TINCIÓN NEGATIVA

TINCIÓN:

Es el proceso por el cual las moléculas de un colorante se absorben a una superficie.

El uso de colorantes permite cambiar el color de las células de los

microorganismos y poder realizar la observación en microscopio óptico.

TINCIONES ESPECIALES:

Son aquellas que utilizan para colorear y aislar varias estructuras, a veces se les utiliza como herramienta diagnostica. Existen distintos tipos:

FlagelosEsporas Cápsulas

corpúsculos

metacromáticos

TINCION NEGATIVA

Es una técnica que permite contrastar las muestras mediante una sustancia opaca a los fotones (microscopía óptica) o a los electrones (microscopía electrónica). Este método de tinción utiliza colorantes neutros o ácidos ya que tienen poca afinidad por la célula bacteriana.

La tinción negativa facilita las

observaciones de la morfología y

tamaño de las bacterias así como la

observación de la cápsula en algunas

especies bacterianas.

La cápsula es una estructura superficial mucosa, más o

menos gruesa que envuelve la pared celular formada por

polisacáridos o polipéptidos, que confiere protección a las

bacterias contra la desecación y la fagocitosis.

A consecuencia de su elevado contenido en agua, se tiñen

débilmente por los colorantes.

El colorante no tiñe los microorganismos, se queda alrededor de ellos, Se usa tinta china (suspensión de partículas de carbón

coloidal) o nigrosina (colorante negro insoluble en agua) para encontrar presencia de cápsulas alrededor de las células microbianas

y micóticas, ya que este elemento no se tiñe con bases.

MECANISMO DE ACCION DEL COLORANTE

En la tinción negativa se utilizan tintes ácidos, Los tintes ácidos poseen un cromógeno negativo que no penetra la célula de la

bacteria debido a la carga negativa en la pared celular. Por esta razón la tinción lucirá como una noche estrellada. La bacteria se

verá transparente y el fondo de la laminilla del color del tinte, que en este caso, es negro.

TINCIÓN NEGATIVA

MATERIAL Y EQUIPO

2 portaobjetos Asa bacteriológica

Aceite de inmersión Microscopio

Mechero Cultivos bacterianos

Tinta china Franela

Cronómetro Papel seda

Guantes Puente de tinción

TÉCNICA1. Esterilizar el asa y enfriarla

2. Colocar una pequeña gota de agua en el extremo de un portaobjetos desengrasado

3. Esterilizar nuevamente el asa y enfriarla

3. Tomar un pequeña cantidad del cultivo , con ayuda del asa hacer una extensión sobre el portaobjetos y enseguida colocar una

gota de tinta china mezclar cuidadosamente.

4. Distribuir la mezcla a lo ancho del portaobjeto, colocando otro portaobjeto perpendicular en ángulo de 45 grados sobre la

muestra.

5. Desplazar poco a poco el segundo portaobjeto a lo largo del primero para hacer una capa fina de la mezcla.

6. Dejar secar al aire.

7. Con el frotis hacia arriba, pasar 2-3 veces sobre la flama (con esto se fijaran las bacterias)

8. Observar al microscopio.

Cryptococcus neoformans en una tinción con tinta china

OBSERVACIONES

Se puede observar la cápsula

(es la capa que rodea la

esfera).

APLICACIÓN

En microbiología medica la demostración de la presencia de una capsula es un

medio para determinar la virulencia del microorganismo, es decir el grado hasta el

cual un patógeno puede causar una enfermedad.

Bacterias con cápsula: Klebsiella, Pasteurella, Bacillus, Escherichia, Haemoplhilus

Levadura con cápsula: Crytococcus

Klebsiella

pneumoniae

Glosario

Fotón: Partícula de luz que se propaga en el vacío

Tinta China: Utilizada para la observación de esporas (mecanismo de defensa) Y para la

tinción negativa, con la cual se observa la cápsula bacteriana

Microbiología Medica: Estudio del papel de los microbios en las enfermedades humanas.

Incluye el estudio de la patogénesis microbiana y la epidemiologia y está relacionada con el

estudio de la patología de la enfermedad y con la inmunología

BIBLIOGRAFIA:

Sitios Web:

http://trabajosmedicos.blogspot.mx/2011/12/tincion-de-tinta-china-cryptococcus.html

Consulta: 28 de septiembre del 2013

http://webcache.googleusercontent.com/search?q=cache:Ou0Rsm4ivQMJ:microdonto.files.wordpress.com/

2010/03/tecnicas-de-tincion.doc+&cd=8&hl=es-419&ct=clnk&gl=mx

Consulta: 28 de septiembre del 2013

http://www.geocities.ws/vidianne_mx/bactincionesbactyhon.pdf

Consulta: 28 de septiembre del 2013

Libros:

Waren Levinson, Ernest Jawets. Microbiología e inmunología, Editorial Legman 2da Edición.

Garcia Martos p, Fernández del barrio M.T, Paredes Salido F. Microbiología Clínica Practica, Editorial

servicio de publicaciones de la universidad de cáliz, 2da. Edición.

Tortora, Funke, Case. Introducción a la Microbiología, Editorial medica panamericana, 9ª Edición.