Seminario 1 Histologia Microscopía, Tinción

7/26/2019 Seminario 1 Histologia Microscopa, Tincin

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Pacaya Chilicahua Luis MartinGRUPO 4 (Viernes)UNAP Facultad de Medicina Humana

Microscopio ptico y electrnico Coloraciones

histolgicas especiales.


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Ao de la consolidacin del Mar de Grau

ASIGNATURA: HISTOLOGA

TEMA: Microscopio ptico y electrnico Coloraciones

Histolgicas especiales.

DOCENTES: C.D. Manuel Meza Garay Blga.Estela TraversoAchaval

ALUMNO: Pacaya Chilicahua, Luis Martin

NIVELACADMICO : 2

CICLO ACADMICO : III

GRUPO : 4

IQUITOS LORETO PER

2016

UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA AMAZONIA

PERUANA


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DEDICATORIA

A Dios por darme la vida, la salud, la sabidura y la oportunidad de

realizar el presente trabajo.

A mis padres porque son los que me brindan su apoyo para podercumplir mis labores como estudiante de esta prestigiosa y

honorable Alma Mter.

A la universidad la cual me est forjando en el saber y me brinda

las posibilidades de ser mejor cada da.

A los docentes, quien, al otorgarme las facilidades del aprendizajeen una etapa universitaria, inculca en el saber cmo futuro

profesional y persona de bien, siendo un pilar de suma

importancia en mi formacin.


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AGRADECIMIENTO

Agradezco a la Universidad Nacional de la Amazona Peruana

por brindarme la posibilidad de ser buen profesional.

Adems, agradecer a los docentes por brindarme susenseanzas y conocimientos, por permitirme realizar este

trabajo del cual adquiero muchos conocimientos que me

servirn en mi formacin profesional.

A todas y cada una de las personas que de una u otra manera

colaboraron con la elaboracin del presente trabajo.

Y a mis padres por brindarme el apoyo moral y econmico que

se necesit para la elaboracin de este trabajo.


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INDICE:

1. Dedicatoria (pag.2)

2. Agradecimiento (pag.3)

3. Objetivo (pag.5)

4. Contenido (pag.5)

5. Introduccin (pag.5)

6. Microscopia(pag.6)

7. Microscopio pticos (pag.6)

8. Microscopio electrnicos (pag.8)

9. Coloraciones Especiales (pag.9)

10.Caractersticas De Las Observaciones Microscpicas (pag.13)

11.Conclusin (pag.15)

12.Anexo (pag.15)

13.

Bibliografa (pag.15)


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Objetivo General:Especificar las herramientas que utiliza la histologa para el estudio

estructural de tejidos y de la clula como unidad morfolgica y funcional del organismo,

y sus coloraciones histolgicas especiales.

Contenido:

Tipos de Microscopios y aplicacin.

Coloraciones histolgicas especiales.

INTRODUCCIN

La mayora de los tejidos, sobre todo los de los animales, son incoloros y por ello

necesitamos teirlos para observar sus caractersticas morfolgicas. Las tincionesgenerales estn basadas en el uso de colorantes, sustancias mediante las cuales

se consigue colorear a los tejidos. Los colorantes son normalmente hidrosolubles

y se caracterizan por unirse a ciertas molculas presentes en los tejidos gracias a

afinidades electro-qumicas. Se utilizan normalmente para teir a las clulas y

componentes tisulares que van a ser observados con el microscopio ptico y los

microscopios electrnicos que permiten alcanzar ampliaciones hasta 5000 veces

ms potentes que los mejores microscopios pticos, debido a que la longitud de

onda de los electrones es mucho menor que la de los fotones "visibles", por ellose realizan habitualmente sobre secciones de tejido, siendo las ms utilizadas las

secciones obtenidas a partir de inclusiones en parafina u obtenidas en el

criostato. Los colorantes son los elementos principales de las tinciones generales.

Son molculas que poseen tres componentes importantes: un esqueleto

incoloro, que normalmente es un anillo aromtico de benceno, al cual se le unen

dos tipos de radicales: uno que aporta el color, denominado cromforo, y otro

que posibilita la unin a elementos del tejido denominado auxocromo. Al

conjunto de estos tres elementos unidos en una molcula se denomina

cromgeno.


