Benemérita Universidad Autónoma de Puebla.

Facultad de Ciencias Químicas.

Licenciatura en Químico Farmacobiólogo.

Area: Analisis Clinicos

Laboratorio de Hematología II

Equipo 5

Pulido Fernández María Guadalupe

Vega López Claudia Liliana

Perea Teres Jesús María

Profesor: Adriana González Flores

“ATLAS DE HEMATOLOGÍA”

OTOÑO 2014

CÉLULAS LEUCOCITARIAS

LINEA MONOCITICA

1. MONOBLASTOS:

Tamaño >20 μm Similar a mieloblasto, cromatina se tiñe más claro en Romanowsky. Citoplasma azul grisáceo más abundante que mieloblasto, sin gránulos, núcleo redondo, cromatina fina, presencia de nucléolos e invaginaciones en el núcleo.

Tiene actividad esterasa inespecífica, diferenciada por lo que por prueba alfa naftil butirato o naftol AS-D.Marcador de linaje CD14

2. PROMONOCITO:

Mide entre 14 y 20 μm, citoplasma azul grisáceo con finos gránulos azurofilos, núcleo irregular, con muescas y una fina red de cromatina, presenta nucléolos (1-2).

Posee peroxidasas inespecífica y fosfatasa alcalina leucocitaria.

3. MONOCITOS

Célula de 15-18 μm, mononuclear, lobulado, núcleo en forma de herradura o riñón, se observa como papel arrugado. Citoplasma azulado, puede tener pseudópodos, las vacuolas pueden estar ausentes o ser numerosas. Presenta muchos gránulos finos, con frecuencia dan un aspecto de vidrio esmerilado.

Monoblasto mieloperoxidasa positiva

LINEA LINFOCITICA

1. LINFOBLASTOS:

Miden de 10-18 μm, núcleo redondo-ovalado. Cromatina laxa, 1-2 nucléolos activos. Citoplasma escaso, basófililia proporcional a cantidad de RNA.

Positivo a fosfatasa acida, puede presentar depósitos de glucógeno.

2. PROLINFOCITO:

Tamaño entre 11 y 15 μm. Cromatina levemente condensada, relación núcleo-citoplasma es menor que en linfoblastos, citoplasma menos basófilos.

3. LINFOCITOS:

Miden entre 7-18 μm, presentan un núcleo redondo u oval, ligeramente dentado (no siempre). La cromatina se observa condensada. Citoplasma escaso a moderado, de color celeste, el cual puede presentar vacuolas. La presencia de gránulos azurofilos es escasa.

LINEA MIELOCITICA

1. MIELOBLASTO

Tamaño de 15-20 μm, con núcleo redondo-ovalado, con 2-5 nucléolos, y cromatina fina y laxa, citoplasma: con basofilia moderada, sin gránulos o muy escasosNo se deben encontrar en sangre periférica.

2. PROMIELOCITO

Es la célula granulocítica de mayor tamaño, de 20-25 μm. Alta relación núcleo-citoplasma, el núcleo es redondo-ovalado con 1-3 nucléolos y cromatina menos laxa que mieloblastos. Gránulos 1° escasos-abundantes (azules-negros) sin gránulos 2°.

Médula ósea 2-5%, sangre periférica 0%

3. MIELOCITO

Miden de 12-18 μm. Tiene un núcleo redondo-ovalado; puede presentar un lado aplanado, ya no se observan nucléolos, y la cromatina es mas gruesa y condensada, gránulos 1° son escasos o moderados y se observan de manera variable gránulos 2°. Se nota la presencia de aparato de Golgi. Disminuye la relación núcleo citoplasma.

Médula ósea 5-19%, sangre periferica: 0%(El color de los gránulos indican linaje neutrófilos, eosinófilos o basófilos).

Nucléolos

Mielocito neutrófilo

Mielocito eosinófilo

Mielocito basófilo

4. METAMIELOCITO

Tamaño de 10-15μm. Núcleo identado (menor al 50% del ancho del núcleo redondo hipotético), con forma de riñón. Sin nucléolos, cromatina condensada (grumos gruesos). El citoplasma se ve azul pálido incluso rosa con escasos gránulos 1° y abundantes 2°. La relación núcleo-citoplasma es de 1.5:1Médula ósea: 13-22%, sangre periférica 0%

5. NEUTROFILOS EN BANDA:

Tamaño entre 10-15 μm, núcleo estrechado, con forma de C o S pero no con filamento delgado, donde la cromatina es visible (grumos gruesos). Citoplasma color azul pálido a rosa.

