1 Histologia

5/16/2018 1 Histologia - slidepdf.com

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Introducción al estudio

de la

Histología y MorfologíaCelular

Prof. NatalyGaerste



n a . n ro ucc n a es u ode la

Histología y Morfología Celular • Objetivo General: Especificar las herramientas que utiliza la

histología para el estudio ultraestructural de tejidos y de la célulacomo unidad morfológica y funcional del organismo

• Contenido: • Histología. Concepto y aplicaciones Científicas yclínicas.

• Técnica Histológica. Etapas en la preparación de tejidos para suestudio al microscopio óptico y electrónico.

• Histoquímica y Citoquímica

• Microscopía. Tipos de Microscopios y aplicación. Microscopio

óptico: partes y funcionamiento. Microscopio electrónico: detransmisión y de barrido.



Histología• Es la rama de la biología encargada del

análisis microscópico de la anatomíacelular y tisular de los tejidos biológicos.

•

Marcello Malpighi es reconocido como elfundador de la Histología

• Las primeras investigaciones histológicas sehicieron en el siglo XVII gracias a la invencióndel microscopio óptico por Antonio VanLeeuwenhoek



Es el estudio de la forma y laestructura de los organismos vivosorganizados

¿Qué es la Anatomía?

AnatomíaMacroscópica

AnatomíaMicroscópica



¿Qué es la Citología? o Biología Celular es

una disciplina académica que se encargadel estudio de las células en cuanto a lo querespecta a las propiedades, estructura,funciones, organelos, su interacción con el

ambiente y su ciclo vital.



Órgano: unidadfuncional mayorcompuesto pordistintos tipos detejido

Sistema de Órganos:conjunto de órganos confunciones relacionadas

Tejido:agrupación decélulas con la

misma función

Célula: Unidadmorfológica yfuncional de todo servivo. Es el elemento

de menor tamaño quepuede considerarsevivo.(Cel. Epitelialescilindricas altas)



Bioquímica

Fisiología Anatomía

ClínicaGenética

Patologí a

Histología



Técnica Histológica•Obtención de la muestra.

Las necropsias o autopsia

Las biopsias

Las piezas operadas.

Animales deexperimentación

Humanos



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• Necropsias: Se obtienenpiezas de un cadáver. Parahistología normal es necesario

que se trate de un cadáver fresco y que no haya sidoatacado por ninguna lesión,por lo menos el órgano que sequiere estudiar.



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• Biopsias: son trozos de tejido quese obtienen de un sujeto con vidacon el objeto de estudiarlos al

microscopio y efectuar undiagnostico histopatológico.

•Piezas operadas: los tejidoshan sido extraídos de lasintervenciones quirúrgicas,generalmente tumores u órganosinflamados, también puedendarnos material de investigación.



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Preparación Histológica de lostejidos

1- Obtención de lamuestra

Fragmentos de tejido, deorigen humano o animal.



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Preparación Histológica delos tejidos

2-Fijación

Métodos

Químico: por inmersión

Físico: por congelación

Formalina: solución

acuosa de formaldehído al37%



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3-Deshidratación

Se extrae el agua deltejido, utilizando para

ello una serie de bañoscrecientes de alcohol.

Preparar al tejido para su encuentro conel medio de inclusión



4/8/12 TOMADO DE: Histologí a y Embriología del ser humano. Eynard-Valentich-



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4.- Aclaramiento: procesopor el cual se consigue la

sustitución del agentedeshidratante por unasustancia miscible(mezclable) con el mediode inclusión. (Xilol)



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5.-Infiltración (Impregnación oInclusión)

Proceso que tiene por objeto

“rellenar o infiltrar” completamentela muestra histológica con el medioque se va a usar para la imbibición(absorción) del tejido. (Bañossucesivos de parafina fundida)



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6.- Encastramiento deltejido y confección de losbloques: consiste en laobtención de un bloque sólidode tejido más medio deinclusión, mediante elenfriamiento lento a 10-15ºC:

El bloque sólido se llamaTACO.



4/8/12 TOMADO DE: Histología y Embriología del ser humano. Eynard-Valentich-



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7-Orientación de lapieza

Para realizar el corte deltejido se monta el taco en

el microtomo y seobtienen cortessumamente delgados (5-10 micrómetros).

Micro: pequeño / Tomo:corte

1 milímetro = 1000micrómetros



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8- Montaje: los cortes secolocan sobre láminasportaobjetos cubiertospreviamente con capa dealbúmina o gelatina



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9- Aclaramiento:Extracción de la parafinacon xilol(Desparafinación).



