UNIVERSIDAD DE...

1

UNIVERSIDAD DE CHILE

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Y FARMACÉUTICAS

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS Y TECNOLOGÍA FARMACEÚTICAS

CENTRO DE INVESTIGACIONES FARMACOLOGICAS Y TOXICOLOGICAS (IFT)

ESTUDIO DE LA BIODISPONIBILIDAD RELATIVA DE CLOPIDOGREL

(EXPANSIA®), FORMULACION ORAL DE LABORATORIO STEIN S.A. VERSUS LA

FORMULACION DE REFERENCIA DEL MERCADO, PLAVIX®.

STUDY OF THE RELATIVE BIOAVAILABILITY OF CLOPIDOGREL (EXPANSIA™)

ORAL FORMULATION OF STEIN LABORATORY S.A. VERSUS MARKET

REFERENCE, PLAVIX ™.

PATROCINANTE y CO-DIRECTOR

Prof. Hernán Chávez

DIRECTOR DE MEMORIA

Prof. Iván Saavedra S.

Facultad Ciencias Químicas y

Farmacéuticas. Universidad de Chile

Laboratorio de Farmacocinética y

Biodisponibilidad. Centro de

Investigaciones Farmacológicas y

Toxicológicas (IFT). Facultad de

Medicina. Universidad de Chile

Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico

Pablo Antonio Toledo Parada

SANTIAGO DE CHILE

2011

2

Al Mundo.

3

Agradecimientos

La presente Tesis es un esfuerzo en el cual, directa o indirectamente, participaron

varias personas leyendo, opinando, corrigiendo, teniéndome paciencia, dando ánimo,

acompañando en los momentos difíciles y en los momentos de felicidad.

Agradezco a la Dr. Iván Saavedra por haber confiado en mi persona, por la paciencia y

por la dirección de este trabajo. Al Dr. Luis Quiñones por los consejos, el apoyo y el

ánimo que me brindó.

Gracias también a mis queridos compañeros, que me apoyaron y me permitieron entrar

en su vida durante los largos años de convivencia dentro y fuera del salón de clase.

A mi madre por su apoyo y cariño incondicional

Gracias a todos.

4

INDICE GENERAL

Página

DEDICATORIA ...................................................................................................2

AGRADECIMIENTOS ........................................................................................3

INDICE GENERAL..............................................................................................4

INDICE DE TABLAS y FIGURAS.......................................................................6

RESUMEN...........................................................................................................7

SUMMARY...........................................................................................................8

I. INTRODUCCIÓN.............................................................................................10

Hipótesis.............................................................................................................15

Objetivos generales............................................................................................15

Objetivos especificos..........................................................................................15

II. VOLUNTARIOS, MATERIALES Y MÉTODOS...............................................16

Selección de Voluntarios.…………………………………………………………….16

Medicamentos en estudio, adquisición y manejo de los productos a ensayar…19

Metodología.…………………………………………………………………………...22

III. RESULTADOS.…………………………………………………………………….26

Adaptación de la metodología bioanalítica………………………………………….26

Validación de la metodología bioanalítica…………………………………………..27

Características antropométricas de los voluntarios. …….....................................35

Análisis físico-químico del producto test y el producto referencia………………..37

Exámenes clínicos y de laboratorio clínico………………………………………….37

Consentimiento informado.……………………………………………………………37

5

Dieta administrada a los voluntarios.………………………………………………...38

Análisis cromatográfico de las muestras plasmáticas.………………………….....38

Análisis Farmacocinético.……………………………………………………………..43

Análisis estadístico de las muestras.………………………………………………...46

Evaluación de Bioequivalencia.………………………………………………………47

Encuesta de reacciones Adversas.…………………………………………………..49

IV. DISCUSIÓN.…………………………………………………………………...…...49

V. CONCLUSION……………………………………………………………...…….…51

VI. REFERENCIAS...............................................................................................53

ANEXOS...............................................................................................................56

ÍNDICE DE FIGURAS

Figura Nº 1 Fórmula química de Clopidogrel Pág. 10

Figura Nº 2 Curva de Calibración de acido carboxílico de clopidogrel Pág. 28

Figura Nº 3 Cromatogramas de separación y cuantificación de acido

carboxílico de clopidogrel y metilprimidona

Pág. 31

Figura Nº 4 Curvas promedio de concentración plasmática de ACC Pág. 42

6

ÍNDICE DE TABLAS

Tabla 1 Validación Analítica: Determinación de linealidad. Pág. 28

Tabla 2 Validación Analítica: Determinación de precisión intradía. Pág. 29

Tabla 3 Validación Analítica: Determinación de precisión intradía. Pág. 29

Tabla 4 Validación Analítica: Determinación de precisión interdía. Pág. 30

Tabla 5 Validación Analítica: Determinación del porcentaje de

recuperación.

Pág. 32

Tabla 6 Estabilidad por ciclos de congelamiento y descongelamiento. Pág. 33

Tabla 7 Validación Analítica: Estabilidad de corta duración. Pág. 34

Tabla 8 Validación Analítica: Estabilidad de larga duración. Pág. 34

Tabla 9 Validación Analítica: Estabilidad de corta duración. Pág. 35

Tabla 10 Características Antropométricas de los voluntarios. Pág. 36

Tabla 11 Concentraciones plasmáticas (ηg/mL) vs el tiempo (h) en 24

voluntarios sanos para A y B

Pág. 39

y 40

Tabla 12 Concentraciones promedio de ACC (ηg/mL) Pág. 41

Tabla 13 Parámetros farmacocinéticas ABC 0→12, ABC 0→∞, Cmáx. Pág. 44

Tabla 14 Otros parámetros farmacocinéticos Pág. 45

Tabla 15 Análisis de varianza para los parámetros farmacocinéticos. Pág. 46

Tabla 16 Test de Bioequivalencia, referencia (A) vs prueba (B) Pág. 47

Tabla 17 Prueba de dos hipótesis de Schuirmann para los parámetros

farmacocinéticos.

Pág. 48

7

RESUMEN

Se determinó la biodisponibilidad relativa para establecer la bioequivalencia del

producto similar EXPANSIA® fabricado por laboratorio STEIN S.A, producto de prueba,

con PLAVIX® de Laboratorios SANOFI-AVENTIS S.A, producto de referencia; ambas

en comprimidos de 75 mg.

Para estos efectos se administró un solo comprimido de clopidogrel de cada una de

las formulaciones a 24 voluntarios(as) sanos(as), después de un ayuno de 12 horas, a

través de un diseño abierto, en dos periodos, randomizado, cruzado y de doble ciego,

dejando 8 días entre cada administración y, luego, se determinaron las concentraciones

plasmáticas del metabolito de la droga (ácido carboxílico de clopidogrel) por un método

de HPLC con detector UV-Vis.Para este efecto, la técnica fue validada en especificidad,

exactitud, precisión y linealidad y estabilidad.

Para evaluar la biodisponibilidad se calcularon a partir de las curvas de

concentraciones plasmáticas versus tiempo los siguientes parámetros farmacocinéticos:

área bajo la curva (ABC), concentración máxima (Cmáx), y vida media (t1/2).

Los resultados de los parámetros farmacocinéticos encontrados fueron: ABC0→∞

6.019,94 ± 1786,40 y 5.869,52 ± 1667,89 gxh/mL; ABC0→12 5.026,13 ± 1.207,37 y

4.850,25 ± 1.102,34 gxh/mL; Cmáx 2.315,34 ± 548,4 y 2.372,47 ± 493,15 g/mL, para

A y B, respectivamente.

De acuerdo a los resultados obtenidos se concluye que las formulaciones

farmacéuticas diseñadas para ambos productos no muestran diferencias

estadísticamente significativas en los parámetros farmacocinéticos obtenidos y, estos

8

se ubican en el rango de similitud de 80 a 125%, fijado por la FDA. Según los criterios

establecidos para este tipo de estudios y a la luz de los resultados, se concluye que

EXPANSIA®, comprimidos de 75 mg de Clopidogrel de Laboratorio Stein, B (test), es

un genérico bioequivalente e intercambiable con PLAVIX®, comprimidos de 75 mg de

Clopidogrel de Sanofi-Aventis, A (referencia).

9

SUMMARY

This study determined the relative bioavailability to demonstrate the

bioequivalence between the similar product EXPANSIA® of Laboratories STEIN Inc., test

product, and PLAVIX® of Laboratories SANOFI-AVENTIS Inc., reference product. A

double blind, crossover and randomizaded study which include 24 healthy volunteers,

which received one dose of 75 mg Clopidogrel was developed fot this purpose.

The main inactive clopidogrel metabolite plasmatic levels, was determinated by

HPLC technique. This technique was validated respect to its specificity, accuracy,

precision, linearity and stability. The pharmacokinetics parameters compared were: area

under the curve AUC, (plasmatic concentration vs time) and maximum concentrations

(Cmax).

The results of the pharmacokinetics parameters of samples A and B were: AUC0→∞

6.019,94 ± 1786,40 y 5.869,52 ± 1667,89 gxh/mL; AUC0→12 5.026,13 ± 1.207,37 y

4.850,25 ± 1.102,34 gxh/mL; Cmáx 2.315,34 ± 548,4 y 2.372,47 ± 493,15 g/mL,

respectively. Significant differences between the kinetic parameters values of both

products, p>0.05 were not observed. The confidence intervals for the rate B/A were:

AUC0→∞ 98.92 to 100.53%; AUC0→12 98.92 100.27% y Cmáx 98.98 101.79%.

The range recommended by FDA is 80 % to 125 % with a bioequivalence

probability of 100 %. All the kinetic parameters for the bioequivalence (Cmáx, AUC0→12,

AUC0→∞) were included in this range; therefore, EXPANSIA® 75 mg, (B test), is a generic

product bioequivalent and interchangeable with PLAVIX®, (A reference).

10

I. INTRODUCCIÓN

Clopidogrel (Figura 1) es un inhibidor de la agregación de plaquetas, las cuales tienen

una participación establecida en la fisiopatología de la enfermedad aterosclerótica y los

eventos trombóticos. Este fármaco inhibe selectivamente la unión del difosfato de

adenosina (ADP) al receptor plaquetario y la subsecuente activación del complejo

GPIIb-IIIa, con lo cual se inhibe la agregación plaquetaria1.

