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Aplicaciones de Biotecnología para el Desarrollo Agropecuario desde la
Empresa Privada.
Gerencia de Operaciones Agrícolas - Gerencia de Campo - Agronomía -Departamento de BiotecnologíaIng. Guillermo Ramirez Ch.; Ing. Juan P. Erazo; Ing. Reinaldo Meneses S.; Lic. Angela M. Fuentes; Lic. Prudencia E.Guevara; Lic. Silvia C. López; Ing. Heidi M. Hernández & Dr. Abby S. Guerra.
Mayo 2018
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LAB
LPHLCB
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Biotecnología al Servicio de la Agricultura
Laboratorio de Biotecnología1. Biofábrica - Vitroplantas certificadas2. Diagnostico Molecular por PCR de Enfermedades3. Producción de Bacterias benéficas para Caña de Azúcar
Laboratorio de Control Biológico1. Producción de Insectos y Nematodos - controladores biológicos
de Diatraea sp, Telchin licus, Aenolamia sp y otros.
Laboratorio de Producción de Hongos1. Hongos Entomopatógenos2. Hongos Micoparásitos
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In vitroBiofábrica
Ex vitro
Test de bacterias
Ápices MeristemáticosDiagnóstico Molecular
BITs Prop. Conv
Siembra directaen campo
Banco de Donantes
Aclimatación
Etapas de la Micropropagación
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Etapa 0 Selección del Material Vegetal
Establecimiento In VitroEtapa 1
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Etapa 1
Etapa 2
Diferenciación y Crecimiento del Ápice
Testaje y Certificación por PCR
In Vitro
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Etapa 3 Micropropagación ConvencionalCámara de Flujo Laminar
Plantas Diferenciadaspara Separar (subcultivo)
Plantas en Crecimiento
Trabajos Asépticos enCámara de Flujo, con el finde evitar contaminaciones
In Vitro
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Etapa 4 Biorreactores de Immersion Temporal BIT
In Vitro
Selección de Cluster Inoculación de Cluter en BITs BITs ensamblado
Primera fase de BITsBITs elongados y enraizados
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Etapa 5 Enraizamiento de Vitroplantas
In Vitro
Enraizamiento en Biorreactores deInmersión Temporal
Plantas listas para transplante
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Transplante y Aclimatación
Sistemas de enraizado Siembra en SustratoAclimatación bajo Zarán
Aclimatación Directa
Ex Vitro
Etapa 6
Vitroplantas de 2 mesesIzq. y de 22 días Der.
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Transplante de Plántulas a CampoEtapa 7
Plantas Endurecidas Transplante
Plantas de 3 MesesPlantas Recién Sembradas
Ex Vitro
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Diagnóstico Molecular
(RSD)
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Resultados mediante PCR
Fase acuosa (ADN y ARN)Fase Orgánica (Proteínas)
Materiales en la Cámara de extracción de gases
Separación de Fases
ElectroforesisDiagnóstico Molecular
Extracción de ADN y ARN
Proceso en Laboratorio de PCR
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Producción de Bacterias Endófitas
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METODOLOGÍA DE AISLAMIENTO
1. 2.
3.
TEJIDOS DE CAÑA DE AZÚCAR (HOJAS TALLOS Y RAÍCES)NUDOS Y ENTRENUDOS
YEMAS GERMINADAS
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Bacterias Endófitas
Bacterias endófitas cultivadas enmedios sólidos semi-específicos.A. Gluconacetobacter spp en medioLGI-P; B. Gluconacetobacter spp enmedio PDA; C. Azospirillum spp enmedio Rojo Congo; D.Herbaspirillum spp en medio JNFb;E. Burkholderia spp en medio JMV;F. Tinción de Gram (Cepa G625-Y2).
ENSAYO EN INVERNADEROLas imágenesmuestran cadauna de lasplantasinoculadas conlas diferentescepas deCALESA y sucontrol(izquierda)
APLICACIONES EN CAMPOS EXPERIMENTALES
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Producción y Aplicación de Bacterias Endófitas
Aplicación en Campo
Inoculación en Caña Planta
Inoculación -Soca o Retoño
Inoculaciones en Campos Comerciales de Arroz
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Resultados de Aplicaciones – Bacterias Endófitas
En CALESA para 2017 – 2018, se estan haciendo evaluaciones con reducción de fertilizante químico.
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Laboratorio de Control Biológico - LCB
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Medios Biológicos y Plagas en Caña de Azúcar
Diatraea spp
Tetrastichus howardi12,000 adultos/Ha
30 pupas Galleria/Ha
(3 cartuchos/ha)
Lixophaga diatraeae120 Adultos/Ha (65%
hembras)
(10 cartuchos/ha)
Nematodo entomopatógeno
Heterorhaditisbacteriophore50 millones/Ha
Aeneolamia(Salivazo)
Telchin licus (Castnia
licus)
Medios Biológicos Plaga
Larvas
Elasmophalpus, Spodoptera y otros
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Laboratorio de Producción de Hongos - LPH
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METODOLOGÍA DE AISLAMIENTO
1.
