BIOLOGICAS CIENCIAS Colletotrichum gloesporioides Fusarium

UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS

ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE BIOLOGIA

“Control biológico in vitro de Colletotrichum gloesporioides

causante de la antracnosis frente a Clonostachys rosea, Fusarium

oxysporum y Trichoderma harzianum.”

AUTOR: Br. WALTER DANIEL FLORES BAZAURI

ASESOR: Dr. JULIO CHICO RUIZ

TRUJILLO-PERU

2016

TESIS

PARA OPTAR EL TITULO DE:

BIOLOGO

Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.

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AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

RECTOR

Dr. Orlando Gonzáles Nieves

VICERRECTOR ACADÉMICO

Dr. Rubén Vera Véliz

VICERRECTOR DE INVESTIGACIÓN

Dr. Weyder Portocarrero Cárdenas

DECANO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS

Dr. Freddy Mejía Coico

SECRETARIO GENERAL DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

Dr. Willian Zelada Estraver

DIRECTOR DE ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE CIENCIAS BIOLOGICAS

Dr. Freddy Pelaez Pelaez



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DEDICATORIA

A mi hija, Daniela Flores, una bendición de Dios que cambió mi vida.

A mi Madre, Roxana Bazauri, por sus ejemplos, cuidados y amor desinteresado; por

enseñarme que la vida no acaba, hasta que uno mismo lo decide.

A mi Esposa, Luz Delgado, por su amor, apoyo y paciencia.

A mi Padre, Walter Flores, por su apoyo incondicional y la forma tan peculiar de

enseñarme lecciones de vida.

A mi mamá Luisa y mi tía Esther Bazauri, que me enseñaron que a pesar de estar

apenado por tenerlas muy delicadas de salud uno debe enfocarse en sus metas y tratar

de regalarle una sonrisa no solo a la familia si no a ellas también.

Gracias.

Walter Daniel Flores Bazauri



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RECONOCIMIENTO

A la Universidad Nacional de Trujillo, por brindarme las bases de una buena educación

que se verán reflejadas en un futuro muy cercano.

A mi asesor Dr. Julio Chico Ruiz por su valiosa ayuda, paciencia, revisión y supervisión

del presente estudio.

Al Blgo. Carlos Quijano un gran docente y amigo que me brindo su ayuda incondicional.



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PRESENTACIÓN

Señores miembros del Jurado Dictaminador:

En cumplimiento con las disposiciones de reglamentos de grados y títulos de la Escuela

Académico Profesional de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo,

someto a vuestra consideración y evaluado criterio, el presente trabajo de investigación

científica titulada:

“Control biológico in vitro de Colletotrichum gloesporioides causante de la

antracnosis frente a Clonostachys rosea, Fusarium oxysporum y Trichoderma

harzianum.”

Con el cual cumplo con uno de los requisitos indispensables para obtener el título de

Biólogo.

Trujillo, Diciembre del 2016

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Br. Walter Daniel Flores Bazauri



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CERTITIFICACIÓN DEL ASESOR

El que suscribe, en calidad de profesor asesor de la tesis: “Control biológico in vitro de

Colletotrichum gloesporioides causante de la antracnosis frente a Clonostachys rosea,

Fusarium oxysporum y Trichoderma harzianum”, certifica que ésta ha sido desarrollada

de conformidad con los objetivos propuestos en su perfil académico y que el informe ha

sido revisado y acoge las observaciones y sugerencias alcanzadas.

Por lo tanto, autorizo al Br. Walter Daniel Flores Bazauri a continuar con el trámite de

reglamento correspondiente.

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Dr. Julio Chico Ruiz



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JURADO DICTAMINADOR

__________________________________

Dra. MARLENE RENE RODRIGUEZ ESPEJO

PRESIDENTE

__________________________________

Dr. ROGER VENEROS TERRONES

SECRETARIO

__________________________________

Dr. JULIO ROGER CHICO RUIZ

VOCAL



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CONTENIDO

Página

Autoridades de la Universidad Nacional de Trujillo ii

Dedicatoria iii

Reconocimiento iv

Presentación v

Certificación del asesor vi

Jurado Dictaminador vii

Contenido viii

Lista de tablas y figuras ix

Resumen xv

Abstract xvi

Introducción 1

Material y métodos 6

Resultados 13

Discusión 59

Conclusión 62

Referencias bibliográficas 63

Anexos 69



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LISTA DE TABLAS Y FIGURAS

Tabla 1. Promedio del crecimiento en centímetros de Colletotrichum gloesporioides vs Clonostachys rosea, en prueba de antagonismo y su respectivo control, tomado cada 24 horas hasta los 12 días de crecimiento en Agar Papa Dextrosa (PDA) a 10° C 15

Figura 1. Crecimiento de la prueba control y prueba de antagonismo (cm) de C. gloesporioides vs C. rosea en PDA a 10°C, tomado cada 24 horas por 12 días 15

Tabla 2. Promedio del crecimiento en centímetros de Colletotrichum gloesporioides vs Clonostachys rosea, en prueba de antagonismo y su respectivo control, tomado cada 24 horas hasta los 12 días de crecimiento en Agar Papa Dextrosa (PDA) a 20° C 16

Figura 2. Crecimiento de la prueba control y prueba de antagonismo (cm) de C. gloesporioides vs C. rosea en PDA a 20°C, tomado cada 24 horas por 12 días. …………………………………16

Tabla 3. Promedio del crecimiento en centímetros de Colletotrichum gloesporioides vs Clonostachys rosea, en prueba de antagonismo y su respectivo control, tomado cada 24 horas hasta los 12 días de crecimiento en Agar Papa Dextrosa (PDA) a 30° C. ………………………17

Figura 3. Crecimiento de la prueba control y prueba de antagonismo (cm) de C. gloesporioides vs C. rosea en PDA a 30°C, tomado cada 24 horas por 12 días. …………………………………17

Tabla 4. Promedio del crecimiento en centímetros de Colletotrichum gloesporioides vs Fusarium oxysporum, en prueba de antagonismo y su respectivo control, tomado cada 24 horas hasta los 12 días de crecimiento en Agar Papa Dextrosa (PDA) a 10° C. …………………………………18

Figura 4. Crecimiento de la prueba control y prueba de antagonismo (cm) de C. gloesporioides vs F. oxysporum en PDA a 10°C, tomado cada 24 horas por 12 días. ……………………………18

Tabla 5. Promedio del crecimiento en centímetros de Colletotrichum gloesporioides vs Fusarium oxysporum, en prueba de antagonismo y su respectivo control, tomado cada 24 horas hasta los 12 días de crecimiento en Agar Papa Dextrosa (PDA) a 20° C. …………………………………19


Tabla 6. Promedio del crecimiento en centímetros de Colletotrichum gloesporioides vs Fusarium oxysporum, en prueba de antagonismo y su respectivo control, tomado cada 24 horas hasta los 12 días de crecimiento en Agar Papa Dextrosa (PDA) a 30° C………………………………….…20


Tabla 7. Promedio del crecimiento en centímetros de Colletotrichum gloesporioides vs Trichoderma harzianum, en prueba de antagonismo y su respectivo control, tomado cada 24 horas hasta los 12 días de crecimiento en Agar Papa Dextrosa (PDA) a 10° C. …………………21



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Figura 7. Crecimiento de la prueba control y prueba de antagonismo (cm) de C. gloesporioides vs T. harzianum en PDA a 10°C, tomado cada 24 horas por 12 días. ……………………….21

Tabla 8. Promedio del crecimiento en centímetros de Colletotrichum gloesporioides vs Trichoderma harzianum, en prueba de antagonismo y su respectivo control, tomado cada 24 horas hasta los 12 días de crecimiento en Agar Papa Dextrosa (PDA) a 20° C. ………………22

Figura 8. Crecimiento de la prueba control y prueba de antagonismo (cm) de C. gloesporioides vs T. harzianum en PDA a 20°C, tomado cada 24 horas por 12 días. ……………………,…22

Tabla 9. Promedio del crecimiento en centímetros de Colletotrichum gloesporioides vs Trichoderma harzianum, en prueba de antagonismo y su respectivo control, tomado cada 24 horas hasta los 12 días de crecimiento en Agar Papa Dextrosa (PDA) a 30° C. ………………23

Figura 9. Crecimiento de la prueba control y prueba de antagonismo (cm) de C. gloesporioides vs T. harzianum en PDA a 30°C, tomado cada 24 horas por 12 días. …………………………………………………………………………………………….………………23

Tabla 10. Promedio del crecimiento en centímetros de Colletotrichum gloesporioides vs Clonostachys rosea, en prueba de antagonismo y su respectivo control, tomado cada 24 horas hasta los 12 días de crecimiento en Agar Sabouraud Dextrosa (DSA) a 10° C. ………………24

Figura 10. Crecimiento de la prueba control y prueba de antagonismo (cm) de C. gloesporioides vs C. rosea en DSA a 10°C, tomado cada 24 horas por 12 días. …………………………………24

Tabla 11. Promedio del crecimiento en centímetros de Colletotrichum gloesporioides vs Clonostachys rosea, en prueba de antagonismo y su respectivo control, tomado cada 24 horas hasta los 12 días de crecimiento en Agar Sabouraud Dextrosa (DSA) a 20° C. ………………25

Figura 11. Crecimiento de la prueba control y prueba de antagonismo (cm) de C. gloesporioides vs C. rosea en DSA a 20°C, tomado cada 24 horas por 12 días. …………………………..….…25

Tabla 12. Promedio del crecimiento en centímetros de Colletotrichum gloesporioides vs Clonostachys rosea, en prueba de antagonismo y su respectivo control, tomado cada 24 horas hasta los 12 días de crecimiento en Agar Sabouraud Dextrosa (DSA) a 30° C. ………………..26

Figura 12. Crecimiento de la prueba control y prueba de antagonismo (cm) de C. gloesporioides vs C. rosea en DSA a 30°C, tomado cada 24 horas por 12 días. ………………….……26

Tabla 13. Promedio del crecimiento en centímetros de Colletotrichum gloesporioides vs Fusarium oxysporum, en prueba de antagonismo y su respectivo control, tomado cada 24 horas hasta los 12 días de crecimiento en Agar Sabouraud Dextrosa (DSA) a 10° C. ……………………….27

Figura 13. Crecimiento de la prueba control y prueba de antagonismo (cm) de C. gloesporioides vs F. oxysporum en DSA a 10°C, tomado cada 24 horas por 12 días. ……………………….27

Tabla 14. Promedio del crecimiento en centímetros de Colletotrichum gloesporioides vs Fusarium oxysporum, en prueba de antagonismo y su respectivo control, tomado cada 24 horas hasta los 12 días de crecimiento en Agar Sabouraud Dextrosa (DSA) a 20° C. ……………………………28



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Figura 14. Crecimiento de la prueba control y prueba de antagonismo (cm) de C. gloesporioides vs F. oxysporum en DSA a 20°C, tomado cada 24 horas por 12 días. ………………….……28

Tabla 15. Promedio del crecimiento en centímetros de Colletotrichum gloesporioides vs Fusarium oxysporum, en prueba de antagonismo y su respectivo control, tomado cada 24 horas hasta los 12 días de crecimiento en Agar Sabouraud Dextrosa (DSA) a 30° C. ……………………….29

Figura 15. Crecimiento de la prueba control y prueba de antagonismo (cm) de C. gloesporioides vs F. oxysporum en DSA a 30°C, tomado cada 24 horas por 12 días. …………………….…29

Tabla 16. Promedio del crecimiento en centímetros de Colletotrichum gloesporioides vs Trichoderma harzianum, en prueba de antagonismo y su respectivo control, tomado cada 24 horas hasta los 12 días de crecimiento en Agar Sabouraud Dextrosa (DSA) a 10° C. .……30

Figura 16. Crecimiento de la prueba control y prueba de antagonismo (cm) de C. gloesporioides vs T. harzianum en DSA a 10°C, tomado cada 24 horas por 12 días. ……………………….30

Tabla 17. Promedio del crecimiento en centímetros de Colletotrichum gloesporioides vs Trichoderma harzianum, en prueba de antagonismo y su respectivo control, tomado cada 24 horas hasta los 12 días de crecimiento en Agar Sabouraud Dextrosa (DSA) a 20° C. …………31


Tabla 18. Promedio del crecimiento en centímetros de Colletotrichum gloesporioides vs Trichoderma harzianum, en prueba de antagonismo y su respectivo control, tomado cada 24 horas hasta los 12 días de crecimiento en Agar Sabouraud Dextrosa (DSA) a 30° C. …………32


Tabla 19: Grado de antagonismo en cultivos duales de C. gloesporioides frente a C. rosea, F. oxysporum y T. harzianum en Agar Papa Dextrosa (PDA) a 10 °C y 12 días de evaluación, utilizando la escala de Bell. ……………………………………………………………..33

Tabla 20: Grado de antagonismo en cultivos duales de C. gloesporioides frente a C. rosea, F. oxysporum y T. harzianum en Agar Papa Dextrosa (PDA) a 20 °C y 12 días de evaluación, utilizando la escala de Bell. ……………………………………………………33

Tabla 21: Grado de antagonismo en cultivos duales de C. gloesporioides frente a C. rosea, F. oxysporum y T. harzianum en Agar Papa Dextrosa (PDA) a 30 °C y 12 días de evaluación, utilizando la escala de Bell. ……………………………………………………………..33

Tabla 22: Grado de antagonismo en cultivos duales de C. gloesporioides frente a C. rosea, F. oxysporum y T. harzianum en Agar Sabouraud Dextrosa (DSA) a 10 °C y 12 días de evaluación, utilizando la escala de Bell. ………………………………………………………………………34

Tabla 23: Grado de antagonismo en cultivos duales de C. gloesporioides frente a C. rosea, F. oxysporum y T. harzianum en Agar Sabouraud Dextrosa (DSA) a 20 °C y 12 días de evaluación, utilizando la escala de Bell. ……………………………………………………………..34



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Tabla 24: Grado de antagonismo en cultivos duales de C. gloesporioides frente a C. rosea, F. oxysporum y T. harzianum en Agar Sabouraud Dextrosa (DSA) a 30 °C y 12 días de evaluación, utilizando la escala de Bell. ………………………………………………………………………34

Figura 19. Porcentaje de inhibición en Agar Papa Dextrosa (PDA) a 10°C, 20°C y 30°C de C. rosea, F. oxysporum y T. harzianum frente a Colletotrichum gloesporioides a los 12 días de evaluación. ………………………………………………………………………………..35

Figura 20. Porcentaje de inhibición en Agar Sabouraud Dextrosa (DSA) a 10°C, 20°C y 30°C de C. rosea, F. oxysporum y T. harzianum frente a Colletotrichum gloesporioides a los 12 días de evaluación. ………………………………………………………………………………………….36

Tabla 25: Análisis de Varianza (ANOVA) del crecimiento promedio de C. gloesporioides frente a C. rosea en Agar Sabouraud Dextrosa (DSA) a 10 °C y 12 días de evaluación ………………37

Tabla 26: Comparación de las mediciones (Promedio) de los halos de inhibición de C. gloesporioides frente a C. rosea en Agar Sabouraud Dextrosa (DSA) a 10 °C ………………37





