Ao de la Promocin de la Industria Responsable y del Compromiso Climtico Cultivo experimental de Brachionussp.ASIGNATURA:Cultivo de ZooplanctonINTEGRANTES: SANTOS ROJAS LUIS ENRIQUE GALLARDO CARRIL ANGEL CORDOVA PERALTA ZULY CRUZ VALIENTE ERICK VALIENTE MONTES SERGIODOCENTE: CARHUAPOMA GARAY JUANCICLO:VI

Nvo. Chimbote, Noviembre del 20141. INTRODUCCION El alimento vivo (fitoplancton y zooplancton) es esencial durante el desarrollo larvario de peces, crustceos y moluscos. En la actualidad la investigacin orientada hacia los microorganismos como fuente de alimentacin est en pleno desarrollo. En pases como Japn, donde se prctica con xito la maricultura, los cultivos masivos de microalgas, rotferos, coppodos y cladceros son la base de la produccin comercial (FAO 1989).

Es bien conocido que en el ambiente, la supervivencia de las larvas presenta altas fluctuaciones, debido a mltiples factores que provocan valores de supervivencia desde 10% hasta 0.1% .Estos factores se pueden dividir en: 1) factores externos y 2) factores internos. 1) Los factores externos se pueden subdividir en dos grupos: a) los fsicos, como la temperatura, la iluminacin, el flujo de agua, corrientes, etc., y b) los qumicos, como el oxgeno disuelto, el amonio, la salinidad, el pH, etc., que pueden ser considerados algunos de los ms limitantes para la supervivencia y crecimiento. 2) en el caso de factores internos, pueden ser subdivididos en cuatro tipos: a) los genticos, los cuales son conferidos por los padres a travs del material heredado, b) los etolgicos, que se relacionan directamente con el comportamiento alimenticio y procesos de escape para evitar ser capturada, c) los biolgicos, donde la competencia y depredacin rigen su supervivencia , y d) los nutricionales, los cuales conferirn a las larvas la energa necesaria para mantener su metabolismo, crecer y asegurar su supervivencia.

Los criaderos de peces y crustceos marinos, necesitan cultivar zooplancton para adicionrselo a las larvas. Estas larvas no terminan de formar su sistema digestivo hasta unos das despus de nacidas, y su capacidad de digestin es bastante limitada. Lo mismo ocurre con su agudeza visual, prestando atencin (sobre todo en caso de los peces) solamente a objetos en movimiento. Debido a estas y otras razones, las larvas han de comenzar su alimentacin en base a presas vivas, es decir, a zooplancton. En general, hasta que los peces no comienzan a realizar la metamorfosis, no son capaces de ingerir y digerir adecuadamente grnulos de pienso).

El alimento vivo tiene cualidades que no tiene un alimento inerte, como es el movimiento, que estimula ser atrapado por el depredador; el color, que es atractivo para su captura; la calidad nutritiva ya que, los organismos que se aprovechan como alimento y que se cultivan, contienen la cantidad y la calidad de nutrimentos indispensables para el adecuado crecimiento de las especies en el agua. Por otra parte, el alimento vivo tiene la cualidad de no afectar la calidad del agua, debido a que este es consumido antes de que llegue al fondo, sin causar ningn tipo de descomposicin, a diferencia del alimento inerte, que si no tiene buena flotabilidad, (o sea que permanezca por un perodo considerable en la superficie) se ir al fondo, donde se descompone y afecta al medio, causando a veces una mortalidad total en el estanque. (Castro Barrera et al., 2003)

