UNIVERSIDAD INTERAMERICANA PARA EL DESARROLLO

ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUIMICA

CURSO : FARMACOGNOSIA

TEMA : “DETERMINACION DE AZUCARES REDUCTORES

TOTALES (ART)” PRÁCTICA : N° 05 CICLO : V ALUMNO :

TOLEDO MEDINA FRANKLIN

LIMA – 2013

INTRODUCCION

Los azúcares reductores son aquellos azúcares que poseen su grupo

carbonilo (grupo funcional) intacto, y que a través del mismo pueden reaccionar

como reductores con otras moléculas.

Todos los monosacáridos son azúcares reductores, ya que al menos tienen un -OH

hemiacetálico libre, por lo que dan positivo a la reacción con reactivo de Fehling, a

la reacción con reactivo de Tollens, a la Reacción de Maillard y la Reacción de

Benedict. Otras formas de decir que son reductores es decir que presentan

equilibrio con la forma abierta, presentan mutarotación (cambio espontáneo

entre las dos formas cicladas α (alfa) y β (beta)), o decir que forma osazonas.

Los azucares reductores provocan la alteración de las proteínas la reacción de

glucosilación no enzimática también denomina reacción de Maillard o glicación.

Esta reacción se produce en varias etapas: las iniciales son reversibles y se

completan en tiempos relativamente cortos, mientras que las posteriores

transcurren más lentamente y son irreversibles. Se postula que tanto las etapas

iniciales como las finales de la glucosilación están implicadas en los procesos de

envejecimiento celular y en el desarrollo de las complicaciones crónicas de la

diabetes.

La glucosa es el azuzar reductor más abundante en el organismo. Su

concentración en la sangre está sometida a un cuidadoso mecanismo de

regulación en individuos sanos y en personas que padecen diabetes, aumenta

sustancialmente. Esto lleva a que este sea el azúcar reductor generalmente

considerado en las reacciones de la glucosilación no enzimática de interés

biológico.

PRACTICA N° 05 – DE FARMACOGNOSIA

DETERMINACION DE AZUCARES REDUCTORES TOTALES (ART)

I. MARCO TEORICO

Los azúcares reductores son aquellos azúcares que poseen su grupo carbonilo

(grupo funcional) intacto, y que a través del mismo pueden reaccionar como

reductores con otras moléculas. Todos los monosacáridos son azúcares

reductores, ya que al menos tienen un -OH hemiacetálico libre, por lo que dan

positivo a la reacción con reactivo de Fehling, a la reacción con reactivo de

Tollens, a la Reacción de Maillard y la Reacción de Benedict. Otras formas de

decir que son reductores es decir que presentan equilibrio con la forma abierta,

presentan muta rotación (cambio espontáneo entre las dos formas cicladas α

(alfa) y β (beta)), o decir que forma osa zonas.

La reactividad de los distintos azúcares está dada por la disponibilidad de su

grupo carbonilo. Se sabe que la forma abierta o extendida de los azúcares no es

muy estable, a tal punto que, por ejemplo, en la glucosa representa sólo el 0,002

%. Las moléculas de azúcar consiguen estabilizarse a través de un equilibrio entre

dicha forma abierta y por lo menos dos formas cerradas (anómeros cíclicos) en las

que el grupo carbonilo ha desaparecido.

De hecho, los azúcares fosfato, que son azúcares reductores de gran importancia

en el interior celular, poseen mayor capacidad glucosilante que la glucosa dada su

mayor proporción de forma carbonílica (abierta).La sacarosa las estructura de la

sacarosa, celulosa, hemicelulosa, almidón.

Los azúcares reductores provocan la alteración de las proteínas mediante la

reacción de glucosilación no enzimática también denominada reacción de

Maillard o glicación. Esta reacción se produce en varias etapas: las iniciales son

reversibles y se completan en tiempos relativamente cortos, mientras que las

posteriores transcurren más lentamente y son irreversibles. Se postula que tanto

las etapas iniciales como las finales de la glucosilación están implicadas en los

procesos de envejecimiento celular y en el desarrollo de las complicaciones

crónicas de la diabetes.

