INTACentro Regional Santa Fe

PRODOCCIOtl fltllMfiLEstación Experimental Agropecuaria Rafaela

Información Técnica nO151 Mayo 1999

UTILIDAD DE UNA PRUEBA ELISA EN MUESTRAS DE LECHE APLICADAEN LA VIGILANCIA EPIDEMIOLOGICA DE LA BRUCELOSIS BOVINA.(*)

En un programa de control y erradicación de la brucelosis bovina se debe considerar: 1. La puestaen práctica de las estrategias para la eliminación de la enfermedad en los rodeos. 2. Laimplementación de un sistema de vigilancia que permita evaluar el estado de la campaña y a lavez detectar en forma precoz el ingreso de la enfermedad a los rodeos libres de la enfermedad. Elprimero de los aspectos ha sido abordado en repetidas oportunidades y no existen demasiadasdudas respecto de las estrategias a utilizar para lograr el control y saneamiento de unestablecimiento; pero el segundo todavia es una asignatura pendiente y si bien se genera muchainformación desde las. empresas lácteas no existe un mecanismo de acción para actuarinmediatamente en un establecimiento cuando se sospecha el ingreso o reingreso de laenfermedad.

En los cuatro departamentos centrales de la provincia de Santa Fé (Las Colonias, Castellanos, SanMartin y La Capital) se han logrado sustanciales progresos en la campaña de erradicación de labrucelosis. Desafortunadamente, todavia no se le ha prestado la atención suficiente a la vigilanciay ésta es una tarea que necesariamente deberá iniciarse- rápidamente, de lo contfluio se corre elriesgo de sufrir retrocesos con un importante impacto económico negativo.

En el ganado lechero, la única herramienta disponible para controlar periódicamente si los rodeoso áreas libres de brucelosis mantienen esa condición es la prueba del anillo en leche (PAL), lacual se realiza en muestras del total de un ordeño (MTO). Un resultado positivo constituye undiagnóstico presuntivo de la presencia de la enfermedad, lo cual debe ser confirmado por mediodel análisis de muestras individuales.

Referente a la eficacia de esta prueba, los datos más alentadores indican que con tres pruebasconsecutivas fue posible detectar como presuntamente infectados alrededor del 87% de tambosconfirmados posteriormente por análisis individuales. Por otra parte, en el 97% de los tambos contres análisis consecutivos negativos no se encontraron animales con brucelosis.

Enla EEA-Rafaela del INTA, se realizaron estudios comparativos para evaluar la eficacia de laprueba oficial PAL comparándola con una prueba inmunoenzimática (ELISA) que posee una

(*) Información preparada por los Meds.Vets Victor R. Vanzini y Susana T. de Echaide.INTA EEA-Rafaela.

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elevada sensibilidad, condición deseable para su utilización en la vigilancia de la brucelosis entambos.

a) Eficacia de las prueba PAL y ELISA en condiciones experimentales de laboratorio:

Se obtuvieron 24 muestras individuales de leche de vacas positivas durante tres o más meses a laspruebas BPA (Buffered Plate Antigen), ELlSA indirecto y Fijación del Complemento (FC) ensuero sanguineo y ELlSA indirecto en leche. Se realizaron diluciones con leche de unestablecimiento libre de brucelosis simulando una vaca infectada en 10, 20, 30 ... 3200. Lasdiluciones se realizaron de la siguiente manera:

1° Una parte de leche de vaca infectada + 9 de vacas sanas (1: l O), 1:20 hasta 1:200;2° Desde 1:200, 1:220, 1:240 hasta 1:800;3° Desde 1:800, 1:880, 1:960 hasta 1:3200.

A cada muestra se la analizó con la PAL siguiendo la metodología descripta en el manual deprocedimientos del SENASA (Res. 1269/93) y ELlSA indirecto síguiendo la metodologíadesarrollada en el INTA, EEA-Rafaela.

b) Eficacia de las pruebas PAL y ELISA en condiciones naturales:

De 50 establecimientos que resultaron positivos o negativos a las pruebas PAL YELlSA en MTO,se extrajeron muestras individuales de leche que fueron analizadas con un ELlSA indirecto. Decada vaca positiva a ELlSA en leche se extrajo una muestra de suero sanguineo que fue analizadopor las pruebas BPA y FC (prueba de referencia). En nueve tambos PALIELlSA negativos, seextrajeron muestras de suero y leche a todas las vacas en ordeñe y se procesaron por las pruebasde ELlSA en leche y ELlSA, BPA y FC en suero sanguíneo.