Tabla 31: Análisis de Varianza (ANOVA) del crecimiento promedio de C. gloesporioides frente a F. oxysporum en Agar Sabouraud Dextrosa (DSA) a 10°C y 12 días de evaluación. …………..40

Tabla 32: Comparación de las mediciones (Promedio) de los halos de inhibición de C. gloesporioides frente a F. oxysporum en Agar Sabouraud Dextrosa (DSA) a 10 °C…………….40

Tabla 33: Análisis de Varianza (ANOVA) del crecimiento promedio de C. gloesporioides frente a F. oxysporum en Agar Sabouraud Dextrosa (DSA) a 20°C y 12 días de evaluación. ……………41

Tabla 34: Comparación de las mediciones (Promedio) de los halos de inhibición de C. gloesporioides frente a F. oxysporum en Agar Sabouraud Dextrosa (DSA) a 20 °C……………...41

Tabla 35: Análisis de Varianza (ANOVA) del crecimiento promedio de C. gloesporioides frente a F. oxysporum en Agar Sabouraud Dextrosa (DSA) a 30°C y 12 días de evaluación. …………….42

Tabla 36: Comparación de las mediciones (Promedio) de los halos de inhibición de C. gloesporioides frente a F. oxysporum en Agar Sabouraud Dextrosa (DSA) a 30 °C …….42



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Tabla 37: Análisis de Varianza (ANOVA) del crecimiento promedio de C. gloesporioides frente a T. harzianum en Agar Sabouraud Dextrosa (DSA) a 10°C y 12 días de evaluación. ……………..43

Tabla 38: Comparación de las mediciones (Promedio) de los halos de inhibición de C. gloesporioides frente a T. harzianum en Agar Sabouraud Dextrosa (DSA) a 10 °C …….43

Tabla 39: Análisis de Varianza (ANOVA) del crecimiento promedio de C. gloesporioides frente a T. harzianum en Agar Sabouraud Dextrosa (DSA) a 20°C y 12 días de evaluación. ……………44

Tabla 40: Comparación de las mediciones (Promedio) de los halos de inhibición de C. gloesporioides frente a T. harzianum en Agar Sabouraud Dextrosa (DSA) a 20 °C……………..44

Tabla 41: Análisis de Varianza (ANOVA) del crecimiento promedio de C. gloesporioides frente a T. harzianum en Agar Sabouraud Dextrosa (DSA) a 30°C y 12 días de evaluación. ……………45

Tabla 42: Comparación de las mediciones (Promedio) de los halos de inhibición de C. gloesporioides frente a T. harzianum en Agar Sabouraud Dextrosa (DSA) a 30 °C. ……………45

Tabla 43: Análisis de Varianza (ANOVA) del crecimiento promedio de C. gloesporioides frente a C. rosea en Agar Papa Dextrosa (PDA) a 10 °C y 12 días de evaluación. ………………46

Tabla 44: Comparación de las mediciones (Promedio) de los halos de inhibición de C. gloesporioides frente a C. rosea en Agar Papa Dextrosa (PDA) a 10 °C. ………………46

Tabla 45: Análisis de Varianza (ANOVA) del crecimiento promedio de C. gloesporioides frente a C. rosea en Agar Papa Dextrosa (PDA) a 20 °C y 12 días de evaluación ………………47

Tabla 46: Comparación de las mediciones (Promedio) de los halos de inhibición de C. gloesporioides frente a C. rosea en Agar Papa Dextrosa (PDA) a 20 °C ………………47

Tabla 47: Análisis de Varianza (ANOVA) del crecimiento promedio de C. gloesporioides frente a C. rosea en Agar Papa Dextrosa (PDA) a 30 °C y 12 días de evaluación. ………………48

Tabla 48: Comparación de las mediciones (Promedio) de los halos de inhibición de C. gloesporioides frente a C. rosea en Agar Papa Dextrosa (PDA) a 30 °C. ………………48

Tabla 49: Análisis de Varianza (ANOVA) del crecimiento promedio de C. gloesporioides frente a F. oxysporum en Agar Papa Dextrosa (PDA) a 10°C y 12 días de evaluación. ………………49

Tabla 50: Comparación de las mediciones (Promedio) de los halos de inhibición de C. gloesporioides frente a F. oxysporum en Agar Papa Dextrosa (PDA) a 10 °C. ………………49

Tabla 51: Análisis de Varianza (ANOVA) del crecimiento promedio de C. gloesporioides frente a F. oxysporum en Agar Papa Dextrosa (PDA) a 20°C y 12 días de evaluación. ………………50



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Tabla 53: Análisis de Varianza (ANOVA) del crecimiento promedio de C. gloesporioides frente a F. oxysporum en Agar Papa Dextrosa (PDA) a 30°C y 12 días de evaluación. ……………...51


Tabla 55: Análisis de Varianza (ANOVA) del crecimiento promedio de C. gloesporioides frente a T. harzianum en Agar Papa Dextrosa (PDA) a 10°C y 12 días de evaluación. ………………52

Tabla 56: Comparación de las mediciones (Promedio) de los halos de inhibición de C. gloesporioides frente a T. harzianum en Agar Papa Dextrosa (PDA) a 10 °C. ………………52





Figura 21: Crecimiento de los monocultivos puros de A)C. rosea B)C. gloesporioides C)F. oxysporum y D)T. harzianum, a los 12 días de evaluación. …………………………………55

Figura 22: Crecimiento de los cultivos duales de a) C. rosea vs C. gloesporioides b) T. harzianum vs C. gloesporioides y c) F. oxysporum vs C. gloesporioides, a las 24 horas de crecimiento. …56

Figura 23: Crecimiento de los cultivos duales de A) C. rosea vs C. gloesporioides B) T. harzianum vs C. gloesporioides y C) F. oxysporum vs C. gloesporioides, a las 144 horas de crecimiento.…57

Figura 24: Crecimiento de los cultivos duales de A) C. rosea vs C. gloesporioides B) T. harzianum vs C. gloesporioides y C) F. oxysporum vs C. gloesporioides, a las 288 horas de crecimiento.…58



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RESUMEN

En el presente trabajo de investigación se evaluó el control biológico de Colletotrichum

gloeosporioides, que causa la antracnosis en cultivos de interés económico. El patógeno

se enfrentó a los siguientes microorganismos antagonistas: Clonostachys rosea,

Fusarium oxysporum y Trichoderma harzianum. Para ello se utilizó Agar Sabouraud

Dextrosa (DSA) y Agar Papa Dextrosa (PDA), a diferentes temperaturas y en cultivos

duales. Se evaluó: el porcentaje de inhibición, grado de antagonismo y la velocidad de

crecimiento de las colonias enfrentadas. Se encontró que el antagonista más efectivo

fue: Trichoderma harzianum, el cual alcanzó un grado 2 en la escala de Bell (75% de la

superficie del medio), en un medio de cultivo Agar Papa Dextrosa a 10°C 20°C y 30°C

a 3, 6, 9 y 12 días de desarrollo. Además, se demostró que C. gloesporioides alcanzó

un grado 3 en la escala de Bell (50% de la superficie del medio) cuando enfrentó a C.

rosea y F. oxysporum, tanto a 10°C. 20°C y 30°C en los diferentes medios de cultivo

Agar Sabouraud Dextrosa y Agar Papa Dextrosa, concluyendo así que: El mejor

controlador biológico de C. gloeosporioides fué T. harzianum alcanzando un grado 2 en

PDA y DSA según la escala de Bell a 10°C, 20°C y 30°C; que la acción antagónica de

C. rosea y F. oxysporum alcanzaron un grado 3 en PDA y DSA según la escala de Bell

a 10°C, 20°C y 30°C frente al crecimiento de C. gloeosporioides; que el mayor

porcentaje de inhibición del crecimiento de C. gloeosporioides fué también para T.

harzianum con un 65.12% a 30°C en PDA mientras que en el medio de cultivo DSA a

30°C el mayor porcentaje de inhibición de C. gloeosporioides fue para C. rosea con un

27.35%, determinándose así que la temperatura no influye en la determinación del

control antagónico(escala de Bell) pero frente al porcentaje de inhibición existe una

influencia de la temperatura. Demostrando de esta manera que Colletotrichum

gloeosporioides, es un hongo cuyo potencial patógeno es una fuente amplia aún por

investigar.

Palabras clave: Antagonismo, antracnosis, Coletotrichum gloesporioides,

Clonostachys rosea, Fusarium oxysporum, Trichoderma harzianum.



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ABSTRACT

In this research the biological control of Colletotrichum gloeosporioides, which causes

anthracnose in crops of economic interest, was evaluated. The pathogen faced the

following antagonistic microorganisms: Clonostachys rosea, Fusarium oxysporum and

Trichoderma harzianum. Agar Sabouraud Dextrose (DSA) and Agar Papa Dextrosa

(PDA) were used at different temperatures and in dual cultures. The percentage of

inhibition, degree of antagonism and the rate of growth of the colonies were evaluated.

It was found that the most effective antagonist was Trichoderma harzianum, which

reached a degree 2 on the Bell scale (75% of the medium surface), in a culture medium

Papa Dextrose Agar at 10°C 20°C and 30°C to 3, 6, 9 and 12 days of development. In

addition, it was demonstrated that C. gloesporioides reached a degree 3 on the Bell scale

(50% of the surface of the medium) when it faced C. rosea and F. oxysporum, both at

10°C. 20°C and 30°C in the different culture media Sabouraud Agar Dextrose and Papa

Dextrose Agar, concluding that: The best biological controller of C. gloeosporioides was

T. harzianum reaching a grade 2 in PDA and DSA according to the scale of Bell at 10°C,

20°C and 30°C; That the antagonistic action of C. rosea and F. oxysporum reached a

grade 3 in PDA and DSA according to the Bell scale at 10° C, 20° C and 30°C against

the growth of C. gloeosporioides; That the highest percentage of growth inhibition of C.

gloeosporioides was also for T. harzianum with 65.12% at 30 ° C in PDA whereas in the

DSA culture medium at 30° C the highest percentage of inhibition of C. gloeosporioides

was for C. rosea with 27.35%, thus determining that the temperature does not influence

the determination of the antagonistic control (Bell scale) but against the percentage of

inhibition there is a influence of the temperature. Proving this way that Colletotrichum

gloeosporioides, is a fungus whose pathogenic potential is a wide-ranging source yet to

be investigated.

Keywords: Antagonism, anthracnose, Coletotrichum gloesporioides, Clonostachys

rosea, Fusarium oxysporum, Trichoderma harzianum.



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INTRODUCCION

Las enfermedades producidas por hongos fitopatógenos causan pérdidas severas en la

agricultura 1; estas mismas consisten en la reducción de la calidad y/o la cantidad de la

cosecha obtenida2. La forma tradicional para el control de las enfermedades en cultivos

es la aplicación de productos químicos, pero debido a su composición resultan tóxicos

e inespecíficos, ya que además de eliminar los organismos fitopatógenos, dañan la flora

del suelo 3. Por ello es necesaria la búsqueda de alternativas orientadas al manejo de

agentes antagonistas que sean eficientes y compatibles con el ambiente 4.

El uso de pesticidas en la agricultura ha sufrido restricciones, especialmente en vista de

los residuos en los alimentos, las poblaciones seleccionadas de patógenos resistentes,

la contaminación ambiental y los riesgos para la salud humana. El uso de productos

químicos a nivel agrícola en Perú se ha visto muy sobrecargado en los últimos años, y

se prevé que su utilización en el futuro sea más extensa. Por lo tanto, se requiere una

acción alternativa y eficiente en el control de enfermedades de las plantas, tales como

el control biológico. El control biológico es una estrategia de control más compatible con

la conservación del medio ambiente y útil en aquellas enfermedades para las que no

existen otras medidas fitosanitarias, o simplemente para poder reducir el empleo de

pesticidas; sin embargo, muestra una serie de deficiencias y limitaciones que se deben

solucionar para incrementar su aceptación en la agricultura actual. Aunque la cantidad

de antagonistas de microorganismos productos comerciales es aún pequeño, lo que

representa el 1% del mercado mundial de pesticidas, fungicidas, mientras que

representan aproximadamente el 15% del mercado, el uso de agentes de control

biológico está creciendo, especialmente en el contexto de la gestión integrada de

enfermedades5.

Con el uso de antagonistas se puede reducir la necesidad de la aplicación de fungicidas,

combinando el producto químico con la aplicación de estos agentes de control y, en

consecuencia, reduciendo la posibilidad de selección de cepas de patógenos resistentes

a los fungicidas, que hace que el control más estable y sostenible5, 6. Por otra parte, hay

una reducción de los residuos químicos en los alimentos, una menor exposición a los

pesticidas de aplicadores y menos contaminación ambiental7.

Agentes de control biológico, así como reducir el efecto de los agentes patógenos de

las plantas, pueden promover otros efectos beneficiosos, que incluyen la mejora de las

condiciones fisiológicas, la reducción de estrés abiótico, mejorado eficiencia

fotosintética, el aumento de la absorción de agua y la asimilación de nutrientes, lo que

hace las plantas más sanas y productivas8. El desarrollo de plantas con resistencia



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genética, ofrece la mejor estrategia práctica y económica para el manejo de la

enfermedad9; sin embargo, la presencia de nuevas razas de patógenos limita esta última

estrategia10. Otra alternativa para el control de la enfermedad es el control biológico

utilizando microorganismos antagonistas como bacterias y hongos. Diversas

investigaciones han demostrado que el control biológico a través del uso de hongos y

bacterias benéficas es una alternativa potencial al uso de fungicidas y/o fumigantes.

Los hongos endófitos, aquellos que viven en el interior de los tejidos del hospedante sin

causarle daño alguno, tienen potencial como controladores biológicos de algunas

enfermedades de plantas. El control biológico (CB) se presenta como una alternativa

eficaz, económica y libre de riesgo frente a los numerosos y crecientes problemas

derivados del uso indiscriminado de agroquímicos. Son productos naturales y forman

parte del ecosistema, poseen baja toxicidad, nula patogenicidad sobre la fauna benéfica,

no generan resistencia en las plagas, la forma de aplicación es fácil y segura, tiene fácil

establecimiento en los cultivos, contribuyen a la recuperación de las propiedades

biológicas de los suelos, mientras reducen la acción de una enfermedad previenen la

aparición de otras. En el CB de enfermedades se utilizan microorganismos antagonistas

en el sitio de infección11, antes o después de que se presenten los fitopatógenos que

interfieren en su supervivencia. Se busca además del control, lograr la seguridad

alimentaria de adquirir alimentos libres de tóxicos y llevar una vida sana. Para esto, es

necesario conocer a los organismos benéficos, aprender de sus hábitos e identificar la

función que tienen para regular las poblaciones dañinas y reducir así el uso de

plaguicidas10, 11. El Control biológico consiste en la utilización de enemigos naturales

(predatores, parasitoides, entomopatógenos y antagonistas) para controlar a la

población de una plaga o enfermedad, que produce daño a las plantas, describiéndose

a diversas bacterias, nematodos y hongos como organismos controladores biológicos

de un amplio número de plagas y de organismos patógenos de vegetales.12

Existe un gran número de factores biológicos y ambientales que dominan las

interacciones entre el hongo patógeno y el antagonista, afectando al control biológico

de la enfermedad. Uno de los factores ambientales de mayor importancia, en la

interacción patógeno-antagonista, es la temperatura. La actividad antagonista de T.

harzianum, C. rosea y F. oxysporum puede variar con la temperatura. La síntesis y la

actividad de los antibióticos producidos por estos antagonistas13 y la colonización de la

rizosfera por alguno de estos antagonistas, como por ejemplo T. hazianum14, se ve

afectada por la temperatura. Podemos encontrar diferencias en la temperatura óptima



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de crecimiento de estos antagonistas15, aunque a juzgar por múltiples estudios

realizados en laboratorio ésta se encuentra principalmente en el rango de 25°C-30°C16.

