina, ya 2ue cada día es m0s frecuente la colaboración entre gruposforenses y otras especialidades m&dicas Dos e#emplos de ello serían, lacaracteri-ación de muestras pro$enientes de tumores y en la asociación deenfermedades a haplotipos gen&ticos

LOF /)'*!)OF /AFOF D! LA H<!LLA ;!+S'"A

!ste es el titular 2ue eligió un conocido periódico ingl&s para encabe-ar lanoticia sobre la resolución del caso Farbah $ersus Home OWce, a fa$or deldemandante 1ue el diecisiete de mayo de 5678 !sta historia con %nal feli-comen-ó dos a=os antes cuando AndreX, el hi#o de trece a=os de "hristianaFarbah regresaba a su casa en Londres, tras pasar una larga temporada en la'ndia #unto a su padre Fin embargo no pudo conseguir su ob#eti$o por2ue antesu sorpresa, fue detenido en el aeropuerto de HeathroX Fe le acusaba de ungra$e delito3 no era 2uien decía ser Feg4n se le hi-o saber había fundadassospechas de 2ue el $erdadero AndreX había cedido su pasaporte a unfamiliar, para facilitar su entrada a 'nglaterra de forma ilegal De nada sir$ieronlas declaraciones de la madre y hermanos del detenido ampoco lascomparaciones hechas mediante fotografía por2ue seg4n se argumentó, si elsuplantador era, como se suponía, hi#o de una hermana de "hristiana, cabíaesperar un cierto parecido familiar

Así estaban las cosas hasta 2ue los traba#adores del Hammersmith LaX "entre,una institución dedicada a proporcionar ayuda legal a los menos fa$orecidos,encargada de la defensa, fueron informados de un nue$o e interesantedescubrimiento 2ue les llenó de esperan-a3 la huella gen&tica5,E

De forma 2ue se pusieron en contacto con su descubridor, un in$estigador dela <ni$ersidad de Leicester, Alec 9e:reys, para pedir su colaboración Aceptadala solicitud de au.ilio, el profesor utili-ó muestras de sangre de "hristinaFarbah y tres de sus hi#os Y indiscutidos Da$id, 9oyce y Diana, para obtener las

respecti$as huellas gen&ticas Feguidamente las comparó con la 2uecorrespondía a 2uien a%rmaba ser AndreX, para llegar a la conclusión de 2ueno había intento de enga=oG Fu informe fue tan contundente 2ue el mismoHome OWce despu&s de reconocer su error, incluyó esta nue$a pruebagen&tica como una nue$a herramienta para el control de inmigración'ras el&.ito de esta primera inter$ención de la huella gen&tica en el 0mbito forense,no es de e.tra=ar 2ue pronto se $iera implicada en la resolución de otrosproblemas de %liación ampoco 2ue pronto se reclamara su au.ilio en la

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in$estigación de casos criminales "uriosamente el primero de ellos en el 2uese le hi-o participar tu$o una doble contribución3 identi%car al culpable ye.onerar a 2uien se había sido acusado de serlo''

Así fue como la ;en&tica pasó a ser Ytreinta a=os despu&s de 2ue fuera

descrita la estructura del AD+ una herramienta imprescindible enin$estigación criminalFin embargo pronto se puso de mani%esto 2ue la huella gen&tica podía sercuestionada ante los tribunales !l moti$o principal se debía a su comple#idad!n efecto, el procedimiento descrito por el profesor 9e:reys e.igía traba#ar conun AD+ bien conser$ado Ylo 2ue no es habitual en los casos forenses yadem0s los resultados eran difíciles de interpretar !sto 4ltimo se debíaprincipalmente a 2ue en la necesaria electroforesis %nal, la superposición debandas era ine$itable, pro$ocando 2ue en la mayoría de los casos no fueraposible a%rmar si había coincidencia entre las muestras 2ue se comparaban ono De forma 2ue se hi-o necesario me#orar la t&cnica de an0lisis y esto seconsiguió cuando el doctor Kary BanZs *ullis, dio a conocer a la comunidadcientí%ca la reacción en cadena de la polimerasa (/") en adelante8 !staotocopiadora de AD+ hi-o posible traba#ar con los pe2ue=os fragmentos YFhort

 andem )epeats o F) 2ue son los encargados de conformar la huellagen&tica moderna !l nue$o sistema presenta indudables $enta#as frente alpropuesto por el profesor 9e:reys La principal es 2ue utili-a para laidenti%cación F)s, lo 2ue supone 2ue podr0 funcionar en un AD+parcialmente degradado si hay suerte ambi&n 2ue permite el an0lisis decantidades de muestra mínimas por2ue es e.tremadamente sensible Finembargo este incuestionable pro, es a su $e- un contra puesto 2ue lo con$ierte

en especialmente $ulnerable a la contaminación +o obstante y manteniendolas debidas precauciones en todas las etapas de la in$estigación, incluyendoentre ellas la interpretación de los resultados, su potencial no puede ponerseen duda "on el tiempo, a los marcadores tradicionales se ha unido el estudiode F) e.clusi$os del cromosoma [ Fon los 2ue facilitan el estudio de la líneapaterna, el an0lisis en casos de agresión se.ual por uno o m0s indi$iduos, enlos 2ue cabe esperar una contribución femenina predominante en la muestra ytambi&n cuando se debe traba#ar con restos degradados, en los 2ue falla laprimera opción Asimismo el AD+ mitocondrial ha reclamado su propio espacioy se dedica al an0lisis de la línea materna /ero adem0s gracias a su pe2ue=o

tama=o y las numerosas copias 2ue se repiten en cada c&lula, es el recurso al2ue se opta cuando por el estado de las muestras no cabe otra posibilidad de&.ito*0s reciente es el estudio de polimor%smos de un solo nucleótido (en adelanteF+/s con los 2ue se consigue resultados en muestras degradadas y son losprotagonistas de los m0s recientes estudios destinados a la determinación decaracterísticas físicas, como es el color de los o#os, el pelo o la pielC,J odos

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estos a$ances 2ue se han puesto al ser$icio de la 9usticia se sustentan en dosprincipios indiscutibles3!l AD+ de cada persona procede de sus progenitores !l AD+ de cada personaes 4nico e irrepetible !s por esto 2ue cuando se obtienen los marcadores deAD+ a partir de por e#emplo, unos restos óseos, se podr0n comparar con los

procedentes de personas desaparecidas buscando la coincidencia 2ueconseguiría su identi%cación O en el caso de 2ue no se disponga de estosdatos, siempre se podr0 recurrir a los progenitores en base a la primeram0.ima anteriormente citada y problema resuelto Fin embargolamentablemente la realidad no siempre se a#usta a la teoría /or2ue el mismoAD+ 2ue con tanta e%cacia traba#a mano a mano con los e.pertos forenses,puede con$ertirse como se $er0 seguidamente en la causa de su error/OF'BL!F "A<FAF D! !))O) !+ LA '+!)/)!A"'\+ D!L A+]L'F'F 1O)!+F!!n algunas ocasiones esto sucede por2ue la naturale-a tiende una trampadifícil de detectar )ecu&rdese como e#emplo los casos de 2uimerismo, en los2ue se podr0 encontrar en un mismo indi$iduo, dos AD+ nucleares diferentes!s con$eniente recordar en este momento 2ue el 2uimerismo puede tener unorigen natural Yy en consecuencia no controlado por no ser conocido oarti%cial La literatura especiali-ada reconoce dos posibles orígenes para laprimera $ariedad /or una parte se describe el denominado 2uimerismotransplacentario (o micro2uimerismo 2ue se produce como consecuencia deltr0%co de c&lulas entre la madre y el feto !ste intercambio celular fuedemostrado en su momento tras anali-ar el AD+ en la muestra de sangre deuna mu#er embara-ada, comprob0ndose la presencia de F) correspondientesal cromosoma [7!stos adem0s, tal como se puso de mani%esto en posteriores in$estigaciones,

permanecían tras el embara-o6, de forma 2ue podrían ser locali-ados muchotiempo despu&s5? De hecho se ha estado ensayando la me#or forma de e$itaresta interferencia cuando se traba#a con muestras forenses, comprob0ndose2ue se produce con mayor frecuencia al aumentar en n4mero de ciclos de /")y tambi&n cuando la cantidad de AD+ es alta55 !l micro2uimerismo seproduce tambi&n en gemelos no id&nticos, como consecuencia del intercambiode sangre entre ellos durante la gestación 'ncluso puede deberse a un gemelofantasma /or este efecto se e.plica la presencia de marcadores masculinos, enmu#eres 2ue no han tenido hi#os5E,5G,5,58 La otra $ariante es conocidacomo 2uimerismo tetragam&tico y se produce cuando dos ó$ulos fecundados

se unen para formar un 4nico indi$iduo !n esta situación el nue$o organismoestar0 constituido por dos dotaciones gen&ticas diferentes, como si se tratarade dos personas en una Lo 2ue e$identemente puede lle$ar a confusión alencargado de interpretar el an0lisis gen&tico, tal como se muestra en algunoscasos curiosos 2ue describe la bibliografía Fe trata de historias en las 2ue seha cuestionado la paternidad o maternidad en base a discrepancias gen&ticas2ue al %nal, han sido e.plicadas satisfactoriamente5C,5J

