02 Pseudomonas 2011
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Pseudomonas sp.Moraxella spp.
CÁTEDRA DE MICROBIOLOGÍA FACULTAD CIENCIAS VETERINARIAS
Falleció: 25/01/2009
•Pseudomonas aeruginosaPseudomonas aeruginosa
Orden Pseudomonadales
Familia Pseudomonadaceae
numerosas especies
ampliamente distribuidas en la naturaleza, suelo, agua y en todo lugar donde exista materia orgánica en descomposición
De las más de 100 especies que integran este género
Pseudomonas aeruginosa
es la única que en el hombre y los animales reviste una enorme importancia clínica, aunque raramente constituye el agente primario de la enfermedad.
Palleroni (1984) por estudios de hibridación del RNAr/DNA, clasifica al género en cinco grupos ej.
Grupo I (Pseudomonas fluorescentes) está P. aeruginosa.
Grupo II, integrado por P. mallei, P. speudomallei y P. cepacia, hoy constituyen el género Burkholderia.
P. aeruginosaP. aeruginosa
bacilo gramnegativo 0,5 a 1 m por 3 a 4 mmóvil por uno a tres flagelos polares. Posee pili y fimbrias. No forma esporas. Algunas cepas están rodeadas de una capa de mucus o polisacárido extracelular
denominado slime, con capacidad de formar biofilm.
BiofilmBiofilm
aerobio estrictoutiliza el oxígeno como aceptor final de electrones
puede crecer en un ambiente anaeróbico utilizando nitratos como aceptor terminal de electrones.
No tiene exigencias nutritivas
Crece en medios comunes
medios sólidos dos tipos de coloniasgrande, de 3 a 5 mm de diámetro, lisa con centro elevado y bordes ondulados (se parece a un huevo frito) y
pequeña (alrededor de 2 mm), rugosa y convexa.
A veces mucoso productoras de slime
No desarrolla a 4 ºC
Desarrolla de 10 y 42 ºC óptima 35 ºC 24-48 horas .
Crecimiento a 42 ºC ayuda para diferenciarla de otras especies que integran el género.
Los cultivos desprenden un aroma dulzón muy característico “como de uvas”, que ayuda a la identificación.
PigmentosPigmentos1) piocianina, 2) fluoresceína o pioverdina, 3) piorrubina 4) piomelanina,
siendo la única especie que produce piocianina pigmento azul-verdoso.
Este pigmento, no colorea las colonias, sino que se difunde en el medio, favoreciendo la detección y facilitando el diagnóstico de laboratorio.
La piocianina (del griego: pus azulado) casi el 90% de las cepas
responsable del característico pus azul de las heridas.
este pigmento posee actividad antibacteriana e inclusive fungicida.
La pioverdina o fluoresceína, emite fluorescencia a la luz ultravioleta.
Algunas cepas producen piorrubina, de color rojo y
piomelanina de color marrón-negro.
La producción de pigmentos depende de la presencia de hierro en el medio de cultivo.
P. aeruginosa elabora bacteriocinas o piocinas
sustancias de acción bacteriostática sobre otras cepas del mismo género.
En agar sangre produce beta-hemólisis.
No fermenta los carbohidratos.
Citrato de sodio +
Factores de agresión de Pseudomonas aeruginosa
Virulencia multifactorial.
componentes propios de la célula LPSpili,alginatos y productos extracelulares como enzimas y toxinas.
P. aeruginosa plásmidos R por conjugación resistencia a la mayoría de los antibióticos unida a la resistencia a metales pesados.
Factores de adherencia:Los pili facilitan la adhesión a las
células epiteliales, permitiendo la colonización. También coloniza tejidos profundos y expuestos, como ocurre en las quemaduras y heridas.
Las cepas productoras de slime, forman como una biopelícula, que impide la acción de los anticuerpos.
Endotoxina:
lípido A (componente de la endotoxina de la pared celular)
Exotoxina:
Exotoxina A responsable de la dermatonecrosis
en quemadurases inmunodepresora y tóxica para los
monocitos y médula ósea de los animales y humanos.
Exoenzimas S y T:
daño en las células epitelialesFacilita diseminación, invasión tisular y necrosis.
Enzimas proteolíticas: La mayoría de las cepas producen enzimas proteolíticas Degradan
elastinacaseínacolágenogelatinafibrina.
Proteasas extracelulares: elastasas, proteasa alcalina.
DIAGNÓSTICO DE LABORATORIOMuestras:
orina, pus, exudados, raspados de la superficie de los tejidos infectados.
Siembra en medios simples 24-48 horas a 35 ºC, en aerobiosis.