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MICROSCOPIA

El conocimiento detallado moderno de la arquitectura celular se basa sobre varios tipos

de observacin por diferentes tipos de microscopios

Qu es un Microscopio?Es un Instrumento que aumenta el tamao de una imagen y permite ver mayoresdetalles.

El Microscopio ms sencillo: lupa, lentes de correccin

M. ptico compuesto:- Campo claro- Campo oscuro- Contraste de fase

-

Fluorescencia- Luz U.V.

M. Electrnico:- Transmisin (MET)- Barrido (MEB)

MICROSCOPIO PTICO:

Microscopio ptico de Campo Claro

Usa Luz Visible. D = 0.2 um (micrmetro). La luz atraviesa el objeto examinado y elobjetivo capta la luz directa proveniente de la fuente luminosa,el ms utilizado, observamos en l un fondo luminoso, colorclaro pero en el organismo tenemos un ligero color oscuro(vemos las sombras). Si la luz no encuentra obstculos en sucamino, se divisa el campo claro. Su ampliacin mxima tilson 1000-2000. La muestra, aparece teida o no del color delcolorante utilizado. Se usa generalmente para ver

caractersticas morfolgicas de bacterias, hongos, algas yprotozoos.

Componentes Principales:Fuente LuminosaLente Condensadora: para enfocar el haz de luz a la altura de la muestra

- Platina: sobre la que se coloca la muestra.- Lente Objetivo: para recoger la luz que ha atravesado la muestra- Lente ocular: a travs de la cual se puede examinar directamente la imagen formadapor la lente objetivo.


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Microscopio de Campo Oscuro

La lente objetivo no capta la luz directa proveniente de la fuente luminosa.

El fondo es de color oscuro pero lo que observamos, es decir,

el microorganismo est claro. Se consigue colocando en elcondensador una anilla que permite el paso de unos rayos deluz de forma circular, que sern enviados y reflejados, con estose logra que el fondo de la muestra aparezca negro y losespecmenes brillantes.

Utilidad: En la prctica clnica para la deteccin de cristales en la orina y la identificacinde espiroquetas. Generalmente no se tie. Se usa para ver microorganismos quemuestran alguna caracterstica morfolgica en estado vivo y en suspensin. (Flagelos ocpsida por ejemplo).

Microscopio de Contraste de Fase

Aprovecha las pequeas diferencias en el ndice de refraccinque hay en diferentes partes de una muestra de clulas otejidos. Las partes oscuras corresponden a las regiones densasy las partes claras corresponden a las regiones menos densasUtilidad: permite observar las clulas en accin y estudiar losmovimientos implicados en procesos como la mitosis o lamigracin celular. Estudiar cortes semifinos no teidos.

Microscopio de Fluorescencia

Su ampliacin mxima til son 1000-2000. En la muestra se ven bacterias brillantes ycoloreadas, con el color del compuesto fluorescente. Estos compuestos transforman laluz, aumentan la longitud de onda para que podamos ver la luz ultravioleta, que es laque los activa. El ms utilizado es el microscopio de campo claro, pero con objetivos queproduzcan el contraste de fases, pudiendo alternar esta posibilidad con gran facilidad.

Utilidad: Deteccin de molculas con autofluorescencia como la vitamina A y algunos

neurotransmisores (fluorescencia natural).- En tcnicas de inmunocitoqumica (fluorescencia secundaria),- En la investigacin del trayecto de fibras nerviosas


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Microscopio de Luz ultravioleta (UV)

Para poder verla se hace incidir sobre una pantalla o si no por excitacin fotogrfica.Pero sobre todo se utilizan sustancias qumicas que absorben la energa de la luzultravioleta y emiten radiaciones que pueden ser vistas, colorantes fluorescentes.

Existen clulas que de por s son fluorescentes.

Utiliza lentes de cuarzo con una fuente de luz ultravioleta.La imagen depende de la absorcin de la luz UV por lasmolculas de la muestra.La muestra no puede inspeccionarse directamente a travsdel ocular porque la luz UV no es visible y lesiona el ojo.

Utilidad: Detectar cidos nucleicos, en especial las purinas ypirimidinas. Detectar protenas que tienen ciertos aminocidos en la prctica clnica para

evaluar el grado de ploidia en cortes de tumores.