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/or 4ltimo y para cerrar este grupo de 2uimeras naturales, se debe mencionara2uellas 2ue tienen origen en diferentes $ariedades de c0ncer57,56,E?,E5,capaces de proporcionar resultados 2ue en principio parecen ine.plicables paralos in$estigadores forenses Fir$a como muestra el descrito en el artículo 2ueconsta en la referenciaEE rata sobre el an0lisis gen&tico reali-ado sobre las

muestras procedentes del cad0$er de un hombre, hallado en su casa )esultó2ue durante el e.amen m&dico forense se detectó una emasculación parcialcomo 4nica lesión ras la necesaria in$estigación Yy apoy0ndose en laausencia de m0s da=os se llegó a la conclusión de 2ue el responsable de esaemasculación debió ser el perro del %nado !n consecuencia se sometió alanimal a un tratamiento con em&ticos para conseguir recuperar la pie-a encuestión Despu&s se reali-ó el necesario an0lisis de AD+ destinado adeterminar si Ytal como se esperaba procedía del cad0$er y los resultadosante la sorpresa de los in$estigadores, fueron e.cluyentes Fe procedióentonces al estudio de la historia clínica del fallecido, comprob0ndose 2ue noincluía tratamiento o inter$ención alguna 2ue pudiera e.plicar la discrepanciaFin embargo se pudo comprobar 2ue padecía un linfoma !n consecuencia,ante la imposibilidad de obtener muestras de los padres del occiso paradeterminar un posible origen natural de la 2uimera, y atendiendo a los datos2ue se conocen sobre este efecto en enfermos de c0ncer, se optó por aceptar2ue efecti$amente esta patología fue la responsable de la confusión /or suparte el 2uimerismo arti%cial tiene un origen iatrog&nico Fe debe por e#emplo,a transfusiones sanguíneasEG ambi&n a trasplantes de m&dula óseaE, en los2ue la medida del grado de 2uimerismo es un mecanismo de control 2uee$al4a la e%cacia del trasplante Fin embargo en ocasiones puede ser moti$ode confusión cuando se traba#a en casos criminales !n el artículo de la

referenciaE8 se describe un caso en el 2ue se aborda el an0lisis de AD+ de lasmuestras Yhisopo $aginal, ropa interior e hisopo bucal de referenciaprocedentes de una mu#er 2ue seg4n se sospechaba, había sido $ioladamientras se encontraba inconsciente !sta hipótesis pareció con%rmarse trasobtener dos per%les de AD+ en las dos primeras muestras y uno 4nico en la dereferencia Fin embargo al reali-ar an0lisis complementarios sobre muestras desangre y pelo de la supuesta $íctima, se encontraron per%les diferentes alprocedente de su sali$a La e.plicación a esta aparente contradicción seencontró en un trasplante de m&dula ósea, reali-ado para tratar una leucemiay en el 2ue el donante fue un ni=o De hecho la bibliografía muestra datos

su%cientes para aceptar 2ue tras un tratamiento de este tipo, es habitual hallarel AD+ a#eno incluso en las muestras bucalesEC Otros órganos ob#eto detrasplante han sido a su $e- causa de esta alteración, como se ha demostradoal detectarse AD+ del donante en muestras de sangre de los receptores dehígado y ri=ónEJ,E7 !ste halla-go sería en principio un buen indicador del&.ito de la inter$ención, aun2ue por otra parte es a su $e- una fuente deposibles problemas por2ue es susceptible de pro$ocar una respuesta inmunedel paciente +o cabe duda de 2ue tambi&n puede serlo para los forenses

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Asimismo los conocimientos ad2uiridos sobre c&lulas madre podrían introducirotras posibilidades de 2uimerismo arti%cial La hipot&tica e.istencia de c&lulasmadre germinales en la m&dula ósea, con la capacidad de circular y coloni-ardiferentes órganos, sería la causaE6 Fin embargo de momento el asunto sehalla en periodo de in$estigación ambi&n el a$ance de las t&cnicas de

reproducción asistida $a a generar in$oluntariamente complicaciones a=adidasen la in$estigación criminal !n principio por2ue tal como muestra labibliografía, al potenciar los embara-os m4ltiples fa$orecen el 2uimerismoG?,G5 GE,GG,GFin embargo no es este el 4nico camino para inducir a error alos e.pertos en ;en&tica 1orense Fe debe recordar 2ue en este 0mbito setraba#a habitualmente con el %n de identi%car indi$iduos o restos de ellos

 ambi&n con la intención de asignar una muestra biológica a su donante"entr&monos en el primero de los supuestos y ante el problema, por e#emplo,de asignar nombre y apellidos a unos restos humanos !sto se podr0 lograrcote#ando el per%l de AD+ procedente de los restos problema, con otros 2ue sehayan almacenado en bases de datos !stas 4ltimas pueden generarse a partirde los per%les correspondientes a familiares de personas desaparecidas oalternati$amente, guardarían a2uellos 2ue se obtu$ieron de personas 2ue enalg4n momento han tenido algo 2ue $er con la 9usticia!n ocasiones el estudiocon#unto del AD+ problema, #unto con el de los familiares, dar0 el resultadobuscado /ero si no es así e.isten otras posibilidades como son el an0lisis deF) del cromosoma [ o del AD+ mitocondrial De hecho la mayoría de bases dedatos dedicadas a la identi%cación de personas desaparecidas, traba#an coneste 4ltimo'''!s ob$io 2ue la identi%cación se complicar0 si est0n de por mediolas mencionadas t&cnicas destinadas a es2ui$ar los obst0culos 2ue impone lanaturale-a Fer0 posible 2ue el indi$iduo a identi%car sea portador del AD+

materno pero no el paterno, o al re$&s Otros puede 2ue no mantenganninguno de los dos y en este caso se puede complicar el asunto si los donantesfueran familiares de los padres +o es el ob#eti$o de este te.to re$isar losdiferentes procedimientos 2ue se aplican en la reproducción asistidaG8,GC, sinohacer hincapi& en su posible interferencia en la in$estigación forense !s poresto 2ue en lo 2ue sigue se $a a hacer referencia a nue$os ensayos 2ue comose $er0 enseguida, serían capaces de generar un aut&ntico pu--le gen&ticodifícil de $alorar por los e.pertos  "omo se $er0 enseguida su origen seencuentra en la necesidad de es2ui$ar enfermedades 2ue la madre trasmite alfeto, por2ue su herencia est0 asociada al AD+ mitocondrial !n principio la

forma m0s lógica de e$itar la patología en la descendencia sería seleccionarembriones masculinos y desechar los femeninos Fe trata entonces deproceder a una selección del se.o del embrión con %nes terap&uticos "on$ienerecordar 2ue la posibilidad de seleccionar el se.o de la descendencia es unasunto 2ue se $iene mane#ando desde la antig^edad De hecho tienen suorigen en la antigua ;recia, entre el 8?? al E7 a", y no con el %n de e$itaruna enfermedad, sino m0s bien #usti%cados por la mayor rele$ancia social ycultural ad#udicada en esa &poca a los $arones !l procedimiento utili-ado tenía

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problemas &ticos 2ue estos procedimientos suscitan, #unto con los riesgos a4nno e$aluados para la salud futura del indi$iduo generado con suau.ilio?,5,E,G, no hay duda 2ue de ser lle$adas a la pr0ctica, estast&cnicas $an a complicar el estudio gen&tico con %nes forenses, a=adiendo alas posibles causas conocidas de error otras muchas de difícil control !l tiempo

dir0 si se pueden aceptar como una opción $0lida *ientras tanto y por siacaso, 2ui-0 sea necesario m0s 2ue nunca tener presente el acertado conse#o2ue ofreció el *aestro Holmes cuando di#o M<na $e- 2ue se descarta loimposible, lo 2ue 2ueda es la $erdad por improbable 2ue pare-cahttp3RRXXXu$esRgicfRA5_"astello_;'"1_5Epdf ADN 4 SU APLICACI@N FORENSE

!l an0lisis de la $ariación del AD+ ha supuesto una enorme re$olución en*edicina forenseDesde 2ue en 5678 Alec 9e:reys introdu#o la huella gen&tica ha habido unae$olución continua en el tipo de marcadores y en las tecnologías Los

microsat&lites en cromosomas autonómicos son actualmente los marcadoresm0s utili-ados, pero los polimor%smos nucleotídicos simples (F+/s $anemergiendo como marcadores de futuro y son ya 4tiles para muchasaplicaciones mitocondrial 2ue son herramientas fundamentales para losin$estigadores forenses& .%n$!ca 'or%ns%2 De los grupos sanguíneos a los polimor%smos de AD+nuclearLa ;en&tica forense es una especialidad de la ;en&tica 2ue incluye uncon#unto deconocimientos de ;en&tica necesarios para resol$er ciertos problemas

 #urídicos Los tipos de pericia m0s solicitados al laboratorio de ;en&tica forensepor los tribunales son casos de in$estigación biológica de la paternidad,

pericias de criminalística biológica (estudio de $estigios biológicos de inter&scriminal como manchas de sangre, esperma, pelos, etc y, %nalmenteproblemas de identi%cación!n !uropa hay unos G?? laboratorios de ;en&tica forense y en !spa=a m0s de?, aun2ue sólo alrededor de una docena hacen pruebas de in$estigacióncriminal !n los /aíses !scandina$os, Holanda o 'rlanda, la pericia se reali-a engrandes laboratorios estatales (habitualmente un laboratorio paracriminalística y otro para pruebas de paternidad y en otros países como 'talia,/ortugal o Alemania est0 distribuída en laboratorios m0s pe2ue=os !n otrospaíses como B&lgica, 1rancia o Austria, la situación es intermedia!n el )eino <nido pr0cticamente se reali-ar0 todo en grandes laboratoriospri$ados desde el cierre %nal anunciado para mar-o del E?5E del 1orensic

Fcience Fer$ice!n el resto del mundo e.isten apro.imadamente otros 7?? laboratorios, siendouna especialidad típica de países desarrollados económica y socialmente!uropa tiene una preponderancia clara en el campo por encima de !stados<nidos, 9apón o Australia tanto en in$estigación como en calidad de la pericia

!n los 4ltimos a=os est0 acti$idad est0 e.perimentado un gran auge en'beroam&rica y !ste de Asia

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<na acti$idad de creciente importancia en este campo son las bases de datosde AD+ con %nes de identi%cación criminal !st0n legisladas e implantadas enpr0cticamente toda la <nión !uropea e.cepto 'talia (aun2ue este a=o debe delegislarlas de acuerdo con el tratado de /r^m

 ambi&n est0n establecidas en otros países del mundo (!stados <nidos,Australia y +ue$a Uelanda y suponen la introducción de unos G millones de

per%les de AD+ por a=oAntes de la aplicación del AD+ los marcadores gen&ticos 2ue se utili-aban paraestas %nalidades (HLA, proteínas, en-imas, grupos sanguíneos presentabangrandes limitaciones cuando se trataba de anali-ar muestras degradadas o enmin4scula cantidad lo 2ue sucede con mucha frecuencia en el traba#o forense!sto era particularmente cierto para el an0lisis de esperma o manchas deesperma y pelos o cabellos donde era e.cepcional proporcionar alg4n datoacerca de la correspondencia de un $estigio a un presunto agresor con lo 2uela ayuda a la #usticia era muy limitadaLos polimor%smos de AD+ de mayor uso en medicina forense se encuentran enel AD+ repetido en tandem y cl0sicamente se utili-an los denominadosminisat&lites y microsat&lites 2ue consisten en repeticiones de fragmentos de

