GATEWAY® PYES-DEST52 VECTOR

DRA. MARTHA GUERRERO OLAZARÁN

DR. MARÍA JOSÉ VIADER SALVADÓ

MC. EDDY LUZ CAB BARRERA

EQUIPO 3:

CINTHIA VIOLETA HERNÁNDEZ PUENTE

LAURA CRISTINA LLANES MELGOZA

ISAAC MISAEL VÁZQUEZ HERNÁNDEZ

• Es una tecnología que toma ventaja de las propiedades de la recombinaciónsitio-específica del bacteriófago lambda (Landy, 1989) para proveer unarápida y eficiente forma de mover el gen de interés en múltiples sistemas devectores. Para expresar el gen de interés usando esta tecnología:

1. Clonar el gen de interés en un vector Gateway .

2. Generar una clona de expresión al realizar una recombinación LR entre elclon de entrada y el vector.

3. Transformar la clona de expresión en Saccharomyces cerevisiae y hacer elensaño para la expresión del gen de interés.

POLYLINKER

EL INSERTO

Debe tener una secuencia consenso para levaduras.

Para inducir la expresión del promotor GAL1, se añade galactosa al medio.

La transcripción de GAL1 se reprime en presencia de glucosa.

Si las células se mantuvieron con glucosa, la proteína puede ser detectada luego de 4 horas de haber inducido con galactosa.

La proteína recombinante puede ser detectada en células que han sido cultivadas con rafinosa por 2 horas antes de la inducción de la galactosa.

PARA DETECTAR LA PROTEÍNA

Anti-His

(c-terminal) por

Invitrogen

Anticuerpos Anti-V5

Ensayo enzimático o

Western blot

VECTOR

APLICACIONES• Vector que se utiliza en clonación, utilizando cepas de E.coli

que no se vean afectadas por el gen CcdB. Cepasrecomendadas por la compañía:

• También se utiliza como vector de expresión enSaccharomyces cerevisiae, el cual utiliza el sistemade recombinación sitio especifica como marcadorde la inserción correcta del fragmento de DNA deinterés.

• Para realizar tanto clonación o expresión, la empresa recomienda el uso del sistema Gateway Technology, para unos mejores resultados.

COSTOS

BIBLIOGRAFÍA

• Invitrogen (2002). pYES-DEST52 Gateway™ Vector. [EN LÍNEA] Disponible en: http://tools.lifetechnologies.com/content/sfs/manuals/pyesdest52_man.pd. [Último acceso 15 Noviembre 2013].