Tinción Histológica

Tutora: TM Solange ZapataResidente: Dr Jorge Chamorro Ruiz

3 de Mayo del 2007

Universidad de ChileFacultad de MedicinaCurso Histopatología 2007

Técnica Histológica

Fijación Deshidratación Aclaramiento Inclusión Corte Tinción Montaje

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Tinción y Montaje

Corte Desparafinado – Rehidratación Tinción Deshidratación Montaje

Cubreobjetos: funciones Protección del tejido ↓ refracción de luz polarizada

Colorantes ¿Por qué colorear una

muestra?Los diversos elementos de los tejidos poseen prácticamente el mismo índice de refracción, lo que hace que el reconocimiento de distintas estructuras sea una tarea difícil.

Definición de Colorante

Un colorante es un cuerpo coloreado que puede comunicar su color a otro cuerpo.

La coloración es la propiedad que tienen ciertos cuerpos de ejercer una absorción selectiva sobre la luz. Dicho de otra manera un cuerpo se ve de tal color porque trasmite por transparencia o por difusión las radiaciones complementarias de las que él absorbe.

Tipos de Colorantes Colorantes que diferencian los componentes

ácidos y básicos de la célula.

Colorantes especializados que distinguen los componentes fibrosos de la matriz extracelular.

Sales metálicas que se precipitan en los tejidos y forman depósitos de metales en ellos.

Tipos de Coloraciones

Directas: se producen por inmersión en el baño colorante.

Indirectas: en este tipo de coloración, el colorante no puede actuar directamente, el objeto a colorear debe ser tratado de antemano por otra sustancia que lo prepare para admitir el colorante, esta se llama mordiente.

Fundamentos Químicos de la Coloración Clasificación colorantes según afinidad:

Colorantes nucleares o básicos: su componente colorante activo es una base coloreada que se combina con los ácidos nucleicos.

Colorantes citoplasmáticos o ácidos: su componente activo es un ácido coloreado que se combina con el citoplasma.

Colorantes neutros, tanto el ácido como la base son coloreadas.

Colorantes básicos

ANILINA+ Cl-

Los colorantes básicos reaccionan con los GRUPOS ANIÓNICOS de los componentes texturales, que son los grupos fosfato de los ácidos nucleicos (ADN y RNA), los grupos SULFATO de los glucosaminoglucanos y los GRUPOS CARBOXILO de las proteínas. La reacción de estos grupos varía según el pH.

Colorantes ácidos

Na+ ANILINA-

Los colorantes ácidos se unen primariamente a los componentes texturales por medio de enlaces electrostáticos de manera similar pero opuesta a la de los colorantes básicos. Las anilinas ácidas reaccionan con grupos catiónicos, como los grupos amino ionizados de las proteínas.

Entonces:

Elementos que se tiñan con colorantes básicos (ej. Hematoxilina) son basófilos: La Heterocromatina y los

Nucleolos por los grupos Fosfato ionizados.

Ergatoplasma por grupos Fosfato ionizados.

Matriz del Cartílago por grupos Sulfato ionizados

Elementos que se tiñan con colorantes ácidos (ej. Eosina) son acidófilos: La mayor parte del

citoplasma no especializado. Filamentos Citoplasmáticos. Fibras extracelulares. Todos

estos debidos a grupos Amino ionizados.

Metacromasia Fenómeno por el cual un colorante cambia de color

tras reaccionar con un componente textural. Se debe a que en tejidos con altas concentraciones de

POLIANIONES, la molécula del colorante se polimeriza entre si y sus propiedades de absorción son diferentes de las propiedades de las moléculas individuales.

Azul de Toluidina tiñe gránulos mastocito púrpura

Cromótropos: Glucosaminoglucanos sulfatados, nucleoproteínas, cartílago, gránulos de los mastocitos. El cristal violeta también genera metacromasia al teñir amiloide

Tinción (coloración) de cortes

Diferentes componentes celulares y tisulares poseen diferentes afinidades tintoriales.

Tinción (coloración) de cortes

Hematoxilina-EosinaTécnica de tinción más usada. Hematoxilina:

Colorante natural. Propiedades similares a las anilinas

básicas. Tiñe todas las estructuras celulares,

pero principalmente el núcleo (Histonas).

Eosina: Colorante ácido. Acción es la de una anilina ácida. Tiñe ppalmente citoplasma celular.

Cortes de pielTinciónHematoxilina-Eosina

Técnica de Tinción H/E Tinción con hematoxilina.

Lavado con abundante agua.

Aplicar Borato de Potasio.

Cambia el color generado por la hematoxilina del morado al azul.

Aumenta el contraste de color.

Técnica Tinción H/E II Diferenciación:

Eliminación selectiva del exceso de colorante. Se obtiene pasando el corte por un baño de alcohol ácido. Resalta núcleos.

Azuleamiento: La tinción queda de color rojizo se vira a azul intenso Sumerge la placa en agua corriente alcalina o carbonato de

litio al 1% en agua.

Eosina Obtenemos núcleos azules, citoplasma rosado y

colágeno y fibras musculares rosado pálido.