AD+ de n4mero $ariable La repeticiones en el AD+ microsat&lite son detama=o pe2ue=o (de E a C pares de bases por lo 2ue se suelen denominarF)s (Mshort tandem repeatsM/oniendo un e#emplo, un F) puede tener una estructura como A" A"A" A" A" A" A" A"hasta un n4mero n de repeticiones Losindi$iduos nos diferenciamos por el n4mero de repeticiones de esa secuencia<n indi$iduo 75E para ese F) signi%ca 2ue tiene 7 $eces la unidad derepetición (A" en un lugar especí%co de un cromosoma (locus g&nico y 5E$eces en el locus correspondiente del cromosoma homólogoLos minisat&lites y microsat&lites adem0s de ser e.traordinariamentepolimór%cos (esto es $ariables entre los indi$iduos de una población, poseenuna herencia mendeliana simple !sto signi%ca 2ue el indi$iduo 75E, 2ue antes

pusimos de e#emplo, ha heredado uno de los alelos de su madre y otro de supadre biológico!n el campo forense utili-amos b0sicamente F)s de bp y 8bp en la unidadde repetición Los de menos repeticiones son muy propensos a artefactos(bandas tartamudas lo 2ue di%culta la interpretación de per%les de AD+obtenidos a partir de me-clas de diferentes indi$iduos!n 567, el genetista brit0nico Alec 9e:reys y su grupo descubrieron la enorme$ariación 2uetienen los minisat&lites entre los indi$iduos y acu=aron el t&rmino@D+A%ngerprint (huellagen&tica de AD+ y reali-aron las primeras aplicaciones forenses!l an0lisis de minisat&lites mediante sondas se abandonó recientemente poralgunasdi%cultades es su empleo forense, siendo el principal el hecho de 2ue es muydifícil anali-arAD+ degradado o en pe2ue=a cantidad con sondas y esto di%culta gran partede lasaplicaciones forenses/or fortuna esto fue solucionado con la aparición de la reacción en cadena de lapolimerasa y el descubrimiento de los microsat&lites

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!l primer sistema anali-ado por /") con %nes forenses fue un polimor%smo deAD+ codi%cante de la región HLA3 el locus HLA DA5, 2ue se detectabamediante sondas 2ue reconocen cada alelo del sistema pre$iamente %#adas auna membrana /osteriormente se utili-aron minisat&lites de pe2ue=o tama=o,pero fue descubrimiento de los microsat&lites o F)s la 2ue abrió unasenormes posibilidades a este campo Fus $enta#as eran notables ya 2ue

ofrecían #unto a pe2ue=os tama=os (y por lo tanto m0s resistencia a ladegradación, un buen poder de discriminación y facilidades para serampli%cados de forma simult0nea con /") multiple. (esto es ampli%car $ariossistemas F) simult0neamente a partir de la misma muestra!l an0lisis de los productos ampli%cados se ha facilitado en gran medidagracias al uso deuorocromos y sistemas automati-ados (secuenciadores autom0ticos de AD+2ue permiten la $isuali-ación de $arios mini o microsat&lites simult0neamenteLos polimor%smos anali-ables por /") antes de ser aceptados para la pr0cticaforense debencumplir una serie de re2uisitos y pasar sucesi$os controles de $alidaciónActualmente se suelen anali-ar al menos 5C F)s (estandari-ados y $alidados

a partir de lamisma muestra biológica utili-ando secuenciadores autom0ticos y /")multiple. y en !uropaes obligatorio el uso en los diferentes países de un n4mero de F)s comunes2ue componen eldenominado !uropean Ftandard Fet (!FF/ara an0lisis de criminalística biológica se pre%ere usar F)s con un pe2ue=otama=o en elproducto ampli%cado (menos de E?? bp pues el tama=o es in$ersamenteproporcional a ladegradación y en muestras muy degradadas sólo cabe esperar &.ito con laampli%cación de

estos sistemas Actualmente se han dise=ado numerosos multiple.esdisponiblescomercialmente con este tipo de F)s 2ue se suelen denominar miniF)s

 ambi&n son muyinteresantes las repeticiones de 8 nucleótidos (pentanucleotide repeatscuando se trata deanali-ar muestras me-cladas con diferentes indi$iduos pues tienen menosartefactos 2ue otros F)s !n $arios multiple.es disponibles comercialmente seincluyen este tipo de F)s+& Los pol!oros d% ADN !$ocondr!al (ADN$)Hasta no hace muchos a=os, el estudio de los polimor%smos de AD+ se habíacentradomayoritariamente en el an0lisis de marcadores nucleares Fin embargo duranteestos 4ltimosa=os, el inter&s por este genoma mitocondrial ha crecido considerablemente !lAD+mt poseem4ltiples aplicaciones en el campo de la ;en&tica 1orense debidofundamentalmente a sumodo de herencia, su ele$ada tasa de mutación y a la e.istencia de miles demol&culas por

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c&lula, lo 2ue permite su estudio en condiciones en las 2ue el materialbiológico a anali-ar seencuentra en mal estado o en cantidad insu%ciente para estudiar cual2uier otromarcadornuclear!l AD+mt humano es una mol&cula AD+ circular, cerrado y de doble cadena y

relati$amentepe2ue=o ya 2ue mide 5C8C6 bp y fue secuenciado en su totalidad por primera$e- en 5675 por Anderson y cols Aun2ue representa menos del 5P del AD+celular total, posee un grann4mero de copias Fe estima 2ue las c&lulas de mamíferos contienen $ariosmiles de copias deAD+mt dependiendo del tipo de te#ido !sta es característica es la 2ue lecon%ere m0s posibilidades de &.ito en muestras degradadas!l AD+mt se hereda por $ía pr0cticamente solo maternaHay dos regiones principales en el genoma mitocondrial una gran regióncodi%cante (6?P yuna región pe2ue=a de apro.imadamente 5E Zb conocida como región

control !sta región esmuy polimór%ca y contiene dos regiones hiper$ariables bien caracteri-adas,conocidas como la región hiper$ariable ' (HV' y la región hiper$ariable '' (HV'',de apro.imadamente ?? bp cada una odos estos elementos de controlhacen 2ue esta región no sea en con#untoselecti$amente neutraLa identi%cación forense mediante AD+mt se basa fundamentalmente en elestudio de estaregión no codi%cante De la misma manera, dada su alta $ariabilidad, es degran utilidad en elestudio antropológico de la e$olución humana ya 2ue las diferenciasinterpoblacionales a ni$el mitocondrial son un ree#o molecular de

acontecimientos históricos 2ue se han $enidosucediendo durante los 4ltimos milenios

 oda la mol&cula de AD+mt ha sido secuenciada en toda su longitud y lanumeración de lamol&cula del AD+mt es a2uella establecida por Anderson y cols (5675!mpie-aarbitrariamente cerca del punto medio de la región control, de forma 2ue estaregión see.tiende desde la posición 5C?E a la 5C8C6 y luego se contin4a desde la 5hasta la 8JC Lasdos regiones hiper$ariables se e.tienden apro.imadamente desde lasposiciones 5C?E a la`5CGC8 HV' y desde la JG hasta la `G? (los límites no est0n en cual2uier casorígidamenteestablecidos y $arían seg4n los estudios!l AD+mt e$oluciona de 8 a 5? $eces m0s r0pidamente 2ue un segmentopromedio del AD+nuclear y una de sus consecuencias es la heteroplasmía, esto es, una uname-cla intracelular de mol&culas mutantes y normales 2ue puede di%cultar la

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interpretación forense pero tambi&n proporcionar un dato de inter&s en laidenti%cación

 ambi&n est0n cobrando un $alor cada $e- mayor el estudio de $ariacionesnucleotídicassimples en región codi%cante (F+/s del AD+mt 2ue permiten de%nir conmayor precisión el

haplogrupo al 2ue pertenece una muestra lo 2ue aumenta su $aloridenti%cati$o /or e#emploun porcenta#e importante de las muestras europeas pertenecen al haplogrupoH (esto es a unmismo lina#e sin posibilidad de diferenciar unos indi$iduos de otros sino serecurre al an0lisis de F+/s de región codi%cante 2ue aumenta sensiblemente elpoder del test!l AD+mt es importante en gen&tica forense en dos circunstancias3 en elan0lisis de pelos ycabellos y en el an0lisis de muestras degradadas/or su me#or comportamiento en muestras degradadas el AD+mt es esencialpara muchos

casos de identi%cación a partir de restos óseos Fe han obtenido secuencias deAD+mt enmuestras de miles de a=os y la prueba ha ser$ido para solucionar numerososenigmashistóricos como la identi%cación, antes indicada, de los restos de la familia)omano$La mayoría de los laboratorios 2ue de ;en&tica forense utili-an hoy día elAD+mt, siendo sumayor problema el control de la contaminación y la $aloración estadística LaFociedad'nternacional de ;en&tica 1orense ('F1; ha publicado recomendacionesestrictas para su uso

apropiadoLa $aloración estadística e.ige el 2ue se disponga de bases de datospoblacionales muy amplias (es decir per%les de AD+mt totalmente anónimoscon el %n de estimar su frecuencia y en este sentido se est0 haciendo unesfuer-o colaborati$o importante a ni$el mundialB& Los pol!oros d%l croosoa 4 A pesar de representar solo el EP del componente cromosómico humano, elcromosoma [posee unas características 2ue le diferencian del resto de los cromosomas y lecon%eren granutilidad desde el punto de $ista tanto forense como antropólogico de las 2ue lam0simportantes son primero 2ue la mayor parte del cromosoma [ no recombinadurante lameiosis !sto determina 2ue todas las secuencias locali-adas en esta región nopseudoautosomal, son heredadas como un blo2ue de padres a hi#os,constituyendo un grupode ligamiento La 4nica fuente posible de $ariación es producida por e$entosmutacionales

