6. tecnicas de cultivo y visualizacion

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Diagnóstico Bacteriológico Crecimiento y cultivo Técnicas de visualización

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Diagnóstico BacteriológicoCrecimiento y cultivo

Técnicas de visualización

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Diagnóstico bacteriológico

Identificación de los microorganismos en los cultivos o en los frotis de la muestra y complementando en forma indirecta con la respuesta inmune.

El diagnóstico bacteriológico más contundente es la identificación del agente infeccioso en las muestras obtenidas del tejido inflamado.

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• Para poder aislar en cultivos puros e identificar al microorganismo deberemos considerar la sospecha clínica y la incidencia de los agentes más comúnmente encontrados en cada aparato o tejido.

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POSTULADOS DE KOCH

1- Los organismos responsables de una enfermedad, deben encontrarse y ser observados en los casos de la enfermedad diagnosticada como tal en base a signos y síntomas.

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2- Esos organismos deben ser aislados de esas victimas en CULTIVO PURO.

3- El microorganismo del CULTIVO PURO, debe inocularse en animales y reproducir en ellos la enfermedad

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4- De estos animales deben recuperarse los microorganismos y aislarlos nuevamente en CULTIVO PURO.

Excepciones y actualizaciones

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Las bacterias se reproducen por planos de división binaria, es decir la bacteria va creciendo hasta dividirse y formar dos organismos iguales.

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FASE LAG o de adaptación:

La bacteria se tiene que adaptar al nuevo medio al que se ha integrado. No hay un crecimiento importante

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FASE DE crecimiento exponencial

La bacteria acostumbrada al medio y con condiciones óptimas, inicia su multiplicación, esto se refleja en un alto crecimiento

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FASE ESTACIONARIA

El sustrato se agota y los desechos se acumulan, muere el mismo número de bacterias que nace, por esto el crecimiento se mantiene estático.

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Fase de declinación o muerte

El sustrato falta, no nacen nuevas bacterias solo mueren, esto se refleja en la disminución del crecimiento.

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CULTIVO PURO

Crecimiento a partir de UNA CELULA bacteriana.

La evidencia del Cultivo Puro es la COLONIA AISLADA

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COLONIA BACTERIANA

Acumulo de bacterias generadas a partir de una bacteria.

UNA BACTERIA INDIVIDUO

MUCHAS BACTERIAS COLONIA BACTERIANA

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MEDIOS DE CULTIVO DE MICROBIOLOGIA

MEDIO DE CULTIVO: Compuesto de nutrientes para la multiplicación de los

microorganismos en el laboratorio.

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CLASIFICACION

POR SU CONSISTENCIA:• Caldos: Medios de cultivo líquidos que se

utilizan para almacenar bacterias.

- Obtener cultivos puros posteriormente.

- Se contaminan mas rápido

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• Agar:Medios de cultivo sólidos.

Contienen agar: polisacáridos, originalmente derivados de algas marinas.

Se obtienen colonias aisladas

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POR SU FUNCION:

• Básicos o Base:

Son útiles para preparar otros medios.

Ejemplos: Agar Simple, Tripticasa Soya,

Agar-Agar.

• Enriquecidos:

Son aquellos a los que se les agregan sustancias que ayudan a la multiplicación de las bacterias.

Ejemplo: Glicerol, Sangre, Vitaminas,

Huevo de aves.

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Agar SangreAgar Sangre Agar ChocolateAgar Chocolate

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• Selectivo: Impiden el crecimiento de bacterias que no están incluidas en el estudio.Se les agregan sustancias inhibidoras.Ej.: Salmonella-Shigella,

Lowenstein Jensen, Thayer Martin.

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DIAGNÓSTICOIMPORTANCIA DE LA TOMA DE LA MUESTRA

Técnicas de visualización

Técnicas de cultivoTécnicas biología molecular

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Lowenstein Jensen

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• Diferenciales:

Permiten la multiplicación de las bacterias bajo estudio, además ayudan a clasificarlas por características bioquímicas, en base a indicadores incorporados previamente al medio de cultivo.

Ejemplo: Agar Mac Conkey

Contiene:

*Lactosa = azúcar diferencial

*Sales biliares = inhibidor

*Rojo neutro = indicador

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Agar Mac Conkey

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CULTIVO DE VIRUS:

Por su condición de intracelulares obligados, necesitan técnicas de cultivo especiales.

Se necesitan células vivas para lograr la replicación del virus.

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TECNICAS DE VISUALIZACION DE

MICROORGANISMOS

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MICROSCOPIO

El microscopio, de micro- (pequeño) y scopio (observar), es un instrumento que permite observar objetos que son demasiado pequeños para ser vistos a simple vista.

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Generalmente se usa luz visible, la cual se encausa de manera que choque con un objeto y con ayuda de lentes compuestos magnificar la imagen de manera que pueda verse directamente.

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Los microorganismos son transparentes por lo que es necesario

utilizar Técnicas de Tinción

sobre todo con las bacterias.

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CARACTERISTICAS

• La membrana celular es permeable

• Los constituyentes químicos de la bacteria deben de reaccionar con los colorantes

• Los colorantes deben penetrar la membrana celular

• La pared celular debe estar intacta

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CLASIFICACION DE LAS COLORACIONES

• SIMPLE: Utiliza solo un colorante.

-Ejemplo: Azul de Metileno, Verde de Malaquita, Fucsina, etc.

• NEGATIVA: Para bacterias que no toma los colorantes comunes.

Se utiliza Nigrosina o Tinta China.

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• DIFERENCIALES: Ayudan a diferenciar características de la membrana celular.

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DIFERENCIALES

I- COLORACION DE GRAM:

Diferencia a las bacterias en Gram positivas y Gram negativas.

Se basa en la naturaleza proteica de la pared celular específicamente:

Peptidoglicano, Ácidos Teicoicos y Ribonucleato de Magnesio.

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Esos compuestos se encuentran mas concentrados en las bacterias Gram (+)

En las Gram (-) se encuentran poco o están ausentes.

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COMPONENTES

• Colorante base = Cristal violeta

• Mordiente = Lugol

• Decolorante = Alcohol Acetona

• Colorante de contraste = Safranina

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GramGram(+)(+) Gram(-)Gram(-)

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Se basa en la concentración de lípidos de membrana celular.

Bacterias Ácido-Resistentes

II- COLORACION DE ZIEHL – NEELSEN:

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COMPONENTES

• Colorante base Fucsina Básica

• Mordiente Calor• Decolorante Alcohol Acido

• Colorante de contraste Azul de Metileno

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• Para organelas de las bacterias: flagelos, cápsulas, esporas, núcleo, etc.

ESPECIALES:

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