Biología 3725 L

Observar fluorescencia en

UV

ENTEROLERTCOLILERT

¿Por qué en un resultado positivo siempre cambia a amarillo intenso pero solo algunos emiten fluorescencia?

¿Cuál es el propósito de utilizar enterolert, que nos dice un resultado positivo?

Lugar de Lugar de Lugar de Lugar de muestreomuestreomuestreomuestreo

ColilertColilertColilertColilert EnterolertEnterolertEnterolertEnterolert Control PositivoControl PositivoControl PositivoControl Positivo Control NegativoControl NegativoControl NegativoControl Negativo

¿Amarillo intenso?

¿Fluorescencia? Coliforme Total Swab

Coliforme Fecal¿Fluorescencia? Medio¿Fluorescencia? Medio

Enterococos

¿Cuál es la importancia de los controles?

� Estudiar el efecto de factores físicos (temperatura) y químicos en los microorganismos.

� Distinguir entre desinfectante y antisépticos

� Observar el efecto de los agentes � Observar el efecto de los agentes antimicrobianos (antibióticos) en distintos organismos (Gram + y Gram -)

� Entender el concepto de trasmisión de enfermedades.

Temperatura:Temperatura:Temperatura:Temperatura:

� Calor◦ Seco : gas, incineración, horno

◦ Húmedo:� Pasteurización: 63 C 30 min o 72 C 15 segundos. � Ebullición: 100 C 10 min , (no elimina endoesporas)� Autoclave: 121 C 15lbs 15 min

� Frío

********Destrucción total o de estructuras

� FiltraciónFiltraciónFiltraciónFiltración◦ Remoción de microorganismos de líquidos que se dañan por el calor

� Antibióticos, ciertos cultivos, medicinas

RadiaciRadiaciRadiaciRadiacióóóón:n:n:n:� Rayos gamma

� Rayos XRayos X� (formación radicales libres – rompen bandas de ADN)

� Ultravioleta◦ Mutaciones genes◦ Dimerización de timina� Distorsión configuración ADN

� Replicación y transcripción durante síntesis de proteínas

Radiación (Rayos gamma)Radiación (Rayos gamma)Radiación (Rayos gamma)Radiación (Rayos gamma)

Esterilización :Esterilización :Esterilización :Esterilización :

• Rayos liberados por material radiactivo (cobalto 60)

• Altamente energéticos

• Arrancan (e-) a todo tipo de macromolécula (proteínas, DNA, etc.)

Se usan para esterilizar, plásticos, equipo médico, y reducir la carga microbiológica de alimentos.

� En esta práctica determinaremos el efecto de la temperatura en diferentes bacterias (Gram positiva y Gram negativa)

� Para esto inocularemos en 4 tubos el organismo dado y se incubara a diferentes organismo dado y se incubara a diferentes temperaturas.

� Observar y analizar.

4 C 25 C 37 C 45 C

� Microbiostático:◦ Previene el crecimiento y replicación de un microorganismo

� Microbicida: � Microbicida: ◦ Mata directamente al microorganismo

Desinfectante Sustancia química que previene contaminación e infección empleada en superficies. Ejemplo: compuestos fenólicos , alcoholes

Antiséptico-Sustancia química que previene contaminación e infección empleada en superficies corporales. Ejemplo: yodo, compuestos de amonio cuaternario

Desinfectante Antiséptico

Ejemplo: yodo, compuestos de amonio cuaternario (Zephiran).

� En esta práctica determinaremos el efecto de desinfectantes y antisépticos en el crecimiento de diferentas microorganismos.

#1 Inocule la placa con el organismo brindado

#2 Coloque un disco impregnado con: Clorox, H2O2, Lysol, alcohol, Listerin, Nyquil, Betadine, Zefiran. Un área del plato debe tener un control Negativo.área del plato debe tener un control Negativo.

# 3 Incube por 24 horas a 37 °C.

Swab

Antibiótico: compuestos químicos excretados por microorganismos para el control de enfermedades infecciosas

(Natural, sintético o semisintético)

Clasificación:�Amplio espectro: ◦ Elimina Gram + y Gram –� (Ampicilina, Estreptomicina, Cloramfenicol, Gentamicina)

� Espectro reducido: ◦ Elimina Gram positivos o Gram negativos � (Penicilina G, Bacitracina, Polimixina)

� Drogas AntimicrobialesMétodo Kirby-Bauer

Se colocan disco impregnados con antibióticos

� Halo inhibición

� Antibióticos impregnados en discos de papel.

� Platos Petri con Agar( Mueller Hinton Agar, Plate Count Agar).

� Cultivo bacteriano líquido en fase log de crecimiento.crecimiento.

� Fundamento: ◦ Difusión radial del antibiótico desde el disco hacia el agar, creándose un gradiente de difusión.

http://academic.mwsc.edu/jcbaker/images/antibiotics.jpg

� Inocular Bacteria

◦ Utilizar “swab” en 3 direcciones

� Colocar antibióticos

◦ Tomar disco con pinzas

� Alcohol- Flamear-Colocar discos� Alcohol- Flamear-Colocar discos

� PRECAUCION : Evitar contacto de pinzas calientes con Evitar contacto de pinzas calientes con Evitar contacto de pinzas calientes con Evitar contacto de pinzas calientes con alcohol y además, debe mantener el alcohol lejos del alcohol y además, debe mantener el alcohol lejos del alcohol y además, debe mantener el alcohol lejos del alcohol y además, debe mantener el alcohol lejos del mechero.mechero.mechero.mechero.

� Incubar por 24 horas a 37 °C .

� Observar, medir halo de inhibición y documentar crecimiento

� Se dividen por parejas. Un estudiante se pone un guante y coge el dulce de la placa asépticamente, lo manipula por 30 segundos y luego lo devuelve a la placa asépticamente.

� De manera ordenada el estudiante con la placa #1

le da la mano al estudiante con la placa #2 (el #2 al #3 etc.) hasta que todos se saluden.

Luego su pareja le tomará una muestra de la mano con un � Luego su pareja le tomará una muestra de la mano con un “swab” y lo pasará a una placa, esa placa se incubara a 37 °C .

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� ¿Qué factores afectan el crecimiento microbiano?

� ¿ Cuál es la diferencia entre un desinfectante y un antiséptico?

¿ Qué es un antibiótico?� ¿ Qué es un antibiótico?

� ¿ Qué efecto tienen los agentes antimicrobianos sobre las bacterias?

� ¿ Qué es el Método Kirby-Bauer?

� ¿ Qué esperamos del experimento de trasmisión de gérmenes?