Figura 1

Estructura Química de Clopidogrel

Para producir la inhibición de la agregación plaquetaria es necesaria la

biotransformación del clopidogrel; el metabolito responsable de la actividad

farmacológica pertenece a una familia de ocho estereoisómeros con el siguiente

nombre químico: 2-(1-[1-(2-clorofenil)-2-metoxi-2-oxoetil]-4-sulfanil-3-piperidiniliden)

ácido acético5. La inhibición es dosis-dependiente y puede observarse a las 2 horas

después de la administración oral. En dosis de 75 mg/día produce inhibición sustancial

de la agregación plaquetaria inducida por ADP desde el primer día; la inhibición se

incrementa progresivamente y alcanza un nivel de estabilidad entre los días 3 y 7. En

el nivel estable, el porcentaje promedio de inhibición con la dosis de 75 mg/día, oscila

11

entre 40 y 60%. La agregación plaquetaria y el tiempo de sangrado retornan

gradualmente a los valores basales, de manera general, dentro de los 5 días

posteriores a la suspensión del tratamiento.

Clopidogrel se indica preferentemente en el Infarto del miocardio (IM) reciente,

evento vascular cerebral isquémico (EVCI) reciente, enfermedad arterial periférica

establecida. Está indicado en la prevención secundaria de eventos vasculares

isquémicos de origen aterotrombótico (IM, EVCI, enfermedad arterial periférica y

muerte secundaria a alguno de los eventos anteriores). También está indicado en la

reducción de eventos aterotrombóticos, en combinación con ácido acetilsalicílico

(AAS), en pacientes con síndrome coronario agudo (angina inestable o IM sin

elevación del segmento ST), con o sin revascularización cardíaca (cirugía, angioplastia,

con o sin aplicación de endoprótesis coronaria (STENT). Además está indicado como

terapia adyuvante en la prevención de trombosis subagudas posteriores a la colocación

de STENT, en combinación con ácido acetilsalicílico1.

La literatura consultada señala que clopidogrel se absorbe rápidamente

después de la administración oral; con dosis repetidas de 75 mg se alcanza la

concentración plasmática máxima después de una hora. El fármaco se metaboliza

principalmente a través de dos rutas metabólicas: una mediada por esterasas y que

conducen a la hidrólisis en su derivado carboxílico (85% de los metabolitos circulantes)

y otro mediado por los múltiples citocromos P4504, la sustancia de origen es inactiva y

alcanza una concentracion plasmática máxima promedio de 1000 ρg/mL luego de una

dosis de 75 mg. El clopidogrel y su principal metabolito se unen reversiblemente in vitro

a las proteínas plasmáticas (98 y 94%, respectivamente). La administración con

alimentos no modifica significativamente la biodisponibilidad. La cinética de los

12

principales metabolitos es lineal en el rango de dosis comprendido entre 50 y 150 mg

de clopidogrel. La absorción es por lo menos de 50% .La vida media del principal

metabolito circulante es de 8 horas después de administraciones única y repetidas. Se

excreta aproximadamente en un 50% por orina y 46% por heces en un intervalo de 120

horas después de la administración del fármaco. En pacientes geriátricos las

concentraciones plasmáticas de los principales metabolitos son significativamente más

elevadas en mayores de 75 años comparativamente con voluntarios jóvenes sanos; sin

embargo, esos niveles plasmáticos más elevados no han sido asociados con

diferencias en la agregación plaquetaria y el tiempo de sangrado. No es necesario

ajustar la dosis en pacientes de edad avanzada. En pacientes con insuficiencia renal

después de dosis repetidas de 75 mg/día los niveles séricos del principal metabolito se

observan más bajos en sujetos con insuficiencia renal grave (con depuración de

creatinina de 5 a 15 ml/min) comparados con sujetos sanos y con pacientes con

insuficiencia renal moderada (con depuración de creatinina de 30 a 60 mL/min). No

obstante la inhibición de la agregación plaquetaria inducida por ADP también es menor

(25%) que la observada en sujetos sanos, la prolongación del sangrado es similar a

aquella observada en sujetos sanos que recibieron 75 mg/día de Clopidogrel. No es

necesario ajustar la dosis en pacientes con insuficiencia renal 1,5.

Clopidogrel está contraindicado en pacientes con hipersensibilidad y en

aquellos pacientes con sangrado patológico activo, como por ejemplo úlcera péptica y

hemorragia intracraneal. Al igual que otros agentes antiagregantes plaquetarios, el

clopidogrel debe ser utilizado con precaución en pacientes con riesgo de sangrado de

origen traumático, quirúrgico u otras condiciones patológicas y debe ser usado con

precaución en pacientes con lesiones que tengan propensión al sangrado

13

(particularmente gastrointestinales o intraoculares). Se debe advertir al paciente que,

mientras se encuentre en tratamiento con clopidogrel, cualquier sangrado puede tener

mayor duración de la habitual. Han sido reportados raramente casos de púrpura

trombocitopénica trombótica (PTT) posterior al uso de clopidogrel, en algunos casos

después de una corta exposición. Se caracterizan por anemia hemolítica

microangiopática y trombocitopenia asociada con alteraciones neurológicas, fiebre o

disfunción renal. PTT es una condición que requiere tratamiento inmediato1,2

.

Respecto al efecto sobre el embarazo, en animales de laboratorio no se han

evidenciado efectos en fertilidad o daño fetal con dosis de clopidogrel de hasta 500

mg/kg/día (ratas) y hasta de 300 mg/kg/día (conejos), aun cuando en humanos no

existen estudios adecuados y bien controlados durante el embarazo. Clopidogrel y/o

sus metabolitos son excretados en la leche materna, al menos en animales de

experimentación. El fármaco no es genotóxico ni cancerígeno1.

Su seguridad ha sido evaluada en más de 11,300 pacientes, incluyendo a 7,000

pacientes tratados durante 1 año o más. En un amplio estudio clínico controlado

(CAPRIE) el clopidogrel 75 mg/día fue bien tolerado comparado con ácido

acetilsalicílico 325 mg/día. El riesgo de sangrado gastrointestinal se encuentra

potencialmente incrementado por el uso conjunto de Clopidogrel y AINES, por lo que

esta combinación farmacológica deberá ser administrada con precaución. Información

procedente de estudios realizados en microsomas de hepatocitos humanos indican que

el clopidogrel podría inhibir la actividad de una de las isoenzimas del citocromo P-450

(CYP 2C9). Esto podría llevar a niveles plasmáticos elevados de fármacos como

clopidogrel, tolbutamida, toracemida, tamoxifeno, fluvastatina y AINEs que son

metabolizados por la CYP 2C9.

14

Existen a los menos 3 razones que justifican la utilizacion de metabolitos, por

sobre la droga inalterada, en estudios de biodisponibilidad comparativa. Cuando el

fármaco inalterado no es el responsable de la actividad farmacológica, cuando la

cantidad de droga inalterada es indetectable por su baja concentracion, o bien cuando

los parametros farmacocinéticos de la droga inalterada presentan alta variabilidad

estadistica10

.

En atención a estas razones y considerando por sobre todo las bajas

concentraciones de clopidogrel en su forma inalterada, se utilizó el metabolito que

representa el 85 por ciento del total de metabolitos del clopidogrel.

De lo expuesto se deduce que clopidogrel es una droga cuyas formas

farmacéuticas sólidas provenientes de fuentes múltiples deben ser sometidas a

estudios de equivalencia terapéutica o de biodisponibilidad relativas a un estándar que

generalmente es el innovador del mercado farmacéutico mundial para asegurar que

tendrán la misma eficacia y seguridad y así poderse intercambiar sin causar

alteraciones en la concentración plasmática al estado de equilibrio atribuibles al

medicamento7,8,9

. La modalidad aceptada para demostrar la equivalencia terapéutica

son los estudios de Bioequivalencia y/o los estudios clínicos controlados. La

OPS/OMS, a través de “Multisource (generic) pharmaceutical products: Guidelines on

registration requirements to establish interchangeability”, WHO Tecnical Report Series,

Nº 863, 1996 (WHO-96), propone aspectos y criterios científico técnicos que deben ser

considerados en una norma de bioequivalencia9. Se entiende que cuando una

formulación es similar a otra, en cuanto a la velocidad con que entrega el principio

activo y la cantidad de droga que se absorbe a partir de ella, pueden considerarse

bioequivalentes e intercambiables.

15

HIPÓTESIS

Se postula que las formulaciones orales de Clopidogrel, el producto innovador

PLAVIX® y el producto similar EXPANSIA®, son bioequivalentes.

OBJETIVOS

Objetivo general. Determinar, en un diseño de doble ciego, cruzado y

randomizado la biodisponibilidad relativa de una formulación farmacéutica de

clopidogrel respecto del producto innovador.

Objetivos específicos

1. Validar una técnica HPLC para medir las concentraciones plasmáticas de ácido

carboxílico de clopidogrel, respecto a sensibilidad, especificidad, linealidad,

recuperación, límites de detección, cuantificación, exactitud, precisión,

reproducibilidad (intradías e interdías) y estabilidad.

2. Seleccionar 24 voluntarios sanos mediante exámenes clínicos y de laboratorio y

administrarles los productos en estudio.

3. Medir las concentraciones plasmáticas de clopidogrel en el plasma de los

voluntarios sanos y con sus resultados confeccionar curvas de concentraciones

plasmáticas versus tiempo.

4. Realizar el análisis farmacocinético de los resultados obtenidos de la determinación

de las concentraciones plasmáticas en el tiempo, después de una dosis oral para

cada voluntario.

16

5. Realizar el análisis estadístico de la comparación de los resultados de los

parámetros farmacocinéticos de ambos productos similares.