Presencia de gránulos 1° escasos y 2° abundantes.

a) NEUTRÓFILOS POLIMORFONUCLEARES (PMN)

Miden de 12 a 14 μm, núcleo lobulado (2-5 lóbulos), conectados por filamentos delgados, cromatina de grumos gruesa, citoplasma color azul pálido a rosa, presenta gránulos 1° (escasos) y 2° (abundantes).

b) BASOFILOS

Miden entre 10 y 14 μm, con núcleo bilobulado, pero poco notorio debido a presentar grandes gránulos 2° intensamente basófilos, citoplasma color lavanda.

c) EOSINOFILOS

Tamaño promedio de 12-17 μm, núcleo con 2-3 lóbulos. Citoplasma rosa, puede presentar bordes irregulares. Tiene gránulos 2° citoplasmáticos de color naranja-rojo al teñirse con Wright.

LINEA MEGACARIOCITICA

1. MEGACARIOBLASTO

Mide entre 6 y 24 μm. Núcleo único, grande, ovalado o bilobulado, cromatina laxa, numerosos nucléolos. Citoplasma intensamente basófilo, agranular, puede presentar prolongaciones “pseudópodos”

2. PROMEGACARIOCITO

Mide de 30-50 μm. Inicia granulogenesis. Posee bordes mal limitados con numerosas prolongaciones. Núcleo multilobulado, cromatina densa y sin nucléolos. Citoplasma basófila, cubierta zonalmente por numerosas granulaciones azurófilas.

3. MEGACARIOCITO:

Tamaño >80 μm, elevada aploidia.

Dos tipos: a) agranular con núcleo multilobulado, citoplasma rosado y grande, membrana de demarcación asimétrica. b) maduros, liberadores de plaquetas, con extenso citoplasma sin basofilia, granulación azurofila, multilobulado o segmentado, cromatina condensada sin núcleos.

ALTERACIONES CITOPLASMÁTICAS MORFOLOGICAS DE LOS GRANULOCITOS.

1. Del núcleo

ANOMALÍA DE PELGER-HÜET

Aberración nuclear hereditaria autosómica dominante, caracterizada por la hiposegmentación del núcleo, aunque esto no presenta la perdida de la función celular. Los nucleos se presentan esféricos, ovaladas o bilobulados, la cromatina esta dispuesta en racimos

HIPERSEGMENTACIÓN HEREDITARIA

Anomalía autosómica dominante, sin importancia clínica pero debe diferenciarse de la hipersegmentacion por anemias megaloblásticas

GEMELIZACIÓN

Células con núcleo con simetría axial o espejo, caracterizada por el aumento de las extrusiones nucleares

CONDENSACIÓN DE LA CROMATINA

Células granulocíticas con núcleo poco lobulado y cromatina fragmentada y condensada.

SÍNDROME DE CHÉDIAK-STEINBRICK-HIGASHI.

Cuadro autosómico recesivo. Se observan lisosomas peroxidasa-positivos inusualmente grandes en la mayoría de las células. La granulación de los eosinofilos está aumentada, con aspecto cristaloide.

NECROBIOSIS

Los granulocitos mueren y la presencia de grandes cantidades de granulocitos muertos indica un compromiso importante de lso depósitos de granulocitos en desarrollo. las células parecen tener núcleos estallados y citoplasma pálido o no granular.

2. Del citoplasma

BASTONES DE AÜER

Inclusiones citoplasmicas en forma de bastón constituidas por gránulos alineados. Estos gránulos tienen actividad de fosfatasa

ANOMALIA DE MAY-HEGGLIN

Cuadro autosómico dominante. Se caracteriza por la presencia de formaciones grandes similares a cuerpos de Döhle en todas las células, además se presenta trombocitopenia y plaquetas gigantes, la forma es una combinación de bacilos y gránulos de origen ribosómico, grandes y de forma ahusada

y pueden estar presentes en monocitos y linfocitos.

GRANULACIONES TÓXICAS

Es la presencia de gránulos primarios anormalmente grandes o dominantes y más oscuros. Puede confundirse con una tinción escasa ya que esta provoca una granulación densa ficticia, que se observa diseminada en forma homogénea en cada células y en todos los granulocitos, mientras que la granulación toxica se disemina en de forma irregular en todo el citoplasma de determinadas células.

CUERPOS DE DHÖLE

Cuerpos compuestos de cadenas paralelas de RNRr, son esféricos o ovalados de 1.5µm de diámetro.