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10.- Rehidratación: desplazar el xilol por agua.Alcohol con agua en concentraciones decrecientes

11.- Tinción o Coloración: con coloranteshistológicos en su mayoría en solución acuosa

É Ó



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TÉCNICA HISTOLÓGICA O DE LA PARAFINA

FOTOGRAFÍAS: LABORATORIO HITOTECNOLOGÍA. DPTO CS.MORFOLÓGICAS Y FORENSES.

Mx. Fijadaen Formol

al 10%

Gasa eidentificaci

ón de laMx.

É Ó



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Corte deltejido (hoja

de Bisturí)

TejidoFijado

É Ó



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Corte deltejido (hoja

de Bisturí)

TejidoFijado




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Batería de Deshidratación Batería de Aclaramiento




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Estufa Inclusión en parafina fundida




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Estufa, con el tejido a ser incluido




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Cajas de papel para preparar el bloque




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Preparación del Bloque




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Tejido incluido en parafina




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Bloque terminado




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Microtomo




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Corte del tejido en el Microtomo

Bloque de

Tejido

Cuchilla delMicrotomo




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Tejido Cortado

Bloque de

Tejido

TejidoCortado




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Tejido Cortado en el Baño de flotación

TejidoCortado




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Montaje del tejido en el portaobjeto para sudesparafinación

Lámina

Portaobjeto

Tejido



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Biopsias porcongelación

•

Para identificar hallazgos intraoperatoriosinesperados, saber si se ha extirpado toda lamasa patológica y si el borde de la resecciónquirúrgica está libre de tejido enfermo• Se congelan fragmentos de tejido usandoanhídrido carbónico comprimido o un líquidofrío (isopentano) a una temp de -50ºC• Corte del tejido congelado en un criostato(cámara refrigerada que contiene unmicrotomo)• Montaje del corte en un portaobjetos

• Tinción del corte: HE, azul de metileno yPASEl proceso puede tardar 10 minutos y el

resultado se comunica al cirujanoinmediatamente



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Investigar: diferencias entre microtomo yultramicrotomo



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Histoquímica y Citoquímica

Procedimientos que proporcionaninformación detallada sobre laactividad química que tiene lugar encélulas y tejidos.

Colorante oanticuerpo marcado

Componentecelular o

actividadenzimática

Productocoloreado



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Composición química de las muestrashistológicas

La composición química de un tejidopreparado para la coloración de rutina esmuy diferente a la del tejido vivo.

Los componentes que quedan después

de la fijación son moléculas de gran tamañoque no se disuelven con facilidad, entreellos:

Nucleoproteínas

Proteínas intracelulares del citoesqueleto

Proteínas extracelulares

Complejos fosfolìpidos-proteínas



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Composición química de las muestrashistológicas

• Los solventes disuelven los lípidos neutros

• Las macromoléculas que se pierden durante la

fijación de rutina son: Glucógeno, Proteoglucanos

y glucosaminoglucanos

• Los componentes solubles, los iones y lasmoléculas pequeñas también desaparecen

durante la preparación de las muestras incluídas

en parafina: glucosa, sodio,cloro y sustancias

similares

• Estos iones y pequeñas moléculas solubles noconstituyen elementos morfogénicos hísticos sinoque participan en los procesos de síntesis o enlas reacciones celulares.



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Colorantes usados en

Microscopia ópticaFundamento: Radica en la propiedad quetienen todos los tejidos para incorporar y

fijar de modo variable diversas sustancias

coloreadas. Según su afinidad tisular:

Colorantes básicosColorantes ácidosColorantes neutrosColorantes metacromáticosColorantes indiferentes



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Colorantes Básicos: poseenuna carga global positiva

(catiónicos),reaccionan con loscomponentes aniónicos de lascélulas. Ej.Hematoxilina

Colorantes Ácidos: poseenuna carga global negativa(aniónicos), reaccionan con

los componentes catiónicosde las células. Ej. Eosina

Sección de un glomérulo de unriñón de mamífero teñido conhematoxilina-eosina. Los núcleosaparecen de color violáceo(hemtoxilina) y el citoplasma decolor rosado (eosina).



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Colorantes neutros: sucarga global es neutra.

