Microbiologia observacion microscopica y medios de cultivo y aislamiento bacteriano

1º Practico de Microbiología

Nicolas Mora

EJEMPLOS PATOLOGÍASSthapylococcus Epidermidis Endocarditis subagudasSthapylococcus aureus Shock tóxico, osteomielitis maxilarMicrococcus Sp. Infecciones en amígdalas

FORMA:FORMA:TINCION:TINCION:AGRUPACIÓN:AGRUPACIÓN:

CocoCocoGram +Gram +RacimoRacimo


CocoCocoGram +Gram +CadenasCadenas

EJEMPLOS PATOLOGÍASStreptococcus mutans Inicio de placa cariogénicaStreptococcus agalactiae meningitisStreptococcus salivarius Caries dentales, sepsis


CocoCocoGram +Gram +TétradasTétradas

EJEMPLOS PATOLOGÍASMicococcus tetragenus Absesos en partes blandasMicrococcus sp Infecciones en Amigdalas


Bacilos pleomorficosBacilos pleomorficosGram +Gram +Empalizada letra ChicaEmpalizada letra Chica

EJEMPLOS PATOLOGÍASCorynebacterium sp Abceso pulmonar, endocarditis bacterianaListeria sp Gastroenteritis, meningitis


Bacilos finosBacilos finosGram +Gram +Aisladas, diplo, cadenas, Aisladas, diplo, cadenas, empalizadasempalizadas

EJEMPLOS PATOLOGÍASListeria sp Gastroenteritis, meningitisClostridium perfringes Micronecrosis y gangrena gaseosa


BaciloBaciloGram +Gram +CadenasCadenas

EJEMPLOS PATOLOGÍASBacillus rothia Caries dentales


CocoCocoGram -Gram -Diplo arriñonadoDiplo arriñonado

EJEMPLOS PATOLOGÍASNeisseria gonorrhoeae lesiones blanquecinas amarillentas en paladar, lengua, encia

FORMAS FORMAS LEVADURIFORMESLEVADURIFORMES

EJEMPLOS PATOLOGÍASCandida albicans Candidiasis, neumonitis


BacilosBacilosGram -Gram -AisladosAislados

EJEMPLOS PATOLOGÍASPseudomonas aeroginosa piocianosis


BacilosBacilosGram -Gram -Aislado, Aislado, diplo.diplo.

EJEMPLOS PATOLOGÍASKlebsiella pneumoniae infeccion en la mastoides


BacilosBacilosGram -Gram -AisladosAislados

EJEMPLOS PATOLOGÍASEcherichia coli sepsis bacteriana

BAAR Ziehl NielsenBAAR Ziehl Nielsen(Bacilos Acido Alcohol Resistentes(Bacilos Acido Alcohol Resistentes

Realización de Técnica de Gram1. Se toma una muestra por ejemplo una gota de saliva con una asa

estéril y la montamos sobre un portaobjeto limpio.2. Se fija la muestra al porta objetos para que el lavado y la aplicación

de colorantes no la arrastre, entonces se pasa sobre fuego a tal altura que la llama no queme nuestras manos y por ende tampoco las bacterias.

3. Luego se tiñe con cristal violeta, que aparte de dar coloración, inhibe las bacterias gram (+), se aplica este colorante durante 1 minuto y luego se lava.

4. Después del lavado se aplica Lugol, que va fijar el cristal violeta a la muestra. También se aplica durante 1 minuto y vuelvo a lavar la muestra.

5. Lugo por 20 segundos le aplico alcohol acetato, con el fin de decolorar las bacterias gram (-) que hasta acá eran de color violeta y gracias al alcohol se vuelven incoloras y vuelvo a lavar.

6. Por ultimo por 30 segundos aplico safranina, que le dará contraste a la muestra.

Factores de Virulencia

Agar Sangre ( 5% a 10%)α-hemólisis α-hemólisis : degradación parcial de la hemoglobina.(halo opaco)

β-hemólisis: degradación total de la hemoglobina.(halo transparente)

γ-hemólisis: no hay degradación.(sin halo)

Colonia bacteriana

β-hemólisis (transparente)

Agar sangreα-hemólisis

(opaco)γ-hemólisis (sin halo)

*En este medio crecen bacterias no exigentes y la mayoría de las exigentes. En este caso se sembraron bacterias hemolíticas.

*Con esto sabemos si la bacteria es capaz de romper la membrana de los glóbulos rojos o no.

Micrococo en agar sangre

Serratia

Esta bacteria tiene esta pigmentación roja naturalmente.

candida

Placas Petri en Agar Sangre

D= Desarrollo

S/D= Sin desarrollo

D

S/D

D

Placas Petri en Agar Nutritivo (es un agar básico)

D= Desarrollo

S/D= Sin desarrollo

DS/D

D

Petris en Agar Chocolate

D D

S/DD= Desarrollo

S/D= Sin desarrollo

Medio de cultivo Mconkey.

En este medio normalmente crecen bacterias no exigentes, es un medio básico o corriente.

En este caso crecen solamente bacilos Gram (-), ya que es un medio selectivo y diferencial gracias al cristal violeta (que le da la coloración al medio e inhibe a los gram (+)) y a las sales biliares respectivamente.

Medio de cultivo Mconkey.Acá tenemos una prueba para ver si estas bacterias, Scherichia coli y la klebsiella pneumonae, son lactosa (+) o (-).

A ambas placas se le agrega Lactosa y luego rojo neutro:

• si la bacteria es lactosa (+): las colonias se tiñeran de rojo, ya que el medio se ha vuelto mas ácido.