Dentro del control biológico se han descrito el uso de diversos hongos antagonistas,

tales como: Trichoderma sp, Ulocladium oudemansii, Mucor sp, Panicilium sp y

Clonostachys rosea; además de nematodos y bacterias.17 Para el presente trabajo se

ha elegido a: Clonostachys rosea, Fusarium oxysporum y Trichoderma harzianum,

hongos con bastante potencial antagónico, con excepción de F. oxysporum el cuál se

desconoce aún su poder antagónico, y utilizados en varios experimentos como

controladores biológicos a nivel mundial pero que no son muy utilizados en el Perú.18, 19,

20, 21

Clonostachys rosea, hongo Hyphomycete ampliamente distribuido que a menudo actúa

como un parásito de otros hongos del suelo y el cual también ha sido reportado como

un parásito potencial contra nematodos e insectos. C. rosea es un saprófito común en

todo el mundo, con efectos destructivos en diversos hongos fitopatógenos, es decir,

presenta acción antagónica contra una amplia variedad de agentes fúngicos, dicha

actividad está relacionada con la secreción de celulasas, β-1,3- glucanasas, proteasas

e incluidas las quitinasas, las cuales actúan degradando las hifas de otros hongos.22 Los

mecanismos de biocontrol atribuidos a C. rosea, son: micoparasitismo, competencia por

los nutrientes y antibiosis, siendo el micoparasitismo el principal mecanismo de acción

de este hongo; este biocontrolador cubre al hongo, ataca y penetra en sus células,

causándole un daño extensivo alterando y degradando la pared celular, causa retracción

de la membrana plasmática y desorganización del citoplasma.23, 24, 25

Trichoderma harzianum es un hongo que está presente en casi todos los suelos

agrícolas y otros hábitats como madera en descomposición. Pertenece a los

Deuteromycetes que presentan conidióforos complejos y altamente ramificados en

forma piramidal o cónica, desde donde se desprenden esporas circulares hialinas, las

colonias presentan un crecimiento rápido, al comienzo el micelio es blanco algodonoso

para posteriormente tornarse de color verde oscuro o verde limón característico de este

género, comprende varias especies: T. harzianum, T. viride, T. artroviride, T. koningii,

T. hamalum y otras especies son parte de un suelo saludable y pueden ser aislados

comúnmente. Unas pocas cepas de Trichoderma harzianum han demostrado suprimir

el desarrollo de fitopatógenos, por lo cual ha sido la más estudiada entre numerosos



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agentes de control biológico, por sus características de antagonismo en condiciones

naturales; además, se comporta como hiperparásito frente a un amplio rango de

fitopatógenos; entre los cuales, están Alternaria solani, Botrytis cinérea, Fusarium

oxysporum, Phytophotora capsici, Phytium sp, Rhizoctonia solani, Sclerotium

cepivorium, entre otros. 26,27 Trichoderma harzianum como antagonista tiene diferentes

mecanismos de acción, entre los que se encuentran el micoparasitismo, la competencia

por el sustrato y nutrientes, y la actividad antibiótica producida por metabolitos que

inhiben la actividad parasítica de los fitopatógenos. Se ha demostrado que Trichoderma

es capaz de colonizar las flores de algunos cultivos agrícolas desplazando al patógeno

de su habitual sitio de infección, lo que constituye la principal forma de antagonismo

contra algunos fitopatógenos; además, produce enzimas líticas (quitinasas y

gluconasas) capaces de degradar la pared celular de estos patógenos.28,29

Por otro lado, tenemos a Fusarium oxysporum es un hongo cosmopolita que existe en

muchas formas patogénicas, parasitando más de 100 especies de plantas

Gimnospermas y Angiospermas, gracias a los diversos mecanismos que tiene el hongo

para vencer las defensas de muchas plantas30. Se caracteriza por producir colonias de

rápido crecimiento, con una tasa diaria cercana a un centímetro en medio Papa Agar

Dextrosa (PDA) a temperatura ambiente. La morfología de las colonias es muy variable

y puede presentar dos tipos: una de tipo micelial caracterizada por la producción de

abundante micelio aéreo, algodonoso, con una coloración variable, de blanco a rosado

durazno, pero usualmente con un tinte púrpura o violeta más intenso en la superficie del

agar y pocas microconidias31 y una de tipo pionotal con la formación de poco o ningún

micelio aéreo y abundantes microconidias. Existe una gran diversidad de cepas de

Fusarium spp., de las cuales algunas son patogénicas y su gran mayoría son saprófitas,

pueden ser utilizadas como controladores biológicos. Existen más de 76 cepas de

Fusarium oxysporum reportadas que causan enfermedad32. Los géneros de hongos

Ceratocystis spp., Verticillium spp y Fusarium spp son los tres géneros que pueden

afectar el sistema vascular de las plantas. Es causante principalmente de la Fusariosis

o marchitez vascular, que es la principal enfermedad causada por este patógeno33. La

Fusariosis o Marchitez Vascular del cafeto "Root rot", produce una desintegración o

pudrición de parte o todo el sistema radicular de la planta34. Cuando los daños son

severos Fusarium oxysporum puede destruir el sistema radical en más de 90%35.

En Latinoamérica como en el resto del mundo, existen numerosos hongos que son

parásitos obligados o facultativos de las plantas, y constituyen la principal causa de



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infecciones y enfermedades en ellas. En el Perú el panorama es parecido,

encontrándose una gran variedad de hongos que atacan a plantas de interés

económico. Varios son los hongos que afectan a la planta, entre éstos tenemos a

Colletotrichum sp, Phytophtora sp, Rhizoctonia sp, Fusarium sp, Rhizopues sp, Pythium

sp, Botrytis sp, Cladosporium sp, Alternaria sp y Penicillium sp.

Colletotrichum gloeosporioides es un moho que forma conidios simples, aunque

alargados y conidios hialinos, que son unicelulares, céreos y generalmente de color

oscuro. Es una especie de interés en los alimentos, ya que produce la antracnosis

(manchas pardas/negras) en muchos cultivos de importancia económica, como mangos

y papayas36, cítricos, guanábana, aguacate, café, cultivos ornamentales, entre otros37.

Entre las enfermedades poscosecha del mango, palto, la antracnosis es prevalente en

las zonas húmedas y muy húmedas de crecimiento, la incidencia de esta enfermedad

puede llegar a casi el 100% de los frutos bajo estas condiciones38.

La antracnosis de mango es una de las enfermedades más serias de este cultivo. El

daño puede ocurrir en hojas, tallos y panículas florales, siendo el más el daño en los

frutos39. Su efecto es limitante en la producción, debido a que ocasiona grandes

pérdidas de frutos en el campo; durante la cosecha y poscosecha en algunos años ha

afectado más del 50% de la producción mundial40.

Por lo expuesto, el objetivo del presente trabajo fue determinar el mejor controlador

biológico sobre el crecimiento de Colletotrichum gloesporioides causante de la

actracnosis.



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MATERIAL Y METODOS

I. MATERIAL BIOLÓGICO:

La cepa certificada de: Clonostachys rosea y Trichoderma harzianum

fueron adquiridas del Servicio Nacional de Sanidad Agraria (SENASA). (Figura

1).

Figura 1: Cepa de Clonostachys rosea proporcionada por el Servicio Nacional de

Sanidad Agraria (SENASA).

Los cultivos de: Fusarium oxysporum fueron obtenidos de cultivo de tomate

y Colletotrichum gloesporioides fueron obtenidos de cultivo de palto,

proporcionados por la cátedra de Fitopatología, área de Ciencias Biológicas de

la Universidad Nacional de Trujillo.

II. DETERMINACIÓN DE LOS HONGOS

Se tomaron muestras del micelio de cada hongo y se hizo un preparado en fresco,

se observó al microscopio a 400x para reconocer sus características morfológicas.

Se utilizaron claves taxonómicas para su determinación. (Anexos 70, 71, 72 y 73)

III. PROCEDIMIENTOS

A. Preparación del medio de cultivo “Agar Papa Dextrosa”

Se pesó 10 gr de papa, debidamente picada y se colocó en un matraz que

contenga 100 ml de agua. Se llevó a la cocina y se movió secuencialmente hasta

que la papa se disolvió por completo, con la papa disuelta se procedió a filtrar la

muestra a fin de tener la base de nuestro agar. Con la filtración obtenida se



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mezcló con los 3 gr de azúcar y se llevó a la estufa nuevamente y se agregó de

a pocos el agar, una vez disuelto el agar se cubrió la tapa del matraz con papel

aluminio y se llevó a la autoclave por un periodo de tiempo estimado de 30 min.

Finalmente, con total asepsia y siguiendo una modificación del procedimiento

propuesto por Echandi41 se procedió a verter el contenido de nuestra preparación

en las respectivas cajas Petri ayudándonos por el calor de los mecheros. (Figura

2).

Figura 2: Preparación de medio de cultivo Agar Papa dextrosa, dispensados en placas

Petri con ayuda del calor de los mecheros.

B. Preparación del medio de cultivo “Agar Sabouraud Dextrosa”

Se disolvió los componentes del medio en agua destilada., siguiendo las

instrucciones del fabricante se añadió 3gr de Agar Sabouraud Dextrosa en 100

ml agua destilada para conseguir el medio deseado. Se calentó el preparado

hasta la ebullición del mismo agitando de vez en cuando, para asegurar una

completa disolución del agar. Se cubrió el matraz con un tapón de algodón y

papel de aluminio. Finalmente se llevó a esterilizar a la autoclave durante 15-20

minutos. Una vez esterilizado se dispersó en placas Petri estériles, en presencia

del calor de los mecheros y se dejó en reposar hasta que solidifique. (Figura 3).



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Figura 3: Preparación de medio de cultivo Agar Sabouraud dextrosa, dispensados en

placas Petri con ayuda del calor de los mecheros.

C. Aislamiento de Controladores Biológicos

a) Aislamiento y obtención de Clonostachys rosea42

La cepa del hongo estaba formada por pequeños papeles dentro de un

frasco aislado. Se extrajo un papel con ayuda de una pinza punta fina

para luego sembrarlo en una placa Petri con Agar Sabouraud Dextrosa.

A continuación, se le agregó dos gotas de agua destilada, se esperó por

dos minutos para finalmente arrastrar por todas las superficies de la placa

Petri, según el instrucitvo adjunto establecido por el Servicio Nacional de

Sanidad Agrícola (SENASA).

b) Aislamiento y obtención de Fusarium oxysporum

La obtención y aislamiento de Fusarium oxysporum, se realizó a partir de

tomates infectados de este hongo y siguiendo una modificación del

procedimiento propuesto por Tuite43, dicho cultivo y procedimiento fue

proporcionado y previamente identificado por la cátedra del área de

Fitopatología, Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad

Nacional de Trujillo. (Figura 4).



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Figura 4: Tomate con síntomas de ataque por Fusarium oxysporum.

c) Aislamiento y obtención de Trichoderma harzianum42

El aislamiento y obtención de Trichoderma harzianum se realizó

siguiendo el procedimiento correspondiente, establecido por el Servicio

Nacional de Sanidad Agrícola (SENASA), (Figura 5).

Figura 5: Trichoderma harzianum creciendo sobre granos de arroz, enviado por el

Servicio Nacional de Sanidad Agraria (SENASA).

D. Aislamiento y cultivo del hongo fitopatógeno C. gloeosporioides de

Persea americana “palta”

A partir del tejido vegetal enfermo se aisló al patógeno. Se tomaron trozos

de la zona enferma para incrementar las oportunidades de aislar al patógeno.

Los trozos de tejido vegetal se sometieron a una desinfección superficial con

alcohol etílico al 70% por 30 segundos, lavamos con agua destilada, luego

se utilizó lejía al 2% por 5 minutos. Se lavó con agua destilada tres veces, se

secó con papel filtro estéril y se sembró en las respectivas cajas Petri que

contenían agar papa, para luego proceder a su replicación (Figura 6).



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Figura 6: Persea americana “Palto” con síntomas de ataque por Colletotrichum

gloesporioides.

E. Control biológico in vitro (Prueba de antagonismo o cultivos duales)44

Se colocaron en puntos opuestos de placas Petri con medio de cultivo, en

distintas placas, micelios de siete días de desarrollo de: Colletotrichum

gloeosporioides y en el otro extremo, micelios de: Clonostachys rosea,

Fusarium oxysporum y Trichoderma harzianum, respectivamente, de siete

días de crecimiento también, siguiendo la metodología descrita por

Acevedo53. Posteriormente, los cultivos se incubaron a temperaturas de

10°C, 20°C y 30°C, durante 7 días, haciéndose mediciones cada 24 horas

del crecimiento micelial correspondiente.

AGAR PAPA DEXTROSA

10° C 20° C 30° C

COMBINACIONES TRATAMIENTOS

T. harzianum (Monocultivo) T1

C. rosea (Monocultivo) T2

F. oxysporum (Monocultivo) T3

C. gloeosporioides (Monocultivo) T4

C. rosea vs C. gloeosporioides (Cultivo dual) T1 x T4 = T5

F. oxysporum vs C. gloeosporioides (Cultivo dual) T2 x T4 = T6

T. harzianum vs C. gloeosporioides (Cultivo dual) T3 x T4 = T7



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Para el diseño experimental45, se realizó al azar, con un número de 21

tratamientos y 3 repeticiones por tratamiento sometidos a diferentes medios

de cultivo y distintas temperaturas, incluyendo a un testigo (control) de cada

uno, haciendo un total de 126 tratamientos.

F. Evaluación

El antagonismo de los hongos empleados frente a Colletotrichum

gloeosporioides se determinaron después de 5 días de crecimiento de los

cultivos enfrentados, se midieron los micelios colocados en las placas Petri

en puntos opuestos entre sí de los hongos antagonistas frente a C.

gloeosporioides y se incubaron a diferentes temperaturas de: 10°C, 20°C y

30°C. Después de 12 días del período de incubación del crecimiento del

patógeno se registró y calculó el porcentaje de inhibición en relación con su

control46.