La glucosa es el azúcar reductor más abundante en el organismo. Su

concentración en la sangre está sometida a un cuidadoso mecanismo de

regulación en individuos sanos y, en personas que padecen diabetes, aumenta

sustancialmente. Esto lleva a que éste sea el azúcar reductor generalmente

considerado en las reacciones de glucosilación no enzimática de interés biológico.

Sin embargo, cualquier azúcar que posea un grupo carbonilo libre puede

reaccionar con los grupos amino primarios de las proteínas para formar bases de

Schiff.

II. MATERIALES Y REACTIVOS

HCl.

NaOH 2%.

Fehling A, B y C.

Agua Destilada.

Buretas.

Soporte Universal.

Mechero o cocinilla.

Pipetas.

Fiolas.

Matraz.

III. MUESTRA PROBLEMA

Miel.

Dextrosa 0.5 %

Miel Hidrolizada.

IV. PARTE EXPERIMENTAL

4.1. FUNDAMENTO

Los métodos utilizados en el análisis de la miel, para la determinación de

sacarosa se fundamentan en las propiedades ópticas de la sacarosa.

El método polarimétrico, se basa en la propiedad que tiene la sacarosa en

solución acuosa para rotar el plano de la luz polarizada (dextrorrotación). El

ángulo de rotación de soluciones de sacarosa pura es proporcional a su

concentración, con precisión suficiente para servir como medida del

contenido de sacarosa.

El método refractométrico, se basa en la propiedad óptica que tiene la

sacarosa al hidrolizarse para desviar el ángulo de la radiación incidente en la

interfase de dos medios de densidades diferentes, tomando como medio de

referencia el aire, por cambio en la velocidad de la radiación (refracción),

que se mide con el índice de refracción y es específico para sustancias puras

y en soluciones acuosas puras. En el análisis de sacarosa, el índice de

refracción de soluciones acuosas de sacarosa depende de la cantidad de

material disuelto y puede desde luego servir como medida del contenido de

sacarosa presente

Los dos métodos, son aplicables con gran exactitud a soluciones acuosas de

sacarosa pura, pero teniendo en cuenta que en el análisis de la miel virgen de

caña no se eliminan las demás sustancias presentes de la matriz de la

muestra y que esta contiene especies ópticamente activas, las cuales influyen

al igual que la sacarosa en los valores de rotación específica y en el índice de

refracción, por lo cual el resultado de estas medidas no es exactamente el

reflejo del contenido de sacarosa, pero son consideradas como una medida

aproximada de su contenido en estos productos en los que predomina su

concentración.

De igual forma, el análisis de azúcares totales como reductores por el

método de Lane y Eynon, aprovecha la propiedad del poder reductor que

tienen los azúcares para su cuantificación.

4.2. PROCEDIMIENTO

A. DETERMINACIÓN DEL TÍTULO DE FEHLING.

Preparar una solución de Dextrosa al 0.5% a partir de una solución de

Dextrosa al 5%, luego cargar a la bureta para ser titulada.

En un matraz colocar Fehling Estandarizado (mezcla de Fehling A, B y

C) 5mL de Fehling A, más 5mL de Fehling B, más 2.5mL de Fehling C;

luego se calentara hasta ebullición constante, hasta viraje de color de

Azul a Amarillo.

Anotar los resultados obtenidos, para luego hacer los cálculos

correspondientes. Se tomara como gasto el promedio de los demás

resultados que es 7.5 mL.

CALCULO DE TITULO DE FEHLING (T.F.)

B. DETERMINACIÓN DE AZUCARES REDUCTORES EN UNA

MUESTRA (MIEL).

Pesar 10gr. de Miel y llevar a una fiola y enrazar hasta 100mL con agua

destilada. Luego cargar a la bureta para proceder con la titulación.