II. VOLUNTARIOS, MATERIALES Y MÉTODOS.

A. Selección de Voluntarios. El número de sujetos que participa en este tipo de

estudio debe ser definido mediante un método adecuado que permita garantizar la

confiabilidad de los resultados; este número no debe ser menor a 12 individuos, pero

normalmente es de 18 a 24 personas.

En la primera semana del estudio un grupo de adultos, hombres y mujeres,

sanos(as), con edades que fluctuaron entre los 18 y 55 años, con apellidos

hispanoamericanos, fueron citados a las dependencias del Centro de Investigación, en

ayunas. El Coordinador de la etapa clínica los instruyó acerca del propósito del estudio,

y se analizaron los posibles riesgos y beneficios de participar, aquellos voluntarios que

estuvieron de acuerdo con cada uno de los puntos señalados y aceptaron participar en

el estudio certificaron con su firma el consentimiento informado, documento aprobado

por el Comité de Ética de la Facultad de Medicina de la Universidad de Chile. Luego,

los sujetos se entrevistaron con un médico cirujano quien les realizó un examen

médico completo y una interrogación sobre su historia médica. La entrevista con el

médico incluyó los siguientes puntos:

- Identificación: nombre, edad, sexo.

17

- Examen físico general: presión sanguínea, pulso, ritmo respiratorio, medición de

altura y peso en ropa interior. Aspecto de la piel, cabeza, cuello, ojos, nariz,

oídos, boca, garganta, pecho, abdomen, espina dorsal y nódulos linfáticos.

- Anamnesis: enfermedades existentes y preexistentes, historia familiar de

patologías, historia quirúrgica y hábitos (tabaco, drogas, alcohol).

- Anamnesis farmacológica: medicación, RAM, alergia a medicamentos.

Posteriormente, a aquellas personas que cumplían con los criterios de selección

(inclusión y exclusión) se les extrajo una muestra de sangre y se les solicitó una

muestra de orina para análisis de Laboratorio Clínico. Los análisis que se realizaron

antes y después del estudio, comprendieron: hemograma y VHS, orina completa, VIH,

screening de drogas de abuso, glicemia, uremia, proteinemia, fosfatasas alcalinas,

bilirubinemia, tiempo de protrombina, transaminasas oxálica y pirúvica y creatinemia.

En el caso de las mujeres se les solicitó además, un test de embarazo. Los exámenes

de VIH y test de embarazo se realizaron con el consentimiento informado de los

voluntarios.

Finalmente el facultativo seleccionó de todos ellos a 24 voluntarios (as)

completamente sanos (as) a los cuales instruyó acerca del propósito y desarrollo del

estudio.

18

A.1. Criterios de selección de voluntarios para el estudio:

A.1.1. Criterios de Inclusión:

Grupo de hombres y mujeres sanos de edades entre 18 y 55 años con apellidos

hispanoamericanos e índice de masa corporal (IMC) entre 19 y 30.

No fumadores, no consumidores de drogas de abuso ni de alcohol.

Sin alergias a medicamentos.

Sin terapias concomitantes y no haber estado en tratamiento farmacológico a lo

menos dos meses antes del estudio.

Sin presencia en la historia clínica de enfermedades que hayan afectado la

absorción, distribución y eliminación de drogas desde el organismo.

Dar negativo en el análisis de drogas, VIH y/o test de embarazo.

Con resultados de los exámenes de laboratorio en rangos normales y declarados

aptos para el estudio por el médico después del examen físico, el que incluye, en

este caso particular, un valor de INR (razón del índice normalizado de tiempo de

protrombina) entre 1 y 1,25.

A.1.2. Criterios de Exclusión:

Historia clínica de hipersensibilidad a cualquier medicamento y en particular a

Clopidogrel.

Presencia en la historia clínica de problemas gastrointestinales, de hígado,

riñón, pulmón, hematológicos, neurológicos, psiquiátricos, endocrinos,

inmunológicos o dermatológicos significativos. Pacientes con sangrado

patológico activo, como por ejemplo úlcera péptica y hemorragia intracraneal.

19

Presencia en la historia clínica de enfermedades que hayan afectado la

absorción, distribución y eliminación de drogas desde el organismo.

Mantención de una terapia o bien adicción al alcohol, tabaco, marihuana u otras

drogas de abuso.

Haber tenido cualquier enfermedad de importancia en los 28 días previos al

estudio.

Haber usado en los 28 días previos al estudio drogas que modifiquen el sistema

metabólico de drogas (todos los barbitúricos, corticoesteroides, fenilhidantoínas,

etcétera).

Haber usado cualquier medicamento en los 7 días antes del estudio, incluyendo

medicamentos de venta directa o sin receta médica.

Haber participado en otro estudio similar en los 90 días previos al estudio

actual.

Dar positivo el análisis de drogas o VIH.

Presencia de historia de desmayos o miedo a la extracción de sangre.

B. Materiales: Medicamentos en estudio, adquisición y manejo de los productos

a ensayar

B.1. Medicamentos en estudio. Los medicamentos fueron comprimidos recubiertos

que contenían 75 mg de Clopidogrel (bisulfato).

Medicamento Test: El producto farmacéutico EXPANSIA®, comprimidos de 75 mg,

envasados en blister; fue fabricado por Laboratorios STEIN S.A. de Costa Rica con el

número de serie 006H8 y fecha de vencimiento Agosto de 2010.

20

Medicamento Referencia: El producto farmacéutico considerado como referencia,

PLAVIX®, comprimidos de 75 mg, envasados en blister; fue fabricado por Laboratorios

Sanofi Wintrop Industrie ldt., con el número de serie 2299 y fecha de vencimiento

Febrero de 2011.

B.2. Adquisición, obtención y manejo de los productos a ensayar

B.2.1. Adquisición de los productos a ensayar. El producto farmacéutico

EXPANSIA, comprimidos de Clopidogrel 75 mg, fue proporcionado por Laboratorio

STEIN de Costa Rica y el producto considerado como patrón de comparación,

PLAVIX® fue adquirido en el mercado farmacéutico de Costa Rica. Ambos productos

son comprimidos con 75 mg. de Clopidogrel.

B.2.2. Preparación de los medicamentos en estudio. Se solicitó a un profesional

Químico Farmacéutico ajeno a Laboratorios Stein y al Centro de Investigaciones

Farmacológicas y Toxicológicas (IFT) que, en confidencia, confeccionara el ciego,

colocando 24 comprimidos de cada producto en frascos de vidrio de color ámbar

previamente rotulados como “Producto A” y “Producto B” y anotara su correlación junto

a los datos de número de lote y fechas de expiración en un informe que fue entregado

en un sobre sellado a Laboratorios Stein. Los investigadores no conocieron la identidad

de los productos hasta el momento en que se realizó el análisis de equivalencia, ya

que en este procedimiento se debe conocer si el producto A o el producto B

corresponde al medicamento test o medicamento referencia.

21

B.2.3. Administración de los productos farmacéuticos. Los productos

farmacéuticos se administraron a través de un diseño experimental randomizado,

cruzado y ciego. El profesional a cargo de la realización del ciego, realizó la

randomización de los voluntarios seleccionados, asignándole un número al azar de 1 a

24 a cada voluntario, además incluyó la secuencia para la administración de los

medicamentos, creando en cada período dos bloques equilibrados con la secuencia AB

o BA. De esta manera, en la secuencia AB, el voluntario recibió el fármaco A en el

primer período y el fármaco B en el segundo período, y en la secuencia BA, el

voluntario recibió el fármaco B en el primer período y el fármaco A en el segundo

período.

Diseño de tratamientos

Grupos Periodo 1 Periodo 2

I (12 Vols.) A B

II (12 Vols.) B A

Entre los dos periodos hubo 8 días de separación (más de 5 vidas medias del

fármaco). Los voluntarios se cruzaron cambiando el producto de tratamiento tal como

se indica en el cuadro de diseño de tratamientos.

En cada sesión los voluntarios estuvieron en ayunas (de 12 horas) antes de la

administración del medicamento y el médico en presencia del sponsor le administró por

vía oral una dosis del medicamentos en estudio con 250 mL de agua. Se les pidió

expresamente a los voluntarios que no consumieran agua una hora antes y dos horas

después de la administración del medicamento.

22

C. Metodología

C.1. Cuidado de los voluntarios. Durante el estudio los voluntarios estuvieron en

contacto con los médicos del Laboratorio y en los días de tratamiento en que los

voluntarios se recluyeron en el centro de investigación, fueron atendidos por todo el

equipo profesional del Centro. El médico observó e interrogó constantemente durante

el día de tratamiento y después de él, a los voluntarios, de modo de captar y tratar

oportunamente las reacciones adversas potenciales.

La alimentación de los voluntarios, a saber desayuno, almuerzo, meriendas y

cena fue diseñada por la profesional Nutricionista que asesora al Centro, sobre la base

de lo aconsejado por el médico y la información farmacocinética del producto

estudiado. Al respecto, adicionalmente los voluntarios consumieron jugo de frutas tres

veces al día. El equipo biomédico participante supervisó a los voluntarios impidiendo el

consumo de alimentos antes de 2 horas después de la administración del

medicamento.

En cada uno de los procedimientos empleados, se respetaron rigurosamente las

normas de investigación de fármacos en seres humanos. Así para realizar este estudio

se solicitó la autorización de la Comisión de Bioética para Investigación en Seres

Humanos” de la Facultad de Medicina de la Universidad de Chile. (Anexo 2).

C.2. Recolección de muestras. Dos Enfermeras Universitarias, una para cada grupo

de 12 voluntarios instalaron a primera hora a cada voluntario una bránula ante braquial

(Beckton & Dickinson, 18 G) provista de llave de tres pasos estéril, la que mantuvieron

en forma permeable con heparina sódica diluida como anticoagulante durante el

23

tratamiento. Por esa bránula recolectaron las muestras de sangre en tubos de ensayo

de vidrio los cuales contenían 100 µL de heparina sódica al 30% como anticoagulante,

en los siguientes intervalos de tiempo en horas; a tiempo 0 (antes de administrar la

droga), y a: las 0,25; 0,5, 1; 1,5; 2; 2,5; 3; 4; 6; 8 y 12 hrs. El plasma se obtuvo

mediante agitación suave del tubo y centrifugación, se dividió en dos tubos eppendorf

(muestra y contra-muestra) y se almacenaron en freezer a – 30 ºC hasta el momento

de su análisis mediante Cromatografía.

