Influencia de Agentes Quimicos y Fisicos en El Crecimiento Bacteriano

Universidad Nacional de Ingeniería

Facultad de Ingeniería Ambiental

CONTROL DEL

CRECIMIENTO

BACTERIANO

EFECTO DE LOS AGENTES FÍSICOS Y QUÍMICOS

Informe de laboratorio realizado el miércoles 21 de Mayo de 2014 para el

curso de Microbiología Ambiental (BO – 112)

Integrantes

Delfin Vargas Ricardo Javier 20132551I

Quispe Ochoa Jorge Arturo 20131322F

Contenido

Influencia de la temperatura ___________________________________________________________________________ 1

Introducción _________________________________________________________________________________________________ 1

Objetivos _____________________________________________________________________________________________________ 1

Metodología __________________________________________________________________________________________________ 1

Resultados ___________________________________________________________________________________________________ 1

Conclusiones _________________________________________________________________________________________________ 2

Discusiones __________________________________________________________________________________________________ 2

Influencia de agentes químicos: lejía, alcohol y NaCl_________________________________________________ 3

Introducción _________________________________________________________________________________________________ 3

Objetivos _____________________________________________________________________________________________________ 3

Metodología __________________________________________________________________________________________________ 3

Resultados ___________________________________________________________________________________________________ 3

Conclusiones _________________________________________________________________________________________________ 4

Discusiones __________________________________________________________________________________________________ 5

Influencia de agentes químicos: pasta de diente _____________________________________________________ 6

Introducción _________________________________________________________________________________________________ 6

Objetivos _____________________________________________________________________________________________________ 6

Metodología __________________________________________________________________________________________________ 6

Resultados ___________________________________________________________________________________________________ 6

Conclusiones _________________________________________________________________________________________________ 7

Discusiones __________________________________________________________________________________________________ 8

Influencia del pH _________________________________________________________________________________________ 9

Introducción _________________________________________________________________________________________________ 9

Objetivo: ______________________________________________________________________________________________________ 9

Metodología __________________________________________________________________________________________________ 9

Resultados ___________________________________________________________________________________________________ 9

Conclusiones _______________________________________________________________________________________________ 10

Discusiones ________________________________________________________________________________________________ 11

Antibiograma ___________________________________________________________________________________ 12

Introducción _______________________________________________________________________________________________ 12

Marco teórico ______________________________________________________________________________________________ 12

CUANTITATIVO (Método de dilución) _________________________________________________________________ 12

CUALITATIVO (Método de difusión en agar) __________________________________________________________ 12

Objetivos ___________________________________________________________________________________________________ 12

Metodología ________________________________________________________________________________________________ 13

CONTROL DEL CRECIMIENTO BACTERIANO: EFECTO DE LOS AGENTES FÍSICOS Y QUÍMICOS

Página 1

Influencia de la temperatura

INTRODUCCIÓN

En la siguiente práctica de laboratorio se estudió como era el crecimiento de E. coli a

distintas temperaturas, durante distintos tiempos. Los resultados fueron coherentes con

lo teoría.

OBJETIVOS

Determinar la inhibición bacteriana a medida que se aumenta la temperatura

Observación macroscópica de la muestras de E. coli

Comparar el resultado obtenido con el proceso de esterilización.

METODOLOGÍA

1. Se preparó un caldo nutritivo

2. Se agregó 10 ml de medio en tres tubos de ensayo

3. Se inoculó la cepa ( coliformes) en los tres tubos de ensayo

4. Se asignó un tubo de ensayo como tubo de control

5. Se calentó por baño maría a 60°C por 5 minutos un tubo de ensayo

6. Se calentó por baño maría a 100°C por 5 minutos un tubo de ensayo

7. Se incubaron los tres tubos de ensayo de 24 a 48 horas

8. Se realizó la lectura macroscópica

RESULTADOS

Al observar la turbidez de los tres tubos de ensayo se obtuvo la siguiente información.

1. El tubo de ensayo de control tuvo mayor turbidez, es decir se mostró más opáco.

2. El tubo de ensayo expuesto a baño maría a 60°C por 5 minutos presentó una ligera

turbidez, bastante menor en comparación con el tubo de control.

3. El tubo de ensayo expuesto a 100° C por 5 minutos presentaba un color casi

transparente.


Página 2

CONCLUSIONES

De lo observado y con base en la teoría se pudo concluir lo siguiente

1. La elevada turbidez en el tubo de ensayo de control, nos dice que E. coli creció sin

problemas, esto se debe a que antes de la incubación, no se realizó tipo de

calentamiento, es decir, no hubo reducción inicial de bacterias por calor.