En un matraz colocar Fehling Estandarizado (mezcla de Fehling A, B y

C) 5mL de Fehling A, más 5mL de Fehling B, más 2.5mL de Fehling C;

luego se calentara hasta ebullición constante, hasta viraje de color de

Azul a Amarillo.

Anotar los resultados obtenidos, para luego hacer los cálculos

correspondientes.

CALCULO :

C. DETERMINACIÓN DE AZUCARES REDUCTORES TOTALES

(ART).

Hidrolizar 10 mL de la MP con XXX gotas de HCl, colocando en Baño

María (BM) por 15 a 20 min.

Mantener el volumen constante, con H2O destilada. Evitar la ebullición.

Dejar enfriar y neutralizar la muestra con NaOH 10% hasta liger

alcalinidad, llevar a un volumen determinado con H2O destilada.

Colocar esta solución en bureta para valorar ART anotar el gasto.

CALCULO

4.3. RESULTADOS

Calculo del Título de Fehling = 0.0375 gr. o % Glucosa

Azucares reductores en una muestra (miel) = 7.5 % ARG

Azucares Reductores Totales:

V. CONCLUSIONES

Se demostró la buena precisión del método aplicando, comparado con otros

métodos existentes para esta determinación del porcentaje de sacarosa en la

miel de caña de azúcar y la dextrosa, demostrando una confiabilidad en los

daros obtenidos.

Mediante este método realizado se demostró que la cantidad de sacarosa en la

caña de azúcar está presenta una alta proporción, en comparación a la

proporción que la dextrosa se puedo obtener.

Se pudo comprobar de una forma visual el proceso de reducción con el

reactivo fehling ya que estos azucares reductores totales se transforman

fácilmente en enedioles al someterlos al calor.

Los ácidos clorhídricos y sulfúricos vuelven derivados furfurilicos a los

monosacáridos, también rompen los enlaces glucosidicos de los disacáridos.

El cambio de coloración a azulino en la prueba de polisacáridos demuestra la

formación del ioduro de almidón.

Se prueba que es un monosacáridos puesto que el reactivo de Lugol solo ataca

carbohidratos que no posean enlaces glucosidicos.

En la prueba de inversión de la sacarosa el ácido clorhídrico rompe los enlaces

glucosidicos de la sacarosa separándola en glucosa y fructosa.

VI. OBSERVACIONES Y RECOMENDACIONES

De acuerdo con los resultados obtenidos del estudio comparativo para

determinar el porcentaje de sacarosa en la miel de caña y la dextrosa, se

recomienda aplicar realizar las mediciones exactas y precisas para obtener los

resultados óptimos y confiables.

Se recomienda al realizar los análisis de azucares totales como reductores en

miel de Caña controlar las condiciones y los tiempos de reacción estipulados

en el procedimiento de los análisis.

Evitar las variaciones de la misma o de diferentes muestras que alteren el

resultado final debido a lo susceptible del método a las condiciones externas.

Realizar los cálculos exactos para la identificación de los azucares reductores

totales que se desea identificar.

Solicita los materiales y reactivos con anticipación para no tener ningún

inconveniente durante la realización de esta.

Al finalizar la práctica se debe dejar limpio todos los materiales utilizados,

también el ambiente donde se procedió dicha práctica.

VII. BIBLIOGRAFIA

María del Rosario García Fernández, Determinación de azucares reductores

totales, Universidad Autónoma de Nayarit, pagina 15-25la aurora 2007.

Eduardo Primo Yúfera, Química orgánica básica y aplicada: de la molécula a

la industria, pagina 895-901 tomo II.

Determinación de azucares reductores PEC/EN/V-058, Edición: 3 Pág.: 1 -3.

A.O.A.C. Official Methods of Analysis. 1980. Horwitz W. (ed). Ed. 13th.

Washington, U.S.A.

Ting, S.V. 1956. Rapid Colorimetric Methods for Simultaneous

Determination of Total Reducing Sugars and Fructose in Citrus Juices. Agric.

Food Chem. Vol. 4(3) 263-266.