VACUOLIZACIÓN:

Vacuolas fagociticas se encuentran en los neutrófilos en diversas situaciones. Vacuolas por autofagocitosis son más pequeñas con una distribución más irregular que por ingestión o degradación de bacterias u hongos. Importancia clínica al asociarse con granulaciones tóxicas, degranulación o cuerpos de Döhle.

PSEUDPODÍA

Alteración de neutrófilos que presentan prolongaciones citoplasmáticas, asociadas a infecciones

ANOMALIA DE ALDER-REILLY

Trastorno recesivo en el que la disminución de la degradación mucopolisacarida provoca depósito granular en el citoplasma de la mayoría de las células (cuerpos de Alder-Reilly). Teñidos parecen gránulos metacromáticos (violeta oscuro-lila) y pueden confundirse con granulaciones toxicas.

Según su herencia pueden manifestarse solo en neutrófilos o en todas las células, donde la más grave presenta eosinófilos y basófilos con hipergranulación que los hace indiferenciables entre si.

TINCIONES ESPECIALES

MIELOPEROXIDASA

Detecta la enzima mieloperoxidasa la cual aparece de color ocre/marrón. Las células positivas a esta son:

Promielocito Mielocito Metamielocito Neutrófilo Eosinofilo Monoblastos y monocitos

Es útil para diferencia LLA (-) de LMA (+)

SUDÁN NEGRO B (SNB)

Detecta lípidos con una coloración negra. Las células positivas a esta son:

Promielocito Mielocito Metamielocito Neutrófilo

Eosinófilo Monoblastos y monocitos

Útil para diferenciar LLA (-) de LMA (+)

ESTERASAS

-Cloroacetato (NASDA). Positiva si hay precipitado azul. Positiva en monocitos, megacariocitos y plaquetas

-Butirato (Ácida). Precipitado marrón. Positiva en monocitos

-Acetato (ANAE) Positiva si hay precipitado rojo/marrón. Positiva en monocitos, megacariocitos, linfocitos Y, eritroblastos leucémicos.

ÁCIDO PERIÓDICO DE SCHIFF (PAS)

Para detectar gránulos de glucógeno, aparece una coloración rosada. Esta reacción es positiva para:

Neutrófilos Megacariocitos Plaquetas Linfoblastos Eritroblastos Linfocitos (10-40%)

Útil para el diagnostico de LLA (L1, L2) y LMA M6

FOSFATASA ALCALINA LEUCOCITARIA

Detecta a la enzima fosfatasa alcalina que aparece en una coloración marrón-negra. Las células positivas a esta son:

Neutrofilos

Útil para diagnosticar LMC

LEUCEMIAS (clasificación FAB)

LEUCEMIAS MIELODIDES AGUDAS

M0: Leucemia Mieloblástica aguda (mínima diferenciación)

Presenta una mínima diferenciación celular. Los blastos no tienen desarrollo de características mieloides. Un porcentaje ˃3% de células son mieloperoxidasa positivas o SNB positivas. No hay cuerpos de Auer.

Los blastos tienen citoplasma agranular y núcleo con cromatina laxa, presentan de 1-2 nucléolos prominentes.

M1: Leucemia Mieloblástica Aguda sin maduración

Desarrolla una diferenciación mieloide mínima, en médula osea el 90% de las células no eritroides son blastos; hay menos del 10% de maduración de las series granulocíticas más allá del estadio de promielocito, no presentan cuerpos de Auer, alrededor del 3% de las células serán positivas para MPO y SNB.

Los blastos presentan citoplasma don finas granulaciones, 1-2 nucléolos y una alta relación núcleo citoplasma

M2: Leucemia Mieloblástica Aguda con maduración

Hay signos visibles de linaje mieloide, el núcleo es irregular con nucléolos, la cromatina es laxa y el citoplasma es abundante y agranular, ya hay presencia de bastones de Auer

Al menos hay 30% de blastos cirvulantes, en médula ósea los blastos comprenden el 90% de las células no eritroides

Hay al menos 10% de céulas maduras de la serie granulocitica; además el 20% de células son monocíticas.

El 50% de las células son MPO y SDB positivas.

M3a: Leucemia Promielocítica Aguda (hipergranular)

Presencia de promielocitos anómalos o atípicos con núcleo arriñonado (de aspecto monocitoíde) y bilobulado, el citoplasma es altamente granular y hay presencia de bastones de Auer.

Debido a la hipergranulación las céulas son fuertemente positivas a MPO y SNB, PAS presenta positividad difusa

M3b: Leucemia Promielocítica Aguda microgranular.