Medio sólidocolonias translúcidas, extendidas, con
bordes ondulados semejante a un huevo frito.
Producción de piocianina medio de cultivo azul verdoso que facilita la identificación.
Agar sangre b-hemólisis.
Los cultivos tienen un olor a uvas característico.
medio selectivo de elección:
agar cetrimida
resistencia a los compuestos de amonio cuaternario.
La identificación de otras especies del género requiere una amplia batería de pruebas fisiológicas.
En general, las cepas de Pseudomonas se pueden tipificar por:
serología, sensibilidad a bacteriófagos (fagotipificación), patrones de sensibilidad a antibióticos, producción de
piocinas. Las técnicas de epidemiología molecular (DNA o RNA
ribosómico) permiten clasificar las cepas con mayor sensibilidad y especificidad.
TRATAMIENTO Y CONTROLP. aeruginosa presenta una característica inherente a su fisiología, es la resistencia a varios antibióticos.
Durante el tratamiento, muchas cepas sensibles se vuelven resistentes, al adquirir enzimas inactivantes por medio de plásmidos de resistencia o al mutar las proteínas de los canales porínicos o, inducir alteraciones en el sitio diana
Pseudomonas aeruginosaPseudomonas aeruginosa
Coloración de Gram
Pseudomonas aeruginosaPseudomonas aeruginosa
MEB
Pseudomonas aeruginosaPseudomonas aeruginosa
Colonias en Agar
Pseudomonas aeruginosaPseudomonas aeruginosa
Agar sangre
Pseudomonas aeruginosaPseudomonas aeruginosa
Pseudomonas aeruginosaPseudomonas aeruginosa
Müeller Hinton
Pseudomonas aeruginosaPseudomonas aeruginosa
Agar nutritivo
Pseudomonas aeruginosaPseudomonas aeruginosa
Agar cetrimide
Pseudomonas aeruginosaPseudomonas aeruginosa
Producción de piocianina
Pseudomonas Pseudomonas aeruginosaaeruginosa
Reacción en Agar doble azúcar-hierro o
KliglerNO MODIFICA
Pseudomonas aeruginosaPseudomonas aeruginosa
Producción de oxidasa +
+ -
•Moraxella spp.Moraxella spp.
Género propuesto por Lwoff en 1939
Ubicado en familia Neisseriaceae en 1968
En 1991 se propuso la creación de una nueva
Familia: Moraxellaceaegéneros
MoraxellaAcinetobacterPsychrobacter
Los bacilos son muy cortos y gruesos, “regordetes”
en pares o cadenas cortas
en los cultivos variaciones de tamaño celular, de la forma y aún producción de elementos filamentosos o de cadenas.
Son gramnegativos
No poseen flagelos
En general son aerobios
Poseen oxidasa, generalmente también catalasa y son muy sensibles a penicilina.
Moraxella bovis
queratoconjuntivitis de bovinos.
bacterias aerobias
inactivas frente a hidratos de carbono
con exigencias nutritivas
medios enriquecidos para su desarrollo (sangre, suero).
QueratoconjuntivitisQueratoconjuntivitis
Moraxella bovis produce toxinas:HemolisinasCitolisinas.
Estas toxinas tienen la propiedad de degradarse muy fácilmente, es decir, no duran mucho tiempo fuera de la Moraxella, pero sí lo suficiente como para producir daño corneal.
PILIPILI
Hay distintos tipos de pili, de muy variada composición proteicacada tipo piliar produce anticuerpos que protegen exclusivamente contra ese tipo piliar
DIAGNÓSTICO
queratoconjuntivitis infecciosa cuadro clínico
aislamiento del microorganismo
Opacidad de la córneaOpacidad de la córnea
Toma de la muestra con hisopo estérilfase inicial de la enfermedad
Siembra debe hacerse en medios enriquecidos (agar sangre, agar chocolate)
incubación a 36-37 ºC durante 24‑48 horas.
Desarrollo de colonias pequeñasredondeadasgrisáceas
hemolíticas (halo de hemólisis muy reducido)
Por microscopía se ven cocoides o bacilos cortos gramnegativos.
En cultivos viejos muestra marcado pleomorfismo.
Identificación oxidasa positiva
hidrólisis de gelatina
licuación de medios con sueroNO reducen nitratos a nitritosinactivo frente a hidratos de carbono.
Completar con inmunodiagnóstico
TRATAMIENTOprofiláctico, por vacunas específicas
M. bovis es muy sensible a la mayoría de los antibióticos (penicilina).
La tetraciclina de acción retardada suele ser la droga de elección, tópica o sistémica.