Laboratorio Nacional de ReferenciaServicio Bacteriología Clínica -

INEI -

ANLIS “Dr. Carlos G. Malbrán”Buenos Aires –

Argentinacslara@anlis.gov.ar

Avances en el Diagnóstico de Coqueluche

Latin

American

Regional Pertussis Workshop20‐21 de Febrero de 2019

Buenos AiresArgentina

Red de Meningitis e IRAs bacterianas

Coqueluche

‐134 

laboratorios 

distribuidos 

por 

todo el país.

‐Todas 

las 

provincias 

notifican 

los 

casos de Coqueluche al SNVS 2.0

INEI-A

NLIS-M

albrán

Coqueluche

Coquelucheuche

Niños, 

adolescentes y 

adultos

Adolescentes y 

adultosIN

EI-ANLIS

-Malb

rán

5

Aspirado 

Nasofaríngeo

Hisopado 

NasofaríngeoHisopo de Dacrón

ó

Nylon.  

NO ALGODÓN, NI 

ALGINATO CALCIO. Refrigerar a 4ºC.

ó

Ficha 

Epidemiológica

Medio de  Transporte: Entre 

2 

– 24 

hs: 

solución 

de 

Casaminoácidos

al 

0.5  ‐ 1 

% 

suplementado 

con 

carbón 

activado 

en 

concentración 

(4g/l 

) 

ó Regan

Lowe

al 50%.Si 

excede 

las 

6 

horas, 

refrigerar 

a 

4ºC.

CoquelucheMuestras para el diagnóstico por métodos directos

INEI-A

NLIS-M

albrán

Coqueluche

Coqueluche-IS481

‐pIS1001‐hIS1001

‐ptxS1

‐rnasaP

Ct for IS481:

<35: Positivo35‐40: Indeterminado≥40: Negativo

Multiplex

PCR

Single PCR

Diagnóstico molecular: PCR en Tiempo Real 

A novel multi‐target real time PCR assay for the rapid diagnosis of Bordetella

species in clinical 

specimens. Tatti

K., Sparks K., Boney K., Tondella M.L. J Clin

Microbiol. 2011 Sep 21.IN

EI-ANLIS

-Malb

rán

Coqueluche

90 muestras de ANF + 4 muestras de un Programa Externo de la Calidad.52 B. pertussis, 2 B. holmesii, 2

B. parapertussis, 2 co‐infecciones Bp/Bpp, 4 Indeterminados y 32 

Negativos.

Ensayo de Referencia (ES): ‐

Extracción de ADN con QIAamp

DNA kit‐

AB TaqMan™

Gene Expression

Master Mix‐

Primers y sondas (según Tatti

et al)

Ensayo en BD MAX Open

System

(OS): ‐

Extracción automatizada de ADN con BDMAX™

ExK™

DNA‐1 kit

(200μL de ANF + 550μL agua 

calidad PCR colocados en el BDMAX™

Sample

Buffer Tube)‐

DNA MMK‐SPC Master Mix‐

Primers y sondas (según Tatti

et al)La evaluación del Bias

se realizó

de acuerdo al documento EP09‐A3 de la CLSI.

Evaluación de PCR Real Time para diagnóstico de Coqueluche en la plataforma 

BD MAX – Sistema Abierto 

INEI-A

NLIS-M

albrán

Coqueluche

Resultados:

Evaluación de PCR Real Time para diagnóstico de Coqueluche en la plataforma 

BD MAX – Sistema Abierto 

OPA PPA NPA Coef. kappa Median Bias%

IS481 100%

(95% CI: 96‐100) 100%

(95% CI: 93‐100) 100%

(95% CI:89‐

100)1 ‐8.05. (‐10.32 ; ‐3.51)

ptxS1 94%

(95% CI: 87‐97) 94%

(95% CI: 83‐98) 94%

(95% CI: 81‐98) 0,88 ‐8.96. (‐12.90 ; ‐6.26)

Con BDMAX OS se detectaron 2 B. parapertussis, 2 B. holmesii, 2 co‐infecciones Bp/Bpp.