El coordinador logístico llevó un registro computacional de toda modificación

de tiempos respecto al protocolo original durante el proceso de toma de muestras y

emitió un informe de ello, que junto al informe del jefe de muestras respecto de las

eventuales situaciones sucedidas durante el proceso (extracción de bajos volúmenes,

pérdida de la vía o de la muestra, etc.) se transformaron en documentos de respaldo

para evaluar desviaciones analíticas.

C.3. Técnica analítica: Método para la determinación del principio activo en

sangre. Se utilizó el método de Bahrami et al. (2008)12, de Cromatografía Líquida de

Alta Resolución, HPLC, con modificaciones, el cual se basa en la determinación del

metabolito inactivo de Clopidogrel (ácido carboxílico de Clopidogrel).

El método fue validado en el laboratorio como parte de este protocolo y definido

respecto a selectividad, sensibilidad, exactitud, precisión, recuperación, linealidad,

reproducibilidad (intradías e interdías)y estabilidad, siguiendo la guía FDA.

Para este efecto, a un 1 mL de muestra se agregaron 100 µL del estándar

interno (Metilprimidona 0,015 mg/mL), se agregaron 200 µL de ácido clorhídrico, los

tubos se agitaron por 10 segundos en vortex, se agregó 5 mL de solvente de

24

extracción (metilterbutiléter), luego se agitó durante 5 minutos en agitador mecánico y

se centrifugaron por 5 minutos a 3.500 rpm. Se tomó una alícuota de 3 mL de fase

orgánica y se transfirió a un tubo de vidrio de fondo cónico, se evaporó el solvente en

corriente de N2 a 40 °C, se reconstituyó el analito en 200 µLde fase móvil y se

trasvasijó a un vial de vidrio.

El sistema cromatográfico utilizado consistió en un equipo HPLC marca

Shimadzu LC10A - 10AVP, compuesto por un detector UV-VIS SPD-10AV VP, una

bomba isocrática LC10 AT VP, un módulo de control SCL-10AVP, un desgasificador

DGU-14A, un sistema de gradiente cuaternaria FCV-10AL VP, un auto inyector SIL-

10AD VP, un horno para columna CTO-10ASVP y un sistema organizador

computacional Class-VP. Las condiciones cromatográficas utilizadas fueron las

siguientes:

- Columna: Shimpack ODS 250 mm x 4,6 mm y tamaño de partículas de 5 μm

- Fase Móvil: mezcla de buffer fosfato 0,05M (pH=4,5) (75%); acetonitrilo (25%).

- Detección: 220 nm

- Flujo: 1,5 mL/min

- Volumen de inyección: 50 µL.

C.4. Análisis Farmacocinético. Los parámetros farmacocinéticos correspondientes a

concentración plasmática máxima (Cmáx.) y tiempo máximo (tmáx.) se obtuvieron por

inspección directa de las curvas de concentración plasmática en el tiempo.

Otros parámetros farmacocinéticos tales como la constante de constante de velocidad

de eliminación (Ke), área bajo la curva de concentraciones sanguíneas en el tiempo

ABC0 – t y ABC0 - tiempo de vida media (t½), fueron determinados a partir de los datos

25

obtenidos de las curvas de niveles sanguíneos de la droga en el tiempo pos

administración.

Para ello se utilizó el procedimiento Pkexamine del paquete estadístico STATA

10.0, el cual es independiente de los modelos compartimentales.

C.5. Análisis estadístico. Se utilizó el test de análisis de varianza (ANOVA) para

establecer las posibles diferencias entre los parámetros determinados para cada

producto farmacéutico en cada voluntario, estimándose una diferencia

estadísticamente significativa para valores de p ≤ 0,05. Se utilizarán las

recomendaciones de las Guías del FDA, tanto para el diseño del estudio como para el

análisis farmacocinético y estadístico. Como fuentes de variación se consideraron el

producto administrado, el período de administración y la secuencia. Como fuentes de

variación se consideraron el producto administrado, el período de administración, la

secuencia y el efecto residual. Además, se calcularon los intervalos de confianza (IC)

de 90% para la diferencia de las medias obtenidas con los productos A y B.

El análisis específico de bioequivalencia se realizó utilizando el procedimiento

“pkequiv” de STATA versión 10. Este procedimiento entrega el intervalo de confianza

(IC) para la diferencia de promedios, la razón de promedios, y los límites de

equivalencia usados por la FDA, cuyas regulaciones establecen que el intervalo de

confianza para la diferencia debe estar dentro de los limites contenidos dentro del

rango 0,80 a 1,25 para la razón (± 0,2231 en logaritmo natural). Se basa en la

bioequivalencia promedio con la metodología “two one-side test” (TOST).

26

C.6. Criterios de Bioequivalencia. Para establecer la bioequivalencia promedio de

fármacos que no poseen características farmacocinéticas y clínicas complejas, se

tomaron los valores del intervalo de confianza de 90%, estos valores deben estar

dentro de los límites de bioequivalencia de 80 % a 125 %, para la razón de las medias

del ABC y Cmáx del producto test (T) respecto del producto de referencia (R). Para

establecer la BE, los resultados del estudio deben ser aceptables para los parámetros

farmacocinéticos ABC y Cmáx.

III. RESULTADOS

A. Adaptación de la metodología analítica. Se realizó una adaptación de la técnica

de análisis cromatográfico de acuerdo a las condiciones presentes en el laboratorio. En

primer lugar se buscó un estándar interno que cumpliera con las características de

similitud estructural, rango de absorción y tiempo de retención semejante al de ACC,

en orden de reemplazar el estándar interno descrito originalmente por el método

(fenitoína). Una vez elegido el estándar interno (metilprimidona) se procedió a variar la

fase móvil de manera de obtener una mejor resolución de los analitos; la fase móvil

utilizada por Bahrami y colaboradores 2008, era una mezcla de NaH2PO4 y Na2HPO4

0,05 M a pH 5,7 y acetonitrilo (56:44 v/v), para obtener el objetivo planteado se varió

gradualmente la proporción de los componentes, hasta obtener una mezcla final de

NaH2PO4 y Na2HPO4 0,05 M a ph 4,5 y acetonitrilo (75:25 v/v).

27

B. Validación de la metodología bioanalítica.

B.1. Especificidad. Según la FDA no deben existir interferencias en las muestras

blanco de plasma a los tiempos de retención de los analitos. Esta prueba se realizó

demostrando que en los cromatogramas, a los tiempos de retención de los compuestos

de interés (ácido carboxílico de clopidogrel y metilprimidona) no existen interferencias

de las señales endógenas, para esto se utilizaron seis fuentes diferentes de plasma.

En el cromatograma experimental (Figura N° 2-A) se observa que no hay interferencias

tanto para ácido carboxílico de clopidogrel como para metilprimidona, esto se repitió en

las seis muestras diferentes de plasma.

B.2. Linealidad. La linealidad del método se obtuvo en un rango de concentración de

ácido carboxílico de clopidogrel de 38,32 a 3832,0 ηg/mL. Para establecer linealidad se

realizaron curvas de calibración que incluían 7 puntos (38,32; 76,64; 153,28; 229,92;

383,2; 766,4; 1532,8; 3832,0 ng/mL). En la Figura N° 2 se observa una de las curvas

experimentales de calibración utilizadas para la validación, el valor obtenido para el

coeficiente de correlación es > 0,98, y la FDA exige un coeficiente de correlación mayor

a 0,95.

28

Tabla 1. Validación Analítica: Determinación de linealidad.

Concentración de

ACC (ng/mL) Area de ACC Area de Metilprimidona Relación de areas

0 0 0 0,00000

38,32 3973 299321 0,01327

76,64 9960 264123 0,03771

153,28 10594 156048 0,06789

229,92 17237 213839 0,08061

383,2 27748 250446 0,11079

766,4 49878 234382 0,21281

1532,8 102342 249286 0,41054

3832 256775 254460 1,00910

Ecuación de la recta: y = 0,0003x + 0,0133; Regresión lineal: R2 = 0,9993

0

0,2

0,4

0,6

0,8

1

1,2

0 500 1000 1500 2000 2500 3000 3500 4000 4500

Rela

ció

n d

e Á

rea

Concentración (ng/mL)

Linealidad - Curva de Calibración n°1

Figura N° 2. Curva de Calibración de ácido carboxílico de clopidogrel.

Eje X= Concentración de ácido carboxílico de clopidogrel. Eje Y= Relación de área:

Área de acido carboxílico de clopidogrel / Área de metilprimidona.

29

B.3. Exactitud. Se determinó la exactitud del método, realizando una cuantificación de

analito en plasma fortificado con Acido Carboxílico de Clopidogrel y Metilprimidona en

concentraciones conocidas, la relación de área obtenida se ingresó en la curva de

calibración de manera de obtener un valor para concentración. El valor obtenido se

comparó con el valor real de concentración. La medición se realizó en tres niveles de

concentración (bajo, medio, alto), cada nivel se repitió 6 veces. Los valores medio

estuvieron dentro de un rango superior e inferior de 15% respecto del valor real,

cumpliendo lo exigido por la FDA.

Tabla 2. Validación Analítica: Determinación de exactitud.

Conc. real

(ng/mL) n

RA

promedio Ecuación

Concentración

(ng/mL) (%)

153,28 6 0,062 y = 0,0003x + 0,0163 152,30 99,4

383,2 6 0,137 y = 0,0003x + 0,0164 401,27 104,7

1532,8 6 0,472 y = 0,0003x + 0,0165 1518,01 99,04

RA = Relación de Área = Área ácido carboxílico de clopidogrel /Área metilprimidona

n = número de repeticiones

B.4. Precisión. Se determinó la precisión del método, realizando una cuantificación de

analito en plasma fortificado con acido carboxílico de clopidogrel y metilprimidona en

concentraciones conocidas. Se realizó la medición en tres niveles de concentración

(bajo, medio, alto) y se realizaron ensayos intradía e interdía. Para los ensayos intradía

cada medición se repitió 5 veces y para los ensayos interdía se realizaron un total de

15 mediciones en 3 días distintos. Para determinar la precisión de la metodología se

calculó el promedio, la desviación estándar y el coeficiente de variación para cada

30

punto. Los valores obtenidos para CV mostraron una diferencia menor al 15% que es lo

exigido por la FDA.

