UROCULTIVO

Urocultivo

Es el análisis que se le realiza a la orina para detectar con exactitud y precisión cual es el agente microbiano que esta

causando una infección en un organismo

La orina

Es un liquido biológico considerado estéril debido a su vaciado constante y su pH ácido que inhibe el desarrollo de

algunos microorganismos

INDICACIONES PARA TOMA DE MUESTRA

La orina es tomada por el paciente en su domicilio con previo aseo general, haciendo énfasis en los órganos genitales externos.

La orina se recolecta en un frasco estéril. No requiere ayuno No beber agua en exceso antes de la recolección de

la muestra (al menos 4 horas antes). No estar bajo tratamiento con antibióticos o tener

menos de 72 hrs. antes de recolección de muestra. No colocarse medicamentos tópicos (pomada

ungüentos o talco), en la región genital, 72 hrs antes de la recolección de muestra.

Muestras etiquetadas, nombre y apellido completo, edad, sexo

INDICACIONES DE TOMA DE MUESTRA

Paciente pediátrico se recomienda la toma de muestra en el laboratorio, en los niños también se asean los órganos genitales externos y regiones vecinas, se aplica después el dispositivo de Machuca o bolsas de plástico adhesivas.

Paciente femenino no estar en menstruación, esta en este periodo deberá esperar días después del termino del periodo para la recolección de la muestra.

Paciente con sonda vesical se recomienda que el medico tome la muestra.

El urocultivo debe hacerse, dentro de la hora siguiente a la recolección de la orina, o bien si esto no es posible, debe guardarse la orina en el refrigerador a 4°C hasta que pueda cultivarse, sin exceder de algunas horas.

TOMA DE MUESTRA Una vez que se empieza a orinar, se

desecha la primera orina que arrastrará los organismos contaminantes.

Se interrumpe el paso de la orina para recoger el frasco estéril y recolectar la porción media de la muestra.

Y por ultimo se desecha el resto de la orina.

INFECCIÓN DE VÍAS URINARIAS

Vías urinarias altas • Riñones • Uréteres

Vías urinarias bajas• Vejiga • Uretra

Pielonefritis• Fiebre• Dolor lumbar • Disuria (ardor al orinar).• Polaquiuria (ir mucho al

baño).• Tenesmo (dificultada para

orinar).

Cistitis • Disuria• Dolor

MICROORGANISMOS OBSERVADOS Organismos que son uropatógenos reconocidos y

crecen bien en medios de rutina en 24 hrs: Estos incluyen E.coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, y Pseudomona aeruginosa. Estos patógenos constituyen la causa del 80% de los bacilos gram negativos aislados. Enterobacter y Citrobacter son también comúnmente aislados. Enterococcus, Staphylococcus saprophyticus, Staphylococcus aureus y Streptococcus agalactiae son los gram positivos más frecuentemente aislados.

  Organismos que son uropatógenos reconocidos y

no crecen en medios de rutina: Mycobacterium tuberculosis, Chlamidia trachomatis, Neisseriae gonorrhoeae se desarrollla.

 

Organismos que pueden ser uropatógenos, pueden requerir medios especiales y más de 24 hrs: Corynebacterium urealyticum, Corynebacterium seminale éstos se desarrollan en A.Sangre CNA.; Haemophylus influenzae, H. parainfluenzae, estos de desarrollan en A. chocolate Gardenella vaginalis en altos recuentos se ha asociado a UTI éste se desarrolla en Human Blood Agar. Todos estos medios especiales deben incubarse por 48 hrs. En CO2.

  Organismos que no son uropatógenos pero pueden

aislarse de uretra y orina: Gran variedad de gérmenes colonizan la uretra y el área genitourinaria, estos incluyen anaerobios, Actinomyces spp, Lactobacillus, Streptococcos alfa-hemolíticos, Staphylococcos coag-negativa, y pequeños números de gram negativos.

MÉTODOS Método de conteo en placa o recuento de colonias

(Método de Kass):

Se homogeniza la muestra mediante agitación. Se diluye la muestra al 1:100, colocando 0.1ml de orina en

9.9ml de caldo tripticasa o de suero fisiológico estéril. Se preparan diluciones de 1:1000 y 1:10 000 a partir de la

dilución 1:100. Se deposita 1ml de cada dilución en placas petri estériles que

contienen agar Tripticasa o medio CLED, Mediante rotación suave se favorece la distribución homogénea de la siembra.

Se incuban todas las muestras a 370C de 24 a 48 horas. Para calcular el número de colonias se eligen las placas que

contengan de 30 a 300 colonias. Contadas estas basta multiplicar su número por la dilución respectiva para obtener la cuenta total.

Método del asa calibrada: Esta estimación cuantitativa consiste en sembrar una placa con medio de agar sangre en una muestra de orina, sin centrifugar, empleando un asa de platino calibrada (4mm. De diámetro). Después de incubar las muestras a 370C durante 24 a 48 horas, se cuenta el número de colonias desarrolladas y el resultado se multiplica por 100, ya que el asa de platino contiene 0.01ml de orina.