MICROSCOPIO ELECTRNICO:

La luz se sustituye por un haz de electrones que pasan por un tubo (para mejorar el pasode los electrones, en el tubo se ha hecho el vaco). Importante: Permite la observacinde las estructuras interiores de las clulas. Sirve para visualizar virus. Tiene unaresolucin de 10 A (se pueden ver cosas muy pequeas, incluso molculas).

Microscopio Electrnico de Transmisin

Utiliza un haz de electrones en lugar de un haz de luz, la fuentees un filamento de tungsteno calentado que emite electrones.

El haz de electrones atraviesa una serie de lenteselectromagnticas que cumplen la misma funcin que las lentescristal de un microscopio ptico, la imagen final se observa en unapantalla fosforescente.

Microscopio electrnico de barrido

- El haz de electrones no atraviesa la muestra sino que explora (barre) su superficie.- Forma una imagen de tipo tridimensional en un tubo de rayos catdicos de altaresolucin.


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COLORACIONES HISTOLGICAS ESPECIALES:

Una tincin o coloracin es una tcnica auxiliar utilizada en microscopa para mejorar elcontraste en la imagen vista al microscopio. Los colorantes y tinturas son sustancias queusualmente se utilizan en biologa y medicina para resaltar estructuras en tejidos

biolgicos que van a ser observados con la ayuda de diferentes tipos de microscopios

La principal herramienta y base delestudio microscpico de la patologaquirrgica es la tincin conHEMATOXILINA-EOSINA de corteshistolgicos obtenidos tras fijacin deltejido en formalina, inclusin en parafinay obtencin de cortes de 5 micrasmediante un micrtomo.

En la tcnica de H&E., la tincin de losncleos en azul con hematoxilina esseguida del contraste del citoplasma y varios componentes extracelulares en rojo coneosina.

Esta tcnica permite un diagnstico microscpico correcto de la mayor parte de lasmuestras remitidas al laboratorio.

Sin embargo, dicha tcnica no puede responder a todas las preguntas que un

determinado caso plantea en el plano del diagnstico y es claramente insuficiente encuanto a histognesis, etiologa o patognesis. Como consecuencia, el patlogo habuscado siempre tcnicas adicionales para tratar de aclarar estas preguntas.Coloquialmente estas tcnicas se han llamado especiales simplemente porque seutilizan nicamente en circunstancias especiales.

Las ms usadas son las siguientes:

1. PAS (periodicacid-Shiff),Se usa como tcnica de rutina para observar las membranasbasales que separan el tejido epitelial del corin. Tie los ncleos de color azul, elglucgeno de color prpura y el material PAS + (polisacridos simples,mucopolisacridos neutros, mucoprotenas, glucoprotenas y glucolpidos) rojo rosa.

2. Tinciones para microorganismos (Tincin Gram, Warthin-Starry, Giemsa,Kinyon)

3. Tinciones argentafines y argirfilas4. Tincin de amiloide5. Tincin de reticulina6. Tinciones tricrmicas7. Tinciones para hemosiderina (Perls)8. Tinciones para calcio (vonKossa)9. Tincin de Giemsa

10.

Fibras elsticas


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MITOCONDRIAS:

Las mitocondrias son uno de los orgnulos ms conspicuos del citoplasma y seencuentran en casi todas las clulas eucariticas. Observadas al microscopio electrnicode transmisin (M.E.T.), presentan una estructura caracterstica: la mitocondria tiene

forma alargada u oval de 0,5 a 1 m de dimetro, y entre 1 m y varias micras de longitudy est envuelta por dos membranas distintas, una externa y otra interna (la quepresentan crestas mitocondriales), muy replegada.

Las mitocondrias son los orgnulos celulares encargados de suministrar la mayor partede la energa necesaria para la actividad celular, actan por tanto, como centralesenergticas de la clula y sintetizan ATP a expensas de los carburantes metablicos(glucosa, cidos grasos y aminocidos). Sin mitocondrias, los animales y hongos noseran capaces de utilizar oxgeno para extraer toda la energa de los alimentos ymantener con ella el crecimiento y la capacidad de reproducirse. Los organismos

llamados anaerobios viven en medios sin oxgeno, y todos ellos carecen de mitocondrias.

La ultra estructura mitocondrial est en relacin con las funciones que desempea: enla matriz se localizan los enzimas responsables de la oxidacin de los cidos grasos, losaminocidos, el cido pirvico y el ciclo de Krebs.

