Prof. Encargado.  Presentado por:
Asistente técnico  C.I: 22-998-942
 
resto que le acompañan.
Agar XLD: agar más nutrientes, usado para cultivar microorganismos o pequeñas
plantas como la briofita Physcomitrella patens.
Cultivos puros: contienen un solo tipo de microorganismo, obtenidas de colonias
aisladas por resiembras (pase de un medio de cultivo a otro).
Pipeta: instrumento de laboratorio que se utiliza para medir o transvasar
pequeñas cantidades de líquido. (Suelen ser de vidrio).
Placa de Petri:  recipiente redondo de cristal o plástico con una cubierta de la
misma forma pero algo más grande de diámetro, para poder cerrar el recipiente.
Siembra para aislamiento: se utiliza parar obtener cultivos puros en placas de
petri, que contienen medios de cultivos sólidos.
Siembra para inoculación: consiste en tomar una pequeña porción de la muestra
y diluirla para dispersarla y que crezca con más facilidad en el medio de cultivo
(líquido o solido).
GENERAL: 
  Aislar Bacterias puras del tracto bucal, utilizando caldos y agar lactobacilos.
  Aislar Bacterias puras de aguas residuales, utilizando caldos y agar lauril
sulfato.
selenito cistina y agar XLD.
  Determinar el número más probable de bacterias residuales a partir de los
tubos múltiples.
experiencias anteriores, utilizando agar inclinado TSI (hierro tres azucares).
 
MATERIALES Y MÉTODOS
Practica 1.- Aislamiento de bacterias puras del tracto bucal, utilizando caldos y
agar lactobacilo.
Se realizó un cepillado bucal y se introdujo el cepillo en una suspensión de
buffer fosfato salino, agitando por aproximadamente de 2 a 4 minutos inoculando
un mililitro, usando una pipeta de 2 ml en medios de cultivo con caldo lactobacilo y
se encubó a 37ºC por 24 horas.
Posteriormente, se realizó un estriado en placas de Petri con agar lactobacilo y
encubados a 37 °C por 24 horas, luego de ello se seleccionaron tres colonias las
cuales fueron sembradas con un aza metálica estéril en tubos de ensayos con
caldo lactobacilos e encubados a 37 °C por 24 horas, este procedimiento se
realizó varias veces hasta obtener colonias puras.
Finalmente estos fueron sembrados por punción y estriado utilizando una aguja
metálica estéril en tubos de ensayo con agar inclinado TSI (hierro tres fosfato) e
encubado a 37° C. Identificando bioquímicamente las colonias sembradas y
comparadas con la bibliografía correspondiente (Ver figura 1).
 
 
.
Figura 1.- Procedimiento de aislamiento de bacterias puras a partir de muestras
bucales. 
Aza metaliza estéril se
Pruebas Bio uímicas con a ar inclinado TSI
Agar lactobacilos
Agar lactobacilos
Caldo lactobacilos
Caldo lactobacilos
 
Practica 2.- Aislamiento de bacterias puras de aguas tratadas, utilizando caldos y
agar lauril sulfato.
 A partir de muestras de aguas tratadas se extrajo un mililitro con una propipeta,
y se añadió en 50 ml de caldo lauril sulfato, contenidos en una fiola, esta se
encubo a 37 °C por 24 horas. Pasado el tiempo correspondiente se produjo un
cultivo polimicrobiano, del cual se tomó una muestra con un aza metálica
previamente estéril y se realizó un estriado en una placa de Petri con agar lauril
sulfato, encubado por 37 °C por 24 horas.
Pasadas las 24 horas se observaron los resultados y se seleccionaron 3
colonias diferentes, cada una de ellas fueron aisladas con una aguja metálica
previamente estéril en tubos de ensayos con caldo lauril sulfato e incubadas a 37
°C por 24 horas. Seguidamente los tres tubos con colonias fueron resembrados
por estriado en placas de Petri con agar lauril sulfato, encubándolas a 37 °C por
24 horas, este procedimiento se repitió varias veces hasta obtener colonias puras.
Una vez puras las colonias seleccionadas al inicio, fueron sembradas con una
aguja estéril por punción y estriado en tubos de ensayos con agar inclinado hierro
tres azucares (TSI), e incubados a 37 °C por 24 horas. Identificando
bioquímicamente las colonias sembradas y comparadas con la bibliografía
correspondiente (Ver figura 2).
 