Porcentaje de inhibición del crecimiento micelial se calculó según una

modificación de la ecuación47:

AGAR SABOURAUD DEXTROSA

10° C 20° C 30° C

COMBINACIONES TRATAMIENTOS

T. harzianum (Monocultivo) T1

C. rosea (Monocultivo) T2

F. oxysporum (Monocultivo) T3

C. gloeosporioides (Monocultivo) T4

C. rosea vs C. gloeosporioides (Cultivo dual) T1 x T4 = T5

F. oxysporum vs C. gloeosporioides (Cultivo dual) T2 x T4 = T6

T. harzianum vs C. gloeosporioides (Cultivo dual) T3 x T4 = T7



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Donde, L es la inhibición del crecimiento micelial, C es la medición del

crecimiento micelial del patógeno en control, T es la medición del crecimiento

micelial del patógeno en presencia de antagonistas.

Para indicar los posibles mecanismos de acción como el: Micoparasitismo,

antibiosis y competencia por nutrientes de: Clonostachys rosea, Fusarium

oxysporum y Trichoderma harzianum, frente a Colletotrichum gloesporioides

se realizaron observaciones macroscópicas de los cultivos duales,

tomándose como indicador la invasión del antagonista sobre la superficie del

micelio del hongo fitopatógeno, teniéndose como referencia la escala de Bell

et al citada en Ezziyyani 47; con la siguiente calificación:

G. Análisis estadísticos

Una vez obtenidas las mediciones correspondientes se procedió a realizar

los análisis estadísticos utilizando: Desviación estándar (DE), promedio (X),

análisis de varianza (ANAVA) y la prueba de Tukey.

GRADO MECANISMO DE ACCIÓN

PORCENTAJE DE

CUBRIMIENTO DEL

ANTAGONISTA DE LA

SUPERFICIE DEL MEDIO

1

El antagonista ocupa completamente la

superficie del medio de cultivo cubriendo

totalmente al patógeno.

100 %

2

El antagonista llega a sobrepasar las dos

terceras partes de la superficie del medio de

cultivo.

75 %

3

El antagonista y el patógeno colonizan cada

uno aproximadamente la mitad de la

superficie del medio y ninguno parece

dominar al otro.

50 %

4

El patógeno sobrepasa al crecimiento del

antagonista colonizando tres cuartas partes

de la caja Petri.

25 %

5 El agente fitopatógeno llega a cubrir

totalmente la placa Petri. 0 %



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RESULTADOS

Según la comparación diaria del crecimiento promedio del hongo fitopátógeno frente al

crecimiento promedio de los hongos antagonistas de cada cultivo dual, en distintos

medios de cultivos y diferentes temperaturas, se determinó lo siguiente: En las tablas

N° 1, 2 y 3 del enfrentamiento de C. gloesporioides frente a C. rosea, que corresponden

a 10°C, 20°C y 30°C de temperatura respectivamente en Agar Papa Dextrosa(PDA), se

puede observar que el crecimiento del antagonista siempre es mayor a la del patógeno

tanto en la prueba de antagonismo y prueba control de ambos hongos, observando que

el medio de cultivo PDA no afecta el crecimiento de estos hongos. En cambio, en las

tablas N° 10, 11 y 12 del enfrentamiento de C. gloesporioides frente a C. rosea, que

corresponden a 10°C, 20°C y 30°C de temperatura respectivamente en Agar Sabouraud

Dextrosa(DSA), se puede observar que: a diferencia de los resultados anteriores el

crecimiento del patógeno, fue mayor en relación a su antagonista tanto en la prueba de

antagonismo y prueba control de ambos hongos.

En las tablas N° 4, 5 y 6 del enfrentamiento de C. gloesporioides frente a F. oxysporum,

que corresponden a 10°C, 20°C y 30°C de temperatura respectivamente en Agar Papa

Dextrosa(PDA), se puede observar que el crecimiento del antagonista siempre es mayor

a la del patógeno tanto en la prueba de antagonismo y prueba control de ambos hongos,

observando que el medio de cultivo PDA no afecta el crecimiento de estos hongos. Para

las tablas N° 13, 14 y 15 del enfrentamiento de C. gloesporioides frente a F. oxysporum

a 10°C, 20°C y 30°C respectivamente en Agar Sabouraud Dextrosa(DSA), se puede

observar un ligero incremento en el desarrollo del patógeno en relación a su antagonista

en la prueba de antagonismo realizada, así como en la prueba control.

Las tablas N° 7, 8 y 9 del enfrentamiento de C. gloesporioides frente a T. harzianum,

que corresponden a 10°C, 20°C y 30°C de temperatura respectivamente en Agar Papa

Dextrosa(PDA), se puede observar que el desarrollo del antagonista es muy notorio en

relación al desarrollo del fitopatógeno tanto en la prueba de antagonismo y la prueba

control de ambos hongos enfrentados, observando que el medio de cultivo PDA no

afecta el crecimiento de estos hongos. Sin embargo, en las tablas N° 16 que

corresponde a 10°C del enfretamiento de C. gloesporioides frente a T. harzianum en

Agar Sabouraud Dextrosa(DSA), se observa que el desarrollo del antagonista es mayor

que del fitopatógeno, pero en las tablas N° 17 y 18 en DSA de este enfrentamiento se



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puede observar que el antagonista es ligeramente menor en relación al desarrollo del

patógeno, evidenciando la acción de algún factor en el desarrollo normal del

antagonista.

En la tabla N° 21, que correspode a la determinación del grado de antagonismo para C.

gloesporioides frente a T. harzianum es de clase 2, caracterizado por la invasión del

antagonista por lo menos en 3/4 partes del medio de cultivo frente al patógeno en Agar

Papa Dextrosa (PDA). Para el resto de enfrentamientos, tablas N° 19 y 20 en PDA &

21,22 y 23 en Agar Sabaouraud Dextrosa (DSA) se determinó que pertenecen a la clase

3, caracterizados por la invasión de las 2/4 partes del patógeno frente a sus antagonistas

en los distintos medios de cultivo.



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Tabla 1. Promedio del crecimiento en centímetros de Colletotrichum gloesporioides vs

Clonostachys rosea, en prueba de antagonismo y su respectivo control, tomado cada

24 horas hasta los 12 días de crecimiento en Agar Papa Dextrosa (PDA) a 10° C.

Figura 1. Crecimiento de la prueba control y prueba de antagonismo (cm) de C.

gloesporioides vs C. rosea en PDA a 10°C, tomado cada 24 horas por 12 días.

PRUEBA DE ANTAGONISMO PRUEBA CONTROL

DÍAS C. gloesporioides C. rosea C. gloesporioides C. rosea

3 1.1 1.0 1.2 1.2

6 1.4 1.4 1.6 2.0

9 1.5 1.8 1.8 2.9

12 1.8 2.2 1.9 3.6

0

0.5

1

1.5

2

2.5

3

3.5

4

3 6 9 12

CR

ECIM

IEN

TO (

CM

)

DÍAS DE EVALUACIÓN

CRECIMIENTO CONTROL Y PRUEBA DE ANTAGONISMO EN PDA A 10° C

Antagonismo C. gloesporioides Antagonismo C. rosea

Control C. gloesporioides Control C. rosea



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0

1

2

3

4

5

6

3 6 9 12

CR

ECIM

IEN

TO (

CM

)

DIAS DE EVALUACIÓN


Antagonismo de C. gloesporioides Antagonismo de C. rosea

Control de C. gloesporioides Control de C. rosea



3 1.1 0.9 1.4 1.8

6 1.7 1.4 2.2 3.4

9 2.6 2.4 2.9 4.7

12 3.4 3.3 4.2 5.5



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0

0.5

1

1.5

2

2.5

3

3.5

4

4.5

5

3 6 9 12

CR

ECIM

IEN

TO (

CM

)

DIAS DE EVALUACIÓN






3 1 1.1 1.2 1.4

6 1.3 1.4 1.9 2.3

9 1.7 1.9 3 3.4

12 2.7 2.9 4.2 4.6



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Fusarium oxysporum, en prueba de antagonismo y su respectivo control, tomado cada



gloesporioides vs F. oxysporum en PDA a 10°C, tomado cada 24 horas por 12 días.

0

0.5

1

1.5

2

2.5

3

3.5

4

4.5

3 6 9 12

CR

ECIM

IEN

TO (

CM

)

DIAS DE EVALUACIÓN


Antagonismo C. gloesporioides Antagonismo F. oxysporum

Control C. gloesporioides Control F. oxysporum


DÍAS C. gloesporioides F. oxysporum C. gloesporioides F. oxysporum

3 0.9 0.9 1.2 1.5

6 1.2 1.3 1.6 2.6

9 1.3 1.4 1.8 3.3

12 1.4 1.5 1.9 4.1



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0

1

2

3

4

5

6

7

3 6 9 12

CR

ECIM

IEN

TO (

CM

)

DIAS DE EVALUACIÓN






3 1.0 1.4 1.4 2.0

6 1.6 2.6 2.2 4.3

9 2.3 3.7 2.9 5.7

12 3.2 4.7 4.2 6.6



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0

1

2

3

4

5

6

7

8

3 6 9 12

CR

ECIM

IEN

TO (

CM

)

DIAS DE EVALUACIÓN






3 0.9 1.1 1.2 2.2

6 1.3 1.7 1.9 4.2

9 1.8 2.2 3.0 5.9

12 2.6 3.5 4.2 7.3



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Trichoderma harzianum, en prueba de antagonismo y su respectivo control, tomado

cada 24 horas hasta los 12 días de crecimiento en Agar Papa Dextrosa (PDA) a 10° C.


gloesporioides vs T. harzianum en PDA a 10°C, tomado cada 24 horas por 12 días.

0

0.5

1

1.5

2

2.5

3

3.5

4

4.5

3 6 9 12

CR

ECIM

IEN

TO (

CM

)

DIAS DE EVALUACIÓN


Antagonismo C. gloesporioides Antagonismo T. harzianum

Control C. gloesporioides Control T. harzianum


DÍAS C. gloesporioides T. harzianum C. gloesporioides T. harzianum

3 0.7 1.1 1.2 1.3

6 0.7 1.5 1.6 2.2

9 0.9 1.9 1.8 3.2

12 1.2 2.4 1.9 3.9



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

22






0

1

2

3

4

5

6

3 6 9 12

CR

ECIM

IEN

TO (

CM

)

DIAS DE EVALUACIÓN






3 0.8 1.4 1.4 1.5

6 1.1 1.7 2.2 3.4

9 1.9 2.4 2.9 4.2

12 2.8 3.3 4.2 5.1



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

23






0

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

3 6 9 12

CR

ECIM

IEN

TO (

CM

)

DIAS DE EVALUACIÓN






3 0.7 2.2 1.2 2.8

6 0.7 4.4 1.9 5.2

9 0.9 5.2 3.0 6.7

12 1.3 6.5 4.2 8.8



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

24



24 horas hasta los 12 días de crecimiento en Agar Sabouraud Dextrosa (DSA) a 10° C.


gloesporioides vs C. rosea en DSA a 10°C, tomado cada 24 horas por 12 días.

0

0.2

0.4

0.6

0.8

1

1.2

1.4

1.6

1.8

3 6 9 12

CR

ECIM

IEN

TO (

CM

)

DIAS DE EVALUACIÓN

CRECIMIENTO CONTROL Y PRUEBA DE ANTAGONISMO EN DSA A 10° C





3 1.0 0.9 1.1 1.2

6 1.2 1.0 1.2 1.3

9 1.2 1.1 1.5 1.3

12 1.3 1.2 1.7 1.4



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

25






0

1

2

3

4

5

6

7

8

9

3 6 9 12

CR

ECIM

IEN

TO (

CM

)

DIAS DE EVALUACIÓN






3 2.2 1.6 2.3 1.9

6 3.6 3.0 5.2 3.4

9 5.0 4.0 6.9 4.6

12 6.3 5.1 8.4 5.4



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

26






0

1

2

3

4

5

6

7

8

9

3 6 9 12

CR

ECIM

IEN

TO (

CM

)

DIAS DE EVALUACIÓN






3 2.1 1.9 2.6 2.0

6 3.6 3.0 5.3 3.9

9 4.8 4.0 6.7 5.4

12 5.7 4.9 7.7 6.3



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

27





gloesporioides vs F. oxysporum en DSA a 10°C, tomado cada 24 horas por 12 días.

0

0.5

1

1.5

2

2.5

3

3 6 9 12

CR

ECIM

IEN

TO (

CM

)

DIAS DE EVALUACIÓN






3 1.0 0.9 1.1 0.9

6 1.2 1.0 1.2 1.3

9 1.2 1.1 1.5 1.9

12 1.3 1.2 1.7 2.4



BIBLIO

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NCIAS B

IOLO

GICAS

28






0

1

2

3

4

5

6

7

8

9

3 6 9 12

CR

ECIM

IEN

TO (

CM

)

DIAS DE EVALUACIÓN






3 2.0 1.7 2.3 2.0

6 4.2 3.6 5.2 4.3

9 5.9 4.9 6.9 5.9

12 7.4 6.1 8.4 7.4



BIBLIO

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NCIAS B

IOLO

GICAS

29






0

1

2

3

4

5

6

7

8

9

3 6 9 12

CR

ECIM

IEN

TO (

CM

)

DIAS DE EVALUACIÓN






3 2.4 1.4 2.6 2.2

6 4.1 3.3 5.3 4.8

9 5.4 4.2 6.7 5.8

12 6.6 5.4 7.7 6.4



BIBLIO

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NCIAS B

IOLO

GICAS

30



cada 24 horas hasta los 12 días de crecimiento en Agar Sabouraud Dextrosa (DSA) a

10° C.


gloesporioides vs T. harzianum en DSA a 10°C, tomado cada 24 horas por 12 días.

0

0.5

1

1.5

2

2.5

3

3.5

3 6 9 12

CR

ECIM

IEN

TO (

CM

)

DIAS DE EVALUACIÓN






3 1.0 1.1 1.1 1.2

6 1.2 1.6 1.2 1.9

9 1.5 2.1 1.5 2.5

12 1.7 2.4 1.7 3.3



BIBLIO

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NCIAS B

IOLO

GICAS

31




20° C.



0

1

2

3

4

5

6

7

8

9

3 6 9 12

CR

ECIM

IEN

TO (

CM

)

DIAS DE EVALUACIÓN






3 2.3 2.3 2.3 2.4

6 3.8 3.8 5.2 3.9

9 5.6 5.5 6.9 5.5

12 7.2 7.2 8.4 7.1



BIBLIO

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NCIAS B

IOLO

GICAS

32




30° C.



0

1

2

3

4

5

6

7

8

9

3 6 9 12

CR

ECIM

IEN

TO (

CM

)

DIAS DE EVALUACIÓN






3 2.4 2.2 2.6 2.4

6 4.0 3.8 5.3 4.7

9 5.4 4.9 6.7 5.9

12 6.5 6 7.7 7.2



BIBLIO

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NCIAS B

IOLO

GICAS

33

Tabla 19: Grado de antagonismo en cultivos duales de C. gloesporioides frente a C.

rosea, F. oxysporum y T. harzianum en Agar Papa Dextrosa (PDA) a 10 °C y 12 días de

evaluación, utilizando la escala de Bell.

