Introducción a la Histología.Fundamentos Generales de la Preparación

Histológica de los Tejidos

QUE ES LA HISTOLOGIA?

“Estudio del Tejido”

Análisis de la composición microscópica y la respectiva función del material biológico.

Anatomía: estudio de la forma y la estructura de los organismos vivos organizados.

Anatomía Macroscópica: estudio de las estructuras observables a simple vista.

Anatomía Microscópica: aquella que requiere auxiliares ópticos.

Año 1600: primeras investigaciones histológicas (invento del microscopio). Marcello Malpighi es el fundador de la Histología. Año 1665: Hooke descubre que el tejido vegetal se constituye de pequeñas

cámaras (células). Teoría Celular: “La célula es el elemento fundamental del organismo al

que se deben trasladar todos los procesos vitales”. Las plantas y los animales son agrupaciones de estas unidades vivas potencialmente independientes.

Nace la Citología: estudio de la célula. “Las células se originan por división de otras células”, proceso que se

realiza en el núcleo. (Teoría de Virchow: omnis cellula e cellula).

Tejido: agrupación de células con la misma función. Órgano: unidad funcional mayor compuesto por distintos tipos de tejido. Sistemas de órganos: varios órganos con funciones relacionadas. Sistemas difusos: grupos celulares con funciones relacionadas

localizadas en varios órganos distintos.

“La Histología representa el nexo de unión entre la bioquímica, la fisiología y la genética, por un lado y los procesos patológicos y la clínica por el otro”.

QUE ES LA HISTOLOGIA? (Continuación)

Fundamentos Generales de la Preparación Histológica de los Tejidos (inanimados o muertos)

Muestra: se obtiene mediante extirpación de pequeños fragmentos de tejido (humano o animal).

Preparación de Tejidos para Microscopía Óptica:

1. Fijación: consiste en interrumpir los procesos de degradación que aparecen tras la muerte celular, tratando de conservar la arquitectura y composición tisular más próxima posible a como era en el organismo vivo.

2. Deshidratación: proceso mediante el cual se elimina completamente el agua del espécimen o muestra tisular para que se pueda embeber adecuadamente el tejido en aquellos medios de inclusión que no sean hidrosolubles. Se suele realizar usando alcohol etílico en concentraciones crecientes.

3. Aclaramiento: proceso por el cual se consigue la sustitución del agente deshidratante por una sustancia miscible con el medio de inclusión. Usualmente se realiza con el xileno (xilol).

Preparación de Tejidos para Microscopía Óptica:

4. Infiltración (Impregnación): Proceso que tiene por objeto “rellenar o infiltrar” completamente la muestra histológica con el medio que se va a usar para la imbibición del tejido. Se realiza mediante baños sucesivos en parafina fundida.

Baños(para inclusión)

Tiempo de procesamiento Manual Automático

Formol 10% Etanol 70% Etanol 95% Etanol 100% Etanol 100% Etanol 100% Alcohol-Xilol Xilol I Xilol II Parafina Líquida Parafina Líquida Parafina Líquida

2 horas2-4 horas2-4 horas1-2 horas1-2 horas1 hora1 hora1 hora1 hora1 hora2 horas

30 minutos1 hora1 hora1 hora 1 hora30 minutos45 minutos45 minutos1 hora1 hora1-2 horas

Fundamentos Generales de la Preparación Histológica de los Tejidos (inanimados o muertos)

Preparación de Tejidos para Microscopía Óptica:

5. Encastramiento del tejido y confección de los bloques: consiste en la obtención de un bloque sólido de tejido más medio de inclusión, mediante el enfriamiento lento a 10-15°C.Se utilizan las llamadas “estaciones de inclusión”: dispensador de parafina líquida, placa caliente para la orientación de la pieza y placa fria para la solidificación del bloque.Orientación de la pieza: Se coloca en la posición adecuada al tipo de corte que se desea realizar (la cara inferior del bloque será la superficie de corte). La parte más blanda del tejido debe cortarse primero y la más dura al final del proceso.Corte del bloque en un micrótomo de parafina con cuchilla de acero (3-8 µm de grosor).

6. Montaje: Colocar los cortes sobre portaobjetos cubiertos previamente con capa de albúmina o gelatina.

7. Coloración: Tinción con colorantes histológicos en su mayoría en solución acuosa (por lo que los cortes incluidos en parafina deben ser “desparafinados”, mediante xileno y luego rehidratados con concentraciones decrecientes de alcohol en agua).El método de tinción más usado en la Hematoxilina-eosina (HE)

Fundamentos Generales de la Preparación Histológica de los Tejidos (inanimados o muertos)

Preparación de Tejidos para Microscopía Electrónica:

1. Fijación: Glutaraldehído o Tetróxido de osmio.2. Deshidratación: Etanol y/o acetona en concentraciones crecientes3. Aclaramiento: óxido de propileno (1-2 epoxipropano).4. Inclusión: plástico (resinas). Epoxirresinas (araldite, resina epon y

resina de Spurr)5. Confección de los bloques y cortes con un ultramicrotomo con

cuchilla de vidrio o diamante (20-100 nm). El corte se controla con un microscopio y se aumenta el contrasta mediante el pasaje rápido por una solución de acetato de uranilo.No es necesario eliminar el plástico de inclusión.

6. Montaje: Los cortes ultrafinos se montan sobre un reticulado de cobre (“grilla”) cubierto por una película plástica de sostén delgada.

Fundamentos Generales de la Preparación Histológica de los Tejidos (inanimados o muertos)

Método de Preparación para Microscopia Óptica

Método de Preparación para Microscopia Electrónica

Fundamentos Químicos de la Coloración

El fundamento de cualquier método de tinción radica en la propiedad que tienen todos los tejidos para incorporar y fijar de modo variable diversas sustancias coloreadas llamadas colorantes.

Según su afinidad tisular:

Colorantes Básicos: aquellos que poseen una carga global positiva (catiónicos), por lo que reaccionan con los componentes aniónicos de las células y los tejidos. Ej.: Hematoxolina, fucsina básica, etc.

Colorantes Ácidos: aquellos que poseen una carga global negativa (aniónicos) por lo que reaccionan con los componentes catiónicos de las células y los tejidos. Ej.: Eosina, fucsina ácida, etc.

Colorantes neutros: su carga global es neutra por lo que conservan la propiedad de colorear conjunta o separadamente diversas estructuras. Ej.: tinción de Giemsa.

Colorantes metacromáticos: colorantes básicos que reaccionan con algunas estructuras tisulares que producen tonos de color totalmente distintos al que se espera por el colorante empleado. Ej.: azul de metileno o de toluidina en la sustancia fundamental del cartílago (azul al rojo o púrpura).

Colorantes indiferentes: aquellos que no poseen carácter ácido, básico o salino definido. Colorean mediante impregnación.

HISTOQUÍMICA Y CITOQUIMICA

Procedimientos químicos específicos que proporcionan información detallada sobre sustancias químicas y componentes en las células y tejidos.

Se fundamentan en: La unión específica a un colorante, El uso de anticuerpos marcados con un colorante fluorescente dirigidos

a un componente celular en particular, o la actividad enzimática inherente de un elemento constitutivo de las

células.

Métodos basados en la reacción de Schiff para grupos aldehído. Método del ácido peryódico-Schiff (PAS) Método de Feulgen.

Determinación histoquímica de lípidos. Determinación histoquímica de enzimas. Métodos inmunohistoquímicos.