Técnica histológica

UNIVERSIDAD DE LOS ANDESFACULTAD DE ODONTOLOGÍA

UNIDAD CURRICULAR MORFOLOGÍA

PREPARACIÓN DE LOS TEJIDOS PARA MICROSCOPÍA

ÓPTICA

TÉCNICA HISTOLÓGICA

Eduvigis SolórzanoEduvigis SolórzanoProf. AgregadoProf. Agregado


El conjunto de métodos que se utilizan para poner de manifiesto las estructuras celulares por medio del microscopio óptico. Incluye:

* La conservación del aspecto de las estructuras en el organismo.

* La coloración que permite contrastar los elementos tisulares.

El conjunto de métodos que se utilizan para poner de manifiesto las estructuras celulares por medio del microscopio óptico. Incluye:

* La conservación del aspecto de las estructuras en el organismo.

* La coloración que permite contrastar los elementos tisulares.

La Técnica Histológica:


Pasos a seguir:

1. Obtención de la Muestra

2. Fijación

3. Deshidratación

4. Aclaración

5. Inclusión y Corte

6. Coloración y Montaje

7. Observación


1. Obtención de la muestra:

Tejido Humano

Biopsia

Autopsia

OJO!!OJO!!InmediatamenInmediatamente después de te después de

la muertela muerte

OJO!!OJO!!InmediatamenInmediatamente después de te después de

la muertela muerte



Tejido Animal

Sobreanestesia

Inyección intraperiton

eal


Tejido Animal


2. Fijación:

Procedimiento mediante el cual se interrumpen todas las modificaciones que sobrevienen con la muerte (cambios post-morten), manteniendo las estructuras celulares lo más parecido a sus características in vivo.

Procedimiento mediante el cual se interrumpen todas las modificaciones que sobrevienen con la muerte (cambios post-morten), manteniendo las estructuras celulares lo más parecido a sus características in vivo.

FIJADORESFIJADORES•Coagulan las proteínas, formado enlaces cruzados entre sus moléculas.• Inactivan enzimas

•Coagulan las proteínas, formado enlaces cruzados entre sus moléculas.• Inactivan enzimas


2. Fijación:

¿Cuales son las ¿Cuales son las características características

de un buen de un buen fijador?fijador?

•Conservar la materia orgánica•Prevenir cambios post-mortem•Bacteriostático, bactericida•Producir fuerza mecánica en el tejido•Alto poder de penetración

•Aumentar la afinidad por los colorantes


2. Fijación:

Fijadores Físicos

•Desecación•Calor seco•Calor Humedo •Frio•Freeze-Drying

•Desecación•Calor seco•Calor Humedo •Frio•Freeze-Drying

Fijadores Químicos

•Simples:

Formol al 10 %

•Compuesto:

Solución de Bouin

•Simples:

Formol al 10 %

•Compuesto:

Solución de Bouin


2. Fijación:

Métodos de Fijación más comunes

Métodos de Fijación más comunes

Perfusión

Inmersión

Sólo animales de experimentación

Sólo animales de experimentación

Más de 24 horasMás de 24 horas


3. Deshidratación:

Proceso mediante el cual se preparan los tejidos, fijados químicamente, para su infiltración en un medio de inclusión, sustituyendo el agua tisular con un solvente orgánico.

Proceso mediante el cual se preparan los tejidos, fijados químicamente, para su infiltración en un medio de inclusión, sustituyendo el agua tisular con un solvente orgánico.

Alcohol

Solvente orgánico de preferencia


3. Deshidratación:

Soluciones acusas de alcohol en concentraciones crecientes hasta el alcohol absoluto Batería de

Deshidratación

Soluciones acusas de alcohol en concentraciones crecientes hasta el alcohol absoluto Batería de

Deshidratación

AlcoholesAlcoholes N°de BañosN°de Baños TiempoTiempo

Alcohol 70%Alcohol 70% 22 11 h. C/ uno h. C/ uno

Alcohol 90 %Alcohol 90 % 22 2 h. C/uno2 h. C/uno

Alcohol 96 %Alcohol 96 % 22 2 horas2 horasToda la nocheToda la noche

Alcohol 100%Alcohol 100% 22 1 h. C/uno1 h. C/uno


4. Aclaración:

Proceso mediante el cual los tejidos embebidos en sustancia anhidra (alcohol absoluto) son incluidos en una solución intermedia miscible en alcohol y en la sustancia de inclusión.

