Itzam Adrián Morales - 2006 19875 - Sección A- Reporte No 2 Propiedades de los Aminoacidos.

8/4/2019 Itzam Adrin Morales - 2006 19875 - Seccin A- Reporte No 2 Propiedades de los Aminoacidos.

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aaUNIVERSIDAD SAN CARLOS DE GUATEMALA

FACULTAD DE INGENIERIA

ESCUELA DE INGENIERIA QUIMICA

ESCUELA DE QUMICA

BIOQUIMICA

LABORATORIO DE BIOQUMICA

REPORTE NO.2:

PROPIEDADES DE LOS AMINOCIDOS

ITZAM ADRIN MORALES

2006 19875

GUATEMALA 21 DE AGOSTO DE 2011


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RESUMEN

Los aminocidos son las estructuras generales de las protenas en la qumica dela vida lo cual constituyen una parte muy importante en el estudio de labioqumica como parte fundamental para la comprensin en la forma como

ciertos componentes fundamentales actan.

Debido a que son estructuras qumicas definidas con caractersticas encomn como ser: la presencia del grupo funcional amino y el cido carboxlico.Pero aun as cada aminocido se caracteriza por la el grupo funcional que estunido a la cadena ramificada del enlace del carbono alfa, este grupo funcional dala caracterstica especificas del aminocido. Debido a que estas caractersticaslas da un grupo funcional con propiedades qumicas conocidas, la identificacinse da a partir de reacciones qumicas en las cuales dan cambios de coloracinpor la accin que estas tienen en la polarizacin de la luz. As de esta manera se

da la identificacin cualitativa de diversos aminocidos con propiedadesespeciales.

En el laboratorio se realizo diversas pruebas existentes para laidentificacin de los aminocidos de acuerdo a su grupo funcional. Las pruebasque se realizarn fueron: Prueba de Elrick Diazzo, azufre reducido, pruebaxantoproteica, reaccin de Molich, prueba de nitropruisato de sodio, prueba denihidrina, prueba de Sakaguchi, y la reaccin de Hopkins. Cada a una de laspruebas fue hecha con diversos aminocidos los cuales se observo los cambiosesperados as como la negativa en algunas pruebas.

El experimento se realizo en el laboratorio de qumica de la escuela deingeniera qumica a temperatura ambiente y presin atmosfrica estndar.


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RESULTADOS

Tabla No. 1 Resultados de las diversas pruebas realizadas a losaminocidos.

PRUEBA AMINOACIDOSElrick Diazzo Fenilalanina Tirosina Histidina

+ + +Azufre reducido Cistina Cisteina

- -Xantoproteica Fenilalanina Cistina Tirosina

- + +Molich Arginina Tirosina Fenilalanina

- - -Nitroprusiato de

SodioCistina Cisteina

+ +Nihidrina Asparagina Alanina Hidroxiprolina

- - -No hubo cambios en la coloracin de de los

aminocidos.Sakaguchi Arginina Lisina Asparagina

+ - -Hopkins Tirosina Fenilalanina

- -

Fuente: Hoja de datos originales.


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PRUEBAS DE IDENTIFICACIN

Prueba No: 1

Nombre de la Prueba: Elrick Diazzo

Criterio de la prueba: La presencia de grupos imidazol o fenoles en la muestradan resultado positivo al reaccionar con diazida del cido

sulfanlico y forman productos de sustitucin que se

tornan de color rojo al alcalinizar el medio.

Reaccin:

1.1 Fenil alanina

N+

SO3-

N

+ C

CH2

NH2

H COO-

C

CH2

NH2

H COO-

N

N

SO3-

ci

i z

c s lf

ic

il l i

Compuesto color

marillo

Observacin: Al ser agregado el Hidrxido de amonio concentrado se observoun cambio de coloracin de incoloro a amarillo

Conclusin: La prueba es positiva debido a que la reaccin ocurri mostrando elanillo fenolico del aminocido seleccionado.


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1.2Tirosina

N+

SO3-

N

+ C

CH2

NH2

H COO-

OH

cidodiazobencenosulfnico

Tirosina

Compuesto coloramarillo

C

CH2

NH2

H COO-

O

N

N

SO3-

Observaciones: Al agregar el hidrxido de amonio concentrado hubo cambio decolor de marrn claro a marrn oscuro.