4.
3.
2.
TEJIDOS DE CAÑA DE AZÚCARINSECTOS DE CAMPOS DE CAÑA DE
AZÚCAR
COLECTA EN BOSQUES SECUNDARIOS
MUESTRAS DE SUELO
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METODOLOGÍA DE PRODUCCIÓN Trichoderma sp
TUBOS PRESERVADOS
PLATOS PDA TUBOS INCLINADSOS PDA
MEDIO SALES MEDIO SALES- PROCTO FINAL
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METODOLOGÍA DE PRODUCCIÓN Beauveria sp y Metarhizium sp
TUBOS PRESERVADOS
PLATOS PDA TUBOS INCLINADSOS PDA
MEDIO DIETA DE Galleria mellonella
Beauveria sp y Metarhizium sp
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Evaluación de Cepas de Trichoderma sp
Pruebas Antagonismo
Los porcentajes de inhibición del crecimiento radial de Fusarium varían en un rango de 49 – 68 %mientras que los de Curvularia sp. entre 25 – 70%. Esto refleja que los aislados de Trichoderma, difierenen su poder antagónico hacia los patógenos selectos. El aislado de Trichoderma que tiene el mejorefecto antagónico contra Fusarium sp. mostró un porcentaje de 68% de inhibición; sin embargo, sóloejerce un 50% de inhibición contra Curvularia sp. Las Trichoderma que presentan el mejor antagonismocontra Curvularia sp. mostró un porcentaje de 70% de Inhibición; sin embargo, sólo ejercen un 49% y61% de inhibición contra Fusarium sp. En el caso antagónico contra Rhizopus sp las cepas mostraron unporcentaje de inhibición desde 80 a 93% considerándose según el rango de evaluación desde muy Alto aAlto.
Trichoderma sp vs Curvularia sp Trichoderma sp vs Fusarium sp Trichoderma sp vs Rhizopus sp
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Prueba de Virulencia con Beauveria sp
Pruebas VirulenciaLarvas
Micosadas
Los resultados obtenidos en elensayo de virulencia utilizandolarvas de Galleria mellonellainoculadas con 12 cepas deBeauveria sp mostraronresultados no muy relevantesdebido a que se utilizaron larvasmuy adultas.
Se logró observar que algunascepas como BV-CA11 y BV-CA06 presentaron larvasmicosadas por el hongo el cualfue identificado comoperteneciente al géneroBeauveria sp.
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PRODUCCIÓN MASIVAProducción Masiva
Para la producción en medio líquido se utiliza como sustrato dieta usada deGalleria mellonella como también medio a Base de Sales. Para la producción ensólido se utiliza como sustrato de crecimiento arroz pre-cocido.
MEDIO LÍQUIDO MEDIO SÓLIDO
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PRUEBAS REALIZADAS
PRUEBAS CON YEMAS DE CAÑA DE AZÚCAR PRUEBAS CON SEMILLAS DE ARROZ
• Los tratamientos con mejores resultados fueron TR-CA11,TR-CA25 y TR-CA26 los cuales mostraron valoressuperiores al tratamiento BIO TRI y CONTROL.
Ensayo con semillas de arroz de la variedad IFL-137-11(germinación de las semillas a los 15 días), donde lostratamientos TR-CA11, TR-CA25, TR-CA26 y TR-CA05resultaron con valores mayores al tratamiento CONTROL.
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RESULTADOS OBTENIDOS
Variables evaluadas fueron población, Altura, Diámetro yTon/ha. Este campo fue inoculado con Trichoderma sp.Según los resultadsos, la cepa de Trichoderma sp resultócon porcentajes sobre el Tratamiento CONTROL en lasvariables Población (2.01%), Altura (6.25%), Ton/ha(4.57%), sin embargo para la variable Diámetro eltratamiento CONTROL fue superior al tratamientoinoculado.
CAMPOS COMERCIALES DE CAÑA DE AZÚCAR CAMPOS COMERCIALES DE ARROZ
Los resultados de los campos 973, 986 y 550pertenecientes a las fincas de GANACO muestrandiferencias de rendimiento de 12.06, 13.65 y 7.59QQ/Ha superiores al tratamiento control (sininoculación). Esto representa un 9.1, 12.6 y 8.3 %de incremento con respecto al control.
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Equipo de Trabajo Biotecnología CALESAEquipo de Trabajo Biotecnología CALESA
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