Proceso mediante el cual los tejidos embebidos en sustancia anhidra (alcohol absoluto) son incluidos en una solución intermedia miscible en alcohol y en la sustancia de inclusión.

Agentes aclarantes más utilizados

Agentes aclarantes más utilizados

•Xilol•Benzol•Licor de Hoffman


4. Aclaración:

Batería de AclaraciónBatería de Aclaración

Agente Agente AclaranteAclarante

N°de N°de BañosBaños

TiempoTiempo

Benzol IBenzol I 11 1 hora1 hora

Benzol IIBenzol II 11 1 hora1 hora

Benzol IIIBenzol III 11 1 hora1 hora


5. Inclusión y Corte:

La inclusión permite convertir las estructuras del tejido en elementos firmes con una consistencia compacta evitando, de esta manera, alteraciones tisulares durante el corte.

La inclusión permite convertir las estructuras del tejido en elementos firmes con una consistencia compacta evitando, de esta manera, alteraciones tisulares durante el corte.Sustancia de inclusión de preferencia en

Técnica Histológica

PARAFINPARAFINAA

PARAFINPARAFINAA



Punto de fusión de la parafina es ± 56°C.

Batería de Inclusión

Batería de Inclusión

Parafina Parafina II

1 hora1 hora

Parafina Parafina II II

1 hora1 hora

Parafina Parafina IIIIII

11½ hora½ hora

ESTUFA

ESTUFA



¿¿Y como se Y como se solidifica solidifica el tejido el tejido para ser para ser cortado?cortado?



Barras de LeuckartBarras de Leuckart Cestas de InclusiónCestas de Inclusión



Microtomo de Rotación

Microtomo de Rotación



Baño de Flotación Baño de Flotación

1°Montaje


6. Coloración y Montaje:

Las coloraciones histológicas se han desarrollado en función de su capacidad para teñir selectivamente los distintos componentes tisulares.

Las coloraciones histológicas se han desarrollado en función de su capacidad para teñir selectivamente los distintos componentes tisulares.

Técnica de Técnica de coloración de rutina coloración de rutina es:es: Hematoxilina – Hematoxilina –

EosinaEosina



Hematoxilina – Hematoxilina – EosinaEosina

Hematoxilina: Colorante natural, de tipo progresivo que colorea de azul a púrpura el núcleo y regiones ácidas del citoplasma

Hematoxilina: Colorante natural, de tipo progresivo que colorea de azul a púrpura el núcleo y regiones ácidas del citoplasma

Eosina: Colorante sintético, de tipo regresivo que colorea de rojo a rosado las regiones básicas del citoplasma

Eosina: Colorante sintético, de tipo regresivo que colorea de rojo a rosado las regiones básicas del citoplasma



Batería de ColoraciónBatería de Coloración

benzol Alcohol70%

Alcohol90%



Procedimiento Reactivo Tiempo

Desparafinar Benzol 1 baño de 5’

Hidratar Alcohol 90%Alcohol 70%Agua

1 baño de 5’c|u

Colorear Hematoxilina AguaEosina

1 baño de 5-15’1 baño de 20’1 baño de ½-1’

Deshidratar Alcohol 70% Alcohol 90%Alcohol 100%

1 baño de 10’c|u

Aclarar Benzol 1 baño de 20’



Montaje final

Bálsamo de Canadá + Cubreobjeto


7. Observación:


7. Observación:Fibras

Colágenas

ÓpticoÓptico

TransmisióTransmisiónn

BarridoBarrido


Métodos de Estudios del diente

Desgaste Materia Inorgánica

Desmineralización Materia Orgánica

DentinaDentina

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