En la membrana interna estn los sistemas dedicados al transporte de los electronesque se desprenden en las oxidaciones anteriores y un conjunto de protenas(corpusculos respiratorios) encargadas de acoplar la energa liberada del transporteelectrnico con la sntesis de ATP, estas protenas le dan un aspecto granuloso a la cara

interna de la membrana mitocondrial.

Tambin se encuentran dispersas por la matriz una molcula de ADN circular y unospequeos ribosomas y poliribosomas implicados en la sntesis de un pequeo nmerode protenas mitocondriales

Las mitocondrias se fijan con el VERDE JANUS

Las Mitocondrias tienen "Enzimas Oxidativas dentrode ellas (Matriz mitocondrial), lacoloracin de Verde Jano tie a las mitocondrias dndoles el aspecto de pequeos

corpsculos de coloracin verde, o verde azulada cuando las enzimas oxidativas Oxidandicha coloracin (Verde Jano) en cambio, esa coloracin es incolora en el citoplasmacelular porque la misma esta reducida.


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RIBOSOMAS:

Los ribosomas son estructuras globulares, carentes de membrana.Estn formados qumicamente por varias protenas asociadas a ARN ribosmicoprocedente del nuclolo. Pueden encontrarse libres en el citoplasma o adheridos a las

membranas del retculo endoplsmico. Unas protenas (riboforinas) sirven de nexo entreambas estructuras.Su estructura es sencilla: dos subunidades (una mayor u otra menor) de diferentecoeficiente de sedimentacin.Su funcin consiste nicamente en ser el orgnulo lector del ARN mensajero, conrdenes de ensamblar los aminocidos que formarn la protena.Son orgnulos sintetizadores de protenas.

La hematoxilina se caracteriza por teir las regiones del ribosomas de color azul.

APARATO DE GOLGI:

Est formado por diferentes cisternas donde se modifican protenas y lpidos aadiendolos glcidos necesarios para su buen funcionamiento. Las Cisternas adoptan unaorganizacin concntrica, con una cara Convexa y otra Cncava. Cada una de las pilas decisternas constituye una estructura polarizada con una Cara Proximal o Formadora,generalmente convexa y ms cerca de la envoltura nuclear y una Cara Distal o en vas demaduracin, cncava, que rodea a la regin que contiene Vesculas secretoras grandes.

Las funciones del Aparato de Golgi son:

- Funciones de Secrecin, ya que en la cara externa de los Sacos membranosos y haciaambos costados comienzan a elaborar unas pequeas vesculas, que luego al aumentarde tamao se desprenden formando los LISOSOMAS.- En la cara interna comienzan a secretar pequeas y abundantes vesculas, que luegosern incorporadas una detrs de otra por un proceso de Fagocitosis hasta dar 1 o variasVesculas grandes llamadas VACUOLAS.- Se los considera como un verdadero DEPSITO ENERGTICO por la gran cantidad deProtenas, Lpidos, Hidratos de Carbono, Enzimas que presentan.- Los productos que se forman en otros lugares de la clula, se depositan en el aparatode Golgi y tambin participan en el depsito y modificacin de sustancias lipdicas.

- Intervienen en la secrecin y participan en la deposicin de la pared celular (vegetales).- Los productos de secrecin son sintetizados en el Retculo Endoplasmtico Rugoso,pasan al Complejo de Golgi donde son "empaquetados" y secretados mediantevesculas.


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RETCULO ENDOPLASMTICO LISO Y RUGOSO:

Retculo endoplasmtico rugoso (RER).El principal centro de sntesis proteica de la clula es la superficie del retculo

Endoplasmtico rugoso (RER). La sntesis de protenas o traduccin tiene lugar en los

ribosomas, donde los aminocidos son transportados por el RNA de transferencia(tRNA), especfico para cada uno de ellos, y son llevados hasta el RNA mensajero(mRNA), dnde se aparean el codn de ste y el anti codn del RNA de transferencia,por complementariedad de bases, y de sta forma se sitan en la posicin que lescorresponde. Las protenas que se sintetizan en los ribosomas del RE son protenas demembrana, de secrecin, protenas con diferentes destinos intracelulares y protenasque permanecen dentro de la clula para realizar funciones metablicas. Tambin esfuncin del RER transportar las protenas producidas en los ribosomas hacia las regionescelulares en que sean necesarias o hacia el aparato de Golgi, desde donde se puedenexportar al exterior.