Esta variedad es menos frecuente. En ella se presentan promielocitos sin gránulos visibles (observables con microscopia electrónica) y sin bastones de Auer.el núcleo puede observarse bilobulado El citoplasma suele observarse más basófilo debido a la baja

cantidad de granulación. En el citoplasma se puede observar como “arenilla”, debida a la granulación.

M4: Leucemia Mielomonocítica Aguda

Caracterizada por la proliferación de precursores de neutrófilos y monocitos. En medula ósea el 50% de blastos son mieloides y 20% son monocitoides. La línea monocitoide no debe exceder 80% de las células no eritroides.

Los monoblastos son grandes y con núcleos redondos, citoplasma abundante y nucléolos prominentes. Al menos 2% de los blastos son positivos para MPO (línea mieloide) y negativa para la línea monocítica y a NSE positiva para esta última.

M4Eo: Leucemia Mielomonocítica Aguda con eosinofilia

Presenta características morfológicas similares a la primera variante pero tienen además un componente eosinofilico anormal en médula ósea

M5a: Leucemia Monoblastica Aguda con poca diferenciación

Se caracteriza por la presencia de un 80% de células de línea mmonocítica incluyendo todos sus estados de maduración. Puede haber un componente menor de neutrófilos.

Esta variante se distingue por que más del 80% de las células no eritroides en médula ósea son monocitos o monoblastos.

Los monoblastos son células grandes con abundante citoplasma basófilo con algunos gránulos azurofilicos y vacuolas, el núcleo es redondo, cromatina laxa y uno o mas nucléolos grandes.

Los promonocitos tiene un núcleo irregular y convoluto, el citoplasma generalmente es basófilo, con algunos gránulos azurofilicos sin presencia de bastones de Auer.

M5b: Leucemia Monoblastica Aguda, con diferenciación.

En esta se presentan promonocitos y monocitos, los últimos en mayor proporción. Los promonocitos pueden presentar el núcleo arrugado con vacuolas o endosomas.

M6: Eritroleucemia Aguda

Es una forma rara de LMA caracterisada por una proliferación de elementos eritropoyeticos en la medula osea, eritroblastos con nucleos extraños, lobulados y mieloblastos patológicos.

50% de las células nucleadas medulares son eritroblastos, además de proeritroblastos. Además estas pueden presentar multinuclearidad y pueden hacer mitosis en circulación

M7: Leucemia Megacariocítica Aguda.

Megacarioblastos en circulación de mediano a gran tamaño, con nucleo redondo o indentado, con 1-3 nucléolos. Citoplasma basófilo a menudo agranular y con pseudopodos prominentes lo que le confiere un aspecto de timón de barco

˃30 de blastos en médula ósea yo sangre periférica.

SNB y MPO negativas. Pas, fosfatasa ácida y NSE positivas.

LEUCEMIAS LINFOBLÁSTICAS AGUDAS

L1

Células pequeñas, con cromatina fina condensada, un núcleo regular, el cual puede o no presentar hendiduras o plegamientos. No se puede distinguir nucléolo, citoplasma escaso con basofilia leve. Puede confundirse con una leucemia mieloblástica.

L2:

Células grandes y pleomórficas, con cromatina fina y laxa. Linfoblastos con patrón nuclear homogéneo, uno o más nucléolos prominentes en citoplasma abundante. Puede confundirse con una leucemia mieloblástica.

L3

Presenta una fuerte basofilia en el citoplasma y abundantes vacuolas. Núcleo redondo- ovalado, con 1-2 nucléolos y cromatina fina.

LEUCEMIAS CRONICAS

Leucemia mieloide crónica

Se caracteriza por dos fases: a) la fase crónica, lenta, caracterizada por la acumulación de precursores de la línea granulocitica en sus diferentes etapas de maduración, en médula ósea y sangre periférica. b) la dase aguda o crisis blastica, caracterizado por la predominancia de una clona en la cual las células fallan en su diferenciación. En esta situación un 60% de las células son fenotípicamente mieloblastos y un 30% linfoblastos

Leucemia Linfocítica Crónica

Es una proliferación monoclonal maligna de linfocitos B en su mayoría (95%) y el resto (5%) son linfocitos T.

Existen subgrupos: LLC-B, LLC-T y LLC-TA (células T de adulto), leucemia prolinfocitica, tricoleucemia, linfoma cutáneo de células T, el linfoma y macroglobulinemia de Waldenström.

Pueden existir una gran población de células diferenciadas y una pequeña población de células proliferativas.

Leucemia de Células Peludas (pilosas)

De origen B. los hallazgos de una proporción variable de células peludas en sangre periférica, estas células presenta bordes irregulares con finas proyecciones citoplásmicas, citoplasma gris-azulado y núcleo excéntrico, pueden presentar inclusiones citoplásmicas conocidas como complejos ribosoma-lamelares.

