AGREGOMETRIA PLAQUETARIA

AGREGOMETRIA PLAQUETARIA

FUNDAMENTO› La agregometria plaquetaria es una

técnica utilizada para estimar la cinética de la agregación de la plaquetas por medio de turbidometria (medición de la turbidez o densidad óptica).

› Es el patrón de referencia para el estudio de la función plaquetaria.

METODOS PARA REALIZACION DE AGREGOMETRIA PLAQUETARIA

METODO OPTICO CON PLASMA RICO EN PLAQUETAS.

METODO DE IMPEDANCIA CON SANGRE COMPLETA.

AGREGACION PLASMA RICO EN PLAQUETAS POR METODOS OPTICO

ESTA PRUEBA MIDE EN TIEMPO REAL LA AGREGACION DE LAS PLAQUETAS EN UNA MUESTRA DE PLASMA RICO EN PLAQUETAS MEDIANTE ACLARAMIENTO OPTICO. PARA SU REALIZACION SE REQUIERE UN AGREGOMETRO (ESPECTROFOTOMETRO).

PREPARACIONDE PLASMA RICO EN PLAQUETAS

SE REALIZA SEPANRANDO LOS ERITROCITOS Y LEUCOCITOS D E EL PLASMA Y LAS PLAQUETAS EN UNA MUESTRA DE SANGRE COMPLETA, MEDIANTE CENTRIFUGACION LENTA (1000 RPM) DURANTE 15 MINUTOS.

TAMBIEN SE REQUIERE LA PREPARACION DE UNA MUESTRA DE PLASMA POBRE EN PLAQUETAS, QUE SE OBTINE POR CENTRIFUGACION RAPIDA (3000 RPM).

ESTA MUESTRA DE DEPOSITA EN UNA CUBETA DE INCUBACIONA 37 GRADOS CENTRIGRADOS, QUE SE ENCUENTRA ENTRE UNA FUENTE DE LUZ Y UNA FOTOCELDA DE MEDICION QUE CALCULA LA DENSIDAD OPTICA O TURBIDEZ DEL PRP.

LA CALIBRACION DE LA TRANSMISION DE LA LUZ A TRAVES DE EL PLASMA POBRE EN PLAQUETAS O CLARO, SE AJUSTA AL 100%; LA TRANSMISION DE LUZ A TRAVES DE PLASMA RICO EN PLAQUETAS O9 TURBIO ENTONCES SE AJUSTA AL 0%.

DESPUES SE AGREGA UNA DE VARIAS SUSTANCIAS CONOCIDAS POR SU EFECTO AGONISTA SOBRE LAS PLAQUETAS, CON LÑA FINALIDAD DE INDUCIR AGREGACION DE LAS PLAQUETAS Y SIMULAR IN VITRO LO QUE SUCEDE IN VIVO.

SUSTANCIAS INCLUIDAS EN UN ESTUDIO DE RUTINA

EPINEFRINA ADP COLAGENA ACIDO ARAQUIDONICO TROMBINA RISTOCETINA (antibiótico que estimula

la agregación por aumento de la unión de FvW a GP Ib)

EN EL TRASCURSO DE ESTE PROCESO LA LUZ PASA A TRAVES D ELA CUBETA CON EL PRP Y SE CAPTURA POR EL DETECTOR O FOTOCELDA EN EL LADO OPUESTO. CONFORME LAS PLAQUETAS SE AGREGAN EN RESPUESTA AL AGONISTA, EL PRP SE ACLARA Y SE TRANSMITE MAYOR CANTIDAD DE LUZ. LA TRANSMISION DE LA LUZ SE MIDE EN TIEMPO REAL Y SE GRAFICA EL PORCENTAJE DEL ALCARAMIENTO DE LA MUESTRA.

INTERPRETACION

LA TRANSMISION DE LA LUZ ES DIRECTAMENTE PROPORCIONAL A LA AGREGACION PLAQUETARIA.

ES DECIR, A MAYOR AGREGACIONPLAQUETARIA, MAYOR TRANSMISION DE LA LUZ Y VICECERSA.