2. La turbidez media del tubo de ensayo calentado a 60°C por 5 minutos, nos demuestra

que el calor tiene capacidad de inhibir el crecimiento bacteriano. No obstante, a

pesar del calentamiento hubo un significativo crecimiento bacteriano, por lo tanto

podemos decir que el calentamiento a 60°C por 5 minutos, no es un proceso de

esterilización.

3. De la casi transparencia del tubo de ensayo calentado a 100° C por 5 minutos,

podemos decir que la concentración de E. coli no desapareció, pero se redujo

considerablemente. El calentamiento a a 100°C por 5 minutos, tampoco es un

proceso de esterilización pero es más efectivo que el anterior en la inhibición del

crecimiento de E. coli

DISCUSIONES

De lo realizado anteriormente, se puede observar que al aumentar la temperatura de

calentamiento a un tiempo constante, 5 minutos, la concentración de E. coli disminuye.

Es decir, existe una relación proporcional inversa entre la temperatura de calentamiento

y la concentración de E. coli. Entonces si quisieramos buscar un proceso de

esterelización para E. coli, este podría ser un calentamiento a una temperatura mayor de

100°C, o también podría mantenerse la temperatura constante y aumentar el tiempo.

Un ejemplo de esto es el uso de las teteras domésticas para hervir agua, la tetera emite

un silbido cuando la velocidad de difusión del vapor de agua aumenta, indicando que el

agua está ebulliendo (𝑇𝑒𝑏 = 100°C), como el calentamiento se realizó durante un tiempo

considerable (de 10 a 15 minutos) este proceso permite que el agua hervida sea

saludable para el consumo humano, ya que presenta una concetración demasiada baja

de microorganismos.


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Influencia de agentes químicos: lejía, alcohol y NaCl

INTRODUCCIÓN

En la siguiente práctica de laboratorio se estudió como era el crecimiento de E. coli en

presencia de lejía, alcohol y cloruro de sodio. Los resultados fueron coherentes con la

teoría.

OBJETIVOS

Determinar la inhibición bacteriana ante la presencia de lejía

Determinar la inhibición bacteriana ante la presencia de alcohol

Determinar la inhibición bacteriana ante la presencia de una solución de NaCl

Comparar la eficacia inhibitoria de los tres agentes químicos utilizados

METODOLOGÍA

1. Se preparó un caldo nutritivo

2. Se vertió 10 mL de caldo en 4 tubos de ensayo

3. Se inocularon los tubos de ensayo con E. coli

4. Se designó un tubo de ensayo como tubo de control.

5. En un tubo de ensayo se agregó lejía, en otro alcohol y en el último, una solución de

NaCl al 5%

6. Se sembró cada tubo de ensayo, utilizando el asa de kolle, en una placa Petri con el

medio Plate Count Agar

7. Se incubaron los tubos de ensayo y la placa de Petri por 47horas

8. Se realizó la lectura macroscópica

RESULTADOS

Al observar la turbidez de los cuatro tubos de ensayo se obtuvo la siguiente información.

1. El tubo de ensayo de control tuvo mayor turbidez, es decir se mostró más opáco.

2. El tubo de ensayo con lejía tenía una apariencia totalmente traslucida.

3. En el tubo de ensayo con alcohol se observó una leve turbidez.


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4. En el tubo de ensayo con solución de NaCl al 5%, se observó una turbidez similar al

tubo de ensayo de control

Al observar el número de colonias de la placa petri se obtuvo la siguiente información.

1. El el cultivo proveniente del tubo de ensayo control, se observaron un gran número

de colonias.

2. En el cultivo proveniente del tubo de ensayo con lejía solo se observaron dos

colonias.

3. En el cultivo proveniente del tubo de ensayo con alcohol se apreciaron pocas

colonias, en comparación al cultivo de control

4. En el cultivo proveniente del tubo de ensayo con NaCl al 5% se observaron un gran

número de colonias, similar al cultivo de control.

CONCLUSIONES

De lo observado en los tubos de ensayo, la placas petri y con base en la teoría se pudo

concluir lo siguiente

1. La elevada turbidez en el tubo de ensayo de control y el gran número de colonias en

el cultivo, nos dice que E. coli creció sin inconvenientes, porque al tubo de ensayo no

se le agregó ningun agente inhibidor.

2. La transparencia del tubo de ensayo con lejía y las dos colonias observadas en el

cultivo, nos muestra que la lejía inhibe el crecimiento bacteriano y de manera

considerable, mas no del todo. Es decir es un eficaz agente desinfectante.

3. La turbidez media del tubo de ensayo con alcohol y las pocas colonias presentes en

el cultivo, permite inferir que el alcohol tiene una ligera capacidad para inhibir el

crecimiento de E. coli.

4. El NaCl al 5% no es un agente inhibidor del crecimiento de E. coli, ya que a pesar de

su presencia en el caldo nutritivo, la bacteria creció en el tubo de ensayo y la placa

petri como si fuese la muestra de control.