TRATAMIENTOS HONGOS ANTAGONISTAS GRADO DE

ANTAGONISMO

T5 Clonostachys rosea 3

T6 Fusarium oxysporum 3

T7 Trichoderma harzianum 3





ANTAGONISMO








ANTAGONISMO






BIBLIO

TECA D

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NCIAS B

IOLO

GICAS

34


rosea, F. oxysporum y T. harzianum en Agar Sabouraud Dextrosa (DSA) a 10 °C y 12

días de evaluación, utilizando la escala de Bell.


ANTAGONISMO








ANTAGONISMO








ANTAGONISMO






BIBLIO

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NCIAS B

IOLO

GICAS

35

Figura 19. Porcentaje de inhibición en Agar Papa Dextrosa (PDA) a 10°C, 20°C y 30°C de C. rosea, F. oxysporum y T. harzianum frente a

Colletotrichum gloesporioides a los 12 días de evaluación.

A los 10°C de evaluación C. rosea, F. oxysporum y T. harzianum enfrentados a C. gloesporioides en medio de cultivo PDA presentaron un porcentaje de inhibición de 11.04%; 26.38% y 46.01% respectivamente, mientras que a los 20°C presentaron un porcentaje de inhibición de 17.91%; 24.25% y 38.43% y a los 30°C de evaluación presentaron un porcentaje de inhibición de 34.88%; 36.05% y 65.12% respectivamente.

11.04294479

17.91044776

34.88372093

26.380368124.25373134

36.04651163

46.01226994

38.43283582

65.11627907

0

10

20

30

40

50

60

70

10°C 20°C 30°CPO

RC

ENTA

JE D

E IN

HIB

ICIÓ

N D

EL C

REC

IMIE

NTO

(%

)

TEMPERATURA USADA A LOS 12 DÍAS DE EVALUACIÓN

PORCENTAJE DE INHIBICIÓN DE C. GLOESPORIOIDES FRENTE A SUS ANTAGONISTAS

C. rosea

F. oxysporum

T. harzianum



BIBLIO

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GICAS

36

Figura 20. Porcentaje de inhibición en Agar Sabouraud Dextrosa (DSA) a 10°C, 20°C y 30°C de C. rosea, F. oxysporum y T. harzianum frente a

Colletotrichum gloesporioides a los 12 días de evaluación.

A los 10°C de evaluación C. rosea, F. oxysporum y T. harzianum enfrentados a C. gloesporioides en medio de cultivo DSA presentaron un porcentaje de inhibición de 14.19%; 14.55% y 1.81% respectivamente, mientras que a los 20°C presentaron un porcentaje de inhibición de 24.56%; 14.47% y 17.11% y a los 30°C de evaluación presentaron un porcentaje de inhibición de 27.35%; 17.04% y 17.93% respectivamente.

14.18181818

24.56140351

27.35426009

14.54545455 14.47368421

17.04035874

1.818181818

17.1052631617.93721973

0

5

10

15

20

25

30

10°C 20°C 30°C

PO

RC

ENTA

JE D

E IN

HIB

ICIÓ

N D

EL C

REC

IMIE

NTO

(%

)

TEMPERATURA USADA A LOS 12 DÍAS DE EVALUACIÓN

PORCENTAJE DE INHIBICIÓN DE C. GLOESPORIOIDES FRENTE A SUS ANTAGONISTAS

C. rosea

F. oxysporum

T. harzianum



BIBLIO

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IOLO

GICAS

37

Tabla 25: Análisis de Varianza (ANOVA) del crecimiento promedio de C. gloesporioides

frente a C. rosea en Agar Sabouraud Dextrosa (DSA) a 10 °C y 12 días de evaluación.

ANALISIS DE VARIANZA

Fuente Suma de

Cuadrados GL

Cuadrado Medio

Razón-F Valor-P

Entre grupos 0.245 3 0.0816667 2.84 0.0826

Intra grupos 0.345 12 0.02875

Total (Corr.) 0.59 15

A los 12 días de evaluación del crecimiento promedio de C. gloesporioides frente a C. rosea en DSA 10 °C. La

razón-F, que en este caso es igual a 2.84058, es el cociente entre el estimado entre-grupos y el estimado intra-

grupos. Puesto que el valor-P de la razón-F es mayor o igual que 0.05, no existe una diferencia estadísticamente

significativa entre la media de crecimiento 10 °C entre un nivel de tratamiento y otro, con un nivel del 95.0% de

confianza.

Tabla 26: Comparación de las mediciones (Promedio) de los halos de inhibición de C.

gloesporioides frente a C. rosea en Agar Sabouraud Dextrosa (DSA) a 10 °C.

CONTRASTE Sig. Diferencia +/- Límites

C. gloesporioides - C. gloesporioides (Dual) 0.2 0.357044

C. gloesporioides - C. rosea 0.075 0.357044 C. gloesporioides - C. rosea (Dual) 0.325 0.357044 C. gloesporioides (Dual) - C. rosea -0.125 0.357044 C. gloesporioides (Dual) - C. rosea (Dual) 0.125 0.357044 C. rosea - C. rosea (Dual) 0.25 0.357044 * indica una diferencia significativa.

Al comparar las medias de C. gloesporioides frente a C. rosea en DSA a 10 °C, en el cuadro de CONTRASTE

muestra las diferencias estimadas entre cada par de medias, donde no se encontraron diferencias

estadísticamente significativas entre cualquier par de medias, con un nivel del 95.0% de confianza. En el cuadro

de TRATAMIENTOS, se identificó un grupo homogéneo, según la alineación de “X” en columna, donde tampoco

existe diferencias estadísticamente significativas entre aquellos niveles que compartan una misma columna de

“X”. Con el método de Tukey existe un riesgo del 5.0% al decir que uno o más pares son significativamente

diferentes, cuando la diferencia real es igual a 0.

PORCENTAJE TUKEY HSD

TRATAMIENTO Casos Media Grupos Homogéneos

C. rosea (Dual) 4 1.05 X C. gloesporioides (Dual) 4 1.175 X C. rosea 4 1.3 X C. gloesporioides 4 1.375 X



BIBLIO

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NCIAS B

IOLO

GICAS

38




Fuente Suma de

Cuadrados GL

Cuadrado Medio

Razón-F Valor-P

Entre grupos 11.8069 3 3.93562 1.08 0.3927

Intra grupos 43.5425 12 3.62854

Total (Corr.) 55.3494 15





confianza.





C. gloesporioides - C. rosea 1.875 4.01115 C. gloesporioides - C. rosea (Dual) 2.275 4.01115 C. gloesporioides (Dual) - C. rosea 0.45 4.01115 C. gloesporioides (Dual) - C. rosea (Dual) 0.85 4.01115 C. rosea - C. rosea (Dual) 0.4 4.01115 * indica una diferencia significativa.










C. rosea (Dual) 4 3.425 X C. rosea 4 3.825 X C. gloesporioides (Dual) 4 4.275 X C. gloesporioides 4 5.7 X



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

39




Fuente Suma de

Cuadrados GL

Cuadrado Medio

Razón-F Valor-P

Entre grupos 9.60688 3 3.20229 1.02 0.4175

Intra grupos 37.6275 12 3.13562

Total (Corr.) 47.2344 15





confianza.





C. gloesporioides - C. rosea 1.175 3.72876 C. gloesporioides - C. rosea (Dual) 2.125 3.72876 C. gloesporioides (Dual) - C. rosea -0.35 3.72876 C. gloesporioides (Dual) - C. rosea (Dual) 0.6 3.72876 C. rosea - C. rosea (Dual) 0.95 3.72876 * indica una diferencia significativa.










C. rosea (Dual) 4 3.45 X C. gloesporioides (Dual) 4 4.05 X C. rosea 4 4.40 X C. gloesporioides 4 5.575 X



BIBLIO

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IOLO

GICAS

40


frente a F. oxysporum en Agar Sabouraud Dextrosa (DSA) a 10°C y 12 días de

evaluación.


Fuente Suma de

Cuadrados GL

Cuadrado Medio

Razón-F Valor-P

Entre grupos 0.756875 3 0.252292 1.85 0.1911

Intra grupos 1.6325 12 0.136042

Total (Corr.) 2.38937 15

A los 12 días de evaluación del crecimiento promedio de C. gloesporioides frente a F. oxysporum en DSA 10 °C.

La razón-F, que en este caso es igual a 1.85452, es el cociente entre el estimado entre-grupos y el estimado intra-



confianza.


gloesporioides frente a F. oxysporum en Agar Sabouraud Dextrosa (DSA) a 10 °C.



C. gloesporioides - F. oxysporum -0.25 0.776673 C. gloesporioides - F. oxysporum (Dual) 0.325 0.776673 C. gloesporioides (Dual) - F. oxysporum -0.45 0.776673 C. gloesporioides (Dual) - F. oxysporum (Dual) 0.125 0.776673 F. oxysporum - F. oxysporum (Dual) 0.575 0.776673 * indica una diferencia significativa.

Al comparar las medias de C. gloesporioides frente a F. oxysporum en DSA a 10 °C, en el cuadro de CONTRASTE









F. oxysporum (Dual) 4 1.05 X C. gloesporioides (Dual) 4 1.175 X C. gloesporioides 4 1.375 X F. oxysporum 4 1.625 X



BIBLIO

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IOLO

GICAS

41



evaluación.


Fuente Suma de

Cuadrados GL

Cuadrado Medio

Razón-F Valor-P

Entre grupos 5.2825 3 1.76083 0.33 0.8014

Intra grupos 63.355 12 5.27958

Total (Corr.) 68.6375 15


La razón-F, que en este caso es igual a 0.333517, es el cociente entre el estimado entre-grupos y el estimado

intra-grupos. Puesto que el valor-P de la razón-F es mayor o igual que 0.05, no existe una diferencia

estadísticamente significativa entre la media de crecimiento 20 °C entre un nivel de tratamiento y otro, con un nivel

del 95.0% de confianza.





C. gloesporioides - F. oxysporum 0.8 4.83841 C. gloesporioides - F. oxysporum (Dual) 1.625 4.83841 C. gloesporioides (Dual) - F. oxysporum -0.025 4.83841 C. gloesporioides (Dual) - F. oxysporum (Dual) 0.8 4.83841 F. oxysporum - F. oxysporum (Dual) 0.825 4.83841 * indica una diferencia significativa.













BIBLIO

TECA D

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NCIAS B

IOLO

GICAS

42



evaluación.


Fuente Suma de

Cuadrados GL

Cuadrado Medio

Razón-F Valor-P

Entre grupos 8.13687 3 2.71229 0.75 0.5420

Intra grupos 43.2825 12 3.60688

Total (Corr.) 51.4194 15




estadísticamente significativa entre la media de crecimiento 30 °C entre un nivel de tratamiento y otro, con un nivel

del 95.0% de confianza.





C. gloesporioides - F. oxysporum 0.775 2.92598 C. gloesporioides - F. oxysporum (Dual) 2.0 2.92598 C. gloesporioides (Dual) - F. oxysporum -0.175 2.92598 C. gloesporioides (Dual) - F. oxysporum (Dual) 1.05 2.92598 F. oxysporum - F. oxysporum (Dual) 1.225 2.92598 * indica una diferencia significativa.













BIBLIO

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IOLO

GICAS

43


frente a T. harzianum en Agar Sabouraud Dextrosa (DSA) a 10°C y 12 días de

evaluación.


Fuente Suma de

Cuadrados GL

Cuadrado Medio

Razón-F Valor-P

Entre grupos 0.996875 3 0.332292 6.79 0.0063

Intra grupos 0.5875 12 0.0489583

Total (Corr.) 1.58438 15

A los 12 días de evaluación del crecimiento promedio de C. gloesporioides frente a T. harzianum en DSA 10 °C.


grupos. Puesto que el valor-P de la prueba-F es menor que 0.05, existe una diferencia estadísticamente

significativa entre la media de crecimiento 10 °C entre un nivel de tratamientos y otro, con un nivel del 95.0% de

confianza.


gloesporioides frente a T. harzianum en Agar Sabouraud Dextrosa (DSA) a 10 °C.



C. gloesporioides - T. harzianum 0.425 0.46925 C. gloesporioides - T. harzianum (Dual) * 0.575 0.46925 C. gloesporioides (Dual) - T. harzianum 0.4 0.46925 C. gloesporioides (Dual) - T. harzianum (Dual) * 0.55 0.46925 T. harzianum - T. harzianum (Dual) 0.15 0.46925 * indica una diferencia significativa.

Al comparar las medias de C. gloesporioides frente a T. harzianum en DSA a 10 °C, en el cuadro de CONTRASTE

muestra las diferencias estimadas entre cada par de medias, El asterisco que se encuentra al lado de los 2 pares

indica que estos pares muestran diferencias estadísticamente significativas con un nivel del 95.0% de confianza.

En el cuadro de TRATAMIENTOS, se identificó un grupo homogéneo, según la alineación de “X” en columna,

donde tampoco existe diferencias estadísticamente significativas entre aquellos niveles que compartan una misma

columna de “X”. Con el Método de Tukey existe un riesgo del 5.0% al decir que uno o más pares son

significativamente diferentes, cuando la diferencia real es igual a 0.



T. harzianum (Dual) 4 0.8 X C. gloesporioides (Dual) 4 1.35 X C. gloesporioides 4 1.375 X T. harzianum 4 0.95 XX



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IOLO

GICAS

44



evaluación.


Fuente Suma de

Cuadrados GL

Cuadrado Medio

Razón-F Valor-P

Entre grupos 9.9725 3 3.32417 0.72 0.5601

Intra grupos 55.565 12 4.63042

Total (Corr.) 65.5375 15




estadísticamente significativa entre la media de crecimiento 20 °C entre un nivel de tratamientos y otro, con un

nivel del 95.0% de confianza.





C. gloesporioides - T. harzianum 1.15 4.53119 C. gloesporioides - T. harzianum (Dual) 2.225 4.53119 C. gloesporioides (Dual) - T. harzianum 0.175 4.53119 C. gloesporioides (Dual) - T. harzianum (Dual) 1.25 4.53119 T. harzianum - T. harzianum (Dual) 1.075 4.53119 * indica una diferencia significativa.


muestra las diferencias estimadas entre cada par de medias, No hay diferencias estadísticamente significativas

entre cualquier par de medias, con un nivel del 95.0% de confianza. En el cuadro de TRATAMIENTOS, se

identificó un grupo homogéneo, según la alineación de “X” en columna, donde tampoco existe diferencias

estadísticamente significativas entre aquellos niveles que compartan una misma columna de “X”. Con el Método

de Tukey existe un riesgo del 5.0% al decir que uno o más pares son significativamente diferentes, cuando la

diferencia real es igual a 0.



T. harzianum (Dual) 4 3.475 X C. gloesporioides (Dual) 4 4.725 X C. gloesporioides 4 5.7 X T. harzianum 4 4.55 X



BIBLIO

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IOLO

GICAS

45



evaluación.


Fuente Suma de

Cuadrados GL

Cuadrado Medio

Razón-F Valor-P

Entre grupos 9.38 3 3.12667 0.85 0.4936

Intra grupos 44.21 12 3.68417





estadísticamente significativa entre la media de crecimiento 30 °C entre un nivel de tratamientos y otro, con un

nivel del 95.0% de confianza.