Los rotferos eurihalinos,Brachionussp. son cultivados y utilizados como alimento vivo para larvas de peces y crustceos en todo el mundo, la supervivencia larval en los sistemas de cultivo depende de la disponibilidad de estos, sin embargo, problemas en su produccin masiva, tales como reducida reproduccin o mortalidad total son causa de los mayores impactos econmicos en Larvicultura, por lo que el comienzo de la alimentacin en estadios larvales tempranos, parece ser el mayor cuello de botella para el escalamiento industrial del cultivo de peces.Aunque estos son ideales como primer alimento exgeno, son incompletos como fuente de alimento, ya que son bajos en cidos grasos altamente insaturados n-3 (HUFA), pues los cidos docosahexaenoico (DHA, 22:6n3) y eicosapentaenoico (EPA, 20:5n-3) son requeridos para el desarrollo y supervivencia en larvas de peces. El enriquecimiento de rotferos con HUFA n-3 es un proceso esencial en el campo de Larvicultura marina, pudiendo estos ser alimentados y enriquecidos con microalgas seleccionadas o alimento formulado. Debido a su importancia para el crecimiento larval y desarrollo en peces, un numero de productos comerciales para enriquecimiento de rotferos han sido desarrollados para proveer altos niveles de HUFA (Cabrera, 2008; Andoet al., 2004; Dhertet al., 2001). 2. OBJETIVOS:

Lograr el aislamiento y manteniendo de Brachionussp. Evaluar el efecto de las diferentes dietas sobre la fecundidad y crecimiento de Brachionussp. en base a un cultivo Batch.

3. ANTECEDENTES3.1. ASPECTOS GENERALES DE Brachionussp.Brachionussp. es un rotfero de aguas salobres compuesto de aproximadamente 1000 clulas.Estos filtran pequeas partculas de la columna del agua (bacterias o microalgas) por medio de la corona de cilios localizada en la regin anterior del cuerpo (figura 1) que adems usan para la locomocin (Fulks y Main 1991).

Figura1 Brachionussp.indicando sus rganos (modificado de Dhert1996).El rango de talla est entre 100 y 340 m, y su incremento se debe slo al incremento del plasma celular. La epidermis se compone de una densa capa de queratina y protenas, la lrica. La forma de la lrica y el perfil de las espinas y ornamentos permiten la determinacin de las diferentes especies y morfotipos. 3.1.1. Ciclo de vida.El ciclo de vida comprende la va partenogentica y la va sexual (figura 2). En la primera, que ocurre en condiciones ambientales normales, las hembras producen huevos diploides (2n), que dan lugar a hembras genticamente iguales a sus progenitoras. La va sexual ocurre en condiciones desfavorables como respuesta fisiolgica a la calidad del agua, altas densidades de cultivo y cambios en la cantidad y/o calidad del alimento. En este caso se producen hembras mcticas y amcticas. Aunque ambas no son morfolgicamente diferentes, las hembras mcticas producen huevos haploides (n) que originarn machos haploides, predominando la reproduccin sexual y la produccin de huevos resistentes, que estarn en latencia hasta cuando las condiciones ambientales sean mejoradas

Figura 2. Ciclo de vida de Brachionussp.(Modificado de Dhert 1996).3.1.2. Taxonoma. La clasificacin considerada para este estudio es la de Suzuki (1964) que agrupa a los rotferos dentro del phylumAschelminthes(Tabla 1) y a Brachionussp. como un complejo de subespecies con diferencias morfolgicas entre s.Tabla 1. Clasificacin taxonmica de Brachionussp. (Segn Suzuki 1964).