Conclusin: El resultado es positivo debido a que la reaccin mostro lapresencia de un anillo bencnico en la estructura del aminocido

seleccionado.

1.3 Histidina

N+

SO3-

N

+ C

CH2

NH2

H COO-

N

NH+

CH

ci

o

iazobencenosulf nico

Histi

ina

Compuesto color

mbaroscuro

N

N

SO3-

C

CH2

NH2

H COO-

N

NH+

C


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Observaciones: Al agregar el hidrxido de amonio la coloracin cambio deincoloro a mbar oscuro.

Conclusiones: La prueba resulto positiva detectando la presencia del grupoimidazol del aminocido seleccionado.

Prueba No: 2

Nombre de la prueba: Azufre reducido

Criterio de la prueba: Sirve para identificar aminocidos que tienen en sucomposicin azufre terminal. Si se forma un precipitado

de color negruzco no sindica que se ha formado sulfuro

de plomo, utilizndose el azufre del aminocido.

Reaccin:

2.1 Cistina

Observaciones:No se dio ningn cambio en la coloracin.

Conclusin: La prueba dio como resultado negativo, se puede concluir que lareaccin no sigui por los reactivos utilizados para esta prueba.


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2.2 Cisteina

CH

NH3+

COO-

CH2

SH

+ Na OH No hubo reaccin

Observaciones:No se dio ningn cambio en la coloracin al realizar la reaccin.

Conclusin: La prueba dio como resultado negativo, la reaccin no se dio porlos reactivos utilizados para esta prueba.

Prueba No: 3

Nombre de la prueba: Xantoproteica

Criterio de la prueba: Esta prueba est basada en la nitracin del anillobencnico con cido ntrico concentrado HNO3 dando

una coloracin amarillenta derivada de la nitracin del

benceno. Bajo las condiciones nicamente la tirosina

darn positivo, se hace ms difcil la nitracin de la

fenilalanina.


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Reaccin

3.1 Fenilalanina

CH COO

-

NH2

CH2

+ HNO3 No se da la reaccin

Observaciones: Al agregar el cido ntrico concentrado no se dio ningunareaccin o cambio de coloracin que marcara la nitracin del

anillo bencnico.

Conclusin: La prueba es negativa.

3.2Cistina

OH S

O

NH3+

SOH

O

NH3+

+ HNO3 No ay reacci n

Nota: Hubo cambio ecoloraci n

Observaciones: Se tomo como positiva pero de acuerdo a los criterios de laprueba su reaccin no se pudo dar por que el aminocido no

posee anillo bencnico. Debi formar otros productos que

dieron el cambio de coloracin.

Conclusin: La prueba es negativa.


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3.3 Tirosina

CH COO-

NH2

CH2

OH

+ HNO3 CH COO-

NH2

CH2

OHNH2

Observaciones: Al agregar hidrxido de sodio la muestra cambio de marrnclaro a amarillo claro lo que indico la nitracin del anillo

bencnico en la estructura del aminocido seleccionado.

Conclusiones: La prueba es positiva debido a que se corroboro la presencia delanillo bencnico.

Prueba No: 4

Nombre de la prueba: Molich

Criterios de la prueba: Sirve para detectar la formacin de derivados

aldehidicos que se condensan con alfa naftoldando un producto colorido violeta.


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Reaccin

4.1 Arginina

CH

NH2

CH3

CH2

CH2

CH2

NH

C+

NH2

NH2

+

OH

+ H2SO4No hay reaccin debido a queno existe carbohidratopresente.

Observaciones: Se observaron un cambio de coloracin de incoloro a amarilloplido, no se dio ningn anillo purpura.

Conclusiones: La prueba es negativa

4.2Tirosina

+

OH

+ H2SO4No hay reaccin debido a queno existe carbohidratopresente.

CH

NH3+

COO-

CH2

OH

Observaciones: En la reaccin se formo un precipitado marrn espeso, no sepresento el anillo purpuro.

Conclusiones: La prueba es negativa.


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4.3 Fenilalanina

CH COO-

NH2

CH2

+

OH

+ H2SO4

No se da la reaccin por no

poseer carbohidratos.