Propiedad de colorear junta o separadamentediversas estructuras. Ej.Giemsa



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ColorantesIndiferentes:no poseen carácter

ácido, básico o salinodefinido.Colorean medianteimpregnación. Ejm: Plata

Fibras Reticulares

Ganglio de rata



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Coloraciones más

utilizadasColoración Hematoxilina-Eosina(H.E):

Utiliza dos tipos de colorantes. La

hematoxilina que es un colorante

básico, colorea los componentes

ácidos de la célula (núcleo) de color

morado; y la eosina que es un

colorante ácido se une a estructuras

básicas de la célula (citoplasma)

otorgándole una tonalidad rosada Testículo



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Coloración con PAS (ácidoperiódico-Shiff): se usa paradeterminar la presencia demacromoléculas ricas en

glúcidos como glucógeno,glucoproteínas yglucosaminoglucanos. Seobserva color fucsia almicroscopio óptico.(Coloración Histoquímica) Hígado. Glucógeno



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Coloración con Azán:

(tricrómica): se obtiene trescolores diferentes: Azul oscuro enlos núcleos de la célula; rojo en elmúsculo, queratina y citoplasmacelular, y azul claro en elmucinógeno y colágeno, o sea enel tejido conjuntivo

Coloración con metales:

actúan impregnando a ciertoscomponentes celulares. Se usanpara demostrar aparato de golgi,y las neurofibrillas.Ej: sales deplata, tetraóxido de osmio.

Tejido colágeno

Corte transversal denervio, la mielina (ennegro) coloreada contetróxido de osmio.



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Coloración conhematoxilina férrica: útil

para estudiar detallescelulares finos. Ej. Las fibraselásticas y las mitocondriaspresentes en el citoplasmade ciertas células

Tricrómico de Cajal y

Gallego: implica el uso detres colorantes. Parademostración diferencial yselectiva de las fibrascolágenas y del músculo.

Raíz de cebolla

Tejido conectivo denso decolor azul y el músculoestriado esquelético decolor rojo oscuro.



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La ocreína y la fucsina

resorcina: son colorantespara fibras elásticas. Seobservan entre bordeau ycastaño oscuro.

El t l l t b fili



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Elementos celulares que presentan basofilia,que representan los estructuras ácidas y se vende color morado al microscopio óptico- Heterocromatina y nucléolos del núcleo-

Algunos componentes citoplasmáticos- Material extracelular

Elementos celulares que presentan acidofilia,que representan las estructuras básicas y se vende color rosado al microscopio óptico-La mayoría de los filamentos citoplasmáticos-La mayoría de los componentes membranososintracelulares-

La mayoría de las fibras extracelulares



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Microscopía

Microscopio

Instrumento que amplifica una imagen y permite la

observación de mayores detalles de los posibles a

simple vista.

M. Óptico

compuesto

Campo claroCampo oscuroContraste de

faseFluorescenciaLuz U.V.

M. Electrónico Transmisión (MET)

Barrido (MEB)



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La Luz como onda

En una onda electromagnética, por ejemplo, elcampo eléctrico cambia en intensidad de maneracíclica así:

• Cada ciclo de la onda se repite en intervalos

separados por una longitud de onda• La frecuencia mide el número de estos ciclosque ocurren cada segundo.



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• En la luz, la longitud de onda determina el color de la luz(por ejemplo la longitud de onda correspondiente al colorverde es de 550 nanómetros)

EL ESPECTRO ÓPTICOLa luz blanca está compuesta de ondas de diversasfrecuencias. Cuando un rayo de luz blanca pasa por unprisma se separa en sus componentes de acuerdo a lalongitud de onda así:



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Mi í



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AUMENTO

Es la relación entre el tamañode la imagen y el del objeto en

medidas linealesEl Aumento de un microscopioes:Am= A lente objetivo x A Lente ocular

Ej: Ocular: 10XObjetivo: 40X

¿Cuanto es el aumento delmicroscopio?

Microscopía



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Microscopía

Poder de resolución

Es la capacidad de producirimágenes separadas de objetosque están muy cerca uno de otro.

Numéricamente equivale a d odistancia mínima entre dosobjetos distinguibles.Ojo humano: d= 0.2 mm

Depende de:Apertura numérica (An) delsistema óptico (objetivo ycondensador)Longitud de onda de la luzincidente ( )



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Microscopio óptico de Campo Claro

Usa Luz Visible. D = 0.2 um.(micrométro)La luz atraviesa el objeto examinado y elobjetivo capta la luz directa provenientede la fuente luminosaUtilidad: Académico, Diagnóstico clínico(Lab. Bioanálisis, Patológico), Investigación.

