Post on 11-Feb-2017
Pruebas de sensibilidad a los fármacos
antituberculosos. ¿Es necesaria su actualización?
M. Soledad Jiménez
Lab. de Micobacterias
Centro Nacional de Microbiología
Concepto de Antibiograma
�Ligado a la resistencia bacteriana
�Diferenciar cepas sensibles de resistentes
�Instaurar una terapia eficaz
Características del método ideal para el estudio de sensibilidad
�Rápido�Sencillo�Sin riesgo biológico�Reproducible en diferentes laboratorios�100% Sensible�100% Específico
Problemas técnicos
�Crecimiento excesivamente lento
�Anarquía de las colonias
�Alteración de la actividad antimicrobiana
TASAS DE MUTACIÓN.
1/106 x 1/108 x 1/103 = 1/1017H + R + Z
1/106 x 1/108 = 1/1014H + R
1/103Pirazinamida (Z)
1/108 Etambutol 1/107Rifampicina (R)
1/106 Estreptomicina 1/106 Isoniacida (H)
Métodos validados por la OMS (1963)
�Método de las concentraciones críticas
�Método de la relación de resistencias
�Método de las proporciones múltiples
Método de las concentraciones absolutas (Meissner)
�Preparación del inóculo � 1 mg/ml 1/50 3mm∅ 2.000-10.000
�Determinación de la concentración crítica
Crecimiento superior a 20 colonias en CC
CEPA RESISTENTE
Método de la relación de resistencias (Mitchison)
�Preparación del inóculo� 1 mg/ml 3mm ∅
�CMI (cepas problema y patrón)� Menor concentración en la que crecen
menos de 20 colonias
CMI cepa problemaCMI cepa H37RV
= 2
CEPA RESISTENTE
Método de las proporciones múltiples (Canetti)
SSSR
0 0 0 00 021 2 40/48-5
0 00 04 0∞∞∞∞ ∞∞∞∞∞∞∞∞-3
RMP
20 40
EMB
1,5 2
SM
4 8
INH
0,2 1Cont.
Propor/Concent. Críticas
INH 1% 0,2mcg/ml
SM 1% 2 mcg/ml
EMB 1% 5 mcg/ml
RMP 1% 1 mcg/ml
Lectura del antibiograma
44
21Nº de colonias ccMedia del control
X 100 > 1% X 100 = 47,7%
CEPA RESISTENTE
Inconvenientes de los métodos convencionales
� Necesitan el crecimiento de la bacteria
TIEMPO
� Imposibilidad del estudio de sensibilidad a Pirazinamida
OTRO MÉTODO
Sistemas de lectura automática
�Método de las proporciones
Control 1/100 crecimiento igual 1%
�Medios líquidos RAPIDEZ
�Antibiograma frente a Pirazinamida
Inconvenientes de estos sistemas
�No existe una correlación del 100% con el Método de Referencia
�El sistema radiométrico con una concordancia muy próxima al 100%
Métodos moleculares
� Conocimiento de las bases moleculares � Rapidez� Evitan el manejo de bacteria viva� 100% específicos
Inconvenientes de los métodos moleculares
� Falta de sensibilidad
Datos de sensibilidad
61,5%
63,4%
95,0%
50,0%
78,5%
embBEtambutol
10,5%rrs
39,5%rpsLEstreptomicina
pncAPirazinamida
rpoβRifampicina
24,8%mabA-inhA
53,7%katGIsoniazida
SensibilidadGenFármaco
Datos del Laboratorio de Micobacterias del Centro Nacional de Microbiología.
Recomendaciones para la realización del antibiograma
�� Estudio de sensibilidad de 10 Estudio de sensibilidad de 10 cepas/semanacepas/semana
Am. Rev. Respir. Dis. 128:213. 1983
� Control de calidadRecomendaciones de la OMS
Características del método ideal para el estudio de sensibilidad
�Rápido�Sencillo�Sin riesgo biológico�Reproducible en diferentes laboratorios�100% Sensible�100% Específica
¿Que se propone?
� Nuevo sistema
� Utilizar adecuadamente las técnicas disponibles
Esquema para el estudio de sensibilidad
Estudio fenotípico con sistemas automáticos
SENSIBLE RESISTENTE
Estudio moleculares
SIN MUTACIÓN CON MUTACIÓN
Estudio Fenotípico Método de Referencia
SENSIBLE RESISTENTE