3.2. IMPORTANCIA DE Brachionussp. 3.2.1. Descubrimiento e importancia en la larvicultura. Aunque Brachionussp. est presente en aguas marinas y estuarinas, pudiendo formar parte de la dieta natural de las larvas silvestres, originalmente fue reconocido por los japoneses como un organismo daino para los cultivos de anguilas, pues por su alta tasa reproductiva agotaban el oxgeno de los estanques de cultivo. Este fenmeno fue llamado desnaturalizacin del agua y para prevenirlo se realizaron diferentes estudios entre los aos 1950 y 1960. De estos estudios se concluy que por el contrario, su uso en la larvicultura de peces mejoraba la supervivencia de las larvas, siendo utilizados por primera vez en 1965 para alimentar larvas del pez Pargusmajor. Brachionussp. es ideal como alimento vivo debido a su pequea talla, lento desplazamiento, habilidad de estar suspendidos en la columna de agua, facilidad relativa de cultivar a altas densidades y de bioencapsulacin de substancias nutritivas o profilcticas. Su uso est muy extendido en la larvicultura de peces y crustceos marinos, siendo esencial en los programas de larvicultura de peces marinos3.2.2. Valor nutricional. La composicin bioqumica y valor nutricional es determinada por la dieta. Watanabeet al. (1983) observaron que los rotferos alimentados con Nannochloropsiscontenan en peso seco un 75% de protenas, 22% de lpidos y 3% de cenizas mientras los alimentados con levaduras un 71%, 17% y 12% respectivamente. Tambin observaron que a diferencia de los rotferos alimentados con Nannochloropsis, los alimentados con levaduras, eran pobres en cidos grasos altamente insaturados (AGAI) de las series 22: 5n - 3 y 26: 6n - 3 esenciales en la larvicultura de peces marinos La capacidad de bioencapsulacin que presentan los rotferos es aprovechada con el fin de mejorar su valor nutricional aumentando as la supervivencia y crecimiento de las larvas alimentadas. De este modo, los niveles de AGAI de los rotferos alimentados con levaduras pueden ser mejorados mediante la bioencapsulacin de microalgas como Nannochloropsise Isochrysis, de diversos productos comerciales con excelente composicin de AGAI y niveles de protenas, o preparaciones caseras como harina de calamar o aceite de hgado de bacalao. La bioencapsulacin permite adems el enriquecimiento de rotferos con vitaminas y aminocidos.3.3. CONDICIONES GENERALES DEL CULTIVO3.3.1. Salinidad. El rango de tolerancia de Brachionussp.a la salinidad oscila entre 1 y 97 g/L siendo ptimo entre 4 y 35 g/L (Dhert 1996).

3.3.2. Temperatura. El rango ptimo de temperatura vara de acuerdo a factores especficos e intraespecficos como especie o cepa. Los rotferos del morfotipo L crecen mejor cuando la temperatura del agua est entre 18 y 25 C mientras que los del morfotipo S crecen mejor entre 28 y 35 C

3.3.3. Oxgeno disuelto. Est reportado que los rotferos pueden sobrevivir en aguas con niveles de oxgeno tan bajos como 2 ppm.

3.3.4. pH. En el medio natural los rotferos pueden vivir a niveles de pH inferiores a 6,6.El rango ptimo de produccin ha sido establecido entre 6,6 y 8,0 (Hoff y Snell 1999).

3.3.5. Amonio (NH3). En el agua los niveles de amonio no ionizado (NH3) estn en equilibrio con el ionizado (NH4+) en una relacin NH3/NH4+ que es afectada por la temperatura y el pH del agua. Altos niveles de NH3 son txicos para los rotferos por lo que en cultivos debe vigilarse que estos no superen 1 ppm de concentracin

3.3.6. Presencia de microbios. Los cultivos de rotferos son adecuados para la proliferacin de microorganismos que pueden afectar el cultivo o representar un riesgo sanitario a las larvas por alimentar. Algunos microorganismos (Pseudomonas) producen vitamina B12, necesaria para la reproduccin de los rotferos; otros son oportunistas que deterioran la calidad del agua y aparecen indicando exceso de materia orgnica (los ciliados Euplotesy Uronema), tambin existen patgenos como las bacterias Vibrio sp y los hongos Aspergillus que producen una disminucin drstica de la poblacin de rotferos.