Observaciones: Se observo un cambio de coloracin de incolora a beige turbiocon la formacin de cierto precipitado.

Conclusiones: La prueba se considera negativa.

Prueba No: 5

Nombre de la prueba: Nitroprusiato de sodio

Criterio de la prueba: Los grupos sulfhidrilo libres de algunos aminocidos

reaccionan con el nitroprusiato de sodio en solucinamoniacal y toman color rojo. Los grupos disulfuro de la

cistina dan positiva la prueba.


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Reaccin

5.1 Cistina

OH S

O

NH3+

SOH

O

NH3+

+ 2Na+

Fe4-

CC

CC

N+

C

NN

NN

N

O+

NH3

S-OH

O

NH3+

Fe4-

CC

CC

N

C

NN

NN

N

O+

SH

+CH3

OH

O

NH3+

Cistina en solucin amoniacal

Nitroprusiato de sodio

Compuesto color amarillo

fuerte.

Observaciones: Se observo que al agregar la solucin amoniacal se torno decolor amarillo fuerte plido.

Conclusiones: La prueba se toma como positiva debido que se mostro la

presencia de azufre al reaccionar con el nitroprusiato de sodio apesar del color amarillo.


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5.2 Cisteina

OH SH

O

NH3+

+ 2Na+

Fe4-

CC

CC

N+

C

NN

NN

N

O+

NH3

S-OH

O

NH3+

Fe4-

CC

CC

N

C

NN

NN

N

O+

SH

+CH3

OH

O

NH3+

Cisteina en solucin amoniacal

Nitroprusiato de sodio

Compuesto color amarillofuerte.

Observaciones: Al ser agregado la solucin de amoniaco se formo unacoloracin amarilla fuerte.

Conclusiones: La prueba se toma como positiva a pesar del color amarillo.


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Prueba: 6

Nombre de la prueba: Nihidrina

Criterio de la prueba: Esta prueba es usualmente realizada como una reaccingeneral dada por el carbono primario y la amina y donde

el -carbono posee un hidrogeno. La prueba da positiva

al formarse un complejo color morado.

Reaccin:

6.1 Asparragina

O

OH

OH

O

+

CH COO-

NH2

CH2

C NH2

O

No se dio la reaccin de acuerdo alas observaciones.

6.2Alanina

O

OH

OH

O

+

CH COO-

NH2

CH2

CH3


6.3 Hidroxiprolina

O

OH

OH

O

+

CH

COO-

+H3N

OH


Observaciones: No se dio ningn cambio en la coloracin al agregar el reactivode nihidrina.

Conclusiones: La prueba se toma como negativa.


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Prueba No: 7

Nombre de la prueba: Sakaguchi

Criterio de la prueba: Indica la presencia del grupo funcional guanidinio, la culesta en el aminocido arginina . El grupo guanidinio en

solucin alcalina da una coloracin roja en presencia de -

naftol e hipoclorito de sodio.

Reaccin:

7.1 Arginina

C

H

+H3N

O-OC

CH2 NH C

NH

NH2

+

OH

+ NaOCl

C

H

+H3N

O-OC

CH2 NH C

NH

N

E- Naftol

Compuesto colornaranja


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Observaciones: Al agregar el alfa naftol a la muestra de aminocido estacambio de coloracin de incolora a anaranjado.

Conclusin: La prueba se toma como negativa.

7.2 Lisina

CH

+H3N

COO-

CH2

NH3+

+

OH

+ NaOCl

E- Naftol

No hay reaccin

7.3 Asparragina

CH

+H3N

COO-

C

NH2O+

OH

+ NaOCl

E- Naftol

No hay reaccin

Observaciones: Se observo un cambio de observacin de incoloro a amarillopalido.

Conclusiones: Aunque se haya observado cambio en la coloracin al momentode la reaccin no fue un cambio considerable, y estos

aminocidos no poseen el grupo guanidinio.


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Prueba No: 8

Nombre de la prueba: Hopkins

Criterio de la prueba: En presencia de cido los aldehdos condensan con elanillo de indol de triptfano. Dando una coloracin

purpura intermedia.

