Medios de Cultivo

Dado el pequeño tamaño de los microorganismos, la cantidad de información que puede obtenerse de un individuo es muy limitada. Por ello es necesario el estudio de poblaciones, que contienen miles o millones de individuos. Estas poblaciones se obtienen al hacer crecer los microorganismos bajo condiciones más o menos bien definidas, se conocen como cultivos.

• La mezcla de sustancias, naturales, sintéticas o ambas, que permite el crecimiento y la reproducción de microorganismos o bien que permite mantener su viabilidad es lo que conocemos como Medio de Cultivo

• El agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparación de medios de cultivo. Se licúa completamente a la temperatura del agua hirviendo y se solidifica al enfriarse a 40 grados. Con mínimas excepciones no tiene efecto sobre el crecimiento de las bacterias y no es atacado por aquellas que crecen en él.

Medio de cultivo

Cultivo

Conceptos

Clasificación de los medios de Cultivo

Su consistencia

Su utilización

Su composición

Su origen

MEDIO DE CULTIVO SOLIDO

MEDIO DE CULTIVO LIQUIDO

MEDIO DE CULTIVO SEMI

SOLIDO

Según su consistencia

MEDIOS LÍQUIDOS

Llamado también caldo.

Según su Composición

• diluciones• homogenizar mezclas• enriquecer cultivos • rehidratar cepas

liofilizadas

USO:

MEDIOS SÓLIDOS

Llamado también

agar.

Se le añade 2% de agar.

En cajas petri o en

tubos

USO:

• Para separar microorganismos

• Para favorecer el desarrollo de colonias aisladas

Según su Composición

MEDIOS SEMISÓLIDOS

Consistencia leve o

gelatinosa.

Medio líquido al que se

adiciona agar (0.4 a 0.8%).

Según su Composición

USO:

• Para determinar la movilidad de los microorganismos microaerófilos.

MEDIO COMÚN

Contiene los nutrientes mínimos necesarios para el desarrollo de bacterias

poco exigentes: caldo común, caldo carne, etc.

Según su Utilidad

MEDIO DE ENRIQUECIMIENTO

Son medios líquidos que favorecen el crecimiento de un tipo de microorganismo en particular.

Permite aumentar el número de microorganismos de ese tipo.

Según su Utilidad

MEDIO ENRIQUECIDO

Se le agrega una sustancia que aumenta el poder nutritivo.

Aporta algún factor de crecimiento necesario para el microorganismo

que el medio no lo posea.

Según su Utilidad

MEDIO SELECTIVO

Favorece el crecimiento de un grupo de microorganismos e inhiben el crecimiento de otros.

Útiles en muestras mixtas.

Al medio se le adiciona sustancias inhibitorias como antibióticos o ciertos colorantes.

Según su Utilidad

MEDIO DIFERENCIAL

Permite diferenciar bioquímicamente a las

bacterias por su actividad metabólica.

Revela características fisiológicas de los microorganismos.

Según su Utilidad

MEDIO SELECTIVO DIFERENCIAL

Contiene sustancias inhibidoras y sustancias

diferenciales.

El medio Sal Manitol para Staphylococcus

Según su Utilidad

MEDIO DE TRANSPORTE

Medio líquido o semisólido.

Permite el mantenimiento de muestras clínicas

Contiene agua y amortiguadores del pH.

Según su Utilidad

Pesar Añadir agua Someter a baño maría

Colocar en cajas Petri o

tubos

Preparación de Medios de Cultivo

Medios de Cultivo Agar nutritivo• Gérmenes• Bacterias

Agar sangre• Estreptococos• Staphylococcus• S. Mitis• S. Pyogenes

Agar Chocolate• Haemophilus

influenzae• Bacterias

Agar cistina-lactosa deficiente en electrólitos o CLED• Proteus• organismos urinarios

Agar MacConkey•Bacterias gram negativas•Escherichia coli•Enterobacter•Klebsiella•Salmonella

Agar Manitol salado•Bacterias gram negativas•Staphylococci•'Micrococcaceae

FISIOLOGÍA BACTERIANA

Crecimiento: es el aumento ordenado de todos los componentes celulares → Duplicación celular

Metabolismo: son los pasos intermedios entre la captación de nutrientes y la división celular.

