BIOQUÍMICA, estudio de aminoácidos, cromatografía de aminoácidos y espectrofotometría,
Medio absorvente Intensidad transmisión IOIO Espectroscopía Molecular (Espectrofotometría...
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Medio absorvente
Intensidadtransmisión
IO
Espectroscopía Molecular(Espectrofotometría UV-Vis.)
I
Condiciones para aplicación cuantitativa
1- Selectividad al analito que se desea analizar2- Que esté libre de interferencias que afecten el resultado analítico ó que las interferencias se puedan controlar3- Que tenga alta precisión y exactitud. 4- Que tenga una alta sensibilidad5- Límite de detección corresponda a una concentración baja
Ley de Lambert
Log I0 = K x L
I
L espesor del medio
K coeficiente de extinción
Ley de Beer
Log I0 = K x C IC concentración de la Sustancia absorbente
Ley de Lambert y Beer
Log I0 = e. b. c Ie coeficiente de extinción molar
S
P0 P
dx espesor de sección
dn nº partículas en área S y espesor dx
cada partícula área ds
Px disminuye en – dPx
Px potencia que entra por sección
Probabilidad de captura de fotón ds/S (ds = a dn)
- dPx/Px = ds/S
P0
- dPx/Px =
n
a dn /S
P
0
- ln P/p0 = a . n /S Si Volumen = S.b
- ln P/P0 = a . b . C
T transmitancia A absorbancia
P/P0 = T y ( – ln T) = A
ln se convierte en log 2,3 dentro de a
cc
A
Desvios -
Desvios +
a) Sirve para soluciones diluidas < 10-3 M
Altas cc Se modifican : índice refracción e
Interacciones electrostáticas, formación de pares, etc. (desvíos -)
η (e = e verdadero η /(η 2+2)2 )
Desvíos de la ley
c) Desviaciones químicas aparentes, por ej. modificaciones de pH
CrO4= Cr2O7
= (desvíos +)
b) Desviaciones instrumentales
luz monocromática
Dispersión, monocromador, (desvíos -)
- log I / I0 = log I1 + I2 + I3 (dispersión, reflexión)
I01 + I02 + I03
M
I0 IT TT = IT / I0 solo tuboT
IM
TM = IM / I0 muestra + tubo
SOLO MUESTRA Tr = TM / TT Tr = IM / IT
T 0 % G0 = k P0 + G0
T 100 % G100 = k P0 + G0
T M GM = k PM + G0
IT
I0
Error Fotométrico Tipos y fuentes de incertidumbre en lecturas de
Transmitancia
Fuente típica Instrumento
Caso A St = k = k
a) Resolución Fotómetros baratos, escalas de la lectura limitada de medición pequeñas
b) Ruido de Johnson Espectrofotómetros y
(ruido térmico) Fotómetros IR
c) Corriente oscura Intensidad de la fuente y ruido del amplificador sensibilidad del detector son
bajas
Fuente típica Instrumento
Caso B St = k ( T2- T)1/2
a) Ruido de disparo Espectrofotómetros UV/Vis. del detector de fotones de alta calidad
Caso C St = k T
a) Incertidumbre Espectrofotómetros UV/Vis, en posición de la cubeta IR de alta calidad
b) Parpadeo de la fuente Espectrofotometros y fotómetros baratos
-log T = e.b.c
C = - log T / e.b
C = -0,434 ln T / e.b
dc = - 0,434 dT / e.b.T
dC/ C = 0,434 dT / T . log T
Error = (dC / C) / dT = 1 / T .ln T
Señal/Ruido = X media/desviación standard S =√ Σin (Xi – X)2
(n – 1)
Error
1/ T. ln T
Curva de Tayman y Lothian
Error 2,7 %
Instrumento de baja calidad
Rango de trabajo 30 – 70 % de T
Error mínimo 2,7 % a 0,36,8 % de T
A
Curva del error para instrumento de alta calidad
Rango de trabajo 10 – 80 % de T
Error mínimo 0,135 % T, Aº 0,2 a 2,00
Error