Reaccin

8.1 Tirosina

CH COO-

NH2

CH2

OH

+No se da la reaccin por noposeer carbohidratos.CH

O

COOH

H2SO

4

H2O

8.2 Fenilalanina

CH COO-

NH2

CH2

+ No se da la reaccin por noposeer carbohidratos.CH

O

COOH

H2SO4

H2O

Observaciones:No se dio ningn cambio en la coloracin al agregar el reactivo

Conclusiones: La prueba se toma como negativa.


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DISCUSIN DE RESULTADOS

Al momento de realizar el experimento en la realizacin de la identificacin de losdiversos aminocidos con las pruebas seleccionadas se dieron diversos cambiosde coloracin al momento de realizar las reacciones. En estos casos se tomo

como positiva al momento de observar esos diversos cambios de coloracin enlas soluciones con aminocidos.

De acuerdo a los criterios establecidos en las pruebas de identificacin para losaminocidos, y las reacciones que se daban para los diversos tipos de pruebasse hicieron las conclusiones en las pruebas en los resultados aun cuando estoshayan dado cambios de coloracin. Un ejemplo claro se observa al estudiar laprueba de Sacaguchi, la cual me permite determinar la presencia del grupoguanidinio en un aminocido debido que la reaccin se realiza cuando este grupoest presente con el alfa naftol e hipoclorito de sodio, tal como se muestra en la

reaccin y en los resultados esta prueba solo es positiva en presencia delaminocido arginina, para los otros dos aminocidos utilizados por no poseer elgrupo guanidinio la reaccin que se dio fue diferente a la que realmente sucedeen la presencia del grupo en mencin. Por lo cual se dio un pequeo cambio enla coloracin de los aminocidos.

Los resultados obtenidos para la prueba de Molich tal como se ve en las pruebasde identificacin concuerdan con la teora y criterio de la prueba debido a queesta es ms una prueba para protenas y observar la presencia de algncarbohidrato (azcar) en la estructura de la misma, debido a que los aminocidos

no tienen en su estructura ramificada ningn grupo carbohidrato est presente,por lo cual los reactivos permanecern inertes al estar en mezcla acuosa.

Para la prueba de Nihidrina la cual en todas la pruebas se dio un resultadonegativo debido a que no se observo ningn cambio en la coloracin, se tieneque establecer lo ocurrido debido a que esta prueba es general para cualquiertipo de aminocido debido a que la reaccin se de acuerdo a los criteriosestablecidos en esta reaccin es usualmente realizada como una reaccingeneral dada por los aminas primarios que posee el -carbono Fuente

bibliogrfica No. 1 pag 121. En esta reaccin se da espontneamente dando

como resultado un complejo color purpura, la cual en los medios experimentaleselaborados no se dio. Pudiendo aducir al reactivo utilizado o que no se hayanseguido correctamente los pasos de la metodologa establecida.

De la misma manera se presenta en la prueba de azufre reducido en la cual deacuerdo a los criterios de la prueba se establece que debido a la presencia deazufre de los aminocidos cistina y cistena esta con el reactivo acetato depotasio se presenta un precipitado oscuro el cual en la prueba no se dio debidoa que no se presento ningn cambio en la coloracin de la mezcla de losaminocidos mencionados. El motivo por el cual pudo haber fallado esta prueba


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es que la reaccin lleva una serie de pasos antes de que la el acetato de plomoreaccione con el azufre, fue en alguno de los pasos en los cuales no se dieronlas condiciones necesarias para que el azufre pudiera liberarse y as de estamanera que se diera positiva la reaccin.

En la reaccin de Hopkins el criterio establece el uso de acido glioxilico el cual nose uso en los procedimientos hechos en el laboratorio para esta prueba adems,se tiene que esta prueba es exclusiva para el aminocido triptfano el cual nouso en la identificacin.

De acuerdo a las dems pruebas no se tuvo las coloraciones que semencionaban en los criterios, pero se toma como positiva la prueba debido a quelos cambios se dieron en forma espontanea e incluso en algunas pruebas notodos los aminocidos permiten llegar al color deseado y por la naturalezaqumica del aminocido y el criterio establecido se toma como positiva.


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CONCLUSIONES

1. Las pruebas sirvieron para determinar la composicin qumica de laramificacin en los aminocidos utilizados, los cuales contienen, gruposguanidinio, anillos bencnicos, azufre y otras propiedades.