4. MATERIALES Y METODOS

4.1. Tratamiento del agua para el cultivo:

El agua para el cultivo de rotferos pas tratamientos de filtrado para aislamiento, mantenimiento y enriquecimiento de cepas, realizado en baldes de (5 L) tapado con bolsa colocndosele aireacin moderada y constante, suministrada travs de una manguera y una piedra difusora. 4.2. Cultivo de MicroalgaScenedesmussp.Las muestras fueron donadas por el Laboratorio De Cultivos Auxiliares, la cual su mantenimiento se hizo en medio lquido en botellas de 3L conteniendo de 200 mL, luego se pas sucesivamente a 500 mL, 1 y 2 L. Estas algas crecieron en medio HM (Merino, 2012). Este cultivo se mantuvo en agitacin permanente por burbujeo con aire, lo que proporciona CO2 necesario para el crecimiento, tambin con iluminacin constante.4.3. Colecta y Aislamiento de Brachionussp.Las muestras fueron tomadas del estanque situado frente a la Escuela Profesional de Biologa en Acuicultura en la Universidad Nacional del Santa, perteneciente al distrito de Nuevo Chimbote en el departamento de Ancash. La muestra pas por captacin del medio natural realizado con ayuda de un tamiz pequeo y colocada en baldes plsticos de 4 litros, traslado, recepcin de muestras, adaptacin, limpieza, purificacin y aislamiento de cepas.El mantenimiento del stock comprendi: la preservacin de la cepa aislada. La obtencin de cepas se realiz a travs de aislamiento de 50 rotferos con ayuda de microscopio estereoscpico. Estos fueron colocados en vasos de precipitado con 50 ml de agua filtrada a la cual se le adicion como alimento algas unicelulares (Scenedesmussp.) se mantuvo las cepas en un ambiente controlado con temperatura ambiente e iluminacin constante.

Figura 3. Flujo grama del tratamiento, aislamiento y manteniendo de Brachionussp.

Figura 4. Aislamiento de Brachionussp. presentando 2 huevos.4.4. Cultivo Batch (enriquecimiento):Se realiz el trasvase de cepas a 2 botellas de plstico en forma cnicas (2 tratamientos) conteniendo 300 ml-1 c/u (3750 rot.), se inocularon los rotferos en ambas botellas a una densidad 27 rot.ml-1 (3750 rot. en cada botella) .La primera botella fueron alimentadas con algas unicelulares Scenedesmussp. (Figura 6a) y la segunda con levadura de panificacin (Figura 6b) durante 3 das; no se le practic renovaciones parciales de agua. Diariamente se determinaron parmetros abiticos como Temperatura, pH y salinidad, as mismo para cada tratamiento se realiz el conteo de rotferos a fin de determinar densidad poblacional (indiv.mL-1) y el nmero de huevos por hembra para determinar la fecundidad (F) (huevos.indiv-1), la cual se calcul como:

F = nmero de huevos amicticos/ nmero de hembrasSe determin la tasa de crecimiento poblacional(TC) (da-1), mediante la siguiente frmula:

TC = (lnNt ln No)/t

La productividad (R) en rot.L-1.da-1

R = Nt - No / t

Dnde: Ntes la densidad de rotferos (indiv.mL-1) al tiempo t, No densidad inicial de rotferos (indiv.mL-1) y t el periodo de cultivo (das).

(a)Se realiz el conteo de las microalgasScenedesmussp.(b) Levadura.

5. RESULTADOS:Parmetros de cultivoLos parmetros abiticos se muestran en la tabla 1, Temperatura y pH se mantuvieron en niveles normales, la temperatura fluctu entre 23 y 26 C. En relacin a el pH vario de 8.07 9.5.Tabla 2. Parmetros abiticos (M DS) registrados en el cultivo del rotfero Brachionussp. utilizandomicroalga y levaduraTRATAMIENTOST1 = MicroalgaT2= Levadura