C. gloesporioides - T. harzianum 0.85 4.04177 C. gloesporioides - T. harzianum (Dual) 2.15 4.04177 C. gloesporioides (Dual) - T. harzianum -0.15 4.04177 C. gloesporioides (Dual) - T. harzianum (Dual) 1.15 4.04177 T. harzianum - T. harzianum (Dual) 1.3 4.04177 * indica una diferencia significativa.


muestra las diferencias estimadas entre cada par de medias, donde no existe diferencias estadísticamente

significativas entre cualquier par de medias, con un nivel del 95.0% de confianza. En el cuadro de

TRATAMIENTOS, se identificó un grupo homogéneo, según la alineación de “X” en columna, donde tampoco






T. harzianum (Dual) 4 3.425 X C. gloesporioides (Dual) 4 4.575 X C. gloesporioides 4 5.575 X T. harzianum 4 4.725 X



BIBLIO

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frente a C. rosea en Agar Papa Dextrosa (PDA) a 10 °C y 12 días de evaluación.


Fuente Suma de

Cuadrados GL

Cuadrado Medio

Razón-F Valor-P

Entre grupos 2.325 3 0.775 2.01 0.1662

Intra grupos 4.625 12 0.385417


A los 12 días de evaluación del crecimiento promedio de C. gloesporioides frente a C. rosea en PDA 10 °C. La




confianza.


gloesporioides frente a C. rosea en Agar Papa Dextrosa (PDA) a 10 °C.


C. gloesporioides (Dual) - C. rosea -0.975 1.30728

C. gloesporioides (Dual) - C. rosea (Dual) -0.15 1.30728 C. gloesporioides (Dual) - C.gloesporioides -0.175 1.30728 C. rosea - C. rosea (Dual) 0.825 1.30728 C. rosea - C.gloesporioides 0.8 1.30728 C. rosea (Dual) - C.gloesporioides -0.025 1.30728 * indica una diferencia significativa.

Al comparar las medias de C. gloesporioides frente a C. rosea en PDA a 10 °C, en el cuadro de CONTRASTE









C. gloesporioides (Dual) 4 1.45 X C. rosea (Dual) 4 1.6 X C.gloesporioides 4 1.625 X C. rosea 4 2.425 X



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Fuente Suma de

Cuadrados GL

Cuadrado Medio

Razón-F Valor-P

Entre grupos 8.24688 3 2.74896 1.78 0.2049

Intra grupos 18.5575 12 1.54646

Total (Corr.) 26.8044 15


razón-F, que en este caso es igual a 1.77758, es el cociente entre el estimado entre-grupos y el estimado intra



confianza.





C. gloesporioides (Dual) - C. rosea (Dual) 0.2 2.61861 C. gloesporioides (Dual) - C. gloesporioides -0.475 2.61861 C. rosea - C. rosea (Dual) 1.85 2.61861 C. rosea - C. gloesporioides 1.175 2.61861 C. rosea (Dual) - C. gloesporioides -0.675 2.61861 * indica una diferencia significativa.










C. rosea (Dual) 4 2.0 X C. gloesporioides (Dual) 4 2.2 X C. gloesporioides 4 2.675 X C. rosea 4 3.85 X



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Fuente Suma de

Cuadrados GL

Cuadrado Medio

Razón-F Valor-P

Entre grupos 4.29 3 1.43 1.19 0.3552

Intra grupos 14.43 12 1.2025






confianza.





C. gloesporioides (Dual) - C. rosea (Dual) -0.15 2.30911 C. gloesporioides (Dual) - C.gloesporioides -0.9 2.30911 C. rosea - C. rosea (Dual) 1.1 2.30911 C. rosea - C.gloesporioides 0.35 2.30911 C. rosea (Dual) - C.gloesporioides -0.75 2.30911 * indica una diferencia significativa.










C. gloesporioides (Dual) 4 1.675 X C. rosea (Dual) 4 1.825 X C.gloesporioides 4 2.575 X C. rosea 4 2.925 X



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frente a F. oxysporum en Agar Papa Dextrosa (PDA) a 10°C y 12 días de evaluación.


Fuente Suma de

Cuadrados GL

Cuadrado Medio

Razón-F Valor-P

Entre grupos 7.23687 3 2.41229 6.76 0.0064

Intra grupos 4.2825 12 0.356875

Total (Corr.) 11.5194 15

A los 12 días de evaluación del crecimiento promedio de C. gloesporioides frente a F. oxysporum en PDA 10 °C.




confianza.


gloesporioides frente a F. oxysporum en Agar Papa Dextrosa (PDA) a 10 °C.



C. gloesporioides - F. oxysporum -1.25 1.25794 C. gloesporioides - F. oxysporum (Dual) 0.35 1.25794 C. gloesporioides (Dual)- F. oxysporum * -1.675 1.25794 C. gloesporioides (Dual) - F. oxysporum (Dual) -0.075 1.25794 F. oxysporum - F. oxysporum (Dual) * 1.6 1.25794 * indica una diferencia significativa.

Al comparar las medias de C. gloesporioides frente a F. oxysporum en PDA a 10 °C, en el cuadro de CONTRASTE

muestra las diferencias estimadas entre cada par de medias, donde el asterisco que se encuentra al lado de los

2 pares indica que estos pares muestran diferencias estadísticamente significativas con un nivel del 95.0% de

confianza. En el cuadro de TRATAMIENTOS, se han identificado 2 grupos homogéneos según la alineación de

las “X” en columnas. No existen diferencias estadísticamente significativas entre aquellos niveles que compartan

una misma columna de “X”. Con el Método de Tukey existe un riesgo del 5.0% al decir que uno o más pares son




C. gloesporioides (Dual) 4 1.2 X F. oxysporum (Dual) 4 1.275 X C. gloesporioides 4 1.625 XX F. oxysporum 4 2.875 X



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Fuente Suma de

Cuadrados GL

Cuadrado Medio

Razón-F Valor-P

Entre grupos 14.9525 3 4.98417 2.39 0.1197

Intra grupos 25.025 12 2.08542

Total (Corr.) 39.9775 15





confianza.





C. gloesporioides - F. oxysporum -1.975 3.04088 C. gloesporioides - F. oxysporum (Dual) -0.425 3.04088 C. gloesporioides (Dual) - F. oxysporum -2.625 3.04088 C. gloesporioides (Dual) - F. oxysporum (Dual) -1.075 3.04088 F. oxysporum - F. oxysporum (Dual) 1.55 3.04088 * indica una diferencia significativa.






“X”. Con el Método de Tukey existe un riesgo del 5.0% al decir que uno o más pares son significativamente




C. gloesporioides (Dual) 4 2.025 X C. gloesporioides 4 2.675 X F. oxysporum (Dual) 4 3.1 X F. oxysporum 4 4.65 X



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Fuente Suma de

Cuadrados GL

Cuadrado Medio

Razón-F Valor-P

Entre grupos 24.9525 3 8.3175 4.08 0.0326

Intra grupos 24.445 12 2.03708

Total (Corr.) 49.3975 15





confianza.





C. gloesporioides - F. oxysporum -2.325 3.00543 C. gloesporioides - F. oxysporum (Dual) 0.45 3.00543 C. gloesporioides (Dual) - F. oxysporum * -3.25 3.00543 C. gloesporioides (Dual) - F. oxysporum (Dual) -0.475 3.00543 F. oxysporum - F. oxysporum (Dual) 2.775 3.00543 * indica una diferencia significativa.


muestra las diferencias estimadas entre cada par de medias, donde se ha colocado un asterisco junto a 1 par,

indicando que este par muestra diferencias estadísticamente significativas con un nivel del 95.0% de confianza.

En el cuadro de TRATAMIENTOS, se han identificado 2 grupos homogéneos según la alineación de las “X” en

columnas, No existen diferencias estadísticamente significativas entre aquellos niveles que compartan una misma

columna de “X”. Con el método de Tukey existe un riesgo del 5.0% al decir que uno o más pares son




C. gloesporioides (Dual) 4 1.65 X F. oxysporum (Dual) 4 2.125 XX C. gloesporioides 4 2.575 XX F. oxysporum 4 4.9 X



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frente a T. harzianum en Agar Papa Dextrosa (PDA) a 10°C y 12 días de evaluación.


Fuente Suma de

Cuadrados GL

Cuadrado Medio

Razón-F Valor-P

Entre grupos 6.35187 3 2.11729 4.82 0.0199

Intra grupos 5.2725 12 0.439375

Total (Corr.) 11.6244 15

A los 12 días de evaluación del crecimiento promedio de C. gloesporioides frente a T. harzianum en PDA 10 °C.




confianza.


gloesporioides frente a T. harzianum en Agar Papa Dextrosa (PDA) a 10 °C.


C. gloesporioides - C. gloesporioides Antagonismo 0.75 1.39579

C. gloesporioides - T. harzianum -1.025 1.39579

C. gloesporioides - T. harzianum Antagonismo -0.1 1.39579

C. gloesporioides Antagonismo - T. harzianum * -1.775 1.39579

C. gloesporioides Antagonismo - T. harzianum Antagonismo -0.85 1.39579

T. harzianum - T. harzianum Antagonismo 0.925 1.39579

* indica una diferencia significativa.

Al comparar las medias de C. gloesporioides frente a T. harzianum en PDA a 10 °C, en el cuadro de CONTRASTE

muestra las diferencias estimadas entre cada par de medias, donde se ha colocado un asterisco junto a 1 par,

indicando que este par muestra diferencias estadísticamente significativas con un nivel del 95.0% de confianza.

En el cuadro de TRATAMIENTOS, se han identificado 2 grupos homogéneos según la alineación de las “X” en

columnas. No existen diferencias estadísticamente significativas entre aquellos niveles que compartan una misma

columna de “X”. Con el método de Tukey existe un riesgo del 5.0% al decir que uno o más pares son




C. gloesporioides Antagonismo 4 0.875 X

C. gloesporioides 4 1.625 XX

T. harzianum Antagonismo 4 1.725 XX

T. harzianum 4 2.65 X



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Fuente Suma de

Cuadrados GL

Cuadrado Medio

Razón-F Valor-P

Entre grupos 7.77687 3 2.59229 1.97 0.1731

Intra grupos 15.8275 12 1.31896

Total (Corr.) 23.6044 15





confianza.





C. gloesporioides - T. harzianum -0.875 2.41834 C. gloesporioides - T. harzianum Antagonismo 0.475 2.41834 C. gloesporioides Antagonismo - T. harzianum -1.9 2.41834 C. gloesporioides Antagonismo - T. harzianum Antagonismo

-0.55 2.41834

T. harzianum - T. harzianum Antagonismo 1.35 2.41834 * indica una diferencia significativa.


muestra las diferencias estimadas entre cada par de medias, donde no existe diferencias estadísticamente

significativas entre cualquier par de medias, con un nivel del 95.0% de confianza. En el cuadro de

TRATAMIENTOS, se identificó un grupo homogéneo, según la alineación de “X” en columna, donde tampoco






C. gloesporioides Antagonismo 4 1.65 X T. harzianum Antagonismo 4 2.2 X C. gloesporioides 4 2.675 X T. harzianum 4 3.55 X



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Fuente Suma de

Cuadrados GL

Cuadrado Medio

Razón-F Valor-P

Entre grupos 57.6419 3 19.214 6.72 0.0065

Intra grupos 34.3225 12 2.86021

Total (Corr.) 91.9644 15





confianza.





C. gloesporioides - T. harzianum -3.3 3.56124 C. gloesporioides - T. harzianum Antagonismo -2.0 3.56124 C. gloesporioides Antagonismo - T. harzianum * -4.975 3.56124 C. gloesporioides Antagonismo - T. harzianum Antagonismo

* -3.675 3.56124

T. harzianum - T. harzianum Antagonismo 1.3 3.56124 * indica una diferencia significativa.


muestra las diferencias estimadas entre cada par de medias, donde el asterisco que se encuentra al lado de los

2 pares indica que estos pares muestran diferencias estadísticamente significativas con un nivel del 95.0% de

confianza. En el cuadro de TRATAMIENTOS, se han identificado 2 grupos homogéneos según la alineación de

las “X” en columnas. No existen diferencias estadísticamente significativas entre aquellos niveles que compartan

una misma columna de “X”. Con el método de Tukey existe un riesgo del 5.0% al decir que uno o más pares son




C. gloesporioides Antagonismo 4 0.9 X C. gloesporioides 4 2.575 XX T. harzianum Antagonismo 4 4.575 X T. harzianum 4 5.875 X



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Figura 21: Crecimiento de los monocultivos puros de A) C. rosea B) C.

gloesporioides C) F. oxysporum y D) T. harzianum, a los 12 días de evaluación

en Agar Papa Dextrosa y Agar Sabouraud Dextrosa.

El crecimiento de los cultivos de C. rosea, F. oxysporum y C. gloesporioides

llegan a ocupar la totalidad de la placa Petri, mientras que el crecimiento de T.

harzianum no llega a ocupar la totalidad de la placa.

A B

D C



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= Línea media de la placa Petri

Figura 22: Crecimiento de los cultivos duales de a) C. rosea vs C. gloesporioides

b) T. harzianum vs C. gloesporioides y c) F. oxysporum vs C. gloesporioides, a

un 1 día de crecimiento en Agar Sabouraud Dextrosa.

El crecimiento de los cultivos duales de los hongos: C. gloesporioides, C. rosea,

F. oxysporum y T. harzianum enfrentados, crecieron de forma muy irregular en

comparación a lo largo de la siembra a las 24 horas de su crecimiento.

a b

c



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Figura 23: Crecimiento de los cultivos duales de A) C. rosea vs C.

gloesporioides B) T. harzianum vs C. gloesporioides y C) F. oxysporum vs C.

gloesporioides, a 6 días de crecimiento en Agar Papa Dextrosa.



comparación a lo largo de la siembra a los 6 días de crecimiento.

A B

C



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Figura 24: Crecimiento de los cultivos duales de A) C. rosea vs C. gloesporioides

B) T. harzianum vs C. gloesporioides y C) F. oxysporum vs C. gloesporioides, a

12 días de crecimiento en Agar Papa Dextrosa.



comparación a lo largo de los 12 días de crecimiento.

A B

C



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DISCUSIÓN

De acuerdo con los resultados registrados en esta investigación, detallan que tanto

controladores como fitopatógenos son limitados por la temperatura y el medio de cultivo,

en donde se evidencia la teoría planteada por Luque63, que determinó que esto se debe

a diversos factores como: Las características de los fitopatógenos (grosor de hifas),

humedad y temperatura usada en el medio de cultivo, son factores que crean resistencia

a los antagonistas y deformaciones irregulares a lo largo de la experiencia, en tanto la

investigación de Morales García64, indicaba que la temperatura óptima de desarrollo en

condiciones in vitro para C. gloesporioides es de 20 a 30°C, igual a esta investigación,

en donde el hongo se desarrolla en menor tiempo de lo esperado, impidiendo así el

avance de cualquier antagonista.

