BIOTECNOLOGÍA
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CULTIVOS CELULARES Y SUS APLICACIONES
APLICACIONES EN BIOLOGÍA CELULAR
• OBTENER Y AILAR LAS CÉLULAS DE UN TEJIDO
• TRASPASAR LAS CÉLULAS A UN MEDIO DE CULTIVO (FUENTE DE NUTRIENTES Y EL SUSTRATO DONDE
LAS CÉLULAS VAN A CRECER)
• MANTENCIÓN DEL CULTIVO BAJO CONDICIONES ADECUADAS DE ACUERDO AL TIPO CELULAR
(TEMPERATURA, CONCENTRACIÓN DE CO2, PH, ETC.)
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CULTIVOS CELULARES Y SUS APLICACIONES
APLICACIONES EN BIOLOGÍA CELULAR
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CULTIVOS CELULARES Y SUS APLICACIONES
APLICACIONES EN BIOLOGÍA CELULAR
LINEAS CELULARES TUMORALES (INMORTALES)
CÉLULAS QUE PRESENTAN UNA CAPACIDAD INDEFINIDA DE CRECIMIENTO EN MEDIOS DE
CULTIVO, INCLUSO ANTE MANIPULACIÓN GÉNICA O DE MUTACIONES DIRIGIDAS.
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CULTIVOS CELULARES Y SUS APLICACIONES
APLICACIONES EN BIOLOGÍA CELULAR
• ENZIMAS• ANTICUERPOS
• FACTORES DE CRECIMIENTO• AGENTES CANCERÍGENOS
• ENTRE OTROS
GEN BACTERIA
PROTEÍNA
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CULTIVOS CELULARES Y SUS APLICACIONES
APLICACIONES EN BIOLOGÍA CELULAR
EN EUCARIONTES, LAS PROTEÍNAS ESTÁN CONSTITUIDAS NO SOLAMENTE POR UNA LARGA CADENA DE AMINOÁCIDOS, SINO QUE TAMBIÉN
CONTIENEN COMPLEJOS MOLECULARES UNIDOS A ELLA, FRECUENTEMENTE CARBOHIDRATOS.
TRADUCCIÓN
COMPLEJOS MOLECULARE
SCULTIVOS CÉLULAS
ANIMALES
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TRANSFECCIÓNINCORPORACIÓN DEL ADN
INCORPORACIÓN DE ADN DENTRO DE CÉLULAS DE UN CULTIVO, CON EL OBJETO DE QUE ESTAS SINTETICEN UNA PROTEÍNA EN PARTICULAR.
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ELECTROPORACIÓNTRANSFECCIÓN
FORMACIÓN DE POROS EN LA SUPERFICIE CELULAR POR ESTIMULACIÓN ELÉCTRICA.
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BIOBALÍSTICATRANSFECCIÓN
DISPARO DE MICROPROYECTILES RECUBIERTOS DE ADN DENTRO DE LA CÉLULA.
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TRANSFECCIÓN VIRALTRANSFECCIÓN
INCORPORACIÓN DE ADN FORÁNEO A TRAVÉS DE VIRUS
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ANTICUERPOS MONOCLONALES
CIERTAS PROTEÍNAS SON ALTAMENTE ESPECÍFICAS EN SU UBICACIÓN, HACIENDOLO SOLAMENTE EN
CIERTOS TEJIDOS E INCLUSO EN ALGUNOS ORGANELOS CELULARES.
INMUNOLOCALIZACIÓN
LOCALIZACIÓN DE PROTEÍNAS
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ANTICUERPOS MONOCLONALES
SE UTILIZA LA CAPACIDAD DE LOS ANTICUERPOS PARA UNIRSE, DE FORMA BASTANTE ESPECÍFICA, A
MOLÉCULAS EXÓGENAS.
LOS CIENTÍFICOS HAN DESARROLLADO TÉCNICAS DE
INMUNOLOCALIZACIÓN.
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TÉCNICA DE LOCALIZACIÓN POR ANTICUERPOS MONOCLONALES
INMUNIZACIÓN
1
SE INYECTA LA PROTEÍNA DE ESTUDIO A UN ANIMAL DE LABORATORIO
EL SISTEMA INMUNE DEL ANIMAL SE ACTIVA Y GENERA ANTICUERPOS ESPECÍFICOS PARA LA PROTEÍNA INYECTADA
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TÉCNICA DE LOCALIZACIÓN POR ANTICUERPOS MONOCLONALES
PRODUCCIÓN DE HIBRIDOMAS
2
HIBRIDOMAS: FUSIÓN DE CÉLULAS PLASMÁTICAS (INMUNE) Y TUMORALES (CÁNCER)
CAPACIDAD DE PRODUCIR ANTICUERPOS REQUERIDOS Y MULTIPLICARSE RÁPIDAMENTE.
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TÉCNICA DE LOCALIZACIÓN POR ANTICUERPOS MONOCLONALES
SELECCIÓN DE CÉLULAS HÍBRIDAS
3
LOS HIBRIDOMAS SON CULTIVADOS EN UN MEDIO ESPECIAL DENOMINADO HAT. EN ESTE MEDIO, SOLO LAS CÉLULAS HÍBRIDAS
PUEDEN SOBREVIVIR, POR LO TANTO, SE ELIMINAN LAS CÉLULAS TUMORALES Y LAS CÉLULAS PLASMÁTICAS NO FUSIONADOS.
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TÉCNICA DE LOCALIZACIÓN POR ANTICUERPOS MONOCLONALES
IDENTIFICACIÓN DE CÉLULAS
PRODUCTORAS DE ANTICUERPOS
4
TODAS LAS CÉLULAS HÍBRIDAS SOBREVIVIENTES DEL CULTIVO HAT SON HÍBRIDAS, PERO SOLO UNAS POCAS PRODUCE EL ANTICUERPO NECESARIO.
PARA LA DETECCIÓN SE UTILIZAN PRUEBAS BIOQUÍMICAS. UNA VEZ DEFINIDAS SE AISLAN Y SE MANTIENEN EN CONDICIONES DE CULTIVO, PARA
GENERAR UNA GRAN CANTIDAD DE ANTICUERPOS.
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TÉCNICA DE LOCALIZACIÓN POR ANTICUERPOS MONOCLONALES
MARCACIÓN DE ANTICUERPOS
5
LOS ANTICUERPOS GENERADOS SE MARCAN CON UNA SUSTANCIA FLUORESCENTE. ESTO PERMITE DETECTAR LA PRESENCIA DE LA PROTEÍNA A
TRAVÉS DEL COLOR DEL ANTICUERPO QUE FUE MARCADO.
GENERALMENTE SON MARCADOS CON REACTIVOS FLUORESCENTES, LAS QUE PUEDEN VISUALIZARSE EN MICROSCOPIOS DE FLUORESCENCIA.
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