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La segunda es 2ue presenta una ba#a di$ersidad a pesar de lo cual se handescrito numerosospolimor%smos De todos ellos los m0s interesantes a efectos forense son losmicrosat&litesaun2ue los marcadores bial&licos (mayoritariamente F+/s est0n empe-ando atener una gran importancia por su sensibilidad para poder ser anali-ados en

muestras mínimas y por laposibilidad de de%nir con precisión el haplotipo y poder así dar datos sobre elorigengeogr0%co posible de una muestraActualmente se pueden encontrar en bases de datos genómicas centenares deF)s decromosoma [ pero tambi&n se ha estandari-ado su uso Así, los F)s 2ueintegran el llamado@haplotipo mínimo (D[F56, D[FG78, D[FG76', D[FG76'', D[FG6?, D[FG65,D[FG6E y D[FG6G son usados por la mayoría de los laboratorios forenses en laactualidad y e.isten multiple.es comerciales ampliamente usados 2ue incluyenadem0s otros $arios

Los microsat&lites locali-ados en el cromosoma [, han irrumpido con granfuer-a en elpanorama de los marcadores gen&ticos de uso forense, debido a 2ue suponenuna ayudainestimable para ciertas situaciones forenses especí%cas como son algunoscasos dein$estigación de la paternidad difíciles y especialmente casos criminales conme-cla de AD+masculino y femenino Así, los polimor%smos de cromosoma [ son importantesen el an0lisisde muestras en delitos contra la libertad se.ual en las 2ue el esperma u otrasc&lulas del

agresor est0n me-cladas con c&lulas femeninas de la $íctima ya 2ue si sonutili-adosmarcadores autosómicos, se obtiene una ampli%cación preferencial del mayorde loscomponentes (usualmente D+A femenino, 2ue enmascara el per%l gen&ticodel asaltanteAdem0s de los microsat&lites est0 siendo cada $e- m0s importante el uso depolimor%smosnucleotídicos simples (F+/s de cromosoma [ !stos completan la informaciónde los F)s yson 4tiles para conocer el origen geogr0%co de la persona 2ue de#ó la muestraLa Fociedad 'nternacional de ;en&tica forense ('F1; ha publicadorecientementerecomendaciones para el uso correcto de estos polimor%mos, su nomenclaturayespecialmente la $aloración estadística de los resultados, 2ue comparte losproblemas delAD+mt "omo en &ste, e.iste la necesidad para los polimor%smos decromosoma [ de grandes

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bases de datos poblacionales para estimar la frecuencia de los haplotipos y seha reali-ado unesfuer-o colaborati$o a ni$el mundial muy importante en este sentido(XXXystrorgF)s y F+/s de cromosoma T tambi&n est0n siendo cada $e- m0s usados en laresolución de

casos de paternidad difíciles como herramientas complementarias a todas lasanteriores0& SNPs * los $odos d% 'u$uroA diferencia de otros campos de la ;en&tica, los a$ances tecnológicos en el0rea forensesuelen tener una aplicación a la realidad pericial relati$amente lenta por lanecesidad de$alidación pre$ia y de incorporación a programas de control de calidadLos polimor%smos de m0s futuro, y ya en la mayoría de los casos en una fasede $alidacióna$an-ada son los m0s simples, esto es los F+/s de cromosomas autosómicos!stos poseen una tasa de mutación muy ba#a lo 2ue los hace idóneos para

pruebas de paternidad1recuentemente, debido a la alta tasa de mutación de los F)s, aparecen enlas pruebas depaternidad inconsistencias 2ue parecen e.clusiones 2ue pero 2ue son debidasa mutaciones Al incluirlas en los c0lculos estadísticos la probabilidad depaternidad ba#a dr0sticamente !l uso de paneles de F+/s est0 solucionandotodos esos casos Adem0s est0 demostrando serparticularmente 4til en los casos en los casos de paternidad con relacionesfamiliares en elgrupo (por e#emplo, 2ue los posibles padres sean dos hermanos, así como enpaternidades2ue se han de reali-ar a partir de material degradado (por e#emplo, tras

e.humación de losrestos óseos del presunto padreDado 2ue el tama=o de los productos ampli%cados puede ser mínimo, lae%cacia de los F+/sen material degradado y en ba#o n4mero de copias supera con creces a losF)sFu simplicidad los hace susceptible de an0lisis a gran escala y particularmentede an0lisis conchips o microarrays de AD+ui-0 de todos modos los formatos basados en *ALD'O1 *F (@*atri. assistedlasserdeioni-ation timeofight mass spectrometry son los de mayor futuro sinol$idar formatoselectrofor&ticos basados en minisecuenciación de los 2ue el m0s usado sedenomina F+a/shot(una tecnología basada en minisecuenciación y electroforesis !l n4mero deF+/s 2ue senecesitan a efectos forenses es relati$amente ba#o comparado con otrasaplicaciones de losF+/s en ;en&tica humana <nos 8?C? F+/s de frecuencias e2uilibradas tienen

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apro.imadamente el mismo ni$el de discriminación 2ue 5E F)s !l grupoF+/for'D ha $alidado un set de 8E F+/s autonómicos 2ue est0 siendo muyempleado y tambi&n di$ersos set de F+/s para otras aplicaciones forenses delos F+/s!n este sentido, una de las aplicaciones m0s interesantes es el uso de A'*s(marcadores

informati$os de ancestros para predecir el origen geogr0%co de la persona 2ueha de#ado unamuestra biológica !ste tipo de prueba ha sido empleado con &.ito en losatentados del 55*de *adrid para predecir el origen geogr0%co de per%les no identi%cadosencontrados enob#etos importantes para la in$estigación #udicial del caso La e%cacia delm&todo es muy altahasta el punto de poder predecirse con una ele$ada probabilidad en muchoscasos si unamuestra es sureuropea o norteafricana, dos poblaciones tan pró.imasgeogr0%camente y con

una larga historia compartidaLos F+/s son tambi&n importantes para la predicción de características físicasde un indi$iduo a partir de una muestra con %nes de in$estigación policial Así,a partir de un $estigio biológico, ya se puede decir con muy ele$adasprobabilidades el color de los o#os, de la piel o del pelo, y se han desarrolladopaneles de F+/s al efecto así como herramientas matem0ticas para lapredicción/or 4ltimo el uso de microarrays de F+/s de alta densidad (con hasta un millónde F+/s est0re$olucionando tambi&n la in$estigación de relaciones relati$amente le#anas deparentesco(tíoRsobrino por e#emplo y est0 posibilitando comparaciones de relaciones de

parentesco 2ue con los microsat&lites no son posibles& ADN %n :ao n8%ro d% cop!as * %9clas d% p%rl%s d% ADNLa sensibilidad de las t&cnicas actuales ha hecho posible 2ue se puedanobtener per%les deAD+ a partir de sólo unas pocas copias (agarrar una prenda o un ob#eto unospocos segundosya es su%ciente para de#ar un per%l /or desgracia esto ha hecho m0scomple#a lainterpretación al aumentar el n4mero de casos en los 2ue e.iste una me-cla deper%les deAD+!l an0lisis de me-clas de AD+ es pues una pr0ctica habitual en la rutinaforense y es uno de los mayores retos Fu interpretación es delicada dado 2uese hace imposible diferenciar 2u& alelos pertenecen a cada contribuyente a lame-cla Fi adem0s la me-cla est0 dese2uilibrada (uno de los contribuyentesaportó m0s cantidad de uido biológico 2ue el otro u otros podemos cometererrores al asignar alelos 2ue en realidad son artefactos de la ampli%cación(sttuters o al no detectar alelos 2ue realmente e.isten en la me-cla (drop outal&lico

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/ara solucionar los problemas de interpretación de me-clas de per%les se hancreadoprogramas inform0ticos 2ue nos ayudan a la interpretación de me-clas cuandono e.iste laposibilidad de la separación física de los per%les gen&ticos

B'BL'O;)A1A5 BucZleton 9, riggs "*, >alsh F9 (E??8 1orensic D+A e$idenceinterpretation ")" /ress, Boca)atón, 1lorida, <FAE Butler 9* (E?5? 1undamentals of 1orensic D+A yping !lse$ier Academic/ress,Fan Diego, 8E? pagesG !$ett ', >eir BF (5667 'nterpreting D+A !$idence, Finauer Associates 'ncFunderland,*assachussets, <FA 9obling *A, ;ill / (E?? !ncoded e$idence3 D+A in forensic analysis +at

)e$ ;enet 8(5?3JG6J85http3RRsgfmelcorteinglesesRF;1*R1)ARrecursosRdocRE?5GR/O+!+"'AFR9unioR5886GJ68_5?CE?5G5?E5G?pdf 

An,l!s!s d%l ADN"omo las huellas digitales, cada indi$iduo tiene su propia secuencia 4nica deAD+ "uando un in$estigador forense intenta identi%car a una persona, crea unper%l gen&tico un con#unto de $alores num&ricos 2ue son 4nicos para esapersona /ara ello, el AD+ se e.trae primero de una pie-a de e$idencia <nat&cnica conocida como reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real(/") se emplea para detectar y cuanti%car la cantidad de AD+ presente"opias e.actas de segmentos especí%cos de AD+ se hacen de un proceso

llamado Mampli%caciónM Otra t&cnica conocida como Melectroforesis en gelMsepara los diferentes segmentos de AD+ de acuerdo a su tama=o La muestraes buscada por las -onas especiales de AD+ 2ue se repiten Aun2ue loshumanos comparten 66P de su AD+, estos segmentos en particular, llamadosrepeticiones cortas en t0ndem (Fhort andem )epite3 F) son muy $ariablesde un indi$iduo a otro Dado 2ue cada persona hereda genes diferentes deambos padres, todos los indi$iduos tienen una serie particular de marcadoresF) /or lo tanto, la posibilidad de 2ue dos personas no relacionadas tengan lamisma estructura es muy ba#a /or lo tanto, los Mper%lesM de AD+ se puedenutili-ar durante un proceso de identi%caciónLa identi%cación del se.o es una parte importante en la creación de un per%l deAD+ /ara determinar el se.o a partir del AD+n, los analistas utili-an el hechode 2ue los indi$iduos del se.o femenino tienen dos cromosomas T y 2ue los delse.o masculino tienen un cromosoma T y un cromosoma [, para identi%car losgenes 2ue di%eren entre los hombres y las mu#eres Las tres t&cnicas m0sutili-adas para la identi%cación del se.o en las in$estigaciones forenses es elgen F)[, el gen de amelogenina o secuencias repetiti$as en el cromosoma [ ([F)!l gen F)[ es responsable del desarrollo de fetos masculinos /or lo tanto, supresencia sugiere 2ue el indi$iduo es de ese se.o, mientras 2ue su ausencia