Temperatura C23-2623-25

pH8.07- 9.57.86-8.4

Fecundidad (F)Se observ que T1 presento mayor F a las 24 y 48 horas con 0.52 y 0.47 huevos.indiv-1 respectivamente, con valores menores a las 24 y 72 horas. Estos valores son mayores a los encontrados por Hamreet al., (2008), en un experimento realizado con una cepa del generoBrachionusespecie no identificada, durante 4 das, utilizando 4 dietas a base de levadura con enriquecedores, estos autores encontraron valores de 0.32 huevos.indiv.-1 a las 72 horas (experimento 1) y 0.40 huevos.indiv.-1 a las 48 horas (experimento 2).Tabla 3. Fecundidad (M DS) (huevos.indiv-1), obtenida en el cultivo del rotfero Brachionussp. utilizandomicroalgas y levadura.HORAST1T2

Huevos.indiv-1

00.230.22

240.520.32

480.470.39

720.160.19

Densidad final y productividad (R).

Se observ una mayor R en T1 (5490 rot.L-1 da-1).Este resultado fue menor a losobtenidos por Abu-Rezq& James (2005), quienesencontraron un R de 12130 rot.L-1.da-1alimentando rotferos conlevadura+Chlorella+bacterias lcticas, as como6640 rot.L-1.da-1 con la misma dieta pero sinbacterias.

Tabla 4. Estimacin de la densidad final (indiv.mL-1), y Productividad (R) (c), obtenidas en el cultivo del rotfero Brachionussp. conmicroalga y levaduraTRATAMIENTOST1T2

D. Final8263

R54903600

6. DISCUSIONES:

Kotani&Hagiwara (2003) se refieren que la temperatura de cultivo influencia la fertilizacin de los rotferos y la temperatura optima es diferente para las diferentes cepas de rotferos y aun entre las mismas, pues las condiciones ambientales afectan las generaciones sucesivas.Vasileiadouet al. (2009) mencionan que las diferentes especies de Brachionussp. difieren en sus preferencias de temperatura, salinidad, pH y oxgeno disuelto. En este trabajo, la temperatura mayor a 26 C parece influenciar el crecimiento, ya que en diversas experiencias realizadas en nuestro laboratorio, se observ buen rendimiento poblacional.Se recomienda el uso de levadura como alimento porque proporciona elevadas densidades poblacionales a bajo costo de produccin (Hirayama y Funamoto, 1983).

El uso de levadura de panificacin S. cereviciae se recomienda para la alimentacin de los rotferos porque permite obtener altas densidades a menor costo de produccin. Sin embargo, es de hacer notar que ello puede resultar en un escaso valor nutritivo de los rotferos (Watanabe et al., 1983).

(Gmez 1997) La levadura de pan nacional, se obtuvo menor crecimiento (K =0,45 rotjda y R= 1 1,8x104 roi/L/daEl uso de levadura de pan S. cereviciae se recomienda para la alimentacin de los rotferos porque permite obtener altas densidades a menos costo de produccin, Gomez (1997), sin embargo los resultados obtenidos en nuestra prctica, muestra una baja densidad en el tratamiento con levadura, lo cual estuvo contaminado con protozoarios lo cual pudo ser el motivo de la baja densidad en este tratamiento.Segn Ascn (1992), el rotfero B. plicatilis se ha convertido en un elemento esencial de alimentos organismo vivo en el cultivo de larvas de peces marinos y crustceos y que las tcnicas del cultivo masivo no han cambiado sustancialmente y es aprovechado por ser un filtrador no selectivo filtrando partculas de hasta 30 micras dimetro, como las microalgas, levaduras, especies bacterianas, y partculas inorgnicas. Indudablemente el crecimiento y el desarrollo de las especies cultivadas dependen en gran medida de la naturaleza y composicin qumica del alimento por su participacin en los procesos anablicos para la produccin de tejidos, como catalizador de procesos metablicos y en la creacin de energa para alimentar estos procesos. Desde el punto de vista nutricional, es muy importante considerar la composicin qumica del material a utilizar como alimento para la produccin de alimento vivo.7. CONCLUSIONES: Se logr aislar a los rotferos y alimentarlos con levadura y microalgaas.

La levadura es un buen alimento para los rotferos porque aumenta los niveles de densidad del cultivo; pero el mejor resultado en el caso de nuestra experiencia la densidad fue mucho mejor en el tratamiento a base de microalgas8. REFERENCIA BIBLIOGRAFICAS:

Abu-Rezq T. & James C. 2005. Application of probiotics in rotifer production systems for marine fish hatcheries.Marine finfish Aquaculture Network. July September 2005.Ascn, D. & J. Gilberto 1992. Cultivo masivo de rotferos en estanque de tierra. Rev. Folia Amaznica 4: 35-45. YOFERA, M. Tesis para el Grado de Doctor en Biologia.1982. Aislamiento, Caracterizacin, y Puesta en Cultivo de una Cepa de Pequeo tamao de Brachionusplicatilis. O.F. Muller (1786).Cisneros, R. 2011.RENDIMIENTO POBLACIONAL DEL ROTFERO NATIVO Brachionussp. Cayman, UTILIZANDO DIFERENTES ENRIQUECEDORES.Ecologa Aplicada, 10(2).

Duran, G.2002. Evaluacin de la produccin y uso del rotfero Brachionusplicatilisen la larvicultura de Litopenaeusvannamei.Tesis de Grado Previa a la obtencin del ttulo de: MAGISTER EN CIENCIAS. Hamre A., Srivastava A., Rnnestad I., Mangor-Jensen A. &Stoss J. 2008. Several micronutrients in the rotifer Brachionussp. may not fulfil the nutritional requirements of marine fish larvae. Aquaculture Nutrition. 14: 51-60.

Kotani T. & Hagiwara A. 2003. Fertilization between rotifer Brachionusplicatilis strains at different temperatures. FisheriesScience 69:1078-1080.Vasileiadou K., Papakostas S., Triantafyllidis A., Kappas I. &Abatzopoulos T. 2009. A multiplex PCR method for rapid identification of Brachionusrotifers.Mar biotechnol (2009) 11:53-61.

FAO, 1989. La produccin de alimento vivo y su importancia. Programa de cooperacin gubernamental FAO. Brasilia.Castro, B. T., De Lara Andrade, R., Castro, G., Castro Meja, J., Malpica, A., 2003. Alimento vivo en acuicultura. Dpto. El Hombre y su ambiente. Divisin de CBS: UAM. Unidad Xochimilco. 27 33 p.IMARPE. 1997. I Curso Nacional: Cultivo de organismos marinos. Callao Per. 26 pp.UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA

FACULTAD DE CIENCIAS

E. A. P. BIOLOGA EN ACUICULTURA

Cepa

Bachionussp.

MEDIO DE CULTIVO

TRATAMIENTO DEL H2O

AISLAMIENTO

a

c

b

a

Figura 5. Sistema Batch: (a) Cultivo monoalgalde Scenedesmussp. (b) Botella con Brachionussp.alimentadas con Scenedesmussp. (c) Botella con Brachionusspalimentadas con levadura.

351 cel.campo

X

105rot.

3750 rot.

1gr de levadura

1gota =

0.05 ml

0.05 ml

351 cel.campo

X = 0.04 gr

Cantidad que ser sumistrada al cultivo de Brachionussp. (Botella 2).

1ml

X

X = 7020 cel.ml-1

1 ml

7020 cel.ml-1

X = 15 ml.

Cantidad que ser sumistrada al cultivo de Brachionussp. (Botella 1).

X

100000 cel.

1800 ml

1800 ml

12x106 cel.

X = 12x106 cel.

X

Figura 6. Flujograma para el clculo de las concentraciones de alimento que sern suministradas al cultivo de Brachionussp. (a)Microalgas. (b)Levadura.