DESÓRDENES MIELOPROLIFERATIVOS

CRONICOS

Leucemia Mielógena Crónica

Es un desorden proliferativo hematopoyético asociado a un defecto de gen especifico, donde se observan leucocitosis neutrofilica, neutrófilos inmaduros en sangre periférica e incremento de basófilos.

El defecto del gen es la t(9;22), positivo en 90-95% de los casos (cromosoma Philadelphia CPh1). La translocación

permite la formación de un gen hibrido llamado BDR-ABL.

Se observa un claro desorden en las células clónales, leucocitosis en todos los estados de maduración granulocítica, trobocitosis. Se consideran 3 etapas.

1aetapa: crónicaSangre periférica: Leucocitosis con neutrófilos en todos los estados de maduración. Blastos >2%, incremento de basófilos, incremento de eosinofilos, trombocitosis.

M.O.: Hiperplasia en línea mieloide, blastos <5% M:E=10:1. Incremento de formas inmaduras de basófilos.

2a etapa: aceleradaSangre periférica: Incrementa de promielocitos y blastos. Basofilos >20%, anemia (incremento de células nucleadas eritroides).

MO: displasia, blastos >5% <20%, incrmento de basófilos, proliferación megacariocitica, fibrosis.

3a etapa: blasticaSangre periférica: Blastos >20%, incremento de promielocitos, basófilos y eosinofilos. Trombocitopenia.

MO: blastos >20%, fibrosis, displasia de las tres líneas celulares.

Leucemia Neutrofilica Crónica

Leucemia Eosinofilica Crónica

Policitemia Vera

MIELOFIBROSIS CON METAPLASIA MIELOIDE

Es un desorden crónico mieloproliferativo caracterizado por

fibrosis en medula osea, proliferación de megacariocitos y granulocitos, y una hematopoyesis extramedular. En sangre periférica se observa leucoritroblastosis, células de lagrima.

Trombocitemia esencial

Caracterizado por proliferación clonal de megacariocitos en medula. En sangre periférica conteo > 600,000/ μm hasta 1 millón. Hiperplasia megacariocitica.

LINFOMAS

ANORMALIDADES MORFOLOGIAS EN SANGRE PERIFERICA Y MEDULA OSEA:

Diseritropoyesis

SP: presencia de macrocitos ovalados.en presencia de valores normales de Vit B12 y folato los SMD deben incluirse en el diagnositco diferenical. Microcitos hipocrómicos con reservas adecuadas de hierro.

MO:precursores eritrocitos con más de un núcleo y/o formas nucleares anormales. En ocasiones hay puentes internucleares. Citoplasma anorma: punteado basófilos o coloración heterogenea. Presncia de sideroblastos.

Dismielopoesis

En SP: Basofilia en citoplasma de leucocitos maduros en otros aspectos (asincronia núcleo-citoplasma). Granulacion anormal de citoplasma (más grandes, hipogranulación, agranular).Nucleares; hipersegmentación, hiposegmentación, anillos nucleares).

MO: asincronia núcleo-citoplasma. Citoplasma con coloración desigual, anillo denso de basofilia alrededor de la periferia con área clara no teñida alrededor del núcleo o porciones enteras de citoplasma sin colorear con restos.

Dismegacariopoyesis

SINDROMES MIELODISPLASICOS (FAB)

Anemia refractaria

Anemia refractaria con sideroblastos anulares (arsa)

Anemia refractaria con exceso de blastos (AREB)

Leucemia mielomonocitica crónica (LMMC)

Anemia refractaria con exceso de blastos en transformación (AREB-t)

Bibliografia :

Rodak, F. Benadette “Hematología: Fundamentos y aplicaciones clinicas” Editoriar medica Paramericana.

“Atlas de hematología de células sanguíneas” Carmen Beatriz Universidad Católica de Manizales.

“Atlas de morfología celular, alteraciones y enfermedades relacionadas” Aura R. Manascero Centro Editorial Javerino CEJA.

“Anomalías morfológicas de los leucocitos en el niño” Acta Bioquimica Clinica Latinoamerica vol. 43, núm. 4, 2009. pp. 665-677 Federacion Bioquimica de la Provincia de Buenos Aires Argenina Red de Revistas Cientificas de America Latina, el Caribe, España y Portugal.

“Pathophysiology of Blood Disordes” H. Franklin Bunn, Jon C. Aster. Ed. MacGrawHill LANGE Part III White Blood Cell Disordes.