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sugiere m0s bien el se.o opuesto La t&cnica del gen amelogenina se dirige aun gen locali-ado tanto en el cromosoma T como en el cromosoma [ Lasecuencia de este gen es m0s larga en hombres 2ue en mu#eres y una $e-$isuali-ada, la longitud se puede utili-ar para determinar el se.o de unindi$iduo La t&cnica [F) busca especí%camente las secuencias repetiti$asde AD+ en el genoma nuclear, o sea repeticiones cortas de AD+ en el

cromosoma [ 2ue se encuentra sólo en los hombres /or2ue los hombres hanheredado de sus padres esta parte de su cromosoma [, la t&cnica tambi&npuede ser utili-ada para pruebas de paternidad!l AD+ mitocondrial tambi&n puede ser utili-ado para e.plorar los $ínculosfamiliares, por2ue pasa e.clusi$amente de la madre al hi#o, y ree#aRtra-a lalínea materna !l mayor n4mero de e#emplares presentes en el AD+mitocondrial permite 2ue una cantidad mayor de AD+ sea recuperado para suan0lisis, ello hace al AD+mt particularmente 4til para el an0lisis de materialdegradado o da=adoD%$%r!oro d%l ADN!l deterioro se de%ne como la descomposición o destrucción de las estructurascelulares despu&s de la muerte [a 2ue el AD+ est0 contenido en la c&lula, la

e.posición de te#idos al medio ambiente, fuego, agua o productos 2uímicos,puede e$entualmente conducir a la degradación física de las cadenas de AD+ oa la alteración de su estructura 2uímica !stos cambios pueden dar lugar aatribuciones erróneas de pares de bases y la identi%cación errónea de unaespecie o un indi$iduo Fi la muestra se ha deteriorado, los responsables delan0lisis de AD+ deben tener especial cuidado para asegurarse de 2ue est0nprobando el material adecuado !s importante 2ue las muestras se reco#an y see.traigan e$itando la contaminación "ual2uier error podría dar lugar a lacreación de un per%l falso odos los an0lisis deben repetirse m0s de una $e-para controlar la inuencia de los cambios 2uímicos !n general, el e2uipo dean0lisis de AD+ deben estar muy limpio y seguir protocolos estrictos paragaranti-ar 2ue los resultados sean #ustos y precisos

Apl!cac!n d% ADN/ara ma.imi-ar la cantidad de AD+ de muestras degradadas, a menudo sedeben hacer copias adicionales de AD+ !ste proceso se llama ampli%cación deAD+ <na reacción en cadena de la polimerasa (/") es un m&todo arti%cial delproceso de replicación del AD+, es similar a la de la replicación celular normal/ara reali-ar una /"), una muestra de AD+ debe ser combinada con unaen-ima, y otros productos 2uímicos La solución se calienta para acti$ar laen-ima y para separar el AD+ de doble cadena "uando una nue$a hebra deAD+ se separa del AD+ original, la en-ima utili-a los nucleótidos libres parareplicar una región especí%ca !l calentamiento y enfriamiento repetido de lareacción se asegura de 2ue el AD+ se separe y se repli2ue y todo el procesocompleto se repite nue$amente Dependiendo del ni$el de deterioro de lamuestra, son necesarias G? a C? repeticiones para reproducir AD+ su%cientepara su an0lisis5as% d% da$os d% ADN/ese a todo, un per%l de AD+ sin embargo, no puede identi%car a un soloindi$iduo !l per%l de una persona desconocida debe ser comparado con elAD+ tomado de una fuente conocida con el propósito de hacer unaidenti%cación positi$a /ara facilitar la identi%cación r0pida y e%ca-, ya $ariospaíses mantienen bases de datos disponibles para la in$estigación con un gran

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n4mero de per%les de AD+ "uando un nue$o per%l se introduce en el sistema,se compara con todos los otros per%les y si hay una coincidencia, el sistemacalcula la signi%cación estadística del resultadoA manera de e#emplo digamos 2ue el Fer$icio de *&dicos 1orenses de la"olumbia Brit0nica mantiene una de estas bases de datos Los per%les de AD+generados a partir de los restos no identi%cados dentro de la pro$incia se

registran y se comparan con los per%les de AD+ pro$enientes de otros restosno identi%cados o prestados por familiares de personas desaparecidasDe igual manera, el Banco de Datos de AD+ de OttaXa mantiene dos bases dedatos forenses de AD+3 el registro de delincuentes con$ictos ('ndice de/ersonas 2ue "ometieron Delitos 3 "O' y el )egistro de las escenas del crimen("rime Fcene 'nde.3 "F' La base de datos "O' incluye per%les de AD+ de losdelincuentes condenados por delitos cometidos en el interior de "anad0,mientras 2ue la base de datos "F' contiene los per%les de AD+ emitidos apartir de la e$idencia encontrada en la escena del crimen o $íctimas La basede datos "F' contiene sólo AD+ de un sospechoso potencial <na $e- 2ue elper%l de AD+ de un sospechoso entró en la base de datos "F', se puedecomparar con todos los per%les de los delincuentes detenidos en "anad0 y

registrados en la base de datos "O' o con otros per%les de AD+ contenidos enel base de datos "F' !sto permite entonces $eri%car si el mismo sospechosoha de#ado huellas de AD+ en otras escenas del crimen a tra$&s de "anad0Los !stados <nidos de Am&rica tiene una base de datos similar, llamadaFistema "ombinado de )egistros de AD+ (Fistema de )egistro "ombinado deAD+3 "OD'F, 2ue es gestionadaRmantenida por la O%cina 1ederal de'n$estigaciones (1ederal Bureau of 'n$estigation3Caso a:!%r$o3 cold cas%Los a$ances en la in$estigación del AD+ y la ampliaciónRe.pansión de bases dedatos de AD+, como las mencionados anteriormente, han sido particularmente4tiles en la solución de un Mcaso abiertoM ó cold case (caso frío <n McasoabiertoM es un t&rmino ingl&s usado en la comunidad #udicialRlegal para

referirse a un delito o accidente 2ue no ha sido resuelto toda$ía, pero 2ue yano est0 ba#o in$estigación !stos casos se remontan a $eces sólo a unos pocosa=os atr0s o a m0s de 5?? 'mplican ya sea un delito como el asesinato, unaccidente como el de un a$ión o la identi%cación de los soldados desaparecidosdurante una guerra o un conicto Los in$estigadores se animan a reabrir unMcold caseM con el ad$enimiento de las nue$as tecnologías o si se obtienenue$a información /or e#emplo, un caso de estos se puede reabrir por2ue losmiembros de la familia fueron encontrados con $ida y se puede hacer elan0lisis de AD+ para identi%car a la $íctima a $eces hasta $arias d&cadasdespu&s de la desaparición Asimismo, el descubrimiento de restos humanosprocedentes de un accidente de a$ión puede causar la reanudación del estudiode un registro sin resol$er !n ambos casos, la e$idencia de un Mcaso abiertoMse considera nue$amente con la esperan-a de identi%car a la $íctima o paradeterminar la causa de su muerte para 2ue el archi$o 2uede de%niti$amentecerradoO$ras apl!cac!on%s d%l ADN!n la mayoría de los casos el an0lisis forense del AD+ humano es cada $e- m0sutili-ado para resol$er los delitos relacionados con la $ida sil$estre Variospaíses tienen leyes 2ue protegen a especies en peligro de e.tinción para e$itar2ue sean perseguidas o atrapadas Fin embargo, algunos toda$ía pueden tratar

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de comprar y $ender partes de animales como sou$enirs turísticos, trofeos deca-a o con %nes medicinales /or lo tanto, los funcionarios de la $ida sil$estredeben ser capaces de identi%car las especies en peligro de e.tinción ydistinguirlas de a2uellas 2ue pueden ser ca-adas legalmente !sto puede serdifícil si sólo una parte del animal es encontrada o se ha transformado con%nes medicinales o en #oyas y ornamentos !n estos casos, el AD+ puede ser

utili-ado para identi%car la especie, e incluso a $eces a determinar el 0reageogr0%ca de donde pro$iene el animal "on la tecnología actual es inclusoposible encontrar una coincidencia o correspondencia para cantidades muype2ue=as de material o de muestras degradadas Al igual 2ue en el caso dean0lisis forense humanos, los resultados de AD+ sobre la $ida sil$estre puedeser empleado en el tribunal para condenar a una persona culpable de unaacti$idad ilegalhttp3RRgu-mancarlosalbertoblogspotcomRE?55R?CReladnensuaplicacionforensehtml