2/4 muestras fueron Indeterminados por ER (IS481: 35‐40 y ptxS1

negativo) y negativos por BDMAX OS.

Jonathan Zintgraff

, Lucía Irazu, Marcelo Rodríguez, Maite Arias, Gabriela Weltman, Claudia S. Lara (2018). Evaluation of BDMAX real‐time PCR as 

an open platform for detection of whooping cough. 28th European Congress of Clinical Microbiology and Infectious Diseases – Madrid, Spain.

INEI-A

NLIS-M

albrán

CoquelucheDetección de Anticuerpos IgG

anti

Toxina Pertussis (ELISA)

Sólo para adolescentes y adultos

INTERPRETACION DE RESULTADOS:

<49 UI/ml: Negativo

49‐93 UI/ml: Indeterminado

≥94 UI/ml: Positivo

Baughman

AL, Bisgard

KM, Edwards

KM, et al. Establishment

of

diagnostic

cutoff

points

for levels

of

serum

antibodies

to

pertussis toxin, filamentous

hemagglutinin, and fimbriae

in adolescents

and adults

in the

United

States.

Clin

Diagn

Lab

Immunol. 2004;11(6):1045‐53.IN

EI-ANLIS

-Malb

rán

Coqueluche

Casos con resultado positivo 33

Indeterminado 5

Detección de Anticuerpos anti

Toxina Pertussis (ELISA)

Se estudiaron 94 casos (12‐78 años)

Media días de tos: 29 días  (14‐64)

Concentración de IgG

anti

TP: 104 y ˃480 UI/ml

Síntomas‐signos prevalentes: paroxismos (82%), vómitos pos‐tusivos

(57%), síntomas catarrales (53%), apnea (46%) y estridor (29%). 

Tres casos presentaron neumonía.

INEI-A

NLIS-M

albrán

‐

Puede producir cuadros leves y también severos indistinguibles clínicamente de B. pertussis.

‐

Co‐circula junto a B. pertussis

y pueden observarse co‐infecciones.   

‐

En nuestro laboratorio, desde 2013 a la actualidad se detectaron

18 casos. 

Coqueluche

Nº

casos  Edad ó Grupo etario

Casos co‐infección Bp‐Bpp

4 < 6 meses 1 2 años 1 4 años1 8 años 

Casos Bpp

8 < 6 meses 1 10 meses1 2 años 1 5 años

Otras especies de Bordetella: B. parapertussis

INEI-A

NLIS-M

albrán

Coqueluche•La 

terapia 

antimicrobiana

de 

elección 

son 

los 

macrólidos

y 

en 

segundo 

lugar 

trimetoprima‐

sulfametoxazol. 

La resistencia de B. pertussis

a los macrólidos

es inusual, aunque se han descripto algunos casos 

en EE.UU, Francia  e Irán. 

•En 

China 

se 

ha 

registrado 

un 

aumento 

significativo 

de 

aislados 

que 

presentan 

resistencia 

a 

macrólidos.

•La resistencia de alto nivel a macrólidos

se asocia a la mutación A2047G en 23S rRNA. 

En Argentina:

B. pertussis

(n=104) 

‐

Eritromicina  CIM50/CIM90= 0.03/0.25 µg/ml

‐

Azitromicina CIM 50/CIM90= 0,016/0,03µg/mlINEI-A

NLIS-M

albrán

Servicio Bacteriología Clínica -

INEI -

ANLIS “Dr. Carlos G. Malbrán”Laboratorio Nacional de Referencia de coqueluche, enfermedad invasiva

por S. pneumoniae, N. meningitidis, H. influenzae, psitacosis, difteria y enfermedad causada por M. pneumoniae

y C. pneumoniae.

Mabel Regueira

María Estela Cadario

Adriana Efron

Mauricio Santos

Daniela Nápoli

María Alicia Moscoloni

Gustavo Ayala

Jonathan Zintgraff

Mariano Tristán

Claudia Lara