LeucocitosEritrocitosCélulas Epiteliales Bacterias

INOCULACIÓN

Usar el asa calibrada, flamear, dejar enfriar, mantener en posición vertical introducir solo el aro debajo del nivel de la orina previa mezcla de la orina sin centrifugar.

Método para introducir el asa calibrada

Estriar en la placas de cultivo de la siguiente manera: Estriar de arriba hacia el centro de la placa y estriar la orina

en una serie de pasos de ángulo de 90º a través del inóculo

Sin flamear el asa estriar atravesándola línea del inoculo en el sentido de las flechas.

Incubación Una vez sembradas las placas deben

incubarse durante 24 horas a 35 - 37° C.

ETIOLOGIA DE LAS INFECCIONES DE VIAS URINARIAS

1. Escherichia Coli (80% al 90% de los casos)2. Proteus sp.3. Klebsiella sp.4. Pseudonoma auruginosa5. Enterobacter sp.6. Staphylococcus saprophyticus

ESTIMACIÓN CUANTITATIVA DE LAS COLONIAS

La siembra en las placas se realiza por estría cruzada con asas calibradas de 4 mm de diametro y 0.01 ml de capacidad.

*Hay casos de pielonefritis en los que el número de bacterias es menor de 100 000 en un mililitro de orina. Esos casos se presentan cuando un volumen de orina es muy grande y por lo tanto disminuye la concentración de bacterias en la unidad de volumen.

Criterio Colonias por ml.

Contaminación <10 000

Sospecha de infección 10 000 - 100 000

Infección >100 000

MÉTODOS CUALITATIVOS Se usan para identificar que

microorganismos es el causante de la enfermedad, se usan medios de cultivo tanto enriquecidos como selectivos.

AGAR GELOSA SANGRE

Dada la excelente base nutritiva, permite el crecimiento de prácticamente todos los microorganismos que pudieran estar presentes. Si se añade sangre se pueden determinar las distintas formas de hemólisis que pudieran tener lugar.

AGAR GELOSA CHOCOLATE

El Agar Gelosa Chocolate es un medio utilizado con varios suplementos para el aislamiento y cultivo de Neisseria gonorrhoeae y otros microorganismos fastidiosos. La hemoglobina al 2% provee la hemina (Factor X) requerida para el crecimiento de Haemophilus y mejorar el desarrollo de Neisseria, así como suplementos (disponibles comercialmente) que proveen glutamina, cocarboxilasa, levadura, glutamina, coenzimas, hemina, vitaminas, aminoácidos, dextrosa y otros factores de crecimiento, todos ellos necesarios para el mejor desarrollo de Haemophilus y Neisseria.

Haemophilus influenzae: Colonias pequeñas, húmedas, perladas con característico olor húmedo

Neisseria gonorrhoeae: Colonias pequeñas grisáceas o incoloras, mucoides

Neisseria meningitidis :Colonias medianas a grandes, de color azul grisáceo, mucoides.

Streptococcus pneumoniae: Colonias pequeñas, planas, pueden aparecer verdes por la decoloración del medio.

MEDIO CLED

El Azul de Bromotimol cambia de color por la fermentación ácida de la Lactosa. La Cistina favorece el crecimiento de las Enterobacteriáceas y el bajo contenido en electrolitos reduce la difusión de Proteus. Las peptonas, el extracto de carne y la Lactosa constituyen los elementos nutrientes del medio.

E. coli en Agar CLED

AGAR MCCONKEY

El Agar MacConkey contiene cristal violeta y sales biliares como inhibidores de organismos Gram positivos. Las colonias aisladas de bacterias que fermentan la lactosa son rosadas y pueden estar rodeadas de una zona de precipitado de sales biliares el cual es debido a una caída en el pH por la fermentación de la Lactosa. Las colonias que no fermentan la lactosa permanecen incoloras.

AGAR EOSINA Y AZUL DE METILENO (EMB)

El uso de la eosina y del azul de metileno permite la diferenciación de las colonias fermentadoras de lactosa de las no fermentadoras. La sacarosa está incluida en el medio para detectar a los miembros del grupo coliforme que fermentan más rápidamente la sacarosa que la lactosa.

Las colonias de Salmonella y Shigella son translúcidas, de color ámbar o incoloras. Los coliformes que utilizan la lactosa y/o sacarosa producen colonias de color azul a negro con centros obscuros y brillo metálico. Otros coliformes como Enterobacter presentan colonias mucosas de color rosa. Las cepas de Enterococcus faecalis son parcialmente inhibidas.

AGAR BIGGY

El Extracto de Levadura, la Glicina y la Glucosa constituyen los elementos nutritivos y energéticos necesarios para el crecimiento de las variedades de Candida. El Sulfito Bismuto, que inhibe el crecimiento de la flora secundaria, es reducido a sulfuro por la acción del germen, dando lugar a colonias pardas, que en algunos casos determinan que, alrededor de la colonia, el medio también presente el mismo color.