Esquema de la agregación plaquetaria en plasma rico en plaquetas

SU GRAFICACION GENERA UNA CURVA DE LA AGREGACION PLAQUETARIA EN PORCENTAJE Y TIEMPO. SE DEBE ESTUDIAR UN AGONISTA A LA VEZ.

LA CURVA TIPICA DE LA AGREGACION PLAQUETARIA TIENE CINCO FASES DISTINTAS CON DOS CURVAS.

1. INCREMENTO INICIAL DE LA TRANSMISION DE LA LUZ ATRIBUIBLE A DILUCION DEL PRP POR EL AGONISTA QUE AÑADE

2. DISCRETA DISMINUCION DE LA TRANSMISION CONFORME LAS PLAQUETAS CAMBIAN FORMA

3. INGREMENTO AGUDO INICIAL DE LA TRANSMISION CONFORME LAS PLAQUETAS SE AGREGAN(AGREGACION PRIMARIA)

4. MESETA BREVE O DISMINUCION DE LA AGREGACION5. AGREGACION SECUNDARIA QUE SE ESTIMULA POR LA

SECRECION DE LOS GRANULOS PLAQUETARIOS

EN LA MAYORIA DE LOS INDIVIDUOS ESTA RESPUESTA BIFASICA SE OBSERVA CON CONCENTRACIONES BAJAS DE ADP Y EPINEFRINA. LAS CURVAS QUE SE GENERAN CON OTROS AGONISTAS (COLAGENA, RISTOCETINA) SON TIPICAMNETE UNIMODALES CON UNA SOLA CURVA.

LIMITACIONES

CONSUME TIEMPO LABORIOSO Y COMPLEJO SE REQUIERE EQUIPO HUMANO BIEN

ADIESTRADO Y CON EXPERIENCIA EN LA TECNICA

INDICACIONES

MUESTRA DEBE OBTENERSE POR PUNCION VENOSA DIRECTA

COLECTAR EN TUBOS CON ANTICOAGULANTE CITRATO ( PARA TIEMPOS DE COAGULACION)

REALIZAR EN LAS TRES HORAS SIGUIENTES A LA RECOLECCIONDE LA MUESTRA

NO REALIZAR EN MUESTRAS HEMOLIZADAS LIPEMICAS O CONTAMINADAS POR ERITROCITOS.

AGREGOMETRIA EN SANGRE COMPLETA POR METODO DE IMPEDANCIA

EN ESTE METODO SE COLOCA LA MUESTRAS DE SANGRE EN UNA CUBETA O RECIPIENTE A 37 GRADOS CENTIGRADOS, SE COLOCAN DOS ELECTRODOS DE PLATINO A DISTANCIA FIJA Y ENTRE LOS ELECTRODOS SE APLICA UNA CORRIENTE ELECTRICA.

LA ADICION DE UN AGONISTA ESTIMULA LA AGREGACION DE LAS PLAQUETAS EN LA SUPERFICIE DE LOS ELECTRODOS LO QUE IMPIDE EL FLUJO DE LA CORRIENTE ELECTRICA.

EL AUMENTO EN LA RESISTENCIA AL FLUJO DE LECTRICIDAD ES PROPORCIONAL A LA AGREGACION .

ESTE METODO ELIMINA VARIAS DE LAS VARIBALES CONFUSAS EN LA PREPARACION DEL PRP, YA QUE NO SE REQUIERE, ADEMAS DE SER MAS SIMPLE Y FACIL DE REALIZAR.

EPINEFRINA RISTOCETINA COLAGENA

AC. ARAQUIDONICO EPINEFRINA SEROTONINA

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CONCLUSIONES

EN LA PRACTICA CLINICA LA UTILIDAD DE ESTOS ESTUDIOS ES MUY AMPLIA; SIN EMBARGO LOS RESULTAOS NO SON ESPECIFICOS DE ALGUN TRASNTORNO EN PARTICULAR.

ESTA PRUEBA NO SE DEBE UTILIZAR COMO ESTUDIO GENERAL, SOLO EN CASOS DE SITUACION DE SOSPEHCA DE UNA SITUACION ESPECIFICA.