.ENOMA ?UMANO 4 LA MEDICINA FORENSEADN EN INVESTI.ACIONES FORENSES A NIVEL MUNDIAL

EL ANLISIS DE ADN COMO ?ERRAMIENTA DE IDENTIFICACION!l desarrollo cientí%co ha permitido la introducción de la tecnología del AD+ enla in$estigación forense, posibilitando el estudio de indicios biológicos mínimos,hecho 2ue unos pocos a=os atr0s era imposible !l *&dico 1orense seencuentra en una posición pri$ilegiada para recoger algunos $estigios 2ue porsu fragilidad pueden alterarse o perderse como consecuencia de una actuaciónretrasada, permitiendo su estudio y la resolución del caso, con lasconsecuencias bene%ciosas 2ue de ello se deri$arían/or otra parte, al margen de la profesionalidad y del compromiso deontológico,se est0 produciendo una e.igencia por parte de la sociedad, cada $e- m0sconocedora de las posibilidades t&cnicas e.istentes a tra$&s de los mediosde comunicación, reclamando una responsabilidad profesional del personal

encargado del caso, al igual 2ue en otros campos de la *edicina Así en!stados <nidos se han presentado ya 2uerellas criminales contra hospitales,m&dicos y cuerpos policiales no federales por mal pra.is y negligencia, al norecoger indicios criminales 2ue podrían haber conducido a la identi%cación delautor de los hechos denunciados (en la mayoría de las reclamacionesadmitidas, por defectos en la toma o conser$ación de supuestos indicios desemen en casos de $iolación!l estudio del AD+ ha supuesto un enorme Mpaso de giganteM en laidenti%cación m&dicoforense, tanto en la in$estigación criminal, como en lain$estigación biológica de la paternidad Las especiales circunstancias en las2ue se desen$uel$e la primera de ellas hace 2ue el potencial tecnológico nosea su%ciente para la consecución del ob#eti$o si pre$iamente no se hareali-ado un buen traba#o por parte del e2uipo de in$estigación encabe-adopor el *&dico 1orense, 2ue por su formación y especiali-ación es el profesionalidóneo para $alorar los indicios biológicos!n los casos en los 2ue haya 2ue recoger las e$idencias, debe hacerse encondiciones de m0.ima limpie-a o esterilidad todos los indicios de origenbiológico presentes, almacen0ndolos independientemente y adecuadamenteidenti%cados en cu0ntos recipientes est&riles sea necesario y manteni&ndoloscustodiados en un frigorí%co hasta recibir las instrucciones oportunas por parte

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de las Autoridades 9udiciales "uando se proceda al en$ío de las muestras, hay2ue asegurarse de 2ue no se romper0 la Mcadena de fríoMIV&+ CARACTERGSTICAS DE DATOS SENSI5LES DE LA INFORMACI@N.ENETICA CONTENIDA EN LOS RE.ISTROS DE ADNLa información gen&tica se establece como sensible, desde el punto de $ista desu codi%cación a alg4n producto de e.presión ya sea biológico o metabólico,

en ese sentido, es altamente necesario y de la mayor importancia, paraproteger los derechos consagrados de las personas respecto de su dignidad,intimidad y $ida pri$ada, 2ue las secuencias sugeridas o adoptadas comomarcadores gen&ticos como los contenidos en el "OD'F u otras bases de datos,no presenten e.presión g&nica, es decir, sean secuencias de AD+ intrónicas ointrones Folo así se estar0n respetando y sal$aguardando los principiosconsiderados en la elaboración de esta ley/ara lograr lo anterior, es necesario mantener una $igilancia constanterespecto de los halla-gos 2ue se realicen respecto de dichas secuencias, todosellos consignados en bancos de secuencias gen&ticas como el gene banZ yotras, de acceso $ia internet y a disposición global por todos los gobiernos delmundo

IV&B VULNERA5ILIDADES DEL SISTEMA DE IDENTIFICACI@N .ENETICAB&- MARCADORES .ENETICOSFe debiera mantener una biblioteca de secuencias especí%cas para serutili-adas como marcadores gen&ticos, en especial en "hile, al presentaraspectos raciales, de consanguineidad y aislamiento territorial particulares, lo2ue se traduce en distribuciones poblacionales de genes especí%cos distinti$asrespecto a las frecuencias poblacionales halladas para esas secuencias g&nicasen otros países o grupos raciales o &tnicos o territoriales !llo redundaría enun protocolo de an0lisis con me#ores perspecti$as de ni$eles de calidadrespecto de la pericia forenseB&+- ASPECTOS PO5LACIONALES"hile presenta distribuciones poblacionales de sus habitantes especí%cas, 2ue

constituyen nuestra propia identidad cultural y &tnica, en esa perspecti$a, esnecesario considerar aspectos como la consanguineidad de sus habitantes enlas -onas e.tremas norte y sur de nuestro país, en las islas ( 'sla de /ascua,"hilo& y 9uan 1ern0nde- , grupos &tnicos especí%cos reconocidos por la ley,por todo lo anterior, es necesario adoptar medidas de traba#o estadístico 2ueden cuenta de la distribución demarcadores gen&ticos a ni$el local, y disponerasí de estudios de referencia de distribución poblacional de marcadoresgen&ticos como e posible hallarlos en otros países y es recomendado adem0spor organismos policiales internacionales como '+!)/OL o el 1B' en !stados<nidosIV&0 EL CONTROL DE CALIDAD COMO ?ERRAMIENTA DE .ESTION DELPROCESO&Organismos t&cnicos policiales internacionales como '+!)/OL o el 1B'establecen rigurosas medidas de control de calidad integral a todo el procesode desarrollo de una pericia, desde la toma de muestras desde el lugar de loshechos, hasta la entrega de resultados y comunicación con otros organismosinternacionales !stas directrices se entregan de modo general en este traba#oy ree#an la necesidad de lle$ar a cabo las pericias de modo profesional ye%ca-, al estar in$olucrados recursos ingentes en este tipo de pericias y paraasegurar la buena pr0ctica forense

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Leer más: http://www.monografias.com/trabajos58/identificacion-criminales-adn/identificacion-criminales-adn5.shtml#ixzz!"tcz$$

http3RRXXXmonogra%ascomRtraba#os87Ridenti%cacioncriminales

adnRidenti%cacioncriminalesadn8shtmlINVESTI.ACION FORENSE EN ECUADOR!"<ADO) [ F<F '+V!F';A"'O+!F 1O)!+F!Fhttp3RRifcdp-esRrecursosRpublicacionesRECR8JR_ebooZpdfpage5EC

ADN EN INVESTI.ACIONES FORENSES EN AMHRICA LATINA%le3RRRD3RDoXnloadsRDialnet'n$estigacionesAntropobiologicas!nArgentinaDesdeLaG5??G75pdf http3RRferremingtoneducoRo#sRinde.phpR/[/RarticleR$ieXRJ

!n "osta )ica, la idea de la importancia de introducir la tecnología del AD+para dilucidar la identidad de indi$iduos lle$ados a #uicio fue propuesta por losbiólogos /edro León y !ugenia )o#as (León y )o#as 5665 /oco tiempo despu&sen el /oder 9udicial (entre 566E y 566G los esfuer-os del microbólogo )afael*arín )o#as Yentonces #efe del Laboratorio de 'nmunohematología permitieroniniciar la reestructuración física y el e2uipamiento del 2ue sería el laboratoriode AD+ (*arín )o#as 566G566!l proyecto de in$estigación M'mplantar en "osta )ica la detección de lashuellas gen&ticas para la identi%cación personal en casos criminalísticos y depaternidadM Yconocido como el M/royecto de AD+M fue propuesto a lasautoridades del /oder 9udicial ("omisión de !nlace O'9"F9 en 566G (*orales y!spino-a 566G, y aprobado poco tiempo despu&s

!n la <ni$ersidad de "osta )ica, en 566, la bióloga /atricia "uencaimplementó las huellas digitales de AD+ (D+A%ngerprinting ("uenca et a l566 Varios casos legales y pri$ados fueron atendidos en su laboratorio del'nstituto de 'n$estigaciones en Falud ('+'FA, en tanto 2ue, sus resultadostrascendieron a los tribunales de familia costarricenses'ndependientemente en 5668 (tambi&n en la <ni$ersidad de "osta)ica, !ugenia )o#as 'ncera (5668 in$estigó doce marcadores de AD+ Yprincipalmente dinucleótidos en una muestra de indi$iduos pro$enientes delValle "entral de "osta )ica, traba#o 2ue fue formalmente publicado tiempodespu&s ()o#as et a l 5666 Dicho traba#o tu$o el m&rito de ser el primeran0lisis poblacional reali-ado en "osta )ica con marcadores de AD+ conpropósitos de identi%cación humana (*orera et a l E??5 A pesar de 2ue 5?

pare#as fueron anali-adas para pruebas de paternidad en este estudio, susresultados no trascendieron a los tribunales costarricenses, sino 2ue fuerontratados en un conte.to pri$ado !ste estudio sir$ió de base para 2ue a=osdespu&s laboratorios comerciales ofrecieran el ser$icio de an0lisis depaternidad Aun2ue el precio de cada an0lisis es relati$amente alto (;olcherE??G y resulta prohibiti$o para el grueso de la población costarricense, losrecursos pri$ados, resuel$en las necesidades de un segmento del mercado 2uepre%ere e$itar las instancias legales

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!se mismo a=o, un estudio de AD+ reali-ado por biólogos moleculares de la<ni$ersidad de "osta )ica llamó la atención de la prensa como parte la dein$estigación de homicidios ("ordero 5668, *arrero 5668/or otra parte, en el Laboratorio del /oder 9udicial, luego de meses depreparati$os y un recambio de parte del personal cientí%co, el M/royecto deAD+M dio inicio formalmente el 5C de mar-o de 5668 Fi bien en la propuesta

original se sugería el an0lisis de tres marcadores gen&ticos (D5F7?, D5JF6 yApo B, algunos de estos fueron reempla-ados por los siete marcadoresgen&ticos Mcon$encionalesM (D5F7?, HLADA5, LDL), HB;;, ;[/A, DJ87 y ;cdebido a la disponibilidad comercial de los reacti$os, decisión 2ue a la larga fueacertada, pues signi%caba estar implementando en "osta )ica los mismosmarcadores gen&ticos 2ue se estaban utili-ando en los países desarrollados enel campo de la gen&tica forense, y abría las puertas a la posibilidad deacreditación de la calidad analítica en el conte.to internacional!n la pr0ctica cientí%ca, e.iste un límite en la precisión de toda medida, 2uedepende del e2uipo utili-ado y de la habilidad del e.perimentador, de modo2ue la determinación de la precisión de una medida es tan importante como lamedida misma, y cada e.perimentador debe dar una estimación de su

precisión, o sea de la incertidumbre o error en la medida ("romer 56J7 /oresta ra-ón en 5668, uno de nosotros (B* apoyó estadística y docentementelos esfuer-os de la microbióloga !$a Folano en ese momento 9efa delLaboratorio de 'nmunohematología por implementar rutinariamente en "osta)ica los c0lculos probabilísticos en los dict0menes de paternidad, con plenacon%an-a de 2ue tal información ayudaría a los #ueces a tomar susresoluciones, muy le#os de crearles confusión Afortunadamente, la norma derespaldar los dict0mines periciales con c0lculos probabilísticos 2ue indi2uen larobuste- de cada an0lisis, se ha mantenido despu&s, una $e- se introdu#o latecnología del AD+Los o:%$!7os d%l 3Pro*%c$o d% ADN3