Tabla 3. Validación Analítica: Determinación de precisión intradía.

Concentraci

ón

(ng/mL) n RA promedio S.D. C.V.

153,28 5 0,062 0,0046 7,49

383,2 5 0,137 0,011 8,24

1532,8 5 0,472 0,020 4,33

Tabla 4. Validación Analítica: Determinación de precisión interdía.

Concentraci

ón

(ng/mL) n RA promedio S.D. C.V.

153,28 5 0,061 0,006 9,79

383,2 5 0,118 0,017 14,27

1532,8 5 0,434 0,039 9,09

RA = Relación de Área = Área ácido carboxílico de clopidogrel /Área metilprimidona.

S.D. = Desviación estándar

CV. = Coeficiente de variación


31

Figura N° 3. Cromatogramas de separación y cuantificación de ácido carboxílico

de clopidogrel y metilprimidona.A) Plasma blanco; B) Plasma cero: plasma + estándar

interno; C) Plasma 153,28 ηg/mL ácido carboxílico de clopidogrel + estándar interno; D) Plasma

383,2 ηg/mL acido carboxílico de clopidogrel + estándar interno; E) Plasma 1532,8 ηg/mL acido

carboxílico de clopidogrel + estándar interno; F) Muestra correspondiente al voluntario N° 1.

Minutes

0 2 4 6 8 10

Volts

0,00

0,01

0,02

0,03

0,04

4,8

83

5,6

67

6,0

75

6,4

42

6,7

83

7,2

42

Minutes

0 2 4 6 8 10

Volts

0,00

0,01

0,02

0,03

0,04

5,5

42

5,8

00

6,1

83

6,6

17

7,1

08

Minutes

0 2 4 6 8 10

Volts

0,00

0,01

0,02

0,03

0,04

5,1

08

Ac C

arb

oxilic

o C

lop

ido

gre

l

5,6

42

5,9

00

6

,25

8

6,6

25

7,1

50

Me

tilp

rim

ido

na

7,8

17

8,2

25

8,5

58

9,6

33

10

,55

0

Minutes

0 2 4 6 8 10

Volts

0,00

0,01

0,02

0,03

5,1

25

Ac C

arb

oxilic

o C

lop

ido

gre

l

5,3

92

5,6

50

5,9

08

6,2

58

6,6

33

7,1

75

Me

tilp

rim

ido

na

7,8

42

8,2

42

8,8

75

9,2

58

9,7

33

10

,58

3

Minutes

0 2 4 6 8 10

Volts

0,00

0,01

0,02

0,03

5,1

25

Ac C

arb

oxilic

o C

lop

ido

gre

l

5,6

42

5,8

92

6,2

42

6,6

83

7,1

67

Me

tilp

rim

ido

na

7,8

33

8,2

17

8,8

75

9

,63

3

10

,55

8

Minutes

0 2 4 6 8 10

Volts

0,00

0,01

0,02

0,03

Ac C

arb

oxilic

o C

lopid

ogre

l

5,0

58

173539

5

,350

92

Metilp

rim

idona

7,0

83

301760

7

,450

312

A) B)

C) D)

E) F)

32

B.5. Limite de Detección y Cuantificación. El límite de detección corresponde a 3

veces la señal ruido de la muestra blanco. El límite de detección fue 22,9 ηg/mL.

El límite de cuantificación puede corresponder al menor punto del rango de

concentración utilizado para establecer la linealidad del método si la precisión del LOQ

es menor al 20% y la exactitud se encuentra dentro de un rango de ±20%. El LOQ fue

de 38,32 ηg/mL.

B.6. Recuperación. Se determinó la recuperación del proceso de extracción,

realizando una cuantificación de analito en plasma y solución stock, en

concentraciones conocidas. Las muestras de plasma se sometieron al proceso de

extracción descrito para el método. Se realizó la medición en tres niveles de

concentración (bajo, medio, alto), cada nivel se repitió 5 veces. Se comparó la relación

de área obtenida en la muestras de plasma respecto a las obtenidas en las muestras

soluciones stock. Los valores obtenidos para % de recuperación muestran un valor

promedio de 29%, menor al 100%, este valor es aceptado dado que la técnica en los

niveles ensayados es precisa y exacta.

Tabla 5. Validación Analítica: Determinación del porcentaje de recuperación.

Concentración

(ng/mL) RA promedio plasma

RA promedio solución

stock

Recuperación

(%)

153,8 0,062 0,18 34,04

383,2 0,137 0,49 27,85

1532,8 0,472 1,92 24,61

RA = Relación de Área = Área acido carboxílico de clopidogrel /Área metilprimidona


33

B.7. Estabilidad. Se determinó la estabilidad de las muestras en tres niveles de

concentración (153,28; 383,2 y 1532,8 g/mL); previo a los ensayos de estabilidad,

cada una de las muestras se analizó. Las muestras se consideran estables si el CV

entre la concentración inicial y final no es superior a un 15 %.

a) Estabilidad por ciclos de congelamiento y descongelamiento. Se determinó la

estabilidad de las muestras sometidas a ciclos de congelamiento/descongelamiento.

Las muestras se congelaron durante 24 horas a -30 ºC y luego se descongelaron por

un período de 12 horas a temperatura de 25 ºC. Los ciclos se repitieron tres veces. Las

muestras fueron estables luego de tres ciclos.

Tabla 6. Estabilidad por ciclos de congelamiento y descongelamiento.

Conc.

(ng/mL) Nº Ciclo Area ACC

Area

Metilprimidona RA Promedio Desv. Est CV (%)

0 16688 309317 0,054

1 16883 274326 0,062

153,28 2 24189 362166 0,067 0,064 0,0084 13,12

3 16075 217665 0,074

0 24445 251776 0,097

1 28311 284303 0,100

383,2 2 43083 401559 0,107 0,100 0,0054 5,45

3 16778 177008 0,095

0 125515 282553 0,444

1 135237 332742 0,406

1532,8 2 124733 341051 0,366 0,39 0,0461 11,85

3 48344 142501 0,339

34

b) Estabilidad de corta duración. Para determinar la estabilidad de las muestras

descongeladas, se mantuvieron a 25 ºC durante un período de 96 horas y luego se

analizaron, las muestras fueron estables.

Tabla 7. Validación Analítica: Estabilidad de corta duración.

Conc.


Area


153,28 0 16688 309317 0,054

96h 12486 269547 0,046 0,050 0,0054 10,76

383,2 0 24445 251776 0,097

96h 24389 247473 0,099 0,098 0,0010 1,06

1532,8 0 125515 282553 0,444

96h 126863 259684 0,489 0,466 0,0313 6,72

c) Estabilidad de larga duración. Las muestras se congelaron durante dos meses,

tiempo que transcurrió entre la primera sesión de obtención de muestras y el último

análisis de muestras, luego se descongelaron y se cuantificó la concentración de estas,

las muestras permanecieron estables.

Tabla 8. Validación Analítica: Estabilidad de larga duración.

Conc.


Area


153,28 0 16688 309317 0,0540

2 m 14605 247235 0,0591 0,057 0,0036 6,41

383,2 0 24445 251776 0,0971

2 m 25478 293995 0,0867 0,092 0,0074 8,03

1532,8 0 125515 282553 0,4442

2 m 127904 269766 0,4741 0,459 0,0212 4,61

* 2m = 2meses

35

d) Estabilidad post-preparación. De manera de determinar la estabilidad de las

muestras en el autosampler del equipo, se dejaron durante un tiempo de 12 horas en

este, las muestras permanecieron estables luego de este tiempo.

Tabla 9. Validación Analítica: Estabilidad de corta duración.

Conc.


Area


153,28 0 16688 309317 0,0540

12 h 7289 146936 0,0496 0,052 0,0031 5,93

383,2 0 24445 251776 0,0971

12 h 13249 148650 0,0891 0,093 0,0056 6,05

1532,8 0 125515 282553 0,4442

12 h 60732 161275 0,3766 0,410 0,0478 11,65

C. Características antropométricas de los voluntarios. La Tabla 10 muestra el

promedio, la desviación estándar y el coeficiente de variación para los parámetros de

edad, peso, altura y el índice de masa corporal (IMC) de los voluntarios.

36

Tabla 10. Características Antropométricas de los voluntarios.

Código

Random INICIALES Sexo

Edad

(años)

PESO

(kg)

TALLA

(cm) IMC

01 DVD M 18 71,5 175 23,34

02 VIA F 19 47,5 153 20,29

03 SNT M 24 89 185 26

04 MMS F 23 57,6 161 22,22

05 VAL F 24 77,5 169 27,13

06 AVL M 21 86,6 172 29,27

07 RSV M 25 71 170 24,57

08 CDA M 19 78 170 26,99

09 JMN F 18 57 156 23,42

10 MNP F 23 55,5 156 22,80

11 SCB M 24 64,6 170 22,35

12 CMZ M 19 76,2 175 24,98

13 KQY F 19 49 160 19,14

14 DAR F 22 57,5 153 24,56

15 BSV F 21 72 162 27,43

16 IRG F 37 62 155 25,81

17 RCD M 31 84,2 175 27,49

18 GSM M 31 73 173 24,39

19 DPF F 21 54,1 158 21,67

20 JGV M 27 80,9 169 28,32

21 LMV F 20 55,5 156 22,80

22 CVC F 21 61 165 22,40

23 EFF F 19 70 161 27,00

24 TFA F 42 75 168 26,57

PROMEDIO F/M 14/10 24 67,75 165,29 24,62

D.E. 6,09 11,99 8,52 2,63

C.V 37,10 143,91 72,73 6,92

37

D. Análisis físico-químico del producto test EXPANSIA®. Estos análisis fueron

realizados en el “Laboratorios Stein S.A”. El resultado de los análisis se muestra en el

Anexo 4. En este análisis se demostró que la formulación en estudio cumplía con las

especificaciones de la United States Pharmacopeia (USP), en cuanto a identidad,

uniformidad de contenido, valoración y test de disolución.

