Diagnóstico BacteriológicoCrecimiento y cultivo

Técnicas de visualización

Diagnóstico bacteriológico

Identificación de los microorganismos en los cultivos o en los frotis de la muestra y complementando en forma indirecta con la respuesta inmune.

El diagnóstico bacteriológico más contundente es la identificación del agente infeccioso en las muestras obtenidas del tejido inflamado.

• Para poder aislar en cultivos puros e identificar al microorganismo deberemos considerar la sospecha clínica y la incidencia de los agentes más comúnmente encontrados en cada aparato o tejido.

POSTULADOS DE KOCH

1- Los organismos responsables de una enfermedad, deben encontrarse y ser observados en los casos de la enfermedad diagnosticada como tal en base a signos y síntomas.

2- Esos organismos deben ser aislados de esas victimas en CULTIVO PURO.

3- El microorganismo del CULTIVO PURO, debe inocularse en animales y reproducir en ellos la enfermedad

4- De estos animales deben recuperarse los microorganismos y aislarlos nuevamente en CULTIVO PURO.

Excepciones y actualizaciones

Las bacterias se reproducen por planos de división binaria, es decir la bacteria va creciendo hasta dividirse y formar dos organismos iguales.

FASE LAG o de adaptación:

La bacteria se tiene que adaptar al nuevo medio al que se ha integrado. No hay un crecimiento importante

FASE DE crecimiento exponencial

La bacteria acostumbrada al medio y con condiciones óptimas, inicia su multiplicación, esto se refleja en un alto crecimiento

FASE ESTACIONARIA

El sustrato se agota y los desechos se acumulan, muere el mismo número de bacterias que nace, por esto el crecimiento se mantiene estático.

Fase de declinación o muerte

El sustrato falta, no nacen nuevas bacterias solo mueren, esto se refleja en la disminución del crecimiento.

CULTIVO PURO

Crecimiento a partir de UNA CELULA bacteriana.

La evidencia del Cultivo Puro es la COLONIA AISLADA

COLONIA BACTERIANA

Acumulo de bacterias generadas a partir de una bacteria.

UNA BACTERIA INDIVIDUO

MUCHAS BACTERIAS COLONIA BACTERIANA

MEDIOS DE CULTIVO DE MICROBIOLOGIA

MEDIO DE CULTIVO: Compuesto de nutrientes para la multiplicación de los

microorganismos en el laboratorio.

CLASIFICACION

POR SU CONSISTENCIA:• Caldos: Medios de cultivo líquidos que se

utilizan para almacenar bacterias.

- Obtener cultivos puros posteriormente.

- Se contaminan mas rápido

• Agar:Medios de cultivo sólidos.

Contienen agar: polisacáridos, originalmente derivados de algas marinas.

Se obtienen colonias aisladas

POR SU FUNCION:

• Básicos o Base:

Son útiles para preparar otros medios.

Ejemplos: Agar Simple, Tripticasa Soya,

Agar-Agar.

• Enriquecidos:

Son aquellos a los que se les agregan sustancias que ayudan a la multiplicación de las bacterias.

Ejemplo: Glicerol, Sangre, Vitaminas,

Huevo de aves.

Agar SangreAgar Sangre Agar ChocolateAgar Chocolate

• Selectivo: Impiden el crecimiento de bacterias que no están incluidas en el estudio.Se les agregan sustancias inhibidoras.Ej.: Salmonella-Shigella,

Lowenstein Jensen, Thayer Martin.

DIAGNÓSTICOIMPORTANCIA DE LA TOMA DE LA MUESTRA

Técnicas de visualización

Técnicas de cultivoTécnicas biología molecular

Lowenstein Jensen

• Diferenciales:

Permiten la multiplicación de las bacterias bajo estudio, además ayudan a clasificarlas por características bioquímicas, en base a indicadores incorporados previamente al medio de cultivo.

Ejemplo: Agar Mac Conkey

Contiene:

*Lactosa = azúcar diferencial

*Sales biliares = inhibidor

*Rojo neutro = indicador

Agar Mac Conkey

CULTIVO DE VIRUS:

Por su condición de intracelulares obligados, necesitan técnicas de cultivo especiales.

Se necesitan células vivas para lograr la replicación del virus.

TECNICAS DE VISUALIZACION DE

MICROORGANISMOS

MICROSCOPIO

El microscopio, de micro- (pequeño) y scopio (observar), es un instrumento que permite observar objetos que son demasiado pequeños para ser vistos a simple vista.

Generalmente se usa luz visible, la cual se encausa de manera que choque con un objeto y con ayuda de lentes compuestos magnificar la imagen de manera que pueda verse directamente.

Los microorganismos son transparentes por lo que es necesario

utilizar Técnicas de Tinción

sobre todo con las bacterias.

CARACTERISTICAS

• La membrana celular es permeable

• Los constituyentes químicos de la bacteria deben de reaccionar con los colorantes

• Los colorantes deben penetrar la membrana celular

• La pared celular debe estar intacta

CLASIFICACION DE LAS COLORACIONES

• SIMPLE: Utiliza solo un colorante.

-Ejemplo: Azul de Metileno, Verde de Malaquita, Fucsina, etc.

• NEGATIVA: Para bacterias que no toma los colorantes comunes.

Se utiliza Nigrosina o Tinta China.

• DIFERENCIALES: Ayudan a diferenciar características de la membrana celular.

DIFERENCIALES

I- COLORACION DE GRAM:

Diferencia a las bacterias en Gram positivas y Gram negativas.

Se basa en la naturaleza proteica de la pared celular específicamente:

Peptidoglicano, Ácidos Teicoicos y Ribonucleato de Magnesio.

Esos compuestos se encuentran mas concentrados en las bacterias Gram (+)

En las Gram (-) se encuentran poco o están ausentes.

COMPONENTES

• Colorante base = Cristal violeta

• Mordiente = Lugol

• Decolorante = Alcohol Acetona

• Colorante de contraste = Safranina

GramGram(+)(+) Gram(-)Gram(-)

Se basa en la concentración de lípidos de membrana celular.

Bacterias Ácido-Resistentes

II- COLORACION DE ZIEHL – NEELSEN:

COMPONENTES

• Colorante base Fucsina Básica

• Mordiente Calor• Decolorante Alcohol Acido

• Colorante de contraste Azul de Metileno

• Para organelas de las bacterias: flagelos, cápsulas, esporas, núcleo, etc.

ESPECIALES: