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TECNICAS INMUNODIAGNOSTICAS

�se basan en Interacción Ag-Ac.

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PRUEBAS INMUNIDAGNOSTICAS

AGLUTINACIÓN: Ag.particulado-Ac.1) Rosa bengala-brucella (Ag.particulado)

2) LATEX (Lo hacemos particulado)QH

3) Hemaglutinación/Inhibición hemaglutinación (eritrocito(=1)/unido a eritrocito(=2)

PRECIPITACION(Ag.soluble)1) AGID 2) Inmunodifusión Radial 3) Inmunoelectroforesis

INMUNOMARCADOS1) Fluoresceina (IFD/IFI)

2) Enzimas (ELISA/DOT/WESTERN)/INMUNHISTOQUIMICA

3) Radio actividad (RIA)

SERONEUTRALIZACIONIn vitro(cc)/In vivo(SN)

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PRUEBAS INMUNO-DIAGNÓSTICAS

� UNIÓN PRIMARIA

� UNIÓN SECUNDARIA

ACs-MARCADOS

FERRITINA, ORO COLOIDAL

ENZIMATICASFLUORESCENCIA

PRECIPITACIÓN AGLUTINACIÓN NEUTRALIZACIÓN

FIJACIÓN de COMPLEMENTO

(luego de unión Ag-Ac hay):

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PRUEBAS INMUNIDAGNOSTICAS

1. AGID (IDGA)

2. Inmunodifusión Radial (Ac o Ag disuelto en Agar)

3. Inmunoelectroforesis

PRECIPITACION (Ag.soluble)

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Tanto para las técnicas de PRECIPITACION como de AGLUTINACION Ags y Acs deben estar en cantidades equilibradas

Exceso AgsExceso Acs

Prozona

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Precipitación (principio)

Los anticuerpos son bivalentes (unen dos epitopos a la vez), los antígenos complejos son multivalentes (poseen muchos epitopos).

Cuando se forman grandes complejos estos se hacen insolubles y precipitan.

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IDGA (AGID)

� Los Ag y Ac colocados en una placa de gel de agar

� difunden radialmente

� en la zona de equilibrio se produce una banda de precipitación.

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PRECIPITACION(Ag.soluble)

Inmuno Difusión en Gel Agar (AGID)

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IDGA

Zona de equilibrio (banda de

precipitación)

AcAg

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IDGA

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Inmunodifusión radial

1 mg.

2 mg.5 mg.

10 mg.

50 mg.

muestra

El área de este anillo tendrá relación directa con la [Ag] o [Ac].

1. Se incorpora al agar Ac 2. Una vez solidificado se perforan hoyos

3. se coloca Ag 4. Se colocan estandares de conc. Ag conocida

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PRECIPITACION(Ag.soluble)

INMONOELECTROFORESIS

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AGLUTINACIÓN

Reacción producida por la unión de los Accon un Ag particulado o insoluble

�Aglutinación (Ag.particulado) Rosa bengala-brucella

� HemaglutinaciónAg parte del eritrocito (grupos sanguineos)

algunos virus tiene epitopes hemoaglutinantes� Inhibición hemaglutinación =

Acs. inhiben los epitopes hemoaglutinantes o del eritrocitoy hematies no aglutinan

� LATEX (Lo hacemos particulado) QH

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Tanto para las técnicas de PRECIPITACION como de AGLUTINACION Ags y Acs deben estar en cantidades equilibradas

Exceso AgsExceso Acs

Prozona

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Aglutinación pasiva (Brucella)

Brucella

+ colorante

Suero problema Aglutinación

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Rosa bengala-brucella (Ag.particulado)

AgSuero

Control Neg

Control Pos

Ag

Mezclar

Brucella + colorante rosado

Muestra con Ac anti-brucella Muestra SIN

Ac anti-brucella

Aglutinación pasiva

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HEMO-AGLUTINACIÓNEritrocito es el Ag.particulado

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Hemoaglutinación

El Ag soluble se puede unir químicamente a eritrocitos y (haciendo un Ag. Soluble particulado)

Suero problema

Eritrocitos con Ag pegado Hemoaglutinación

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Hemoaglutinación viralAlgunos virus son capaces de aglutinar eritrocitos de mamíferos o aves, y esto puede utilizarse para caracterizar un virus desconocido, o medir [Ac] en suero.

Ejemplos : Orthomyxovirus

Paramyxovirus

Parvovirus

Coronavirus

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Hemoaglutinación y su Inhibición

Eritrocitos

Inhibición deHemoaglutinación (IHA)

Suero problema

Virus Hemoaglutinante

Hemoaglutinación (HA)

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Hemoaglutinación

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LATEX = Esferas de poliestirenoel Ag de QH (que es soluble) lo hacemos particulado,

Uniendo el Ag a las esferas de Latex

Ag

SueroMezclar

Control Neg

Control Pos

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PRUEBAS INMUNO-MARCADAS

� FLUORESCEINA InmunoFluorescencia

ELISA

RIA

� Enzimas

� Isotopos radioactivos

DOT

WESTERN-BLOT

IHQ = InmunoHistoQuimica

(Inmunoenzimaticas)

(Acs marcados)

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PRUEBAS INMUNO-MARCADAS

�Fluoresceina

InmunoFluorescencia Directa (IFD)

Ag + Acs (específico)-FICT

IFI = Ag + Acs (específico) + anti-Ig-FICT

Conjugado fluorescente

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INMUNOENZIMATICAInmunoFluorescencia Directa (IFD)

Fluoresceina

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Inmunofluorescencia

Negativo Positivo

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Inmunofluorescencia

Ventajas

� Permite identificar Agespecíficos de patógenos en tejidos, cultivos de células y secreciones (IFD o IFI).

� Permite identificar Acespecíficos en suero (IFI).

Desventajas

� Se debe utilizar microscopio UV.

� Personal capacitado.

� Infraestructura necesaria.

� Fundamentalmente cualitativa