 odos los ob#eti$os inicialmente propuestos, se habían cumplido al %nali-ar el

proyecto de in$estigación en abril de 566J, a saber35 Fe implemento formalmente la tecnología del AD+ recombinante para laidenti%cación indi$idual en el Laboratorio de "iencias 1orenses, dentro de laspericias 2ue ofrece rutinariamente su Organismo de 'n$estigación 9udicial(O'9 del /oder 9udicial de "osta )ica, como una ayuda para la me#oradministración de la #usticia!n la pr0ctica se pasó de tener un laboratorio 2ue solo reali-aba pruebas degrupos sanguíneos, a tener un laboratorio 2ue había incluido al AD+ en formarutinaria dentro de las pericias cientí%co forenses 2ue ofrece el Organismo de'n$estigación 9udical, y 2ue cumplía adem0s con los todos los re2uerimientosinternacionales de ese momento (566J Fe paso de una probabilidad dee.clusión de paternidad del J8,?P con grupos sanguíneos ($er *orera etal  E??5 a ofrecer una probabilidad del 67,7P con AD+ (*orales"ordero etal  E??5 y se paso de una probabilidad de e.clusión forense del 5G,GP congrupos sanguíneos ($er *orera et al  E??5 a ofrecer una probabilidad del66,66P con AD+ (*orales"ordero et al  E??5 /robablemente este es el pasocualitati$o m0s trascendental 2ue se ha dado en el país durante la !ra delAD+, en lo 2ue respecta al n4mero de casos anali-ados, así como su impactoglobal en la sociedad costarricense !llo ad2uiere especial rele$ancia por2ue

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otros afamados logros de la gen&tica nacional debieron ser alcan-ados enlaboratorios de países desarrollados (Leon et al  566E, Leal  et al  E??5E Fe caracteri-ó la estructura gen&tica de la población costarricense, medianteel uso de marcadores gen&ticos de AD+ !specí%camente, se identi%caron losalelos presentes en esta población, se cuanti%có las frecuencias genotípicas delos marcadores de AD+ antes mencionados y se probó su bondad de a#uste al

e2uilibrio de Hardy>einberg, y se determinó la heterocigosidad y la capacidadde e.clusión de los marcadores gen&ticos utili-adosLos datos primordiales generados en este proceso, recibieron el a$al de lacomunidad cientí%ca al ser publicados por la prestigiosa re$ista M1orensicFcience 'nternationalM (*orales "ordero et al  E??5, una de las dos re$istas deciencias forenses con mayor índice de impacto en esta 0rea dentro de lacorriente principal de la "iencia mundialG Fe creó y mantiene desde entonces un banco de muestras de AD+,adecuadamente preser$adas, con las cuales se pudieran reali-ar futurasin$estigaciones poblacionales forenses utili-ando otros marcadores gen&ticos ye$itando así recurrir a nue$os procesos de recolección de muestras aleatoriasde la población

!n este sentido las e.pectati$as a mediano pla-o se han cumplido tambi&n, ya2ue hasta la fecha hay dos tesis de maestría en proceso en busca de laestandari-ación de nue$os marcadores de AD+ y un proyecto de in$estigacióncon#unto con la <ni$ersidad de "osta )ica (+o 556J8EE A4n cuando en eldesarrollo normal de la gen&tica forense los marcadores inicialmenteestudiados sean totalmente substituidos por otros m0s informati$os, de m0sr0pida caracteri-ación, o t&cnicamente m0s simples, la representati$idad delestudio inicial sigue $igente y con%ere solide- estadística a los estudios dereferencia posteriores Fe estableció una base de datos sobre las frecuencias de marcadoresgen&ticos a ni$el de AD+ en la población de "osta )ica Datos de resumenfueron aceptados en la Base de datos de AD+ nuclear del ;!/'F1; (;rupo

!spa=ol, /ortugu&s e 'beroamericano de la M'nternational Fociety of 1orensic;eneticsM (*orales"ordero et al  5666<na base de datos e2ui$alente en perspecti$a y dise=o e.perimental, fuecreada apro.imadamente en la misma &poca 2ue la base costarricense, por el1B' con datos de las poblaciones de !stados <nidos3 afroamericanos,cauc0sicos, hispanos y orientales, la cual incluyó primero los mismosmarcadores estudiados por nosotros a2uí (BudoXle et al  5668a, b, BudoXle etal  5667b, y luego se le agregaron los datos de los 5G sistemas F)s,caracteri-ados en los mismos indi$iduos (BudoXle y *oretti 5666D!s%o %Jp%r!%n$alFi bien los aspectos metodológicos relacionados con esta in$estigación hansido tratados con detalle en otras publicaciones (*orales"ordero etal  E??5, *orera et al  E??5, los puntos relacionados con el dise=oe.perimental re2uieren un especial detalle, en el presente conte.to Fe hi-o unmuestreo aleatorio de los centros de salud, clínicas, y hospitales de la "a#a"ostarricense del Feguro Focial y del *inisterio de Falud de todo el país Fe$isitó 8? de ellos y se in$itó a participar en este estudio, en cada uno de ellos,un n4mero de hasta G? costarricenses por nacimiento, no emparentados, losprimeros 2ue se presentaron al laboratorio el día de la $isita, hasta completarun total de 5G? indi$iduos Fe solicitó consentimiento informado y se pidió

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responder a un formulario en el 2ue se incluyeron características demogr0%casrespecto al origen de los $oluntarios Los indi$iduos se clasi%caron seg4n sucantón de nacimiento, para lo cual se di$idió el país de acuerdo a límitescantonales y barreras geogr0%cas en 8 0reas3 Atl0ntica, "entral, "horotega,+orte y Fur (*orera et al  E??5 Del total, se caracteri-aron los per%lesgen&ticos de 5E?C indi$iduos, seleccionados aleatoriamente dentro del banco

de muestras !l dise=o aleatorio y prospecti$o de este estudio garanti-a larepresentati$idad estadistíca de la población costarricenseO$ros lo"ros d%l 3Pro*%c$o d% ADN3Durante el desarrollo del proyecto se formó personal capacitado en el an0lisisde AD+ con propósitos forenses3 cuatro profesionales y tres t&cnicosFe implementaron $arios m&todos de an0lisis 2ue se pre$eían importantes una$e- se iniciara la utili-ación en forma rutinaria pericial de la tecnología del AD+,dentro del Organismo de 'n$estigación 9udicial Así, se estandari-ó la e.tracciónde AD+ a partir de huesos, m4sculo, semen, hisopeados orales, anales y$aginales, a la $e- 2ue se procesaban los primero casos penales

 eniendo como marco de referencia el desarrollo de esta tecnología en !stados<nidos, y en comprensión de la necesidad de estudiar la estructura gen&tica de

las minorías &tnicas y de la $alidación de los estudios de AD+ a partir dee$idencias forenses sometidas a un clima tropical, presentamos $ariaspropuestas de in$estigación a la 9efatura del Departamento de Laboratorios de"iencias 1orenses 57 de mar-o de 566C, para ser sometidos ante lasautoridades #udiciales y tratar de obtener su %nanciamiento Así se presentaronlos proyectos denominados3(a MDeterminación de la frecuencia de algunos marcadores gen&ticos en laspoblaciones nicarag^ense, negra e indígena de "osta )icaM(b MDeterminación de la frecuencia de algunos marcadores de AD+mt en lapoblación de "osta )icaM(c M!studios de $alidación en el an0lisis de HLADA5, D5F7? y /olymarZerutili-ando reacción en cadena de la polimerasaM

Fi bien la idea no encontró repercusión en a2uel momento <na $e- concluidoel proyecto, apro$echamos una donación de reacti$os de una casa comercial yuna situación acad&mica uni$ersitaria fa$orable, para completar el estudio delas poblaciones de +icaragua (*orera et al  E??5 e indígena costarricense(*orales "ordero et al  E??5/or otra parte, el an0lisis del AD+ mitocondrial en la población de "osta )icafue retomado independientemente en el E??5 (*el&nde- Bola=os E??5 Finembargo, la $alide- cientí%ca de dicho traba#o ha sido se$eramentecuestionada (*orera E??5RE??E !n tanto, su implementación pr0ctica en elLaboratorio de "iencias 1orenses sigue toda$ía pendiente en "osta )ica, seisa=os despu&sFe contribuyó con los esfuer-os por impulsar el desarrollo de la gen&ticaaplicada a las ciencias forenses en 'beroam&rica, por medio de la presentaciónde nue$e ponencias en congresos de car0cter nacional de *icrobiología y*edicina en "osta )ica, y en congresos internacionales de Biología *olecular y"iencias 1orenses en /anam0, !l Fal$ador y !spa=a, para dar a conocer losa$ances y logros del proyecto, y con la publicación de nue$e traba#oscientí%cos (*orales 5668a, b, *orales y *arín )o#as 566J,*orera y 9im&ne-Arce 5667, 9im&ne-Arce y *orera 5666, *orales"ordero et a l5666, E??5, *orera et a l E??5, E?? Fin embargo, hay 2ue tener presente

