Tinción de Gram

Antecedentes

Descrita y desarrollada por Christian Gram en 1884.

• Esta tinción es la más importante en microbiología, pues permite diferenciar a las bacterias en base a su : Afinidad tintorial: GRAM POSITIVAS y GRAM NEGATIVAS .Morfología: COCÁCEAS, BACILOS, COCOBACILOS, VIBRIOS, ESPIRILOS, ESPIROQUETAS visualizar su Agrupación: CADENAS, TETRADAS, RACIMOS.

Fundamento

El cristal violeta es un colorante que penetra la pared celular de bacterias Gram positivas y negativa.

Posteriormente se agrega el lugol que es mordiente y se forma un complejo con el cristal violeta.

Durante el proceso de decoloración con alcohol-acetona, la gruesa pared de los Gram positivos impide la salida del colorante manteniendo la coloración violeta.

Fundamento

En cambio, por el alto contenido lipídico de la pared de los Gram negativos, el alcohol-acetona genera poros , por los cuales, escapa el cristal violeta, la bacteria se decolora y tiñe de color rojo con el colorante de contraste.

Paso N° 1

Preparar el frotis bacteriano:

Paso N°2

Teñir con cristal violeta 1 minuto

Paso N°3

Lavar con abundante agua el exceso de colorante

Paso N°4

Cubrir con lugol 1 min

Paso N°5

Lavar con agua el exceso de Lugol

Paso N°6

Decolorar con alcohol-acetona aproximadamente 30 seg

Paso N°7 y N°8

Lavar con abundante agua para eliminar el resto de decolorante.

Teñir con Safranina 1 min.

Paso N°9 y 10

Lavar con abundante agua para eliminar el colorante de contraste.

Secar la preparación.

Paso N° 11

Observar al microscopio, con objetivo de inmersión (100X)

Resumen de los pasos de la Tinción de Gram

Factores que considerar en la tinción de Gram

• –No se debe sobrepasar los tiempos de tinción y decoloración.–Los cultivos viejos hacen que las bacterias Gram positivas se tiñan parcial o totalmente de color rosa.–Hay que tomar en cuenta que el agua usada en el frotis se encuentre en el rango de Ph 7-7.8 ya que:*Los Gram positivos pueden hacerse gramnegativos al aumentar la acidez.*Los gramnegativos pueden hacerse Gram positivos al aumentar la alcalinidad.