antecedentes Cromatografía en columna
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8/4/2019 antecedentes Cromatografía en columna
http://slidepdf.com/reader/full/antecedentes-cromatografia-en-columna 1/2
a) Cromatografía en columna. Características y aplicaciones.
La cromatografía en columna es una técnica basada en la adsorción y solubilidad. Es una
técnica de partición solido-liquido, puesto que existe un equilibrio dinámico entre la
adsorción y desorción (elución).
Existen diferentes clases de interacciones intermoleculares que originan que los
compuestos orgánicos se una a la superficie del adsorbente con mayor fuerza
dependiendo de la naturaleza no polar de los compuestos la fase móvil y la fase
estacionaria, son las mismas que para el caso de cromatografía en capa fina, variando para
el caso del adsorbente,, el tamaño de la partícula.
La columna de cromatografía está constituida por un tubo de vidrio en posición vertical,
en el cual, por la parte baja se colectaran las diferentes fracciones. En el fondo del tubo se
introduce un pequeño trozo de algodón que cumple la función de un filtro que impide que
el gel de alice salga. Existen otros tipos de empacados, el empacado por vía seca, consiste
en introducir el adsorbente y posteriormente el eluyente seleccionado, la cantidad de
muestra requerida de fase estacionaria se determina de acuerdo a la cantidad de muestra.
Una regla común es usar de 30 a 100 el peso de la muestra a separar de adsorbente. Las
dimensiones de la columna se diseñan según las características de la muestra a separar,
siendo por lo general de una relación de 10:1 de largo de la columna respecto a el radio de
esta.
b) Cromatografía de adsorción y de partición o reparto.
Esta es una técnica para partición solido-liquido. La fase sólida, fase estacionaria,
corresponde al adsorbente que debe ser un material que no se disuelva en la fase liquida;
los más comunes utilizados son: celulosa, silicato de magnesio, sulfato de calcio, acido
silícico, gel de sílice, alúmina, oxido de magnesio, carbón activado; la fuerza de interacción
de enlace aumenta hacia los compuestos polares.
La acción del adsorbente se basa en la atracción intermolecular tal como atracción dipolo-
dipolo o de enlaces de hidrogeno. Diferentes tipos de adsorbente atraen diferentes tipos
de moléculas. Un adsorbente altamente polar, atrae moléculas fuertemente polares, pero
no presenta gran atracción por moléculas no polares, como hidrocarburos.
El eluyente corresponde a la fase móvil de la cromatografía, siendo por lo general
disolventes o mezclas de estos, dependiendo de la muestra a separar. Dentro de los más
utilizados podemos mencionar: éter de petróleo, ciclohexanos, tetracloruro de carbono,
benceno, cloroformo, cloruro de metileno, dietileter, acetato de etilo, acetona, etanol,
metanol, agua y ácido acético. La polaridad y poder de disolvente de estos aumenta hacia
los grupos polares.
c) Factores que influye en una separación por cromatografía en columna (en una
cromatografía de adsorción).
La versatilidad de la cromatografía depende de muchos factores que deben ser
considerados:
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8/4/2019 antecedentes Cromatografía en columna
http://slidepdf.com/reader/full/antecedentes-cromatografia-en-columna 2/2
Elección del adsorbente adecuado.
Polaridad del disolvente o disolventes seleccionados.
Velocidad de elución.
Formación de burbujas.
d) Selección de eluyentes y adsorbentes para la separación de compuestos por cromatografía
en columna.
Adsorbentes: existen muchos factores que rigen la elección del adsorbente para una
cromatografía. Deben ser insolubles en los disolventes que se utilicen para la separación y
no reaccionar con las sustancias que se vas a separar ni actuar como catalizador de su
descomposición, transposición o isomeracion. Debe poseer una composición uniforme
independiente de su procedencia y ha de ser incoloro si se emplea para compuestos
colorados cuyas zonas respectivas hayan de localizarse visualmente.
Disolventes: lo normal es emplear un disolvente relativamente no polar para llevar a la
columna la mezcla de compuestos que se quiere separar; luego, utilizar un disolvente alfo
más polar para revelar el cromatograma y finalmente un disolvente todavía más `polar
para eluir las sustancias adsorbidas.