BIOTECNOLOGÍA
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CULTIVOS CELULARES Y SUS APLICACIONES
APLICACIONES EN BIOLOGÍA CELULAR
• OBTENER Y AILAR LAS CÉLULAS DE UN TEJIDO
• TRASPASAR LAS CÉLULAS A UN MEDIO DE CULTIVO (FUENTE DE NUTRIENTES Y EL SUSTRATO DONDE
LAS CÉLULAS VAN A CRECER)
• MANTENCIÓN DEL CULTIVO BAJO CONDICIONES ADECUADAS DE ACUERDO AL TIPO CELULAR
(TEMPERATURA, CONCENTRACIÓN DE CO2, PH, ETC.)
CULTIVOS CELULARES Y SUS APLICACIONES
APLICACIONES EN BIOLOGÍA CELULAR
CULTIVOS CELULARES Y SUS APLICACIONES
APLICACIONES EN BIOLOGÍA CELULAR
LINEAS CELULARES TUMORALES (INMORTALES)
CÉLULAS QUE PRESENTAN UNA CAPACIDAD INDEFINIDA DE CRECIMIENTO EN MEDIOS DE
CULTIVO, INCLUSO ANTE MANIPULACIÓN GÉNICA O DE MUTACIONES DIRIGIDAS.
CULTIVOS CELULARES Y SUS APLICACIONES
APLICACIONES EN BIOLOGÍA CELULAR
• ENZIMAS• ANTICUERPOS
• FACTORES DE CRECIMIENTO• AGENTES CANCERÍGENOS
• ENTRE OTROS
GEN BACTERIA
PROTEÍNA
CULTIVOS CELULARES Y SUS APLICACIONES
APLICACIONES EN BIOLOGÍA CELULAR
EN EUCARIONTES, LAS PROTEÍNAS ESTÁN CONSTITUIDAS NO SOLAMENTE POR UNA LARGA CADENA DE AMINOÁCIDOS, SINO QUE TAMBIÉN
CONTIENEN COMPLEJOS MOLECULARES UNIDOS A ELLA, FRECUENTEMENTE CARBOHIDRATOS.
TRADUCCIÓN
COMPLEJOS MOLECULARE
SCULTIVOS CÉLULAS
ANIMALES
TRANSFECCIÓNINCORPORACIÓN DEL ADN
INCORPORACIÓN DE ADN DENTRO DE CÉLULAS DE UN CULTIVO, CON EL OBJETO DE QUE ESTAS SINTETICEN UNA PROTEÍNA EN PARTICULAR.
ELECTROPORACIÓNTRANSFECCIÓN
FORMACIÓN DE POROS EN LA SUPERFICIE CELULAR POR ESTIMULACIÓN ELÉCTRICA.
BIOBALÍSTICATRANSFECCIÓN
DISPARO DE MICROPROYECTILES RECUBIERTOS DE ADN DENTRO DE LA CÉLULA.
TRANSFECCIÓN VIRALTRANSFECCIÓN
INCORPORACIÓN DE ADN FORÁNEO A TRAVÉS DE VIRUS
ANTICUERPOS MONOCLONALES
CIERTAS PROTEÍNAS SON ALTAMENTE ESPECÍFICAS EN SU UBICACIÓN, HACIENDOLO SOLAMENTE EN
CIERTOS TEJIDOS E INCLUSO EN ALGUNOS ORGANELOS CELULARES.
INMUNOLOCALIZACIÓN
LOCALIZACIÓN DE PROTEÍNAS
ANTICUERPOS MONOCLONALES
SE UTILIZA LA CAPACIDAD DE LOS ANTICUERPOS PARA UNIRSE, DE FORMA BASTANTE ESPECÍFICA, A
MOLÉCULAS EXÓGENAS.
LOS CIENTÍFICOS HAN DESARROLLADO TÉCNICAS DE
INMUNOLOCALIZACIÓN.
TÉCNICA DE LOCALIZACIÓN POR ANTICUERPOS MONOCLONALES
INMUNIZACIÓN
1
SE INYECTA LA PROTEÍNA DE ESTUDIO A UN ANIMAL DE LABORATORIO
EL SISTEMA INMUNE DEL ANIMAL SE ACTIVA Y GENERA ANTICUERPOS ESPECÍFICOS PARA LA PROTEÍNA INYECTADA
TÉCNICA DE LOCALIZACIÓN POR ANTICUERPOS MONOCLONALES
PRODUCCIÓN DE HIBRIDOMAS
2
HIBRIDOMAS: FUSIÓN DE CÉLULAS PLASMÁTICAS (INMUNE) Y TUMORALES (CÁNCER)
CAPACIDAD DE PRODUCIR ANTICUERPOS REQUERIDOS Y MULTIPLICARSE RÁPIDAMENTE.
TÉCNICA DE LOCALIZACIÓN POR ANTICUERPOS MONOCLONALES
SELECCIÓN DE CÉLULAS HÍBRIDAS
3
LOS HIBRIDOMAS SON CULTIVADOS EN UN MEDIO ESPECIAL DENOMINADO HAT. EN ESTE MEDIO, SOLO LAS CÉLULAS HÍBRIDAS
PUEDEN SOBREVIVIR, POR LO TANTO, SE ELIMINAN LAS CÉLULAS TUMORALES Y LAS CÉLULAS PLASMÁTICAS NO FUSIONADOS.
TÉCNICA DE LOCALIZACIÓN POR ANTICUERPOS MONOCLONALES
IDENTIFICACIÓN DE CÉLULAS
PRODUCTORAS DE ANTICUERPOS
4
TODAS LAS CÉLULAS HÍBRIDAS SOBREVIVIENTES DEL CULTIVO HAT SON HÍBRIDAS, PERO SOLO UNAS POCAS PRODUCE EL ANTICUERPO NECESARIO.
PARA LA DETECCIÓN SE UTILIZAN PRUEBAS BIOQUÍMICAS. UNA VEZ DEFINIDAS SE AISLAN Y SE MANTIENEN EN CONDICIONES DE CULTIVO, PARA
GENERAR UNA GRAN CANTIDAD DE ANTICUERPOS.
TÉCNICA DE LOCALIZACIÓN POR ANTICUERPOS MONOCLONALES
MARCACIÓN DE ANTICUERPOS
5
LOS ANTICUERPOS GENERADOS SE MARCAN CON UNA SUSTANCIA FLUORESCENTE. ESTO PERMITE DETECTAR LA PRESENCIA DE LA PROTEÍNA A
TRAVÉS DEL COLOR DEL ANTICUERPO QUE FUE MARCADO.
GENERALMENTE SON MARCADOS CON REACTIVOS FLUORESCENTES, LAS QUE PUEDEN VISUALIZARSE EN MICROSCOPIOS DE FLUORESCENCIA.