Cultivo de Protoplastos Listo Para Expo

5/12/2018 Cultivo de Protoplastos Listo Para Expo - slidepdf.com

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: BIOTECNOLOGIA AGRICOLA

: PROTOPLASTOS Juan Alarcon Camacho

Jose Antonio Aguilar Davalos Carlos Enrique Juro Basilio Niler Hurtado

http://www.utea.edu.pe/Carreras/Agronomia.htm



PROTOPLASTOS

Cultivo y aplicaciones



Protoplasto:

Célula vegetal desprovista depared celular, por procesomecánico o enzimático.

Membrana plasmáticacompletamente expuesta.

Estado transitorio, permitemanipulación de esas células.

Mantiene potencialidades decélulas

vegetales completas.



1892 Primer aislamiento de protoplastos vivos decebolla por métodos mecánicos.

1919 Primer aislamiento enzimático, células delevadura.

1960 Aislamiento de protoplastos de plantassuperiores con degradantes de pared celular.

1971 Regeneración de plantas a partir de

protoplastos de Nicotiana tabacum.



APLICACIONES

Producción de híbridos por fusión

de protoplastos.

Manipulaciones genéticas.

Estudio de procesos fisiológicos y bioquímicos.



METODOLOGÍA

1. Aislamiento y factores que lo afectan

2. Purificación

3. Determinación de viabilidad

4. Cultivo

5. Regeneración



1) Factores que afectan la producción y viabilidadde los protoplastos

Fuente de material

Tratamientos pre-enzimáticos Tratamientos enzimáticos

Osmolaridad



2) Purificación



3) Viabilidad

Toma de oxígeno Actividad fotosintética

Tinciones



4) Cultivo

Medio de cultivo: MS, B5 (líquido o sólido)

Osmolaridad Densidad de plaqueo

Condiciones de almacenamiento

Material vegetal



5) Regeneración

Organogénesis/Embriogénesis somática Eficiencia generalmente baja



REGENERACIÓN DE PLANTAS DE ARROZ

POR CULTIVO DE PROTOPLASTOS.

Protoplastosaislados de

hipocótilo dearroz

Primer división deun protoplasto, a

los 4 días decultivo.

Grupos deprotoplastoscreciendo en

agarosa.



Bloques deagarosa flotandosobre medio de

cultivo.

Plántula derivadade protoplasto, entubo de ensayo.



HIBRIDACIÓN SOMÁTICA

Aislamiento de protoplastos

Fusión de protoplastos (fases)

Selección células híbridas

Cultivo de células híbridas

Regeneración de plantas

Caracterización de las planas híbridas



HIBRIDACIÓN SOMÁTICA



MECANISMO DE FUSIÓN

oTRES FASES: AglutinaciónFusión de membranas

Redondeamiento de protoplastos fusionados

oTRATAMIENOS:PEG

Alto pHCa+2



HIBRIDACIÓNSOMÁTICA

PROTOPLASTO A PROTOPLASTO B

AGREGACIÓN

FUSIÓN

DIVISIÓN CELULAR

CÉLULAS HÍBRIDAS



Hibridación somática en Dianthus



HIBRIDACION SOMATICA EN Dianthus



Hibridacion somatica entreD. Chinensis y D. caryophyllus



Problemas de la hibridación somática:

La regeneración de plantas a partir de protoplastos es

difícil, y a partir de productos de fusión aún más.

Ploidía de los híbridos es impredecible. Dificultades para recobrar la ploidía normal.

Híbridos con frecuencia presentan problemas de

esterilidad.



Logros de la hibridación somática:

Transferencia de esterilidad masculina de coliflor

(Brassica oleracea) a rábano (B. rapa) y a colza (B.

napus). Earle y Dicson, 1994).

Transferencia de resistencia a atrazina en Brassicas

(Christey et al. 1991).

Transferencia de esterilidad masculina en Nicotiana

(Zelcer et al. 1978). Diversos híbridos somáticos en especies ornamentales

y flores de corte.



Lin et al, 1987



Gracias

por su

atencion

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