 
Figura 2.- Procedimiento de aislamiento de bacterias puras de aguas residuales,
utilizando caldos y agar lauril sulfato.
Caldo Lauril
Aza metaliza estéril se
Pruebas Bio uímicas con a ar inclinado TSI
Agar Lauril
 
Practica 3.- Determinación de baterías puras a partir de estriado de Agar XLD.
 A partir de aguas residuales se tomó una muestra con una propipeta de 5 ml
los cuales se añadieron en 50 ml de caldo enriquecido de selenito cistina y se
incubo a 37 °C por 24 horas, pasado el tiempo correspondiente se tomó una
muestra con una aza metálica estéril y se realizó un estriado en una placa de Petri
con agar XLD, encubados a 37 °C por 24 horas.
Se tomaron dos muestras de colonias puras, resultado del estriado en las
placas de Petri con agar XLD, y se sembró por punción y estriado en cada tubo de
ensayo con agar inclinado hierro tres azucares (TSI), utilizando una aguja metálica
previamente estéril, y se encubo por 37° C por 24 horas. Determinando el género
 
 
Figura 3.- Procedimiento de aislamiento de bacterias puras de aguas residuales,
utilizando agar XLD.
Agar XLD
C1 C2
 
Practica 4.- Determinación del número más probable de bacterias de aguas
residuales, a partir de los Coliformes totales y fecales con tubos múltiples.
 A partir de agua residual de efluente de una planta de tratamiento, se procedió
a tomar con una propipeta 10 ml de muestra y se añadieron en tres tubos de
ensayo con 10 ml de caldo bilis verde brillante (50% de muestra), de igual forma
se añadieron 1 ml en tres tubos de ensayos con 10 ml de caldo bilis verde brillante
(10 % de muestra); por último, se tomó 1 ml de la muestra y se diluyo en 9 ml de
buffer fosfato salino contenidos en un tubo de ensayo, y de este se extrajo 1 ml y
se añadió en otros tres tubos de ensayos con caldo bilis verde brillante (0.1 % de
la muestra), todos los tubos fueron encubados a 37 °C por 24 horas, pasado el
tiempo correspondiente los tubos que resultaron positivos para Coliformes totales
fueron resembrados utilizando un aza metálica estéril e incubados a 44 °C (baño
de maría) por 24 horas determinando el crecimiento de Coliformes fecales (ver
figura 4).
Se determinó el número más probables (NMP/100 ml) comparando los tubos
que dieron positivos a diferentes concentraciones (10 ml, 1 ml y 0,1 ml) con las
referencias aportadas por el profesor de la materia.
 
 
Figura 4.-  Procedimiento de la determinación del número más probable de
bacterias de aguas residuales, a partir de tubos múltiples.
Efluente de
Aguas tratadas
Encuban a
10 ml 10 ml 10 ml
9 ml
1 ml
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
 Aislamiento de bacterias puras del tracto bucal, utilizando caldos y agar
lactobacilo.
Figura 5.- Colonias puras en agar lactobacilo.
En la figura 5 se nota la presencia de colonias de color blanco que
posiblemente pueden ser Lactobacilos  casei , Lactobacilos leichmannii ,
Lactobacilos plantarum  o Enterococcus faecalis  según The Himedia manual
(1998).
 
 Aislamiento de bacterias puras de aguas tratadas, utilizando caldos y agar lauril
sulfato.
Figura 6.- Colonias estriadas en agar Lauril sulfato.
En la figura 6, se nota la presencia el crecimiento de colonias de una variedad
de bacterias de las cuales se seleccionaron tres (3): C1: colonia con forma de
nube, color azul con una tonalidad verdosa; C2: colonia circular, color blanquecina
y muy grumosa y C3: colonia en forma de cotufa blanquecina con los bordes
transparentes muy grumosa.
 
 
Figura 7.- Tubos de ensayo con crecimiento de bacterias en caldo Lauril sulfato.
En la figura 7 se observó cambio de coloración comparado con el tubo control,
de igual forma se nota la presencia de gas, lo cual indico digestión bacteriana, con
depósitos de sedimento en el fondo comparando estos resultados con The
Himedia manual (1998), que posiblemente podrían ser Enterobacter aerogenes,
Escherichia Coli , Salmonella typhimuriun, Staphylococcus aureus o Enterococcus
faecalis.
 
Determinación de baterías puras a partir de estriado de Agar XLD.
Figura 8.- Presencia de colonias puras en placa de agar XLD.
En la figura 8, Se obtuvo como resultado la observación del crecimiento de
colonias de color amarillo las cuales son posibles Proteus vulgaris, Proteus
mirabilis  y la presencia de colonias rojas las cuales posiblemente sean Salmonella
 parahyphy a, Salmonella parahyphi b, Shiguella sonnei   o Shiguella dysenteriae 
según The Himedia manual (1998).
 