E. Exámenes clínicos y de laboratorio clínico. En el Anexo 5 se muestra a modo de

ejemplo un informe de laboratorio con los resultados clínicos de uno de los voluntarios

que fue seleccionado por el equipo médico para participar en este estudio. Los

resultados de los exámenes clínicos se adjuntan a la ficha clínica, la cual fue utilizada

exclusivamente por el médico del estudio (Anexo 6). Tanto los resultados de los

exámenes como la información registrada en la ficha son confidenciales. El conjunto de

antecedentes médicos fueron entregados, una vez finalizado el estudio al Director de

este proyecto, Dr. Q.F. Iván Saavedra.

F. Consentimiento informado. En el Anexo 2 se muestra la copia del consentimiento

informado entregada a cada uno de los voluntarios participantes en el estudio. Tanto

este documento como el proyecto fueron aprobados por la Comisión de Ética de

Investigación en Seres Humanos de la Facultad de Medicina de la Universidad de

Chile.

38

G. Dieta administrada a los voluntarios. La dieta fue controlada, estrictamente

estandarizada y especificada. Los alimentos administrados a cada voluntario fueron

determinados por una Nutricionista y aparecen en el Anexo 1.

H. Análisis cromatográfico de las muestras plasmáticas. Los 24 voluntarios

seleccionados para participar en el estudio, lo concluyeron satisfactoriamente. En la

Tabla Nº 11 se muestran los resultados analíticos de las concentraciones plasmáticas

de ACC por voluntario y producto, los puntos que figuran sin resultado corresponden a

muestras en las cuales se obtuvo un volumen de muestra insuficiente para el análisis.

Las concentraciones promedio de Acido carboxílico de clopidogrel y la desviación

estándar de ambos productos aparecen en la Tabla 12. A partir de estos valores se

construyeron las curvas promedio de concentraciones plasmáticas de ACC (A y B) vs

el tiempo transcurrido desde la administración del fármaco hasta las 12 horas; estos

resultados se muestran en la Figura N° 4.

39

Tabla 11. Concentraciones plasmáticas (ηg/mL) vs el tiempo (h) en 24 voluntarios sanos para A y B.

Producto A

tiempo (h) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24

0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0

0,25 109,8 158,6 2808,7 387,1 1248,7 73,2 299,0 345,8 217,7 145,7 294,0 0,0 0,0 604,6 2025,4 0,0 73,5 593,2 521,9 960,2 939,8 2372,9 1227,7 85,4

0,5 740,1 2082,9 2469,6 2910,0 2157,7 904,3 2051,5 717,2 1427,3 1155,3 - 296,0 2787,9 2299,8 1525,8 470,3 1145,0 2366,7 1713,2 2645,4 3603,8 1837,1 2141,6 2084,8

1,0 1822,9 2693,1 1136,2 2445,8 1127,5 1573,6 1806,5 1754,6 3396,7 2493,7 1820,7 1730,1 2181,6 1370,3 1074,9 2643,9 1429,4 1379,4 1953,2 1375,5 2426,5 1828,2 1535,7 1851,6

1,5 1382,0 2059,2 868,3 1743,1 730,3 1071,8 957,1 822,7 2335,4 1372,8 951,7 1444,9 904,9 836,5 686,6 1858,3 859,9 770,2 1442,5 781,7 1428,2 923,9 1008,1 1010,6

2,0 1087,0 1668,5 510,0 1109,2 694,5 782,8 679,9 553,8 1931,7 1123,1 672,3 916,4 800,1 686,1 615,5 1099,3 552,0 649,5 1255,8 668,8 1300,2 746,9 790,8 751,8

2,5 719,4 1116,3 418,7 938,2 575,7 509,9 566,1 451,9 761,8 774,9 532,4 729,0 603,6 548,4 608,3 873,7 412,5 434,8 899,7 419,2 917,6 669,6 565,3 553,2

3,0 579,4 721,0 377,1 660,3 397,5 500,5 377,9 389,1 597,2 452,9 458,4 573,9 383,1 279,5 482,1 505,8 357,7 344,9 522,4 514,0 617,0 409,0 444,6 446,7

4,0 416,4 466,5 268,1 438,4 269,8 420,3 330,3 363,5 305,4 314,6 321,0 359,1 165,2 152,0 377,6 257,5 - 241,3 386,3 335,5 369,2 211,1 239,0 218,2

6,0 292,8 351,5 192,8 371,0 196,9 281,9 229,4 293,2 275,5 179,2 219,1 228,2 126,4 114,2 124,2 145,6 242,4 255,6 196,1 191,3 226,4 178,1 113,0 -

8,0 244,0 306,4 137,8 326,0 157,1 252,5 179,0 219,4 - 150,5 186,9 149,0 106,5 67,3 114,5 100,2 115,1 116,7 140,4 130,5 223,0 107,1 76,3 141,4

12,0 141,3 212,3 94,6 236,5 116,9 176,4 137,7 140,5 88,9 95,8 110,5 105,9 42,5 0,0 69,2 50,7 88,5 69,2 99,6 71,5 128,9 94,4 26,8 67,7

40

Producto B

tiempo (h) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24

0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0

0,25 483,2 1093,7 726,8 617,3 300,0 152,4 351,8 122,7 56,5 163,5 231,5 1536,5 878,3 697,9 1574,4 179,9 641,6 752,6 835,3 550,4 140,6 655,9 154,7 77,0

0,5 2612,2 2122,2 2419,7 2847,8 2531,0 1698,1 2984,5 1491,0 806,4 2605,6 1510,4 2458,7 2787,9 2223,9 2624,3 1641,8 2635,8 2371,0 3719,8 1487,2 2156,7 1808,5 2286,0 1706,8

1,0 1666,1 2481,2 1250,8 2303,9 1945,0 1501,5 1583,4 1287,4 1795,9 - 2020,1 1316,6 1263,3 1608,6 1318,4 1829,3 1040,1 990,6 2070,6 2457,1 2470,1 1881,2 1440,0 1528,5

1,5 1002,8 2481,2 906,1 1264,3 1034,1 1187,9 913,3 567,4 1143,2 1152,7 1226,5 807,0 789,9 815,1 988,7 1488,1 549,8 773,2 1373,5 768,4 1264,8 1524,8 892,6 875,0

2,0 745,8 1702,1 646,8 713,8 859,3 794,2 736,6 381,9 975,9 909,2 759,5 571,0 569,1 611,3 800,6 789,8 432,5 520,2 1083,8 - 1260,2 742,5 673,7 522,0

2,5 714,3 1236,2 490,3 679,0 787,1 679,3 577,5 352,2 587,5 703,7 667,3 473,3 502,6 506,4 625,4 608,0 309,9 466,1 691,4 - 768,6 596,3 608,8 376,4

3,0 492,7 757,0 431,2 583,2 468,3 487,1 436,5 273,0 376,6 354,8 468,4 224,6 319,7 306,9 392,8 389,3 269,0 333,7 615,8 464,0 548,9 289,2 420,6 335,6

4,0 395,0 474,3 329,7 322,7 304,5 308,3 313,6 231,8 338,7 260,0 349,0 180,9 272,9 159,4 242,0 176,7 198,7 188,7 - 299,1 369,3 143,9 317,9 218,2

6,0 368,1 334,3 322,6 295,6 204,3 299,0 236,5 180,9 273,8 189,3 285,6 160,1 171,1 114,3 176,1 131,8 105,9 167,5 273,0 211,3 207,7 140,4 150,5 163,6

8,0 261,9 245,9 221,2 162,4 171,0 230,5 198,8 145,5 236,4 179,1 207,1 141,4 147,6 72,6 121,0 70,4 97,3 98,8 184,0 174,5 135,3 87,9 127,2 138,2

12,0 216,2 205,6 74,8 91,6 114,3 159,4 141,5 97,7 151,0 97,1 145,5 0,0 76,9 36,4 87,1 53,8 45,9 57,9 161,3 95,1 102,6 31,0 76,4 90,1

41

Tabla 12. Concentraciones promedio de ACC (ηg/mL)

Tiempo (h) Producto A Producto B

PROMEDIO D.E. PROMEDIO D.E.

0,0 0 0 0 0

0,5 645,5 781,6 540,6 429,8

1,0 1805,8 849,1 2230,7 626,6

1,5 1868,8 576,2 1697,8 449,9

2,0 1177,1 451,8 1074,6 397,8

2,5 901,9 359,3 774,0 286,3

4,0 650,0 192,2 609,0 187,9

6,0 474,7 108,9 418,3 124,6

8,0 314,2 86,5 278,1 83,2

12,0 218,5 71,3 215,1 74,3

42

A)

B)

Figura N° 4. Curvas promedio de concentración plasmática de ACC. Normal (A) y

logarítmica (B) versus tiempo.

43

I. Análisis Farmacocinético.

Los parámetros farmacocinéticos para establecer bioequivalencia son Cmáx, ABC0-12

y ABC0-∞. Así los parámetros obtenidos de cada voluntario para cada formulación,

fueron expresados en números naturales y logaritmo natural. Los resultados se

presentan como el promedio de los valores y su desviación estándar (Tabla 13).

Los parámetros farmacocinéticos correspondientes a concentración plasmática

máxima (Cmáx.) y tiempo máximo (tmáx.) se obtuvieron por inspección directa de las

curvas de concentración plasmática en el tiempo.

Otros parámetros farmacocinéticos tales como área bajo la curva de

concentraciones sanguíneas en el tiempo ABC0 – t y ABC0 - tiempo de vida media (t½)

fueron determinados a partir de los datos obtenidos de las curvas de niveles

sanguíneos de la droga en el tiempo post administración. Para ello se utilizó el

procedimiento Pkequiv del paquete estadístico STATA 10.0, el cual es independiente de

los modelos compartimentales.