De acuerdo con los datos registrados en las tablas N°1, 2 y 3 & 10, 11 y 12, la

disminución del crecimiento micelial del biocontrolador C. rosea en la prueba de

antagonismo realizada a 10°C, 20°C y 30°C en los medios de cultivo Agar Papa

Dextrosa (PDA) & Agar Sabouraud Dextrosa (DSA) respectivamente; Chavez17 &

Papavizas22, demostraron en sus respectivas investigaciones que esto se debe a que

entre las condiciones que pueden afectar el desempeño de G. roseum (=C. rosea) como

biocontrolador está: La temperatura y el tiempo de siembra del antagonista que delimitó

el crecimiento de este biocontrolador, que en condiciones ambientales favorables, para

los autores mencionados el antagonista incrementa su actividad supresiva según se

incrementa la temperatura de 10° C a 25 °C y a partir de los 15 °C la germinación de los

conidios del biocontrolador es mayor al 80%, incrementándose también con el aumento

de temperatura. Worsatit54 en cambio, relacionó la no efectividad de este antagonista,

con la cantidad de metabolitos producidos por C. rosea en una prueba de antagonismo,

donde depende de los nutrimentos y no siempre está relacionada con la habilidad para

controlar alguna enfermedad. Tal y como se pueden observar gráficamente en las

figuras: 1, 2 y 3 en PDA & 10, 11 y 12 en DSA.

A demás en las tablas N° 4, 5 y 6 & 13, 14 y 15, de la prueba de antagonismo realizada

a 10°C, 20°C y 30°C en los medios de cultivo Agar Papa Dextrosa (PDA) y Agar

Sabouraud Dextrosa (DSA) respectivamente, nos muestra la clara competencia por

nutrientes de F. oxysporum frente a C. gloesporioides, donde el crecimiento de este

hongo usado como antagonista, se limita ya que, según Fletcher56 & Nelson57, no



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60

revelaron la patogenicidad exacta de Fusarium oxysporum fuera de un género

hospedante, el hongo presenta características importantes sobre muchas plantas no

hospedantes, al igual que la sobrevivencia saprofítica en el suelo y tener una

temperatura óptima de desarrollo entre 25 y 30ºC, pero concluyeron que ejerce solo

cierta competencia por nutrientes en vez de un antagonismo en condiciones in vitro.

Debe tenerse en cuenta; sin embargo, que son estudios llevados a cabo en condiciones

in vitro, las cuales pueden diferir marcadamente de las condiciones de campo. Lo antes

mencionado se puede observar gráficamente en las figuras N° 4, 5 y 6 en PDA & 13, 14

y 15 en DSA.

Mientras que en las tablas N° 7, 8 y 9 & 16, 17 y 18, de la prueba de antagonismo

realizada a 10°C, 20°C y 30°C en los medios de cultivo Agar Papa Dextrosa (PDA) y

Agar Sabouraud Dextrosa (DSA) respectivamente, nos muestra el claro antagonismo

demostrado por T. harzianum sobre C. gloesporioides, en las tablas 7 y 8, pero de

manera más clara en la tabla 9, donde, Fernandez58 por ejemplo, sostiene que el género

Trichoderma es un agente de control biológico muy eficiente puesto que presenta alta

velocidad de crecimiento, abundante esporulación y una amplia gama de sustratos

donde pueden crecer debido a la riqueza de enzimas que posee; además, menciona

que la habilidad de Trichoderma como excelente competir por espacio y recursos

nutricionales se debe a la presencia en forma natural de este hongo en diferentes tipos

de suelos que evidencia el amplio rango de hospedante de este antagonista. Al

respecto, Mont 42, refiere que T. harzianum tiene una alta capacidad de competencia por

el sustrato; como consecuencia de ello, el organismo afectado tiende a entrar en un

estado de latencia, que podría ser por deficiencia de nutrientes o la presencia de cierto

nivel de sustancias inhibitorias, lo cual impide que siga creciendo; coincidiendo, con una

parte de los resultados obtenidos en la presente investigación. Asimismo, Ezziyyani59

refiere que T. harzianum presenta una gran adaptabilidad a diferentes temperaturas del

medio ambiente, pudiendo crecer y reproducirse normalmente hasta los 35°C, a este

nivel estas enzimas juegan un importante papel en el micoparasitismo. Al respecto,

Harman60complementó lo anterior y especificó que la temperatura y humedad son

considerados como parámetros de importancia en la distribución natural de este

antagonista en el suelo; por la alta presencia de saprófitos que compiten por espacio y

alimento, considerando a Trichoderma como un competidor agresivo; Papavizas61. Tal

y como las podemos observar gráficamente en las figuras N° 7, 8 y 9 en PDA.



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61

Asimismo, las tablas N° 19,20 y 21 & 22,23 y 24, nos evidencia la resistencia de C.

gloesporioides frente a C. rosea, Fusarium oxysporum y Trichoderma harzianum sólo

en el medio Agar Sabouraud Dextrosa, que nos indicó la resistencia de este fitopatógeno

ya que probablemente contribuyó a la expresión de resistencia, debido a que existen

muchas posibilidades de que surjan alteraciones en algunos procesos metabólicos que

son gobernados por un número reducido de genes como la cuantificación del

crecimiento micelial, germinación de esporas en medio de cultivo adicionado con

fungicidas, y pruebas in vivo de la efectividad biológica de dichos productos, como lo

demostró en sus investigaciones Delp65 & Dekker66. Las características antes

mencionadas las podemos observar gráficamente en las figuras N° 22, 23 y 24

respectivamente.

Asimismo, la figura N° 19 y 20, nos muestra el porcentaje de inhibición obtenido por

Colletotrichum gloesporioides que obtuvo frente a C. rosea, F. oxysporum y T.

harzianum en un medio de cultivo PDA presentaron un porcentaje de inhibición de

11.04%, 26.38% y 46.01% respectivamente, mientras que a los 20°C presentaron un

porcentaje de inhibición de 17.91%, 24.25% y 38.43% y a los 30°C de evaluación

presentaron un porcentaje de inhibición de 34.88%, 36.05% y 65.12% respectivamente.,

mientras que medio en el medio de cultivo DSA presentaron un porcentaje de inhibición

de 14.19%, 14.55% y 1.81% respectivamente, mientras que a los 20°C presentaron un

porcentaje de inhibición de 24.56%, 14.47% y 17.11% y a los 30°C de evaluación

presentaron un porcentaje de inhibición de 27.35%, 17.04% y 17.93% respectivamente;

donde estos datos obtenidos se pueden vincular a la siembra del fitopatógeno realizada

con 24 horas de anticipación frente a su antagonista en condiciones in vitro, donde a

medida que desarrollaba la colonia del patógeno en relación a sus antagonistas mayor

era el porcentaje de inhibición frente a estos antagonistas.

El estudio de Colletotrichum gloesporioides es muy limitado en nuestra región y poco

conocido sobre todo en el Perú. Hasta el momento los resultados indican la gran

capacidad de resistencia de este fitopatógeno causante de la antracnosis en distintos

alimentos cosechados en nuestro país frente a algunos antagonistas, por lo cual este

trabajo es un modelo a seguir para seguir investigando en busca de biocontroladores

para los distintos tipos de hongos fitopatógenos que causan daño económico en la

agricultura peruana.



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CONCLUSIONES

El mejor controlador biológico de C. gloesporioides fue T. harziaum en el medio de

cultivo Agar Papa Dextrosa (PDA) y Agar Sabouraud Dextrosa (DSA) con un grado

2 según la escala de Bell en las temperturas de 10°C, 20°C y 30°C.

La acción antagónica de C. rosea y F. oxysporum frente a C. gloesporioides alcanzó

un grado 3 en la escala de Bell en los medios de cultivo PDA y DSA en las

temperaturas de 10°C, 20°C y 30°C.

El mayor porcentaje de inhibición del crecimiento de C. gloesporioides también fue

para T. harzianum con un 65.12% en medio de cultivo PDA respecto a 34.88% para

C. rosea y 36.05% para F. oxysporum para la temperatura de 30°C.

El mayor porcentaje de inhibición del crecimiento de C. gloesporioides en medio de

cultivo DSA fue para C. rosea con 27.35% respecto a los 17.04% de F. oxysporum

y 17.93% de T. harzianum.

La temperatura no influye en la determinación del control antagónico (escala de

Bell) pero frente al porcentaje de inhibición si existe una influencia de la

temperatura, donde se determinó que a mayor temperatura existe mayor porcentaje

de inhibición.



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63

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

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cepas de Trichoderma para su empleo como biofungicidas. Rev. Iberoam

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Biochemistry, 2008; 40: 1-10.

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ANEXOS



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70

Figura 8: Aislamiento de C. rosea, siguiendo el procedimiento de SENASA

3. Obtención del cultivo

puro de C. rosea

4. Observación de C. rosea

mediante microcultivos.

1. Frasco conteniendo

cepas de C. rosea. 2. Siembra de C. rosea



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71

Figura 9: Aislamiento de T. harzianum, siguiendo el procedimiento de SENASA

1. Cepas de T. harzianum

enviados por SENASA

3. Obtención de cultivo

puro de T. harzianum

4. Observación de T.

harzianum mediante

microcultivos.

2. Siembra de T.

harzianum



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72

Figura 10: Aislamiento, obtención y observación microscópica del cultivo puro de F. oxysporum.

2. Fruto con síntomas de

ataque F. oxysporum

1. Siembra de F.

oxysporum

3. Cultivo puro de F.

oxysporum

4. Observación

microscópica de F.

oxysporum



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73

Figura 11: Aislamiento, obtención y observación microscópica del cultivo puro de C. gloesporioides.

1. Cáscara de palto

infectada por el ataque

de C. gloesporioides

2. Siembra de C.

gloesporioides

3. Obtención de cultivo

puro de C. gloesporioides 4. Observación

microscópica de C.

gloesporioides



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74

Figura 12: Procedimiento de dispersión y temperaturas sometidas de las Placas Petri en estudio.

DISPERSIÓN DE PLACAS DE AGAR

SABOURAUD & AGAR PAPA. CRECIMIENTO DE HONGOS EN

PLACAS PETRI SOMETIDAS A 10° C.

CRECIMIENTO DE HONGOS EN

PLACAS PETRI SOMETIDAS A 20° C

(AMBIENTE).

CRECIMIENTO DE HONGOS EN

PLACAS PETRI SOMETIDAS A

30° C.



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75

Figura 13: Identificación de las muestras microscópica de los hongos antagonistas como fitopatógenos.

.

MATERIALES USADOS EN LA

OBSERVACIÓN MICROSCOPICA

COLORANTE VERDE DE METILO

USADO PARA LA FIJACIÓN DE LA

MUESTRA

MUESTRAS FIJADAS Y PREPARADAS

EN FRESCO PARA SU OBSERVACIÓN.

OBSERVACIÓN A TRAVES DEL

MICROSCOPIO DE LAS MUESTRAS

EN FRESCO PREPARADAS.



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Tabla 1: Crecimiento del diámetro de la colonia de los monocultivos y cultivos duales de C.

gloesporioides, F. oxysporum, T. harzianum y C. rosea, a 10°C de temperatura, en Agar Papa

dextrosa de medio de cultivo y 3 días de evaluación.




MONOCULTIVO CULTIVO DUAL

TRAT. T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7

REP. C. gloes F. oxys T. harzi C. rosea C. gloes F. oxys C. gloes T. harzi C. gloes C. rosea

1 1.2 1.3 1.0 1.0 0.8 0.9 0.6 0.8 0.9 0.9 0.9 1.0 0.5 0.4 0.9 0.8 0.7 0.8 0.6 1.0 1.0 1.0

2 1.2 1.5 1.2 1.2 0.9 1.0 1.0 0.9 1.0 1.0 1.0 1.0 0.9 1.2 1.0 0.9 0.9 0.8 1.1 0.8 1.2 1.2

3 1.3 1.8 1.7 1.4 0.9 1.1 0.7 1.2 1.1 1.1 1.0 1.0 0.7 2.2 1.1 1.0 1.1 0.9 0.6 1.0 1.4 1.4

PROM. 1.2 1.5 1.3 1.2 0.9 0.9 0.7 1.1 1.1 1.0




1 1.5 2.1 1.9 1.7 1.0 1.3 0.7 1.2 1.2 1.2 1.1 1.2 0.7 2.2 1.2 1.1 1.2 1.1 0.6 1.0 1.5 1.6

2 1.6 2.8 2.2 2.0 1.1 1.3 0.7 1.2 1.2 1.3 1.1 1.3 0.9 2.3 1.3 1.2 1.3 1.2 0.6 1.1 1.6 1.7

3 1.7 2.9 2.6 2.4 1.2 1.5 0.7 1.3 1.2 1.4 1.1 1.3 1.1 2.5 1.4 1.3 1.4 1.2 0.6 1.1 1.6 1.9

PROM. 1.6 2.6 2.2 2.0 1.2 1.3 0.7 1.5 1.4 1.4



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1 1.7 3.1 2.9 2.6 1.2 1.6 0.7 1.4 1.2 1.5 1.1 1.3 1.2 2.6 1.5 1.4 1.5 1.2 0.6 1.1 1.8 2.0

2 1.8 3.3 3.2 2.9 1.3 1.6 0.8 1.5 1.2 1.6 1.1 1.3 1.3 2.9 1.6 1.5 1.6 1.3 0.7 1.2 1.8 2.1

3 1.8 3.5 3.5 3.1 1.3 1.7 0.8 1.6 1.3 1.7 1.1 1.4 1.4 3.1 1.6 1.7 1.7 1.3 0.8 1.4 1.9 2.3

PROM. 1.8 3.3 3.2 2.9 1.3 1.4 0.9 1.9 1.5 1.8




1 1.8 3.9 3.7 3.4 1.4 1.7 0.9 1.7 1.4 1.8 1.2 1.4 1.5 3.3 1.7 1.9 1.7 1.3 0.8 1.5 2.1 2.5

2 1.9 4.1 3.9 3.6 1.4 1.7 1.0 1.9 1.5 1.9 1.2 1.4 1.6 3.7 1.8 2.1 1.8 1.4 0.9 1.6 2.2 2.7

3 1.9 4.3 4.1 3.9 1.5 1.8 1.1 2.0 1.6 2.0 1.2 1.4 1.7 4.0 1.8 2.3 1.0 1.5 1.0 1.9 2.5 2.9

PROM. 1.9 4.1 3.9 3.6 1.4 1.5 1.2 2.4 1.8 2.2



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1 1.1 1.3 1.2 1.1 1.0 1.0 0.9 1.0 0.8 0.9 0.9 1.1 0.7 1.5 1.0 0.8 0.7 1.3 0.6 1.4 0.9 0.7

2 1.4 2.1 1.6 1.8 1.2 1.2 1.0 1.3 1.0 1.0 1.0 1.3 0.7 1.5 1.2 0.9 0.9 1.9 0.6 1.5 1.1 0.8

3 1.8 2.7 1.8 2.4 1.5 1.3 1.3 1.7 1.1 0.9 1.1 1.6 0.8 1.5 1.4 1.1 0.9 2.3 0.6 1.5 1.2 1.0

