Proceso tinción de gram
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Tinción de Gram • Desarrollada por el bacteriólogo Christian Gram en 1884 • Permite la rápida evaluación de morfología y complejidad bacteriana • Tinción rápida y Económica • Puede variar según el protocolo usado (necesidad de estandarizar el protocolo)
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Tinción de Gram
•Desarrollada por el bacteriólogo Christian Gram en 1884•Permite la rápida evaluación de morfología y complejidad bacteriana•Tinción rápida y Económica•Puede variar según el protocolo usado (necesidad de estandarizar el protocolo)
Portaobjetos Agua destilada Pipetas Pasteur, haza, Mechero. Cristal Violeta Lugol Alcohol acetona Safranina (u otra tinción de contraste)
Reactivos Necesarios
Colocar una pequeña gota de Agua destilada en el portaobjetos (con pipeta por ejemplo)
Re-suspender muestra en el portaobjetos. Secar al mechero.
Procedimiento: Fijación
La gota de agua debe ser pequeña
Se debe calentar por 5 min aprox, hasta que toda el agua se seque.
Se debe colocar Cristal Violeta cubriendo toda la muestra por 1min (variable según lab.)
Se lava con agua corriente
Procedimiento: Tinción
Puede hacerse con gotario o pizeta
Luego debe agregarse el lugol. Este debe aplicarse como el cristal violeta y también debe cubrir la muestra por 1 min. Luego se lava con agua corriente.
Procedimiento: Tinción
El cubrir la muestra con alcohol acetona para decolorarla es el paso más critico del procedimiento. Este debe cubrir la muestra por el tiempo que puede ir de 15s a 30s según corresponda y la reacción debe ser detenida con el lavado con agua corriente. El tiempo debe ser el mismo para todas las muestras.
Procedimiento: Tinción
Al ser tiempos por lo general muy cortos, se recomienda agregar el alcohol mientras ya se tiene la llave del agua corriendo, listo para el lavado.
El último paso consiste en agregar una tinción de contraste, para teñir las bacterias que pierden el cristal violeta. Para esto se agrega safranina cubriendo la muestra por 15s o por 1min, dependiendo. Luego se lava con agua corriente y se deja secar.
Procedimiento: Tinción
Bacterias Gram positivas:◦ Corresponden a las bacterias que mantienen la
coloración del cristal violeta después del alcohol acetona, lo que les da un color violeta/morado.
Resultados: Microscopía
Streptococcus pneumoniaeBacteria Gram positiva, desde cultivo bacteriano en agar sangre.
Bacterias Gram negativas:◦ Corresponden a las bacterias que pierden la
coloración del cristal violeta después del alcohol acetona y se tiñen con el colorante de contraste (safranina), lo que les da un color rosáceo/rojizo.
Resultados: Microscopía
Escherichia coli Bacteria Gram Negativa, cultivo desde agar Macconkey
Es conveniente estandarizar los tiempos de tinción para cada laboratorio, ya que la calidad y concentraciones de reactivos pueden variar bastante.
Lo más recomendable es realizar el gram de los cultivos de agares enriquecidos y de colonias aisladas y en crecimiento.
Los gram directos de una muestra solo son útiles en ciertos casos.
Las bacterias anaerobias son más difíciles de teñir, esto puede mejorar si se agrega bicarbonato mezclado a las tinciones.
La muestra no debe ser excesiva para poder determinar las otras características de la bacteria, como forma y agrupación.
Recomendaciones Finales
Imágenes originales Se presentan las imágenes sin
modificaciones usadas en la presentación
Reencuadre
Brillo -27Contraste -50Reencuadre
Brillo +38Contraste +22
Brillo +29Contraste +26
Brillo +80
Saturación -31Luminosidad +6