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DISCUSIONES

Según la Federación Nacional de Asociaciones de Fabricantes de Lejía y derivados, la

lejía tiene una gran variedad de usos domésticos (ver.

http://fenalyd.com/index.php?m=Derivados ), y en la mayoría de estos procesos la lejía

actua como agente desinfectante. Y efectivamente, con los resultados de esta práctica

podemos cerciorar que la lejía tiene un alto potencial para la eliminación de bacterias,

casi en su totalidad. Asu vez, el alcohol también se utiliza como desinfectante en heridas

y en laboratorio, debido a su capacidad para eliminar la carga bacteriana. Sin embargo,

se pudo apreciar una notable diferencia entre la capacidad desinfectante del alcohol y la

lejía, si es así, entonces ¿Por qué el alcohol se sigue utilizando y no ha sido reemplazado

del todo por la lejía? La respuesta radica en las propiedades físicas de estas 2 sustancias,

el alcohol es mucho más volatil que la lejía y puede evaporarse más rápidamente,

además que el hipoclorito de sodio es un agente oxidante bastante fuerte y al mezclarse

con otras sustancias puede reaccionar generando productos desconocidos.

http://fenalyd.com/index.php?m=Derivados


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Influencia de agentes químicos: pasta de diente

INTRODUCCIÓN

En la siguiente práctica de laboratorio se estudió como era el crecimiento de E. coli frente

a la presencia de 4 pastas de dentales: Colgate total 12, Colgate triple acción, Kolynos y

Dento.

OBJETIVOS

Determinar la efectividad antibacteriana de las pastas dentales.

Comparar la efectividad antibacteriana entre las pastas dentales.

METODOLOGÍA

1. Se escogieron 4 pastas dentales diferentes: Colgate 12 horas, Colgate triple acción,

Kolinos, Dento

2. Se sembraron por diseminación una muestra de saliva de dos personas diferentes,

en una placa Petri con el medio Plate Count Agar

3. Se hizo una divison imaginaria de 4 cuadrantes en la placa Petri

4. Se agregó una pequeña cantidad de pasta dental a cada cuadrante respectivo

5. Se incubaron las placas petri.

6. Se volteó la placa pasada las 24 horas de estar en la incubadora, para eliminar el agua

que se podía haber quedado en la placa

7. Luego de 48 horas aproximadamente, se pasó a hacer la lectura macroscópica de la

placa

RESULTADOS

De la observación macroscópica de la placa se pudo obtener algunas de estos resultados:

1. El resultado de la pasta dental Colgate 12 horas (1) , se perdió debido al agua que se

encontraba en ese cuadrante.

2. En el cuadrante de Colgate triple acción (2), se observó un numero bajo de colonias

y un halo formado alrededor de la pasta agregada de 3 cm de diámetro


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3. En el cuadrante de Kolinos (3) , se observó casi el mismo número de colonias que el

segundo cuadrante y un halo formado alrededor de 2.5 cm de diámetro

4. En el cuadrante de Dento (4), se observó un mayor número de colonias, respecto a

los dos cuadrantes anteriores y el halo formado es de 2 cm de diametro

CONCLUSIONES

1. Colgate triple acción obtuvo el mayor diámetro alrededor de la pasta agregada,

además que tiene un menor crecimiento bacteriano alrededor, cual nos indica inhibe

mas a este tipo de bacterias que las otras dos pastas

2. Kolinos es el segundo mejor inhibidor, si bien tiene el mismo numero de colonias

alrededor, el diámetro del halo es menor al formado por Colgate triple accion

3. Si bien Colgate triple acción es el mejor agente inhibidor, eso no la hace la mejor

pasta de diente que se puede utilizar ya que las bacterias de la boca son diferentes a

la bacteria utilizada.

4. En el cuadrante de Dento, se observo mayor crecimiento bacteriano y un halo de

diámetro menor a comparación de los otros dos, lo cual no la hace una mala pasta

dental según lo especificado en el punto numero 3


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DISCUSIONES

Luego de lo ocurrido con la pasta colgate total 12, podemos decir que trabajar con pasta

de dientes requiere que se considere el comportamiento de la pasta ante el

calentamiento, así como la consistencia de esta. Ya que al parecer, colgate total 12 al

calentarse se diluye con mayor facilidad haciendo más sencilla su dispersión.

Como se mencionó en conclusiones E. coli es una enterobacteria que, por lo general, no

debería estar presente en el tracto bucal, y si hay es producto de la ingesta de alimentos

contaminados. Es por eso que el concluir que una pasta es mejor que otra por inhibir

más a E. coli no sería correcto. No obstante si la bacteria utilizada hubiera sido

Streptococcus mutans mutans, podría haberse obtenido una mejor comparación de

calidad.