Anabolismo Catabolismo (Síntesis) (Destrucción)

H2O

Macronutrientes

Micronutrientes

Hierro

Factores de crecimiento

Nutrientes que se emplean en la biosíntesis y producción de Energía

• No todos los microorganismos responden de la misma manera a los factores ambientales, lo que para unos puede ser beneficioso para otros es perjudicial

• Los requerimientos para el crecimiento microbiano se pueden dividir en dos categorías:

• FISICOS: QUIMICOS:– TEMPERATURA *AGUA– pH *FUENTE DE C Y DE N– PRESION OSMOTICA *SUSTANCIAS MINERALES

*OXIGENO*FACTORES ORGANICOS

* FACTORES DE CRECIMIENTO

FACTORES AMBIENTALES SOBRE EL CRECIMIENTO BACTERIANO

TEMPERATURAS CARDINALES: Tº MAXIMA, Tº OPTIMA Y Tº MINIMA

• Psicrófilas = 0 - 20ºC– Pseudomonas, Listeria

• Mesófilas = 20 - 45ºC– Staphylococcus, Streptococcus

• Termófilas = 55ºC o más– No patógenas

• Estenotérmicos = 35 - 36ºC– Neisseria

• Euritérmicos = 0- 44ºC– Enterococcus

Requerimientos de temperatura:

22

• Neutrófilas = 5,5 - 8,0– Staphylococcus

• Acidófilas = 0,0 - 5,5– Lactobacillus

• Alcalófilas = 8,0 - 11,5– Vibrio

Requerimientos de pH:

• Todos los organismos requieren H2O para vivir.

• Halófilos: microorganismos que viven en altas concentraciones de sales.algunas bacterias se han adaptado muy bien a ambientes con altas concentraciones de sal (nacl): – halotolarentes,(toleran

conentraciones de nacl) – halófilas ( requieren nacl para su

crecimiento, moderados (6-15%) y extremos (15-30% nacl).

• Osmófilos: microorganismos que viven en altas concentraciones de azúcares.

• Xerófilos: microorganismos que viven en ambientes secos.

DISPONIBLIDAD DE AGUA:

Crecimiento de algunas bacterias

depende de la presencia de oxigeno

(aerobias y facultativas)

Otras mueren (anaeróbicas)

La utilización de O2 genera productos

tóxicos como superoxido y H2O2

Algunos ya aerobios y facultativos poseen enzimas superoxido dismutasa y catalasa

para detoxificar estos productos

Crecimiento aeróbico y anaeróbico:

Presencia de O2

Aerobios

ObligadosO2(21%)

FacultativosNo requieren crecen mejor

en presencia de O2

Anaerobios(ausenciaO2)

AerotolerantesNo requieren

crecen peor en O2

Extrictos, obligadosO%, letal

MicroaerofilosRequiere(1-15%)

• CUANDO INTRODUCIMOS UNA POBLACION DE MICROORGANISMOS DENTRO DE UN MEDIO DE CULTIVO LIQUIDO, CADA ORGANISMO PRESENTA CUATRO FASES DE CRECIMIENTO TIPICAS:

» FASE LAG (latencia)» FASE LOGARITMICA (LOG)» FASE ESTACIONARIA» FASE DE MUERTE.

• ESTAS CUATRO FASES FORMAN LA CURVA ESTANDAR DEL CRECIMIENTO BACTERIANO

CRECIEMIENTO EXPONENCIAL• N° CELULAS : 1 2 3 4 8• EXPONENTE 20 21 22 23 24

FASES DEL CRECIMIENTO

•Fase de latencia: período de adaptación , gran actividad metabólica, células no se dividen (min-horas )

•Fase exponencial o logarítmica (log): aumento regular de la población que se duplica a intervalos regulares de tiempo (G). •Los Bllactamicos actuan en esta fase

Fase estacionaria: cese del crecimiento por agotamiento de nutrientes, por acumulación de productos tóxicos, etc.N|°cel.nuevas=n°cel.que mueren

Fase de declinación o muerte: el número de células que mueren es mayor que el número de células que se dividen.↓cel. viables

Las propiedades de un microorganismo dependerán de la fase de la curva en que se encuentren (la producción de antibióticos se lleva a cabo en la fase estacionaria).

Se mide siguiendo los cambios en el numero de células o el peso de la biomasa celular.• El cálculo del número de células que existen en una suspensión se puede llevar a cabo mediante el

recuento celular (microscopía, número de colonias), masa celular (peso seco, medida del nitrógeno celular, turbidimetría) o actividad celular (grado de actividad bioquímica en relación al tamaño de la población). todos estos métodos se clasifican en dos apartados: métodos directos y métodos indirectos

• Recuentos pueden clasificarse en:

– directos e indirectos– viables o totales Métodos

MEDIDAS DEL CRECIMIENTO MICROBIANO:

*Recuento en el microscopio*Recuento en placas *Numero mas probable

Directo *Turbidimetrìa*Filtración *Diluciones

Indirecto

SALES DE TETRAZOLIUM

VIABLES

FILTRO MEMBRANA

BREED

PETROFHAUSSEN

EPIFLUORESCENCIA

TOTALES

DIRECTOS

NMP RECUENTO EN PLACA

VIABLES

INDIRECTOS

RECUENTOS

TUIRBIDIMETRIA

DILUCIONES: