HISTOLOGIA

HISTOLOGIAMETODOS DE ESTUDIO1er. SEMESTRE. U.A.E.M.Grupo B HISTOLOGIA Estudio de los tejidos del cuerpo humano, su organizacin y su constitucin para formar rganos, aparatos y sistemas.Tejidos: epitelial, conjuntivo, muscular y nervioso.Casi todos los rganos (excepto, SNC), estn formados por una combinacin organizada de tejidos diversos.HISTOLOGIALa combinacin precisa de los tejidos permite el funcionamiento de cada rgano y del cuerpo humano como un todo.La histologa depende del uso del microscopio.La investigacin de los distintos aspectos qumicos, fisiolgicos, inmunolgicos y patolgicos, as como la interaccin de estas disciplinas, es fundamental para el conocimiento de la biologa de los tejidosMICROSCOPIO OPTICO O FOTONICOPermite estudiar la imagen debido a que el corte histolgico es atravesado por un haz de luz.Clulas vivas, capas delgadas de tejidos, algunas membranas (mesenterio), etc. pueden observarse directamente.La mayor parte de tejidos o cortes de ellos se colocan en un portaobjetos para poder ser estudiados.

Microscopio OpticoLa preparacin histolgica ideal se debera preservar de tal manera que su estructura y composicin molecular fueran las mismas que las existentes en el cuerpo.Esta preparacin es posible en ocasiones, pero existen fenmenos de distorsin y prdida de componentes llamados artefactos.FIJADORESPara evitar la digestin de los tejidos por enzimas propias del interior de las clulas (autolisis), o por las bacterias, debe preservarse la estructura y composicin molecular, o los fragmentos de los distintos rganos, y deben tratarse antes o despus de su extraccin del cuerpo mediante los fijadores.FIJADORES QUIMICOSSon agentes desnaturalizantes o substancias que estabilizan las molculas mediante la formacin de puentes.Propiedades: tiempo suficiente para difundirse. Deben cortarse en fragmentos pequeos y facilitar la penetracin. Perfusin intravascular.Agentes: Formaldehido 4% y Glutaraldehido reaccionan con grupos amina (NH2) de las protenas de los tejidos.

FIJADORES FISICOS Congelacin rpida del propio tejido, adquiriendo una gran rigidez (auxiliado por una resina), lo que permite su corte por un microtomo especial para tejidos congelados llamado (CRISTATO).Ventajas: rapidez, uso en salas de quirfano, estudios histoqumicos de enzimas muy sensibles o formadas por pequeas molculas, estudio de los lpidos, etc.

INCLUSIONPARAFINA: el proceso de impregnacin de los tejidos con parafina est precedido por 2 fases:1.- Deshidratacin.- se extrae el agua en diversos baos de soluciones con crecientes de etanol (70 al 100 %) en agua.2.- Aclaramiento.- El etanol existente debe sustituirse por Xilol (disolvente orgnico o estabilizador).

EMBEBIDOLos tejidos se colocan en un bao de parafina (embebido) a 60 C.El calor da lugar a la evaporacin del disolvente y la parafina ocupa los espacios que deja en el interior de los tejidos, otorgandole rigidez y forma un bloque de parafina o montaje en casette, lo que permitir un corte adecuado en el microtomo.

RESINAS: en microscopa optica y electrnica.Se utiliza el mismo proceso anterior (se deshidratan con etanol y posteriormente se incluyen en resinas de plstico (que se endurecen por polimerizacin).Se producen menos artificios que en la parafina y se consiguen cortes histolgicos mas finos.CORTEMICROTOMO: 1 a 10 micras de grosor.Cuchilla fija o reemplazable.Los cortes histolgicos se someten a bao de flotacin para su planchado y se colocan en un portaobjetos de vidrio a los que se adhieren y posteriormente van a ser teidos.

TINCIONLa mayor parte de los tejidos al corte son incoloros, por lo que deben ser teidos.Tcnica cida (acidfilos) o bsica (basfilos).Tienden a formar enlaces electrostticos (salinos) con los radicales ionizados de los tejidos.Azul de Toluidina y Azul de Metileno (bsicos).Hematoxilina

TINCIN BSICALa mayora de colorante bsicos contienen cidos en su composicin: a. nucleicos, glucosaminoglucanos, glucoproteinas cidas.TINCION ACIDANaranja G, eosina, fucsina cida actan principalmente sobre los componentes acidfilos de clulas y de tejidos, grnulos de secrecin, protenas citoplasmticas y el colgeno.

TINCION UNIVERSALHEMATOXILINA Y EOSINA (H/E). La H. proporciona un color azul o violeta al ncleo de las clulas, porciones del citoplasma ricas en ARN, matriz del cartlago hialino.EOSINA.- color rosado o naranja al citoplasma y al colgeno.OTRAS TECNICASTricrmico de Masson.- facilita observar la diferencia entre el colgeno y el msculo liso.Tincin monocromtica (azul de metileno).- solo visualiza contornos de las clulas y ncleos.Sales de oro.-Sales de plata.- en el SNC,

MICROSCOPIO OPTICOPARTES MECANICAS: platina, revolver, control macro y micromtrico, fuente de luzPARTES OPTICAS: Condensador, objetivo y ocular.Resolucin: distancia menor existente entre 2 partculas o 2 lneas que todava permite que sean visualizadas como 2 objetos distintos.El poder mximo de resolucin (lmite) es de 0.2 micras.Los lmites de la m. o. han sido ampliados por el uso de cmaras de video de alta sensibilidad y de gran resolucin que permiten la digitalizacin para uso en PCs o para el estudio cuantitativo de tcnicas de anlisis de imagen.Tambin son tiles para el estudio de clulas vivas por largos periodos sin dao celular por iluminacin intensa.M. DE CONTRASTE DE FASES E INTERFERENCIALUtiliza un sistema de lentes que da lugar a imgenes visibles de estructuras casi transparentes que muestran la misma densidad ptica.La luz modifica su velocidad al atravesar estructuras celulares y extracelulares que presentan ndices de refraccin distintos.Permite la observacin de clulas vivas.M. DE LUZ POLARIZADALos ratos de luz pasan atravs de un filtro polarizado, salen de l vibrando en una sola direccin (birrefringencia). Un 2 filtro colocado con su eje principal perpendicular al 1er. filtro bloquea el paso de la luz.Esto hace que las diversas estructuras celulares aparezcan iluminadas sobre un fondo oscuro tras atravesar el 2 filtro.M. De FLUORESCENCIACiertas substancias reciben la luz de una cierta longitud de onda, emitiendo luz con una longitud de onda mayor (fluorescencia).Los cortes tisulares se iluminan con luz UV y filtros especiales que emiten en la porcin visible del espectro, lo que hace que las substancias fluorescentes aparezcan con un color brillante sobre fondo oscuro.M. DE FLUORESCENCIAColorantes fluorescentes: naranja de acridina, isotiocianato de fluoresceina.Permite identificar y localizar los 2 tipos de acidos nucleicos en el interior de las clulas.HISTOQUIMICA Y CITOQUIMICAPermiten por medio de reacciones qumicas especficas o en interacciones identificar y localizar diversas substancias en cortes histolgicos o clulas en cultivo.IONES.- Ca+, He+, Fosfatasas para demostrar la presencia de lisosomas, deshidrogenasas eliminan el H+ de un sustrato y lo transfieren a otro; peroxidasas (H202) con mayor utilidad para el dx. de leucemias.Polisacaridos (glucogeno) y Oligosacaridos.- los P. en nuestro organismo permanecen en forma libre o combinada con protenas y lpidos. Se detectan con la reaccin de PAS (transformacin de radicales 1,2-glicol presentes en los azucares en forma de residuos de aldehido).Las glucoprotenas son molculas proteicas asociadas a cadenas pequeas y ramificadas de azucares (oligosacaridos).Reaccionan al PAS.Glucosaminoglucanos.- son Polisacaridos no ramificados que contienen monosacaridos amina (aminoazucares), poseen grupos carboxilo y sulfato. Reaccionan al azul alciano.LIPIDOSTinciones liposolubles (Sudan IV y Sudan negro).Los cortes mas adecuados son los congelados.TECNICAS DE HIBRIDACIONAnlisis del funcionamiento molecular de las clulas ( Permite identificar secuencias especficas de ADN o ARN purificados ).HIBRIDACION IN SITU.- Se aplica directamente en las clulas, cortes histolgicos, frtis o cromosomas de clulas en mitosis.Permite determinar si una clula presenta una secuencia especfica de ADN de un gen en un cromosoma.