Se consideró establecimiento infectado, a los tambos que poseían al menos una vaca positivo a laprueba de FC. Se analizó la eficacia de cada prueba para detectar establecimientos infectados ylibres de brucelosis.

RESULTADOS

a) Eficacia en condiciones experimentales de laboratorio:

En el siguiente gráfico puede observarse que la prueba ELlSA en todos los casos dio resultadopositivo a diluciones más elevadas (indicada en la parte superior de la barra) que la prueba PAL,lo cual significa que ELISA es capaz de detectar menores concentraciones de anticuerposespecíficos que la PAL Yen consecuencia posee mayor sensibilidad.

2

OPAL -ELlSA--- ~--- - ~ --- ---- .._--- -- ---- -~ --

1000

10

1~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~

Vacas Infectadas

Figura 1: Sensibilidad de la PAL y ELlSA bajo condiciones controladas

b) Eficacia en condiciones naturales:

++

+

1517O

En 9 de los 19 tambos negativos a PAL YELISA (150-203 vacas) se obtuvo muestras de leche y suerosanguíneo a todas las vacas en ordeñe, no se observaron vacas positivas a Fe.

Tabla 2: Eficacia de la prueba ELISA en muestras de leche del total de un ordeño.Establedmientos

Infectados No infectadosPos 22 5

ELISANeg I

232227

3

Tabla 3: Eficacia de la prueba PAL en muestras de leche del total de un ordeño.Establecimientos

Infectados No infectadosPos 16 4

PALNeg 7

232327

Según lo expuesto en las tablas 2 y 3, ELISA fue capaz de clasificar como positivo a 22 de los 23establecimientos infectados, mientras que PAL identificó sólo 16 de ellos. En el grupo de tambosno infectados las pruebas tuvieron un comportamiento similar, ELISA clasificó como negativo a22 de los 27 analizados y PAL a 23.

CONSIDERACIONES

En el estudio en muestras de leche diluidas en el laboratorio se observó una mayor eficacia de laprueba ELISA(lOO%) respecto de la PAL(87,5%). En tres de las 24 muestras analizadas la PALdio resultado negativo, mientras que ELISA fue positivo a la dilución 1:lOen dos vacas y 1:40 enla restante. En las diluciones donde ambas pruebas dieron positivo, ELISA arrojó resultadospositivos a diluciones más altas que PAL lo cual puede estar relacionado con la mayorsensibilidad de la prueba.

En el ensayo en muestras de leche obtenidas del total de un ordeño, si bien el número deestablecimientos analizados es reducido, del análisis de los resultados surge que ELISA fue mássensible que PAL en la detección de tambos con brucelosis. Sobre 23 tambos infectados la pruebaELISA detectó a 22(95,6%) mientras que la PAL sólo detectó a 16 (69,6%). Para la vigilanciasanitaria, es necesario contar con pruebas de elevada eficacia que permitan la detección precozdel ingreso de la enfermedad a un establecimiento. La incorporación del ELISA aplicado a MTO,reduciría la posibilidad de clasificar como negativo un establecimiento que posee animales conbrucelosis.

Con respecto a los resultados obtenidos de muestras de tambos no infectados el comportamientofue similar y las dos pruebas dieron resultados falsos positivos. La doble prueba brindó la mayorgarantla de clasificar como negativos a establecimientos con sus vacas libres de brucelosis.

De acuerdo a los resultados de este ensayo se infiere que la eficacia de la PAL para detectartambos infectados es inferior a ELISA, por lo tanto la incorporación del ELISA al sistema devigilancia sanitaria de la brucelosis sería benéfico, porque permitiría la detección precoz delingreso de la brucelosis a un rodeo libre y accionar inmediatamente para evitar la dispersión de laenfermedad dentro del establecimiento con la consecuente implicancia económica.

INSTITUTO NACIONAL DE TECNOLOGIA AGROPECUARIAEstación Experimental Agropecuaria Rafaela

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