Prueba bioquímica con agar inclinado TSI (hierro tres azucares):
Figura 9.- Prueba bioquímica en agar inclinado TSI con muestras de agar
Lactobacilo y agar Lauril sulfato.
En la figura 9, en la colonia 1 (C1) se nota la presencia de oxígeno y
producción de sulfuro de hidrogeno, en la C2 y C3 se nota la formación de sulfuro
de hidrogeno, esto indica que la glucosa en fermentado con producción de sulfuro
de hidrogeno según Infante (2011), por otra parte, en el Manual de Difco (1984) y
The Himedia manual (1998) posiblemente sean las colonias de Proteus vulgaris o
Salmonella enteritidis. 
 
 
Figura 10.- Prueba bioquímica en agar inclinado TSI, con muestras de agar XLD.
En la figura 10 se nota en C1, la presencia de gas y cambios de coloración a
amarillo en comparación con el control, indicando una fermentación de la glucosa,
lactosa y/o sacarosa (Infante, 2011), mientras que en C2 se nota la presencia de
gas, formación de sulfuro de hidrogeno, y cambio de coloración a negro lo que
indica glucosa fermentada con producción de sulfuro de hidrogeno y gas (Infante,
2011). En comparación con The Himedia manual (1998), indica que posiblemente
puedan ser C1: Escherichia coli  y C2: Salmonella typhimurium. 
C1 C2
 
Determinación del número más probable de bacterias de aguas residuales, a partir
de los coliformes totales y fecales con tubos múltiples.
Tabla 1.- Número más probable bacterias de aguas tratadas a temperaturas de 37
°C y 44°C.
ml Coliformes
37°C 3/3 3/3 3/3 >1100 Totales
44°C 3/3 3/3 3/3 >1100 Fecales
En la tabla 1, se nota el crecimiento de coliformes totales a temperaturas de
37ºC, en las concentraciones de 10ml (50%), 1ml (10%) y 0,1ml (0,1%)
respectivamente de igual forma a 44ºC se presentó el crecimiento de coliformes
 
CONCLUSIÓN.
En conclusión puedo agregar que en el tracto bucal las placas de agar lactobacilo
obtuvo presencia de bacterias que posiblemente sean Lactobacilos  casei,
Lactobacilos leichmannii, Lactobacilos plantarum o Enterococcus faecalis según
The Himedia manual (1998).
En las bacterias puras de aguas tratadas, utilizando caldos y agar lauril sulfato
crecimiento de colonias de una variedad de bacterias .Tubos de ensayo con
crecimiento de bacterias en caldo Lauril sulfato se observó presencia de gas, lo
cual indico digestión bacteriana, con depósitos de sedimento en el fondo
comparando estos resultados con The Himedia manual (1998), que posiblemente
podrían ser Enterobacter aerogenes, Escherichia Coli, Salmonella Typhimuriun,
Staphylococcus aureus o Enterococcus faecalis.
En las placas de agar XLD resultado la observación del crecimiento de colonias de
color amarillo las cuales son posibles Proteus vulgaris, Proteus mirabilis y la
presencia de colonias rojas las cuales posiblemente sean Salmonella parahyphy a,
Salmonella parahyphi b, Shiguella sonnei o Shiguella dysenteriae según The
Himedia manual (1998).
En las prueba bioquímicas todas resultaron + y en el cuadro comparativo el
 
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS.
Clavell Luis A., Pedrique de Aulacio Magaly. (1999). Microbiología manual de
métodos generales. Primera reimpresión revisada. Facultad de Farmacia.
Universidad Central de Venezuela, Caracas.
Consulta en línea: http://www.pomif.com/pages/.../  aislamientos. Consulta 02/12/2013.
Manacorda, Cuadros y Álvarez. (2007). Manual práctico de microbiología - tomo
II: microbiología ambiental ii. Capítulo 3. Técnica de fermentación en tubo
múltiple (NMP) para miembros del grupo de los coliformes: colimetría.
Manual difco. (1984), Medios de cultivos deshidratados y reactivos para la
microbiología décima edición Detroit michigan. Usa.
Sasson, Albert (1984). Las biotecnologías: desafíos y promesas Investigaciones Biológicas. La Habana.
The HiMedia Manual for Microbiology Laboratory Practice. (1998).editorial
HiMedia. 524pp.
Consulta: 02/12/2013
Wikipedia® Fundación Wikimedia, Inc.,  una organización sin ánimo de lucro
.http://es.wikipedia.org/wiki/Tubo_de_ensayo . Consulta 02/12/2013.