Metodología para los cultivos comunes: Tipos de cultivo en

microbiología clínica: urocultivo, coprocultivo, hemocultivo,

tracto respiratorio, genital, SNC, piel y heridas. Antibiograma.

Definición. Procesamiento.

Universidad Nacional de Trujillo

Facultad de Farmacia y Bioquímica- Dpto. Bioquímica Cátedra

de Bioquímica-Asignatura Análisis Clínicos

Docente:

MSc. Anabel González Siccha

Trujillo, 10 de Abril de 2014

Cultivos

Son medios esenciales para determinar la identidad, cantidad y patogenicidad de un microorganismo.

Secreción: es el proceso por el que una célula o un ser vivo vierte al exterior sustancias de cualquier clase. También se llama secreción a la sustancia liberada. El acto de verter una secreción se llama secretar.

Ejemplo :

Secreción de heridas

Urocultivo

Coprocultivo

UROCULTIVO

•Es la determinación de elementos anormales, observación del sedimento urinario y cultivos en medios selectivos y diferenciales

RECOMENDACIONES

•El paciente no debe haber recibido antibióticos por lo

menos cinco días antes del examen.

•El recolector puede estar como máximo 30’ instalado,

mas tiempo, la muestra se considera contaminada.

MATERIALES

Muestra de orina ( torunda de algodón, Sol salina, frasco

recolector), Microscopio, Placas de Agar, agar-sangre,

Asa de siembra.

UROCULTIVO

DeterminaciónVolumen

(ml)Comentarios

BACTERIAS 0.5-1 PRIMERA ORINA DE LA

MAÑANA

HONGOS > 20 PRIMERA ORINA DE LA

MAÑANA

MICOBACTERIAS > 20PRIMERA ORINA DE DIAS

CONSECUTIVOS

ANAEROBIOS 1

ASPIRADO SUPRAPÚBICO,

ENVIAR EN UN SISTEMA DE

TRANSPORTE PARA

ANAEROBIOS

PARÁSITOS ORINA DE 24 HORAS

UROCULTIVO

METODO

Tomar la orina sin centrifugar, con el asa de siembra

calibrada, es decir q cada asada suministre 0,01 o

0,001 ml de orina.

Sembrar la orina por dispersión-agotamiento con una

asa de siembra, sobre una placa de agar sangre y otra

sobre una placa de agar Mac Conkey.

Rotular e incubar a 37ºC.

UROCULTIVO

Lectura e Interpretación

Detallar las características de las colonias en el medio

Seleccionar colonias y resembrar en los medios de diferenciación bioquímica (citrato, urea)

Se interpreta de acuerdo a las Rx bioquímicas

Para conocer el número de microorganismos en 1 ml de orina, se cuentan las colonias y el resultado se multiplica x 100, si se uso asa de 0,01 ml. (0,001ml x 1000).

Si el # de colonias sobrepasa el # de 100 000 bacterias/ ml de orina, al informar no interesa precisar el # exacto de bacterias, sólo debe informarse” más de 100 000 bact/ml de orina

Negativo

(contaminación)

De 0 – 10 000 bacterias por ml

de orina

Dudoso, discutible ( debido al

tiempo de envío de la muestra

al laboratorio)

De 10 000 – 100 000 bacterias

/ ml de orina

Positivo: Indica infección

urinaria

Recuento superior a 100 000

bacterias/ ml de orina

Lectura e Interpretación

En la orina infectada puede encontrarse:

•E. coli, P. aeruginosa, Enterococo, Citrobacter, Klebsiella

•Se acepta un recuento superior de 100,000 bacterias/ ml de orina, indica infección de las vías urinarias.

COPROCULTIVO

•Se toma muestra para identificar parásitos y otros microorganismos que causan diarrea, para valorar la función intestinal y para investigar la posibilidad de sangre oculta.

•Recomendaciones

•Se el análisis cuando presenta prurito anal, dolor abdominal y diarreas.

•Cada muestra debe contener por lo menos 4 ml ( necesaria para facilitar la detección de parásitos cuando se encuentran pocos concentrados). Los niños que controlan su evacuación deben orinar y luego defecar en el recipiente.