•Si la bacteria es lactosa (-): las colonias permanecerán incoloras y el medio no sufrirá cambios de pH.

Lactosa (+) Lactosa (-)

Medio de Cultivo Brind Parker

Brind Parker

colonia

colonia

S. epidermidis: esta bacteria es Lipasa (-), ya que al poseer un halo totalmente transparente nos indica que hay proteolisis, por ende la bacteria tiene proteasas, no hay lipasas.

proteolisis

S. aureus: esta bacteria es lipasa (+) ya que tiene un halo opaco y hacia el exterior un halo transparente, el halo opaco corresponde a lipasa o lecitinasa y el transparente a la proteolisis de las proteasas.

* Este medio es un medio enriquecido tiene yema de huevo lo que lo torna de un color amarillo opaco en el crecerán bacterias no exigentes y algunas exigentes.

DNAsaEl medio tiene ADN lo que pasa es que si esta bacteria tiene esta enzima va a degradar el ADN, si no la tiene el ADN va a permanecer en el medio.

Al medio que tiene ADN a las 24 horas le agrego HCl, este ADN va precipitar como un precipitado blanco. Si yo tengo una bacteria que tiene ADNasa lo que va a pasar es que alrededor no hay ADN porque lo degrado de la enzima, por lo tanto no hay ADN para ser precipitado por el HCl y este queda transparente, si fuera ADNasa (-) al agregar el HCl se vería blanco, turbio alrededor de la colonia.

DNAsa (+)

DNAsa (-)

CoagulasaEn un tubo se coloca plasma citratado de conejo y se le agrega cultivo puro de una cepa en estudio y se incuba. Si la bacteria tiene la enzima coagulasa, va a coagular este plasma, si no la tiene no coagula. Entonces en el tubo donde la sangre se coagula, se encuentran bacterias coagulasa (+).

Este método se usa para los staphylococcus para saber que especie es , porque hasta hace unos tiempos se consideraba que el único patógeno era el S. aureus este es coagulasa (+), no es el único , hay otros mas que se encuentran en el hocico de los animales.

Si la bacteria posee la coagulasa, transforma el fibrinogeno que posee el plasma en fibrina por eso forma el coagulo.

Esta prueba se pude hacer en tubos como en laminas, en las laminas vamos a ver grumos, aglutinación cuando es coagulasa (+)

Coagulasa (+)

Coagulasa (-)

Catalasa Actúa sobre el H2O2 (peroxido de hidrogeno). Se siembra en un tubo o lamina, en un medio que no tiene glóbulos rojos, la bacteria que queremos ver si produce la catalasa y se le agrega agua oxigenada , si tiene la enzima va a descomponer el agua oxigenada en O2 y H2O y lo que vamos a observar es el O2

en forma de burbuja. Si es negativa no hay producción de burbuja.

Factores Químicos o Físicos

En este laboratorio, para hacerles recuerdo, vimos una serie de tubos, cada uno con características diferentes, (diferentes niveles de PH o de salinidad o de oxigeno, etc.), para ver en cual de estas condiciones ciertas bacterias podían desarrollarse mejor. A mayor desarrollo de bacterias mayor opacidad en el fluido del tubo. (miren la foto, en el del medio hay mayor desarrollo).

También vimos unas placas Petri, si veíamos colonias la bacteria crecía en esa condición y si no hay colonias no crecía. ( las colonias estaban dadas por estrías en el gel).

Agar agar

Agar nutritivo

Agar sangre

clasificación tipo

E. coli No Si Si Bacteria no exigente

Bacilo gram (-)

S. Aureus No Si Si Bacteria no exigente

Coco racimo

S. Pyogenes No No Si Bacteria exigente

Coco gram (+)

Vibrio No Si Si Bacteria no exigente

Bacilo gram (-)

Prevotella no no no Bacteria exigente

Nutrientes

*el agar nutritivo es un agar básico no enriquecido.

Niveles de oxigeno21% 14-17% 2-8% clasificación

S:aureus si Si Si Aerobia facultativa

N gonorrea No Si No Microaerofila

L.perfungins No No Si Anaerobia

Micrococcus luteus

Si No No Aerobia

treponemas No No No Anaerobia estricta (-0.5%)

Niveles de Ph4 - 6 6 - 7 8 - 9 clasificación

Lactobacilo acidofilo

+ - - acidófila

Vibrio parahemolitico

- - + basófila

Streptococcus neumonian

- + - Neutrófila

Salinidad NaCl 0 0.9 4.5 1.5 clasificación

S.aureus + + + + No Halófilo o facultativo

E. coli + + - - No halófilo

Vibrio fisheri

- - + - Halófilo

Control de microorganismos

Bueno como recordaran en este laboratorio teníamos que medir los diametros de los halos producidos por antibióticos sobre algunas bacterias (halos de inhibición), según lo que median se evaluaba en una tabla adjunta si era sensible o resistente al antibiótico.

También vimos desinfectogramas, algo similar pero con desinfectantes, acá también mediamos halos pero no es necesario, basta con observar si hay existencia de halo o no, si hay halo la bacteria es sensible y si no lo hay es resistente.

Agar Miller HintonAntibiótico Sensible

(menor o igual a)CIP Ceprofloxacina 21 mm

SAM Ampicilina 15 mm

Pl Penicilina 20 mm

EM Eritromicina 13 mm

CXM Ceproxacimo? 18 mm

Éxito!

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