Componentes Principales:- Fuente Luminosa- Lente Condensadora: para enfocar el haz de luz a la alturade la muestra- Platina: sobre la que se coloca la muestra.- Lente Objetivo: para recoger la luz que ha atravesado lamuestra- Lente ocular: a través de la cual se puede examinardirectamente la imagen formada por la lente objetivo

Í



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MICROSCOPÍAPARTES DE UN MICROSCOPIO ÓPTICO

Mecánicas

•Cabezal

•Brazo

•Revolver

•Platina

•Carro

•Tornillosmacrométrico y

micrométrico•Base

Ópticas•Lámpara

•Condensad

or/Diafragma

•Objetivos

•Oculares



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Examen de unPreparado Histológico

con el Microscopio

Óptico

Los artefactos oartificios son elementos

querepresentan un error en elproceso de preparación(partículas de polvo,fragmentos de vidrio,agregados de colorante,filamentos de gasa etc.)



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OTROS SISTEMAS ÓPTICOS

• Microscopio de Contraste de Fase: Aprovechalas pequeñas diferencias en el índice de refracción quehay en diferentes partes de una muestra de células otejidos. -

Las partes oscuras corresponden a las regiones densasy las partes claras corresponde a las regiones menosdensas

Utilidad: permite observar las célulasen acción y estudiar los movimientosimplicados en procesos como la mitosis

o la migración celular. Estudiar cortessemifinos no teñidos



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Microscopio de Campo Oscuro

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La lente objetivo no capta la luz directa proveniente dela fuente luminosa-El principio se consigue con un condensador específicoque permite transmitir la luz de forma circular, dejandoel centro oscuro.- Con esto se logra que el fondo de la muestra aparezcanegro y los especimenes brillantes.-Utilidad: En la práctica clínica parala detección de cristales en la orinay la identificación de espiroquetas



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Microscopio de Fluorescencia-

Aprovecha la capacidad de algunas moléculas defluorescer bajo la luz UV-Utilidad: Detección de moléculas conautofluorescencia como la vitamina A y algunos

neurotransmisores (fluorescencia natural)- En técnicas de inmunocitoquímica (fluorescenciasecundaria),- En la investigación del trayecto de fibrasnerviosas



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Microscopio de Luz ultravioleta (UV)-

Utiliza lentes de cuarzo con una fuente de luz ultravioleta.- La imagen depende de la absorción de la luz UV por lasmoléculas de la muestra.-La muestra no puede inspeccionarse directamente através del ocular porque la luz UV no es visible y lesiona elojo.

Utilidad: Detectar ácidos nucleicos, enespecial las purinas y pirimidinas. Detectarproteínas que tienen ciertos aminoácidosen la práctica clínica para evaluar el grado

de ploidia en cortes de tumores



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MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA

Representa un gran adelanto respecto a lamicroscopía óptica ya que:

• La longitud de onda del haz de electrones es 2000veces

menor que la del haz de luz, por lo que aumenta laresolución por un factor de 10³• Los electrones no pueden atravesar el vidrio, por lo

quedeben remplazarse por bobinas o lentes

electromagnéticasExisten dos tipos: MET y el MEB



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Microscopio Electrónico de Transmisión

-

Utiliza un haz de electrones en lugar de un haz deluz

-La fuente es un filamento de tungstenocalentado que emite electrones

-El haz de electrones atraviesa unaserie de lentes electromagnéticas queCumplen la misma función que las lentes

cristal de un microscopio óptico-La imagen final se observa en una pantallafosforescente



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Microscopio electrónico de barrido

- El haz de electrones no atraviesa lamuestra sino que explora (barre) susuperficie.- Forma una imagen de tipo tridimensional

en un tubo de rayos catódicos de altaresolución.



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GRACIAS



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INVESTIGAR• 1-La célula: Concepto, función,

tipos (procariotas y eucriotas),tamaños y formas y organizacionescelulares.

• 2-Citoplasma: Organelasmembranosas: Membrana plasmática

o Plasmalema: Modelos



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• 3-Movilización de sustancias,receptores. Transporte vesicular.Exocitosis y endocitosis.

• 4-Endosomas, lisosomas, retículoendoplasmático liso y rugoso,

aparato de Golgi, mitocondrias,peroxisomas.

INVESTIGAR



• 5-Organelas No membranosas:(citoesqueleto) Microtúbulos,Microfilamentos, filamentos

intermedios, centriolos y centrosorganizadores de microtúbulos,cuerpos basales.Citosol. Inclusionescitoplasmáticas:

INVESTIGAR

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