Los resultados de los parámetros farmacocinéticos encontrados fueron: ABC0→∞

6.019,94 ± 1786,40 y 5.869,52 ± 1667,89 gxh/mL; ABC0→12 5.026,13 ± 1.207,37 y

4.850,25 ± 1.102,34 gxh/mL; Cmáx 2.315,34 ± 548,4 y 2.372,47 ± 493,15 g/mL, para

A y B, respectivamente.

44

Tabla 13. Parámetros farmacocinéticas ABC 0→12, ABC 0→∞, Cmáx.

A B A B A B

Vol. N°

Cmáx

(g/mL)

Cmáx

(g/mL)

ABC 0→12

(g h/mL)

ABC 0→12

(g h/mL)

ABC0→∞

(g h/mL)

ABC0→∞

(g h/mL)

Ln Ln Ln Ln Ln Ln

1 1822,86 7,50816 2612,2 7,86796 5411,52 8,59629 5969,58 8,69443 6.561,06 8,78891 8.487,57 9,04636

2 2693,12 7,89846 2481,2 7,81649 7804,01 8,96239 7990,8 8,98605 10.292,15 9,23914 10.607,43 9,26931

3 2808,67 7,94047 2419,7 7,79141 4654,1 8,44550 4945,05 8,50614 5.452,29 8,60379 5.256,65 8,56725

6 2909,98 7,97590 2847,8 7,95430 7586,26 8,93409 5670,45 8,64302 10.702,34 9,27822 6.137,41 8,72216

8 2157,68 7,67679 2531 7,83635 4405,58 8,39063 5206,35 8,55763 5.756,14 8,65802 6.388,87 8,76231

9 1573,60 7,36112 1698,1 7,43728 4972,14 8,51161 5075,76 8,53223 7.201,00 8,88197 6.618,11 8,79756

10 2051,50 7,62633 2984,5 8,00118 4849,32 8,48659 5122,16 8,54133 6.484,07 8,77710 6.789,56 8,82314

11 1754,57 7,46998 1491,0 7,30721 4458,04 8,40246 3378,27 8,12512 5.601,39 8,63077 4.338,01 8,37517

13 3396,66 8,13055 1796,0 7,49329 7428,2 8,91304 4915,81 8,50021 7.990,89 8,98606 6.395,36 8,76333

14 2493,74 7,82154 2605,6 7,86543 5155,18 8,54776 5674,76 8,64378 6.070,16 8,71114 6.532,53 8,78455

15 1820,73 7,50699 2020,1 7,61092 4400,66 8,38951 5238,77 8,56384 5.365,95 8,58783 6.548,04 8,78692

16 1730,13 7,45595 2458,7 7,80740 4525,34 8,41745 4166,19 8,33476 5.359,18 8,58657 5.953,62 8,69175

17 2787,88 7,93304 2787,9 7,93304 4361,86 8,38065 4429,78 8,39611 4.599,61 8,43373 5.027,77 8,52273

19 2299,82 7,74059 2223,9 7,70700 3447,63 8,14544 3703,14 8,21694 3.789,79 8,24006 3.892,56 8,26682

21 2025,40 7,61352 2624,3 7,87258 4311,89 8,36913 4731,85 8,46207 5.015,72 8,52033 5.490,29 8,61074

22 2643,89 7,88001 1829,3 7,51169 4715,78 8,45867 4089,87 8,31627 5.007,40 8,51867 4.449,16 8,40047

23 1429,44 7,26504 2635,8 7,87695 3679,27 8,21047 3411,36 8,13487 4.210,84 8,34542 3.738,36 8,22640

24 2366,71 7,76926 2371,0 7,77107 4159,33 8,33311 3699,77 8,21603 4.475,84 8,40645 4.024,80 8,30023

Prom. 2315,34 7,72 2372,47 7,75 5026,13 8,49822 4850,25 8,46390 6019,94 8,66637 5869,52 8,64237

DE. 548,49 0,23 493,15 0,21 1207,37 0,21774 1102,34 0,21527 1786,40 0,26724 1667,89 0,26607

45

Tabla 14. Otros parámetros farmacocinéticos. tmáx; t1/2; ke: constante de velocidad de eliminación; f: fármaco.

Fármaco A Fármaco B

Vol. N° Tmáx (h) T1/2 (h) ke (1/h) Vol. N° Tmáx (h) T1/2 (h) ke (1/h)

1 0,98 5,56 0,1247 1 0,57 8,39 0,0826

2 0,98 8,06 0,0860 2 1,50 9,13 0,0759

3 0,43 5,97 0,1160 3 0,55 2,81 0,2464

4 0,5 9,09 0,0763 4 0,57 3,70 0,1876

5 0,48 8,09 0,0857 5 0,57 7,14 0,0970

6 0,97 8,67 0,0800 6 0,57 6,78 0,1023

7 0,50 8,37 0,0828 7 0,57 8,17 0,0849

8 0,95 5,69 0,1218 8 0,58 6,83 0,1016

9 0,95 4,27 0,1625 9 1,00 6,73 0,1029

10 0,95 6,56 0,1056 10 0,58 5,92 0,1170

11 0,95 5,95 0,1164 11 1,00 6,37 0,1088

12 0,95 5,66 0,1224 12 0,57 11,22 0,0618

13 0,57 3,72 0,1862 13 0,52 5,27 0,1315

14 0,57 3,40 0,2041 14 0,52 3,66 0,1893

15 0,27 6,88 0,1007 15 0,50 6,23 0,1112

16 1,02 4,00 0,1731 16 0,98 4,99 0,1389

17 1,02 4,57 0,1516 17 0,48 4,74 0,1464

18 0,57 3,42 0,2025 18 0,48 4,04 0,1716

19 1,03 6,37 0,1088 19 0,48 8,61 0,0805

20 0,58 4,34 0,1598 20 0,97 5,13 0,1351

21 0,58 7,08 0,0979 21 0,97 6,23 0,1112

22 0,43 7,34 0,0944 22 0,97 2,74 0,2532

23 0,6 2,89 0,2396 23 0,50 6,07 0,1142

24 0,58 4,76 0,1457 24 0,48 6,91 0,1003

Promedio 0,73 5,86 0,1310 Promedio 0,69 6,16 0,1272

DE. 0,25 1,83 0,0450 DE. 0,26 2,06 0,0501

CV. % 34,05 31,13 34,37 CV. % 38,46 33,38 39,3638

46

J. Análisis estadístico de las muestras. Para comparar ambos tratamientos en un

diseño cruzado y tal como sugiere la FDA, se realizo un Análisis Varianza (ANOVA),

que considera la secuencia y el periodo. En la Tabla 15, se muestra el resultado final

del análisis aplicado a los datos del estudio. Dicho análisis se realizó introduciendo en

el programa estadístico STATA V10 (pkcross), las variables: voluntario, secuencia,

período, y parámetro farmacocinético, y se analizaron, donde la variable dependiente

fue el parámetro farmacocinético (ABC, Cmáx y tmáx) y los efectos principales fueron las

variables secuencia, período y tratamiento.

Se puede observar evidencia de variabilidad interindividual y efecto secuencia

para ABC0-12 y ABC 0-∞, respectivamente. No se observó diferencia para Cmax. A nivel

intraindividual no se observaron diferencias significativas ni para efecto tratamiento y

periodo, en ninguno de los parámetros.

Tabla 15. Análisis de varianza para los parámetros farmacocinéticos.

Fuente de Variación LN Cmax (p-value)

LN ABC 0-12 ( p-value)

LN ABC 0-i ( p-value)

Interindividual

Efecto Secuencia

Error interindividual

0.5424 0.3877

0.0315 0.0002

0.0026 0.0006 Intraindividual

Efecto Tratamiento

Efecto Periodo

0.6433 0.9375

0.3136 0.9151

0.5620 0.9168

47

K. Evaluación de Bioequivalencia. La Tabla 16 muestra los intervalos de confianza

al 90% para Cmáx, ABC0-12, ABC0-∞ y tmáx.

Se puede observar que los parámetros logarítmicamente transformados Cmax,

ABC 0-12 y ABC 0-i en un 100% son bioequivalentes con el test clásico de los

intervalos, es decir con una probabilidad de un 100% están dentro de los rangos

establecidos por la FDA para establecer bioequivalencia.

Tabla 16. Test de Bioequivalencia, referencia (A) vs prueba (B)

INTERVALOS DE BIOEQUIVALENCIA CLÁSICOS

N=24

Límites de

Test Límites

Probabilidad

Equivalencia Bioequivalencia (%)

LnCmax

Diferencia -1.544 1.544 -0.079 0.138

Razón 80% 125% 98,977% 101,793% 100%

LnABC 0-12

Diferencia -1.700 1.700 -0.091 0.023

Razón 80% 125% 98,924% 100,269% 100%

LnABC 0-i

Diferencia -1.733 1.733 -0.094 0.046

Razón 80% 125% 98,915% 100,531% 100%

48

La Tabla 17 muestra el análisis estadístico utilizando el método de Schuirmann.

Este método indica los valores inferiores y superiores para la hipótesis nula. Los

resultados muestran Además que el Two one side test (Test de Schuirmann) fue

estadísticamente significativo para todos los parámetros (p<0.001), cumpliendo los

requerimientos para bioequivalencia.

Tabla 17. Prueba de dos hipótesis de Schuirmann para los parámetros

farmacocinéticos.

SCHUIRMANN'S TEST

Two One Side Test p-value

LnCmax

Límite superior -23.916 <0.001

Límite inferior 24.855 <0.001

LnABC 0-12



LnABC 0-i



Ambas metodologías cumplen con los requisitos de la FDA de EEUU para probar

bioequivalencia, cuyas regulaciones establecen que para ABC0-12, ABC0-∞ y Cmáx los

intervalos de confianza deben estar dentro de los límites de 80 % a 125 % para la

razón test/referencia y además de lo anterior la hipótesis nula planteada se debe

rechazar.

