Pruebas de sensibilidad a los fármacos

antituberculosos. ¿Es necesaria su actualización?

M. Soledad Jiménez

Lab. de Micobacterias

Centro Nacional de Microbiología

Concepto de Antibiograma

�Ligado a la resistencia bacteriana

�Diferenciar cepas sensibles de resistentes

�Instaurar una terapia eficaz

Características del método ideal para el estudio de sensibilidad

�Rápido�Sencillo�Sin riesgo biológico�Reproducible en diferentes laboratorios�100% Sensible�100% Específico

Problemas técnicos

�Crecimiento excesivamente lento

�Anarquía de las colonias

�Alteración de la actividad antimicrobiana

TASAS DE MUTACIÓN.

1/106 x 1/108 x 1/103 = 1/1017H + R + Z

1/106 x 1/108 = 1/1014H + R

1/103Pirazinamida (Z)

1/108 Etambutol 1/107Rifampicina (R)

1/106 Estreptomicina 1/106 Isoniacida (H)

Métodos validados por la OMS (1963)

�Método de las concentraciones críticas

�Método de la relación de resistencias

�Método de las proporciones múltiples

Método de las concentraciones absolutas (Meissner)

�Preparación del inóculo � 1 mg/ml 1/50 3mm∅ 2.000-10.000

�Determinación de la concentración crítica

Crecimiento superior a 20 colonias en CC

CEPA RESISTENTE

Método de la relación de resistencias (Mitchison)

�Preparación del inóculo� 1 mg/ml 3mm ∅

�CMI (cepas problema y patrón)� Menor concentración en la que crecen

menos de 20 colonias

CMI cepa problemaCMI cepa H37RV

= 2

CEPA RESISTENTE

Método de las proporciones múltiples (Canetti)

SSSR

0 0 0 00 021 2 40/48-5

0 00 04 0∞∞∞∞ ∞∞∞∞∞∞∞∞-3

RMP

20 40

EMB

1,5 2

SM

4 8

INH

0,2 1Cont.

Propor/Concent. Críticas

INH 1% 0,2mcg/ml

SM 1% 2 mcg/ml

EMB 1% 5 mcg/ml

RMP 1% 1 mcg/ml

Lectura del antibiograma

44

21Nº de colonias ccMedia del control

X 100 > 1% X 100 = 47,7%

CEPA RESISTENTE

Inconvenientes de los métodos convencionales

� Necesitan el crecimiento de la bacteria

TIEMPO

� Imposibilidad del estudio de sensibilidad a Pirazinamida

OTRO MÉTODO

Sistemas de lectura automática

�Método de las proporciones

Control 1/100 crecimiento igual 1%

�Medios líquidos RAPIDEZ

�Antibiograma frente a Pirazinamida

Inconvenientes de estos sistemas

�No existe una correlación del 100% con el Método de Referencia

�El sistema radiométrico con una concordancia muy próxima al 100%

Métodos moleculares

� Conocimiento de las bases moleculares � Rapidez� Evitan el manejo de bacteria viva� 100% específicos

Inconvenientes de los métodos moleculares

� Falta de sensibilidad

Datos de sensibilidad

61,5%

63,4%

95,0%

50,0%

78,5%

embBEtambutol

10,5%rrs

39,5%rpsLEstreptomicina

pncAPirazinamida

rpoβRifampicina

24,8%mabA-inhA

53,7%katGIsoniazida

SensibilidadGenFármaco

Datos del Laboratorio de Micobacterias del Centro Nacional de Microbiología.

Recomendaciones para la realización del antibiograma

�� Estudio de sensibilidad de 10 Estudio de sensibilidad de 10 cepas/semanacepas/semana

Am. Rev. Respir. Dis. 128:213. 1983

� Control de calidadRecomendaciones de la OMS

Características del método ideal para el estudio de sensibilidad

�Rápido�Sencillo�Sin riesgo biológico�Reproducible en diferentes laboratorios�100% Sensible�100% Específica

¿Que se propone?

� Nuevo sistema

� Utilizar adecuadamente las técnicas disponibles

Esquema para el estudio de sensibilidad

Estudio fenotípico con sistemas automáticos

SENSIBLE RESISTENTE

Estudio moleculares

SIN MUTACIÓN CON MUTACIÓN

Estudio Fenotípico Método de Referencia

SENSIBLE RESISTENTE