PROM. 1.4 2.0 1.5 1.8 1.0 1.4 0.8 1.4 1.1 0.9




1 1.9 3.1 3.4 2.7 1.8 1.6 1.4 1.8 1.4 1.1 1.3 1.8 0.8 1.5 1.6 1.3 1.0 2.8 0.9 1.5 1.3 1.2

2 2.2 4.7 3.4 3.2 2.1 1.7 1.5 1.9 1.7 1.3 1.5 2.1 1.0 1.5 1.9 1.7 1.1 3.9 0.9 1.7 1.5 1.4

3 2.5 5.2 3.5 4.3 2.3 1.9 1.6 1.9 1.9 1.5 1.7 2.7 1.1 1.6 2.1 1.9 1.3 4.5 0.9 1.8 1.7 1.6

PROM. 2.2 4.3 3.4 3.4 1.6 2.6 1.1 1.7 1.7 1.4



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1 2.7 5.4 3.9 4.5 2.6 2.2 1.9 2.3 2.2 1.8 1.9 3.0 1.4 1.9 2.5 2.4 1.5 4.9 1.3 2.1 2.0 1.9

2 2.9 5.7 4.2 4.7 2.9 2.5 2.3 2.6 2.4 2.0 2.1 3.6 1.7 2.2 2.9 2.8 1.8 5.1 1.6 2.5 2.3 2.1

3 3.1 5.9 4.5 4.9 3.1 2.7 2.8 3.0 2.9 2.4 2.5 3.9 2.0 2.5 3.4 3.3 1.9 5.3 1.9 2.9 2.6 2.5

PROM. 2.9 5.7 4.2 4.7 2.3 3.7 1.9 2.4 2.6 2.4




1 3.6 6.3 4.8 5.2 3.5 2.9 3.3 3.4 3.1 2.7 2.8 4.3 2.2 2.7 3.7 3.6 2.3 5.7 2.1 3.1 2.9 2.8

2 4.1 6.5 5.1 5.5 3.9 3.2 3.6 3.7 3.2 3.0 3.0 4.7 2.2 2.9 3.9 3.8 2.6 6.0 2.3 3.3 3.0 3.1

3 4.9 6.9 5.4 5.9 4.2 3.9 4.1 4.0 3.4 3.3 3.5 5.3 2.7 3.1 4.3 4.1 3.0 6.3 2.5 3.5 3.2 3.7

PROM. 4.2 6.6 5.1 5.5 3.2 4.7 2.8 3.3 3.4 3.3



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

80










1 1.1 1.4 1.3 1.2 0.7 0.8 0.6 1.1 0.9 1.0 0.5 1.1 0.7 1.2 0.8 0.9 0.9 1.0 0.5 1.1 1.0 1.1

2 1.2 2.2 3.1 1.4 0.9 1.0 0.7 2.1 1.0 1.1 0.6 1.3 0.7 2.3 0.9 1.0 1.0 1.1 0.6 2.7 1.1 1.2

3 1.3 2.9 3.9 1.7 1.1 1.2 0.7 2.7 1.1 1.2 0.8 1.4 0.7 3.6 1.0 1.1 1.2 1.3 0.7 3.1 1.2 1.3

PROM. 1.2 2.2 2.8 1.4 0.9 1.1 0.7 2.2 1.0 1.1




1 1.5 3.6 4.4 2.0 1.2 1.4 0.7 4.6 1.2 1.3 0.9 1.6 0.7 3.8 1.1 1.2 1.3 1.5 0.5 3.6 1.3 1.4

2 1.8 4.1 5.3 2.3 1.3 1.6 0.7 5.6 1.3 1.4 1.1 1.8 0.7 4.0 1.2 1.3 1.4 1.7 0.6 3.8 1.4 1.5

3 2.3 5.0 5.9 2.5 1.4 1.7 0.7 5.9 1.4 1.5 1.2 1.9 0.7 4.4 1.3 1.4 1.5 1.8 0.6 3.9 1.5 1.6

PROM. 1.9 4.2 5.2 2.3 1.3 1.7 0.7 4.4 1.3 1.4



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

81










1 2.6 5.4 6.1 2.9 1.6 1.9 0.8 6.1 1.6 1.8 1.4 2.1 0.8 4.7 1.4 1.5 1.8 2.0 0.7 4.1 1.7 1.9

2 2.9 5.9 6.8 3.4 1.8 2.2 0.9 6.4 1.8 2.0 1.6 2.3 0.9 4.9 1.6 1.8 2.0 2.1 0.8 4.3 1.9 2.1

3 3.4 6.3 7.3 3.8 1.9 2.5 1.0 6.7 1.9 2.2 1.7 2.7 1.0 5.1 1.7 1.9 2.2 2.2 0.9 4.7 2.1 2.3

PROM. 3.0 5.9 6.7 3.4 1.8 2.2 0.9 5.2 1.7 1.9




1 3.7 6.9 7.5 4.3 2.1 2.7 1.2 7.1 2.1 2.5 1.9 3.1 1.2 5.6 1.9 2.1 2.7 2.8 1.0 5.1 2.6 2.9

2 4.2 7.3 9.3 4.6 2.5 3.1 1.3 7.8 2.7 2.9 2.3 3.8 1.3 6.3 2.0 2.4 3.1 2.8 1.1 5.4 3.2 3.3

3 4.8 7.8 9.5 5.0 2.7 3.6 1.5 8.2 3.4 3.5 2.5 4.9 1.5 7.0 2.3 2.6 4.0 4.3 1.2 5.7 3.9 4.0

PROM. 4.2 7.3 8.8 4.6 2.6 3.5 1.3 6.5 2.7 2.9



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

82


gloesporioides, F. oxysporum, T. harzianum y C. rosea, a 10°C de temperatura, en Agar

Sabouraud Dextrosa de medio de cultivo y 3 días de evaluación.







1 1.1 0.9 1.0 1.2 1.1 1.4 0.9 0.8 0.7 1.1 0.8 1.4 0.9 0.9 1.0 0.9 0.7 1.1 1.2 1.1 0.9 0.9

2 1.1 0.9 1.1 1.2 1.0 1.4 1.0 1.0 0.9 1.0 0.8 1.4 0.9 1.0 1.1 0.9 0.7 1.0 1.1 1.2 0.9 0.9

3 1.1 1.0 1.5 1.3 1.0 1.4 1.0 1.3 1.1 1.0 0.8 1.4 0.9 1.2 1.1 0.9 0.8 1.0 1.2 1.5 0.9 0.9

PROM. 1.1 0.9 1.2 1.2 0.9 1.3 1.0 1.1 1.0 0.9




1 1.1 1.0 1.7 1.3 1.1 1.4 1.0 1.5 1.1 1.0 0.9 1.4 0.9 1.4 1.1 0.9 0.9 1.0 1.2 1.6 0.9 0.9

2 1.2 1.3 1.9 1.3 1.3 1.6 1.1 1.6 1.2 1.0 1.1 1.4 1.2 1.5 1.2 0.9 1.1 1.3 1.3 1.7 0.9 1.0

3 1.3 1.5 2.0 1.3 1.4 1.8 1.3 1.8 1.2 1.1 1.2 1.5 1.5 1.7 1.3 0.9 1.3 1.6 1.4 1.9 0.9 1.0

PROM. 1.2 1.3 1.9 1.3 1.2 1.6 1.2 1.6 1.2 1.0



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

83










1 1.4 1.7 2.1 1.3 1.4 1.9 1.4 1.9 1.2 1.1 1.2 1.5 1.5 1.8 1.3 0.9 1.2 1.6 1.4 2.0 0.9 1.0

2 1.5 1.9 2.6 1.3 1.5 2.0 1.5 2.0 1.3 1.2 1.2 1.6 1.6 1.9 1.3 0.9 1.2 1.7 1.5 2.3 0.9 1.1

3 1.5 2.0 2.9 1.4 1.5 2.1 1.6 2.1 1.3 1.2 1.2 1.6 1.6 2.0 1.4 1.0 1.2 1.8 1.5 2.5 0.9 1.1

PROM. 1.5 1.9 2.5 1.3 1.3 1.8 1.5 2.1 1.2 1.1




1 1.6 2.3 3.1 1.4 1.5 2.2 1.6 2.2 1.4 1.3 1.3 1.7 1.7 2.1 1.4 1.0 1.3 1.9 1.6 2.7 1.0 1.1

2 1.7 2.4 3.3 1.4 1.5 2.3 1.6 2.3 1.1 1.3 1.3 1.8 1.7 2.2 1.4 1.0 1.3 1.9 1.7 2.8 1.0 1.1

3 1.7 2.6 3.5 1.5 1.5 2.4 1.6 2.4 1.6 1.4 1.3 1.8 1.7 2.3 1.5 1.1 1.3 2.0 1.7 2.9 1.0 1.1

PROM. 1.7 2.4 3.3 1.4 1.4 2.0 1.7 2.4 1.3 1.2



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

84










1 1.4 1.3 1.5 1.0 1.2 0.9 1.2 1.4 1.3 0.8 1.3 1.1 1.4 1.5 1.3 1.2 1.4 1.5 1.6 1.6 1.4 1.3

2 2.4 1.8 2.6 2.2 2.1 1.3 2.2 2.4 2.5 1.0 2.2 1.2 2.4 2.5 2.1 2.4 2.3 2.1 2.8 2.7 2.6 1.7

3 3.1 2.9 3.0 2.5 2.4 1.9 2.6 2.8 2.8 1.2 2.6 2.2 2.8 2.7 2.4 2.6 2.7 3.1 3.3 3.3 3.2 2.3

PROM. 2.3 2.0 2.4 1.9 2.0 1.7 2.3 2.3 2.2 1.6




1 4.2 3.5 3.2 2.9 3.3 2.4 2.8 3.0 3.1 2.3 3.5 3.3 3.1 3.1 2.9 2.7 4.1 4.2 3.9 3.6 3.4 3.3

2 5.3 4.3 3.8 3.3 3.7 2.9 3.2 3.6 3.5 2.5 4.3 3.4 3.7 3.8 3.2 2.9 4.4 4.5 4.5 4.0 3.9 3.6

3 6.1 5.2 4.6 4.1 4.2 3.1 3.9 4.2 3.9 2.8 5.1 3.5 4.2 4.3 4.1 3.2 5.5 4.8 5.3 4.9 4.6 4.0

PROM. 5.2 4.3 3.9 3.4 4.2 3.6 3.8 3.8 3.6 3.0



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

85










1 6.3 5.6 5.0 4.3 4.4 3.9 4.1 4.3 3.1 5.6 4.6 5.0 5.1 4.6 3.6 6.1 5.3 6.1 5.2 5.1 4.3

2 7.0 5.9 5.5 4.6 4.8 4.1 4.4 4.9 4.9 3.4 6.0 4.8 5.3 5.6 5.0 3.9 6.8 5.7 7.3 5.9 5.4 4.6

3 7.5 6.3 6.0 4.9 5.2 4.4 4.9 5.5 5.1 3.9 6.4 5.1 5.9 6.3 5.2 4.3 7.6 6.2 7.7 6.5 5.8 4.9

PROM. 6.9 5.9 5.5 4.6 5.9 4.9 5.6 5.5 5.0 4.0




1 7.9 6.8 6.4 5.2 5.8 4.9 5.2 6.0 5.4 4.3 6.9 5.7 6.3 6.7 5.7 4.8 8.0 6.5 7.9 6.9 6.4 5.1

2 8.4 7.2 7.0 5.4 6.4 5.3 6.1 6.5 5.9 4.7 7.3 6.1 7.0 7.3 6.5 5.1 8.5 7.0 8.2 7.5 7.1 5.4

3 9.0 8.3 7.8 5.7 6.9 5.6 7.0 7.3 6.3 5.0 7.8 6.3 8.2 8.2 5.9 5.3 9.1 7.9 9.1 8.0 7.8 5.8

PROM. 8.4 7.4 7.1 5.4 7.4 6.1 7.2 7.2 6.3 5.1



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

86










1 1.6 1.3 1.5 1.4 1.3 0.9 1.4 1.5 1.3 1.0 1.4 1.2 1.5 1.4 1.5 1.2 1.6 1.1 1.8 1.8 1.1 1.9

2 2.7 2.2 2.5 1.9 2.3 1.0 2.4 2.3 2.3 1.6 2.5 1.4 2.6 2.2 2.5 1.9 2.7 1.3 2.8 2.5 2.1 2.2

3 3.4 3.2 3.2 2.7 2.9 1.0 2.4 2.7 2.7 2.2 3.1 1.5 2.8 2.6 3.0 2.4 3.4 3.1 3.5 3.2 2.5 2.8

PROM. 2.6 2.2 2.4 2.0 2.4 1.4 2.4 2.2 2.1 1.9




1 4.2 4.5 3.9 3.3 3.9 3.1 2.9 3.2 3.0 2.4 3.4 3.3 3.2 3.0 3.2 2.8 3.6 3.3 4.1 3.9 2.9 3.1

2 5.5 4.8 4.7 3.9 4.3 3.1 3.4 3.6 3.3 2.5 3.8 3.3 3.9 3.5 3.9 2.9 4.0 3.4 4.8 4.4 3.1 3.7

3 6.1 5.1 5.6 4.4 5.1 3.1 3.8 4.0 4.1 2.8 4.3 3.5 4.3 3.9 4.7 2.9 4.7 3.6 5.5 4.6 3.8 4.1

PROM. 5.3 4.8 4.7 3.9 4.1 3.3 4.0 3.8 3.6 3



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IOLO

GICAS

87










1 6.5 5.4 5.5 4.9 5.5 3.3 4.1 4.3 4.6 3.1 4.6 3.8 4.8 4.1 4.9 3.3 5.0 4.1 6.1 5.0 4.1 4.5

2 6.7 5.9 5.9 5.4 5.9 3.7 4.5 4.9 4.7 3.4 4.8 4.2 5.2 4.5 5.1 3.7 5.4 4.7 6.5 5.3 4.5 4.8

3 6.9 6.1 6.3 5.8 6.3 4.0 4.9 5.4 4.8 3.7 5.1 4.6 5.7 4.9 5.3 4.0 6.0 5.1 6.9 5.6 4.9 5.1

PROM. 6.7 5.8 5.9 5.4 5.4 4.2 5.4 4.9 4.8 4.0




1 7.0 6.3 6.6 6.1 6.6 4.2 5.3 5.8 5.1 4.0 5.6 5.0 6.0 5.4 5.7 4.3 6.3 5.6 7.2 5.7 5.2 5.4

2 7.7 6.4 7.2 6.3 7.1 4.6 5.6 6.2 5.4 4.3 5.9 5.4 6.4 5.7 6.1 4.6 6.7 6.1 7.5 5.9 5.6 5.7

3 8.4 6.5 7.9 6.4 7.6 4.9 6.0 6.6 5.9 4.6 6.4 5.8 6.8 6.3 6.6 4.9 7.0 6.6 7.8 6.5 6.1 6.0

PROM. 7.7 6.4 7.2 6.3 6.6 5.4 6.5 6.0 5.7 4.9



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BIOLOGICAS CIENCIAS Colletotrichum gloesporioides Fusarium

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