2. La mayora de pruebas resultaron positivas de acuerdo a los criteriosestablecidos para cada prueba. Dndose diversas reacciones las cualesfueron perceptibles a travs de cambios de coloracin en las solucionesde aminocidos.

3. La utilizacin de pruebas especificas para protenas fueron negativas paralos aminocidos utilizados por la falta del compuesto qumico a identificar.

4. En algunas pruebas los cambios de coloracin se dieron indicando unareaccin la cual no corresponda a la reaccin adecuada por el reactivoutilizado.


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PROCEDIMIENTO

Elrich Diazo

1. Se tomaron 1 ml de cada uno de los aminocidos siguientes: Fenilalanina,tirosina, histidina.

2. Se agrego 1 ml de acido sulfanilico al 0.5 %3. Agregado de 1 ml de nitrito de sodio 0.5 %4. Se agregaron gotas de Hidroxido de amonio concentrado.

Azufre reducido.

1. Se tomaron 1 ml de cada uno de los aminocidos siguientes en tubos deensayo separados: Cistina y cisteina

2. Se agrego 4 ml de NaOH 6 M en cada aminocido.3. Se agrego 0.5 ml de PbAc al 2 % al la solucin anterior.

4. Se calent a ebullicin.5. Se observaron los cambios y fueron anotados.

Xantoproteica

1. Se tomaron 1 ml de cada uno de los aminocidos siguientes en tubos deensayo separados: Fenilalanina, cistina, tirosina

2. Se agregaron gotas de acido ntrico concentrado en cada uno de losaminocidos.

3. Se observaron los cambios y fueron anotados.

Molicsh

1. Se tomaron 1 ml de cada uno de los aminocidos siguientes en tubos deensayo separados: Arginina, tirosina, fenilalanina.

2. Se agregaron 2 gotas de -naftol al 5 % a cada una de los aminocidos.3. Se agrego acido sulfrico concentrado4. Se observaron los cambios y fueron anotados.

NItroprusiato de Sodio1. Se tomaron 1 ml de cada uno de los aminocidos siguientes en tubos de

ensayo separados: Cistina y cistena.2. Se agregaron 1 ml de Nitroprusiato de sodio a cada uno de los

aminocidos.3. Se agregaron gotas de hidrxido de amonio.4. Se observaron los cambios y fueron anotados.


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Nihidrina

1. Se tomaron 1 ml de cada uno de los aminocidos siguientes en tubos deensayo separados: Asparragina, lisina, asparagina.

2. Se agregaron 1 ml de Nihidrina a cada uno de los aminocidos.

3. Se coloco en bao de Mara a 60C por cinco minutos.4. Se observaron los cambios y fueron anotados.

Sacaguchi.

1. Se tomaron 1 ml de cada uno de los aminocidos siguientes en tubos deensayo separados: Arginina, lisian, asparragina.

2. Se agregaron 1 ml de solucin de NaOH al 40%3. Se agregaron 5 gotas de -naftol al 5%.4. Se agregaron 5 gotas de hipoclorito de sodio.5. Se observaron los cambios y fueron anotados.

Hopkins

1. Se tomaron 1 ml de cada uno de los aminocidos siguientes en tubos deensayo separados: Tirosina y fenilalanina.

2. Se agregaron 5 gotas de -naftol al 5%.3. Se agregaron cuidadosamente 1 ml de acido sulfrico.4. Se coloco en bao de mara a 60C5. Se observaron los cambios y se anotaron.


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OBSERVACIONES

En la mayora de las reacciones realizadas hubieron cambios decoloracin por parte de las soluciones de aminocidos, en las que no se percibicambios considerables se tomo como negativa la prueba.

Al realizar la prueba de azufre reducido el calentamiento se realizo en unmechero de Bunsen, al calentarla se obtuvo evaporacin espontanea lo cualhacia que la mezcla se saliera del tubo de ensayo.


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FUENTES BIBLIOGRAFICAS

1. Louise J. Daniel, Leslie Nea. Laboratory experiments in bioquemistry.1stEdition, Dual Printing, Buffalo, New York. Pag 121 123

2. Dr. Abraham Cantarow, Dr. Bernard Schepartz. Bioquimica. CuartaEdicin, traducido por Dr. Homero Vela Trevio. Interamericana. Pag. 90 91

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