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2ue "osta )ica dista mucho de estar a la cabe-a en la in$estigación ydesarrollo de las ciencias forenses, ni si2uiera al ni$el regional m0s inmediato(*orales et al E???, *orales E??EE7oluc!on d% los arcador%s d% ADN para la !d%n$!cac!on 'or%ns%<n fenómeno curioso ha sido la sustitución periódica de diferentesmetodologías gen&ticas por otras 2ue se muestran cada $e- m0s

prometedoras Así, los grupos sanguíneos dieron paso a huellas digitales deAD+ y con estas inició la !ra del AD+ !stas fueron sustituidas por losmarcadores dinucleotidicos Luego se populari-aron las sondas de AD+ y losV+)s !n los 4ltimos a=os &stos han sido reempla-ados por los F)s !n estemomento se traba#a en estandari-ar adem0s algunos marcadores de herenciae.clusi$a de se.o, del mtD+A y del cromosoma [ Fin embargo, algunos de losa$ances en la ;en&tica 1orense, a pesar de ser esta una ciencia conser$adoray de progreso lento, o nunca llegaron a "osta )ica, o se han ido incorporandode 8 a 5? a=os tarde, generalmente cuando ya est0n a punto de sersubstituidos <n ciclo 2ue lamentablemente se ha repetido cuatro $ecesAsí los polimor%smos cl0sicos de grupos sanguíneos y proteínas 2ue fueronutili-ados durante alrededor de E? a=os, han sido pr0cticamente abandonados

para estos propósitos por los laboratorios de punta de un sin n4mero de países,y %nalmente en 5667, terminaron siendo sustituidos tambi&n en "osta )ica enfa$or de los marcadores de AD+!l M/royecto de AD+M %nali-ó luego de E8 meses de in$estigación, el 7 de mayode 566J, fecha de la entrega de los resultados %nales (*orales"ordero etal  E??G Luego de un período de in pass de $arios meses, %nalmente estatecnología empe-ó a ser utili-ada en forma rutinaria para la resolución decasos forenses y de paternidad en el O'9 Así, los marcadores gen&ticosMcon$encionalesM (HLADA5, LDL), ;[/A, HB;;, DJF7, ;c, D5F7? fueron4tiles para atender una importante cantidad de casos en cede #udicial (nG??Fin embargo, al igual 2ue ocurrió con el traba#o por )o#as et al  (5666, losresultados del M/royecto de AD+M (*orales"ordero et al  566J, E??5

obligaban a recomendar un aumento en el n4mero de marcadores, ye$idenciaban la necesidad de me#orar la con%abilidad estadística, o sustituirlospor otros marcadores m0s informati$os !sta misma dirección fue tomada yliderada por el 1B' estadounidense a fa$or de los marcadores F)s (BudoXle etal 5666a, b!n tanto, en "osta )ica, se siguió un enfo2ue localista mediante laimplementación de algunos marcadores F)s (D6F6E8, D55FE???, D5F8G6,D5JF5E6?, DEEFC7G (!spino-a et al 5667a, y (D8F757, DJF7E?, D5EFG65,D5GFG5J, D5CF8G6, D57F85, DE5F55 (!spino-a et al 5667b diferentes a losF)s implementados por el resto de países desarrollados en el 0rea de lagen&tica (por e#emplo3 Argentina (;angitano et a l E??5, E??E, Brasil(;rattapaglia et a l E??5, Le$adoZou et a l E??5, FoaresVieira et a l E??5,"hile ("ifuentes et a l E??E, "olombia ( [unis et a l E???a, b, Bra$o et a lE??5, Holt et a l E??E, !l Fal$ador (*orales et a l E??E, !spa=a (Bosch et a lE???, ;usmao et a l E???, /ere-Le-aun et a l E???, Aler et a l E??5, Alonso eta l E??5, Arce et a l E??5, ;arcia et a l E??5, !stados <nidos (BudoXle etal 5666b, E??5a, b, BudoXle y Fprecher E??5, Le$adoZou et a l E??5, *&.ico()angelVillalobos et a l E??5, "erda1lores et a l E??E, /er4 (/ere- et a l E??Gy <ruguay (/agano et a l E??5

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!ste camino indi$idualista no es nada no$edoso, notese por e#emplo 2ue en la'ndia Mun "entro de dicho país ha ideado su propio m&todo de per%l del AD+ aba#o costo, y su procedimiento ha sido aceptado por los tribunalesM de esepaís (Fhapiro 566G Fin embago, en "osta )ica, hasta la fecha no se conoceninguna publicación cientí%ca formal 2ue respalde la utili-ación de talesmarcadores para propósitos forenses, por lo 2ue su e$entual uso no ha tenido

el proceso de aceptación formal 2ue sí se siguió en el caso de la 'ndia Adem0s,el utili-ar con propósitos forenses en "osta )ica algunos marcadores gen&ticos2ue no se usan en ning4n otro país, y 2ue no se han estudiado en ninguna otrapoblación del mundo, nos cerraba las puertas a la implantación de mecanismosinternacionales de acreditación de la calidad La tendencia actual en !uropa y+orte Am&rica, así como en el resto de 'beroam&rica+o es sino muy recientemente, en el a=o E??5, 2ue se inicia en "osta )ica laimplementación de los mismos F)s, 2ue se han $enido utili-ando conpropósitos forenses en el resto del mundo (BudoXle et al 5666a, b Feme#anteprocedimiento se est0 implementando en el laboratorio de paternidadresponsable de la "a#a "ostarricense del Feguro Focial (;olcher E??G/ermanece a4n pendiente la implementación de marcadores mitocondriales

("arracedo et a l E???, Alonso et a l E??E y del cromosoma [ (;ill  et a lE??5, Bosch et a l E??E, Oli$eira et a l E??E, aun cuando ya se ha empe-ado acaminar en este sentido ( 9im&ne-Arce E??? Fin embargo, es lamentable 2uehasta ahora en "osta )ica se ha $enido implementando cada grupo demarcadores, cuando ya est0n a punto de ser substituidos a ni$el mundialLa historia reciente nos muestra 2ue los marcadores gen&ticos de utilidadforense han $enido siendo substituidos en ciclos sucesi$os, por otrosmarcadores m0s informati$os, f0ciles de mane#ar e interpretar en ellaboratorio, m0s seguros, y algunas $eces m0s baratos "ada ciclo a tardadoun periodo de alrededor de cinco a=os !sta tendencia no se ha detenido a4n,por lo 2ue se puede pre$er al menos un cambio m0s La pró.ima generación demarcadores gen&ticos estar0 posiblemente dominada por los MmicroarraysM o

MmicrochipsM de AD+!n síntesis, la reciente utili-ación de la tecnología del AD+ para la identi%caciónindi$idual a traído consigo una re$olución en las ciencias forenses La senda aseguir es muy simple, ya 2ue son muchos los países 2ue la han ido recorriendoantes Folo nos 2ueda estar alerta y esperar 2ue las autoridades de "osta )icasepan mantenerse a la altura de los tiempos, y así puedan utili-ar todo elpotencial de esta 4til herramienta al ser$icio de la #usticia para el bene%cio delpueblo de "osta )icaR%su%nLa reciente utili-ación de la tecnología del AD+ para la identi%cación indi$iduala traído consigo una re$olución en las ciencias forenses, 2ue ha alcan-adotambi&n a la America Latina !l an0lisis histórico muestra 2ue en "osta )ica sehan logrado importantes a$ances y en la actualidad se encuentra consolidadoel traba#o con los F)s, y se est0n en proceso de implementación losmarcadores de AD+mt y del cromosoma [ Fin embargo, la incorporación de lasinno$aciones de la gen&tica forense se ha $enido reali-ando, en forma cíclica,de 8 a 5? a=os tarde respecto a los paises desarrollados en este campo Feespera un cambio de actitud en el futuro, al estar disponible una nue$ageneración de marcadores de AD+, 2ue permita así utili-ar en forma pronta,todo el potencial de esta 4til t&cnología

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Forensic implementation of DNA technology in Costa Rica: a retrospective analysis. Lareciente %tilizaci&n de la tecnolog'a del $() para la identificaci&n indi*id%al a tra'do consigo %nare*ol%ci&n en las ciencias forenses+ ,%e ha alcanzado tambin a la $merica Latina. l análisis

hist&rico m%estra ,%e en osta 0ica se han logrado importantes a*ances 1 en la act%alidad seenc%entra consolidado el trabajo con los 230s+ 1 se están en proceso de implementaci&n losmarcadores de $()mt 1 del cromosoma 4. 2in embargo+ la incorporaci&n de las inno*aciones de lagentica forense se ha *enido realizando+ c'clicamente+ de 5 a 6 a7os tarde respecto a los paisesdesarrollados en este campo. 2e espera %n cambio de actit%d en el f%t%ro+ al estar disponiblesn%e*as generaciones de marcadores de $()+ ,%e permitan explotar a corto plazo todo el potencialde esta til herramienta al ser*icio de la j%sticia. 0e*. 9iol. 3rop. 5;<: =>5-?. p%b 66@ (ic 5.

Key words: osta 0ica+ ()$ technolog1+ pop%lation st%dies+ Aorensic genetics+ paternit1 test.

Palabras clave: osta 0ica+ $()+ est%dios poblacionales+ gentica forense+ pr%eba de paternidad.

l desc%brimiento en >86 de los polimorfismos del $() en el genoma h%mano 1 la demostraci&n

de ,%e este rico acer*o de *ariabilidad está ampliamente distrib%ido en las poblaciones h%manas+permiti& ,%e los cient'ficos forenses reconocieran el enorme potencial ,%e ofrece el $() paraidentificar criminales a partir de las m%estras biol&gicas dejadas en la escena del crimen. $s'+ pocotiempo desp%s+ los trib%nales de pa'ses como Bnglaterra 1 .CC. admitieron las e*idencias de

 $() en litigaciones criminales 1 ci*iles ;haDrabort1 1 Eidd >><+ lo ,%e a s% *ez fa*oreci& ,%e s%%tilizaci&n se extendiera rápidamente a todo el m%ndo.

l %so de la reacci&n en cadena de la polimerasa ;0< para la caracterizaci&n del $() h%manoha proporcionado %na poderosa herramienta para los análisis forenses 1 de paternidad ;!or,%era 19%dowle >>8<. on los loci o marcadores de F)30 ;nmero *ariable de repeticiones en serie<;9%dowle et al.  >>5a+ b<+ 230 ;repeticiones cortas en serie< ;dwards et al.  >>+ 9%dowle et

al.>>>< 1 2)s ;polimorfismos de n%cle&tidos nicos< ;haDrabort1 et al.  >>>+ !obling 66<disponibles en n%estros d'as+ el *alor del análisis de $() como herramienta de in*estigaci&n

forense es extraordinario debido al gran nmero de genotipos ,%e existe en la poblaci&n+ el c%alcond%ce a %na alta probabilidad de encontrar patrones genticos excl%si*os de cada indi*id%o.sto significa %na enorme probabilidad de excl%ir c%al,%ier indi*id%o falsamente ac%sado 1 %naposibilidad m%1 pe,%e7a de apareamiento err&neo ;haDrabort1 1 Eidd >><+ resol*iendo conm%cha confianza c%al,%ier disp%ta de paternidad ;ena 1 haDrabort1 >>@<.

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