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Influencia del pH

INTRODUCCIÓN

En la siguiente práctica de laboratorio se estudió como era el crecimiento de E. coli en

un medio ácido, básico y neutro. Los resultados fueron coherentes con la teoría.

OBJETIVO:

Determinar la influencia del ph en el crecimiento bacteriano

Obtener un caldo nutritivo de pH básico y ácido.

Observar entre que intervalo de ph puede aún existir crecimiento bacteriano

METODOLOGÍA

1. Se preparó el caldo nutritivo

2. Se utilizaron tres tubos de ensayo, en los cuales se agregó 10 mL de caldo en cada

tubo de ensayo

3. Se separó el tubo de ensayo de control (tubo N°5), al tubo de ensayo N°4 se le agrego

3.5 ml de NaOH (0.1 N) y al tubo de ensayo restante (sin número) se le agrego 4.5 ml

de HCl (0.1 N)

4. Con ayuda de un potenciometro se realizo la medición del pH de cada tubo de ensayo.

5. Se inoculo E. coli en los tubos de ensayo

6. Se llevó a incubar las tres muestras por 46 horas a 37 C°

7. Se realizó la lectura de las muestras (macroscópicas)

RESULTADOS

De la medición del pH de las soluciones con el potenciómetro se obtuvo lo siguiente.

pH Característica del caldo

Tubo N°5 6.9 Neutro

Tubo N°4 10.279 Básico

Tubo sin número 2.264 Ácido


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De lo observado en los tubos de ensayo se obtuvieron los siguientes resultados.

1. En el tubo de ensayo control (tubo N°5) se observa mucha turbidez.

2. En el tubo de ensayo N° 4 se observa que existe una turbidez bastante leve.

3. El tubo de ensayo sin número se mostró totalmente traslúcido.

CONCLUSIONES

De lo observado y con base en la teoría se pudo concluir lo siguiente

1. La elevada turbidez en el tubo de ensayo de control, nos dice que E. coli creció sin

problemas, esto se debe a que E. coli es una bacteria neutrófila y un pH de 6.9

favorece su crecimiento.

2. En el tubo de ensayo N°4 hubó un muy bajo crecimiento de E. coli debido a que el

medio en el que se incubó era básico (pH=10. 279).

3. El que no se haya apreciado turbidez alguna en el tubo de ensayo sin número, es

prueba de que en un medio muy ácido (pH= 2.264) E. coli no se desarrolla.


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DISCUSIONES

A pesar de que haya sido poco, el hecho de que E. coli haya crecido en un medio de pH=

10.279, nos dice que algunas bacterias de E. coli tiene la capacidad de adaptarse a un

medio de por los menos ±3.2 puntos de pH, con respecto al 7 (pH neutro), es decir el

posible rango de pH para que E. coli crezca es de 𝑝𝐻 = [3.8, 10.2] aproximadamente. No

obstante ante una variación mayor E. coli aparentemente deja de crecer, un cultivo en

placa petri del tubo de ensayo con medio ácido hubiera confirmado del todo esto último.


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Antibiograma

INTRODUCCIÓN

Esta práctica no se realizó en laboratorio por falta de material, más no podemos

prescindir de ella, es por eso que a continuación se describirá como se hubiese realizado

el experimento de haberse tenido los materiales.

MARCO TEÓRICO

El antibiograma es una prueba que sea usa para determinar la sensibilidad de una

colonia bacteriana a un antibiótico o grupo de antibióticos.

Permite evaluar la eficacia de un antibiótico sobre una bacteria. Ya que permite definir

para cada antibiótico, si la bacteria es sensible (antibiótico eficaz), intermedio

(antibiótico eficaz en ciertas condiciones) o resistente (antibiótico ineficaz)..

Entre los métodos para la realización del antibiograma podemos dividirlos en:

CUANTITATIVO (Método de dilución)

Consiste en la determinación de la bacteria en concentraciones diferentes de un

mismo antibiótico. Se observa el crecimiento de microorganismos mediante la

aparición de turbidez.

CUALITATIVO (Método de difusión en agar)

Es el más usado en el laboratorio y consiste en que se determine la

susceptibilidad ante diversos antibióticos entre bacterias de la misma especie.

Este método tiene varias variantes como el método E-test, Kirby Bauer, etc.

OBJETIVOS

Determinar la susceptibilidad de una colonia bacteriana al antibiótico empleado

Selección de un antibiótico que inhiba la colonia bacteriana


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METODOLOGÍA

1. Se siembra coliformes en una placa petri.

2. Elegimos el antibiótico a usar

3. Se sobreponen los discos del antibiótico distribuidos de tal manera que no estén

demasiado juntos uno del otro

4. Incubar 24 horas

5. Medir el diametro que se produce alrededor del disco del antibiótico

6. Comparar con tablas establecidas


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Una de las tablas establecidas que se tienen seria (Método Kirby Bauer)

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