Cubre-objeto

Una vez teñido el tejido debe ser protegido con un cubre-objeto.

Deshidratar Medio de montaje

Limpieza de láminas

Análisis de placas

DIAGNÓSTICO80-90% bp

TÉCNICAS ESPECIALES±10% biopsias

Tinciones Especiales

Tinciones para Amiloide

H/E Rojo Congo(cortes ±30 m)

Birrefringencia

Tinciones para Amiloide

Bacterias

a y b Gram positivos:tinción azul

c Gram negativo: colonias bacterianas se tiñen rojas

d FITE: bacilos ácido resistentes

se tiñen rojo

a

b

c

d

Bacterias II

Ambas placas con tinción Ziehl NeelsenBacilos ácido resistentes se tiñen rojo brillante

Calcio

Von Kossa-Azul Toluidina

Von Kossa: depósitos de calcioSe tiñen café oscuro-negro

Colágeno I: proteína extracelular, predominante en dermis, función estructural

a y b Picrosirius: Colágeno I color amarillo-rojizo e Van Gieson: colágeno I rojo

c y d Tricromico Masson: colágeno I verde

a

c d

ebb

Colágeno III: o fibras de Reticulina, en dermis perineural, perivascular

Impregnación con Nitrato de Plata: fibras de reticulina se tiñen negras

Eosinófilos

Tinción Giemsa, eosinófilos se ven rojos

Fibras elásticas

HE Orceína ácida de Pinkus/Giemsa: fibras de coloración pardo oscura

Fibrina

ambas, Tinción de Picro-Mallory: Fibrina se tiñe rojo claroTambién PAS

Hemosiderina

aa Gránulos de Hemosiderina sin teñir, de coloración amarillo-café birrefringentes

bb Ferrocianuro de Potasio de Perls: azul

Hongos

a Mucicarmin para teñir Criptococo: hongos de coloración azul-violácea

b PAS para Criptococo (rojo)

a

b

cc Tinción de PAS evidenciandoBlastomicosis

b

c

Hongos II

a PAS esporas fungicasb PAS Coccidiomicosisen ambas, hongos se tiñenrojos

c Tinción de Gomori para Criptococo

a

b

c

Lípidos sólo en tj fijadoen formalina + cortes por congelación

a Sudan IV: adipocitos anaranjados

b Sudan III: adipocitos rojos

c Sudan black b: Lípidos azul-negruzcos

c

b

a

Mastocitos

ambas, Tinción con Azul de Toluidina:gránulos de Mastocitos azul-púrpura(metacromasia)

Mastocitos

ambas, Tinción de Giemsa, donde los gránulos de losMastocitos son teñidos púrpura

Melanina

ambas, Tinción de Fontana Massonpigmento melánico se tiñe negro

Principales colorantes

Tricrómico de Masson

Principal Uso: Colágeno.

Tiñe: Colágeno Verde. Núcleo, músculo y nervios

Rojo oscuro. Citoplasma amarillo

Van Gieson

Principal Uso: Tejido Fibroso

Tiñe: Colágeno rojo. Núcleo azul negro Músculos, nervios

amarillos (+Verhoeff) fibras elásticas

negro

Fontana Masson

Principal Uso: Melanina

Tiñe: Melanina Negro.

Plata Metenamina

Principales Usos: Hongos y Cuerpos de Donovan

Tiñe: Paredes micóticas

Negros. Cuerpos de Donovan negro

PAS

Principales Usos: Glucógeno, MPS neutros y Hongos, Membrana basal.

Tiñe: Glucógeno Diastasa lábil. MPS neutros y Paredes

micóticas Diastasa resistentes.

Reacción positiva para glucógeno y polisacáridos neutros.

Reacción positiva sólo para polisacáridos neutros.

+ DIASTASA

Azul alcián

Principal Uso: Mucopolisacáridos ácidos

Tiñe Mucopolisacáridos

ácidos (mucina) Azul.

Azul de toluidina

Principal Uso: Mucopolisacáridos ácidos

Tiñe Mucopolisacáridos

ácidos Purpura metacrómico.

Giemsa

Principales usos: Gránulos mastocitarios, MPS ácidos, eosinófilos, leishmanias, médula ósea

Tiñe: Gránulos mastocitarios,

Mucopolisacaridos ácidos Púrpura.

Eosinófilos, leishmanias Rojo.

Eosinófilos en mucosa Eosinófilos en mucosa gástricagástrica

Ferrocianuro de Potasio de Perls.

Principal Uso: Hemosiderina

Tiñe: Hemosiderina Azul

Rojo Congo

Principal Uso: Amiloide.

Tiñe Sustancia amiloide

Roja con luz, Verde con luz polarizada

Von Kossa

Principal Uso: Calcio

Tiñe: Calcio Negro.

Naftol AS-D cloroacetato esterasa

Principal Uso: Mastocitos y Neutrófilos

Tiñe: Gránulos de

mastocitos y neutrófilos Rojo

Orceína ácida de Pinkus/Giemsa

Principal Uso: Fibras elásticas.

Tiñe: Fibras elásticas

Pardo oscuro.

Histopatología es como la espada del auguriohacen ver más allá de lo evidente