49

L. Encuesta de reacciones Adversas. La encuesta fue realizada por el Médico y

estuvo orientada a detectar los efectos adversos. Se presentó un episodio adverso

relacionado con el sistema gastrointestinal (deposiciones disgregadas no liquidas). Se

presentó un caso de lipotimia post extracción sanguínea. Todas estas reacciones

adversas fueron leves y tratadas no farmacológicamente con reposo y observación

(Anexo 3).

IV. DISCUSION

Para realizar un estudio clínico de biodisponibilidad relativa y establecer

bioequivalencia entre productos farmacéuticos provenientes de diferentes fuentes de

fabricación, es necesario contar con un buen equipo multidisciplinario, acceso a

voluntarios sanos, a Comité de Ética y tener un laboratorio analítico de excelencia con

métodos de análisis validados; el presente estudio contó con esas condiciones.

La magnitud de la absorción de un principio activo contenido en una forma

farmacéutica se ve reflejada en el valor de los parámetros de área bajo la curva de

concentraciones plasmáticas respecto al tiempo post administración (ABC). En el

presente estudio, se analizó el ABC entre cero y 12 horas (0 a t) y entre cero y tiempo

infinito (0 a ∞); a saber, (ABC0→t) y (ABC0→∞). Dicho en otras palabras, a ese tiempo

se tienen mediciones confiables de la biodisponibilidad de la droga. El parámetro que

mejor refleja la velocidad de absorción es la constante de absorción Ke; sin embargo,

es útil también la Cmáx y el Tmáx.

Los valores de velocidad de eliminación (Kel) promedios encontrados de 0,131

± 0,045 y 0,127 ± 0,050 µg/hr, para A y B, respectivamente y los tiempos de vida

media de eliminación (t1/2β) obtenidos de 5,86 + 1,83 y 6,16 + 2,06 hr, para A y B,

respectivamente demuestran gran similitud entre ambos productos.

50

Ambas formulaciones presentaron un comportamiento farmacocinético

bastante similar. Los resultados de los parámetros de bioequivalencia así lo

demuestran: ABC0→∞ 6.019,94 ± 1786,40 y 5.869,52 ± 1667,89 gxh/mL; ABC0→12

5.026,13 ± 1.207,37 y 4.850,25 ± 1.102,34 gxh/mL; Cmáx 2.315,34 ± 548,4 y 2.372,47

± 493,15 g/mL, para A y B, respectivamente.

También se demuestra esta similitud en el intervalo de confianza al 90 % para

la relación B/A LN transformado fue ABC0→∞ 98,92 a 100,53%; ABC0→12 98,92 a

100,27% y Cmáx 98,98 a 101,79%.

El valor promedio de Tmáx, es decir, tiempo en que se alcanza la concentración

máxima, aunque no constituye un parámetro farmacocinético que se utilice para

establecer bioequivalencia, es un parámetro importante de evaluar. En este estudio los

valores obtenidos fueron de 0,73 + 0,25 y 0,69 + 0,26 en números corrientes para A y

B demostrando una pequeña diferencia. En conclusión, el comportamiento

farmacocinético (biodisponibilidad) de ambas formulaciones es muy similar.

El test de Bioequivalencia mostró que todos los intervalos de confianza al 90%

de los parámetros farmacocinéticos que se utilizan para establecer bioequivalencia

(Cmax, ABC 0→t y ABC 0→∞) se encuentran dentro de los rangos del 80 al 125% (0,8 a

1,25) y el test de hipótesis “two one-side” (TOST) basado en Schuirman, concluye que

ambas formulaciones son bioequivalentes.

51

V. CONCLUSION

1. Se realizó sin mayores dificultades, un estudio de BD/BE de clopidogrel entre

dos formulaciones farmacéuticas en voluntarios sanos, siguiendo las

recomendaciones de la FDA y del Comité de Ética para estudios en humanos

de la Facultad de Medicina de la Universidad de Chile

2. El estudio fue completado en forma satisfactoria por 24 voluntarios (as) sanos

(as).

3. Se dispuso de una metodología analítica sensible, reproducible, precisa y

exacta, técnica validada en el laboratorio, que concuerda con los

requerimientos bioanalíticos de la FDA para este tipo de estudios.

4. Los promedios de los parámetros farmacocinéticos obtenidos para ambas

formulaciones; a saber: Cmax, ABC0

12 y ABC0

∞, no mostraron diferencias

estadísticamente significativas.

5. En términos de cantidad de droga absorbida y velocidad de absorción, el

principio activo se absorbe por el organismo a velocidad y magnitud similar

desde ambas formulaciones.

6. Los resultados de los parámetros farmacocinéticos concuerdan con aquellos

descritos en la literatura científica.

52

7. De acuerdo a estos resultados obtenidos se concluye que las formulaciones

farmacéuticas diseñadas para ambos productos no muestran diferencias

estadísticamente significativas en los parámetros farmacocinéticos obtenidos de

las curvas de concentración en el tiempo y, estos se ubican en el rango de

similitud de 80 a 125%, fijado por la FDA. Según los criterios establecidos para

este tipo de estudios y a la luz de los resultados, se concluye que EXPANSIA®,

comprimidos de 75 mg de Clopidogrel de Laboratorio Stein, B (test), es un

genérico bioequivalente e intercambiable con PLAVIX®, comprimidos de 75 mg

de Clopidogrel de Sanofi-Aventis A (referencia).

53

VI. REFERENCIAS

1. Gerschutz G., Bhatt D. The Cure trial: Using clopidogrel in acute coronary

syndromes without ST-segment elevation. Cleveland Clinic Journal of Medicine

69(5): 377. 2002

2. Mehta SR, Yusuf S, Peters RJ, Bertrand ME, Lewis BS, Natarajan MK,

Malmberg K, Rupprecht H, Zhao F, Chrolavicius S, Copland I, Fox KA;

Clopidogrel in Unstable angina to prevent Recurrent Events trial (Cure)

Investigators.Effects of pretreatment with clopidogrel and aspirin followed by

long-term therapy in patients undergoing percutaneous coronary intervention:

the Pci-Cure study. Lancet; 358(9281):527-33. 2001

3. Beitelshees A. And McLeod H. Clopidogrel pharmacogenetics: promising step

toward patient care. Am Heart Assoc 1681-1683. 2006.

4. Fitzgerald D and Maree A. Aspirin and Clopidogrel Resistance. American

Society of Hematology, 114 – 120. 2007

5. Pereillo JM, Maftouh M; Structure and Stereochemistry of the Active Metabolite

of Clopidogrel. The American Society for Pharmacology and Experimental

Therapeutics.Vol. 30:1288 – 1295. 2002

6. Saavedra, I.; “Conceptos de farmacodinamia y farmacocinética en la

perspectiva clínica”. En, Rosselot, E. & Biagini, L. (eds.) Farmacología Clínica

en Medicina Interna. Series Clínicas Sociedad Médica de Santiago, Editorial

Mediterráneo, Vol. VII (1): 15 – 20. 1988

7. Saavedra, I. Saldaña, A. Ruminot, C. Medicamentos Genéricos. Cuadernos

Médicos Sociales. 46 (3): 205 – 211. 2006.

54

8. Multisource (Generic) Pharmaceuticals Products: Guidelines On Registration

Requirements to Establish Interchangeability, WHO Expert Committee On

Specifications for Pharmaceutical Preparations, Thirty Four Report (WHO

Technical Report Series, Nº 863), Geneva, 1996.

9. Midha K, Rawson MJ, and Hubbard J. The Role of Metabolites in

Bioequivalence. Pharmaceutical Research, Vol.21 , No.8, August2004

10. Declaración de Helsinki. Recomendaciones para guiar a los médicos en la

investigación biomédica en seres humanos, hecha por la Asociación Médica

Mundial en la Asamblea del Helsinki, Finlandia, en 1964. En Ética Médica

normas y documentos. Colegio Médico de Chile AG. Graphos Comunicaciones

Ltda.; 91-95. 1986

11. Guidance for Industry. “E6 Good Clinical Practice: consolidate guidance” US.

Department of Health and Human Services, FDA, Center for Drug Evaluation

and Research, April 1996. ICH.

12. Bahrami G. et al. High-performance liquid chromatographic determination of

inactive carboxylic acid metabolite of Clopidogrel in human serum: Aplication to

a bioequivalence stuy. J. Chromatogr. B 864 168-172. (2008)

13. Guidance for Industry. “Bioanalytical method validation” US. Department of

Health and Human Services, FDA, Center for Drug Evaluation and Research,

May 2001.

14. STATA Corporation intercooler for Windows, college station, TX V10, 2007

15. Guidance for industry. “BA and BE Studies for Orally Administered Drug

Products-General Considerations” Draft Guidance, US. Department of Health

and Human Services, FDA, Center for Drug Evaluation and Research, 1999.

55

16. Code of Federal Regulations. Título 21, part. 320. “Bioavailability and

bioequivalence Requirements” Washington, 1998.

17. Guidance for Industry Statistical Approaches to Establishing Bioequivalence

U.S. Department of Health and Human Services Food and Drug Administration

Center for Drug Evaluation and Research (CDER) January 2001

18. Rani S and Pargal A. Bioequivalence: An overview of statistical concepts.

Indian J Pharmacol, vol 36, Issue 4, pag 209-216. 2004.

19. Schuirman, DJ. A comparison of the two on –sided tests procedure and the

power Approach for assessing the bioequivalence of average bioavailability J.

Pharmacokinetics Biopharm, 15: 657 – 80. 1987.

56

ANEXOS Anexo 1: Dieta proporcionada a los voluntarios durante el estudio.

Anexo 2: Aprobación ética de la comisión de bioética de la Facultad de Medicina de la

Universidad de Chile y Consentimiento Informado.

Anexo 3: Informe de reacciones adversas

Anexo 4: Informe del análisis físico-químico del producto EXPANSIA®.

Anexo 5: Exámenes realizados a uno de los voluntarios.

Anexo 6: Ficha clínica de estudio de Biodisponibilidad relativa de clopidogrel.

UNIVERSIDAD DE...

Documents

Transcript of UNIVERSIDAD DE...