Retculo Endoplasmtico Liso (REL)Interviene en la sntesis y metabolismo de casi todos los lpidos (cidos grasos y

fosfolpidos) que forman las membranas de la clula. Las clulas especializadas en elmetabolismo de lpidos, como las hepticas, suelen tener ms REL. En el retculo de lasclulas del hgado tiene lugar la detoxificacin, que consiste en modificar a una droga ometabolito insoluble en agua, en soluble en agua, para as eliminar dichas sustancias porla orina.

El REL tambin interviene en la absorcin, almacenamiento y liberacin de calcio

para mediar en algunos tipos de actividad y equilibrio celular. En las clulas del msculoesqueltico, por ejemplo, la liberacin de calcio por parte del retculo endoplasmticoactiva la contraccin muscular.


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CARACTERSTICAS DE LAS OBSERVACIONES MICROSCPICAS:

Coloraciones Utilizadas en Microscopa ptica

Fundamento: Radica en la propiedad que tienen todos los tejidos para incorporar y fijar

de modo variable diversas sustancias

Coloreadas. Segn su afinidad tisular:

Colorantes Bsicos: poseen una carga global positiva (catinicos), reaccionan con los

componentes aninicos de las clulas. Ej. Hematoxilina.

Colorantes cidos: poseen una carga global negativa (aninicos), reaccionan con los

componentes catinicos de las clulas. Ej. Eosina

Colorantes neutros: su carga global es neutra. Propiedad de colorear junta o

separadamente diversas estructuras. Ej. Giemsa

Colorantes metacromticos: colorantes bsicos. Produce tonos de color totalmente

distintos al que se espera por el colorante empleado.

Colorantes Indiferentes: no poseen carcter cido, bsico o salino definido. Colorean

mediante impregnacin.

Coloracin con PAS (cido peridico-Shiff): se usa paradeterminar la presencia de macromolculas ricas en

glcidos como glucgeno, glucoprotenas y glucosa

minoglucanos. Se observa color fucsia al microscopio

ptico.

Coloracin con Azn: (tricrmica): se obtiene tres colores diferentes: Azul oscuro en

los ncleos de la clula; rojo en el msculo, queratina y

citoplasma celular, y azul claro en el mucingeno y

colgeno, o sea en el tejido conjuntivo.

Coloracin con metales: actan impregnando a ciertos componentes celulares. Se

usan para demostrar aparato de golgi, y las neurofibrillas.
http://histologia.bigthicketdirectory.net/unidad6a/imagenes/neurag.JPG


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Coloracin con hematoxilina frrica: til para estudiar detalles celulares

finos. Ej. Las fibras elsticas y las mitocondrias presentes en el citoplasma de

ciertas clulas.

Tricrmico de Cajal y gallego: implica el uso de tres colorantes. Para demostracin

diferencial y selectiva de las fibras colgenas y del msculo.

La orcena y la fucsina resorcina: son colorantes para fibras elsticas. Se observan

entre bordeau y castao oscuro.

Carmn de Best: para tincin nuclear y deteccin de glucgeno.
http://www.telmeds.org/AVIM/Ahisto/Ahisto%202006/fotos%20aHisto/Picture17.jpg


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CONCLUSIN:

Parece factible que, si deseamos estudiar una clula o una asociacin de

ellas, para conocer su estructura morfolgica microscpica y deducir, en lo

posible sus funciones, bastara examinarlas a travs de los instrumentosque amplan imgenes de los objetos observados (microscopios fotnicos y

electrnicos); este procedimiento no es factible de realizar; al intentar

hacerlo se presentan serias dificultades en la manipulacin de los

especmenes y el inicio de los procesos propios de desarreglo molecular

(autolisis) y celular que suelen presentarse despus que las clulas y los

tejidos abandonan su hbitat natural. Por lo tanto, es necesario utilizar una

serie de procedimientos y artificios que nos permitan describir, comprender

y analizar la estructura microscpica de las clulas, tejidos y rganos.

ANEXO:

BIBLIOGRAFA:

METODOS HISTOTECNOLOGICOS.Mills, Bob y Edna B.Instituto de Patologa de los Estados

Unidos AFIPImpreso en Washington, D. C. 1995.280 pg.

Seminario 1 Histologia Microscopía, Tinción

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