•No se debe dejar las muestras expuestas al aire en recipientes sin tapa. No dejar muestras para examinarlas después de 2 a 3 horas. No aceptar

COPROCULTIVO

• MATERIALES :

• Recipientes indicados, hisopo rectal estéril, cinta adhesiva transparente 12 x 1 cm (huevos oxiuros)

• METODO

• 1) Examen parasitológico: Test de Graham

COPROCULTIVO

2) Examen bacteriológico

Usar un recipiente estéril para la muestra.

Se debe recolectar antes de la administración de

cualquier antibiótico

En niños y en paciente con problemas, se usa un

hisopo embebido en el medio de transporte y se

introduce en el recto en unos 3 cm, se toma la

muestra rotando y por movimiento circular para

arrastrar la deposición.

Se coloca la muestra en un tubo estéril con medio

de transporte y se corta la porción sobrante del

palo del hisopo y se ajusta fuertemente la tapa del

tubo.

COPROCULTIVO

Lectura e Interpretación

Se puede identificar: helmintos, huevos o larvas de helmintos, protozoarios , quistes de flagelados y ciliados ( Giardia lamblia, Balantidium coli)

En estado primario de la enfermedad (salmonella y shiguella) se encuentran el cc en período agudo.

En heces con moco: Giardia lamblia.

Los coprocultivos se piden en toda diarrea desinteriforme, máxime si cursa con respuesta inflamatoria sistémica o si hay pus o sangre en las heces.

HUEVO DE ASCARIS EN

HECES

HUEVO DE TENIA EN

HECES

HUEVO DE TRICHURIS

TRICHURA ADULTO DE ECHINOCOCCUS

HEMOCULTIVO

•Es la prueba más útil y más frecuentemente usada para demostrar la presencia de microorganismos en la sangre.

•Consiste en obtener sangre en asepsia y añadirla a un frasco q contiene un medio de cultivo elegido para aislar un determinado microorganismo.

Recomendaciones

•Deben obtenerse, antes que el paciente reciba terapia

antimicrobiana.

•Tomar la muestra cuando el paciente esta con T elevada.

•Se requiere un mínimo de tres hemocultivos seriados por

pacientes antes de considerar el caso como negativo.

•El medio: corazón cerebro con agar (aerobias y

anaerobias), tioglicolato (b. anaerobias)

HEMOCULTIVO

METODO

Se extrae sangre del pliegue del codo en forma

aséptica

Sembrar 5-10 ml de sangre ( mayor cantidad

posible)

El medio de elección se calienta a 37ºC en una

estufa de cultivo, y se flamea el tapón para destruir

los microorganismos contaminantes en la

superficie.

Para llevar el frasco a la cabecera del paciente se

cubre el tapón con un algodón con alcohol.

Obtenida la muestra de sangre, se retira el algodón

se introduce la aguja de la jeringa y se expulsa la

HEMOCULTIVO

Lectura e Interpretación

Examinar el frasco diariamente durante la primera semana para detectar la aparición de turbidez en el medio, hemólisis, signos de producción de gas o crecimiento de colonias directamente encima de la sangre.

Si los cultivos son negativos deben seguir en observación hasta por 21 días antes de informarse como negativos.

Los hemocultivos “visualmente positivos” (turbidez) deben teñirse por el método de Gram y subcultivarse (resiembra)

Retirar un gota del hemocultivo utilizando una jeringa

Las secreciones que pueden determinarse son entre otras:

• Tracto Respiratorio: • Óticas: conducto auditivo externo• Vaginal : conducto cervical• Uretral• Exudados etc.

Materiales:

Hisopos de algodón estéril

Tubos de ensayos con medio de cultivo

Asa bacteriológica estéril de alambre delgado

Tubo como medio de transporte

Solución fisiológica

Secreciones

Tracto Respiratorio: Muestras

Tracto

Respiratorio

Superior

Tracto Respiratorio

Inferior

MUESTRAS

EXTRAPULMONAR

ES

Faringo-

amigdalino

Esputo, Esputo inducido Líquido pleural

Nasofaringe Aspirado

traqueobronquial

Biopsia pleural

Nasal:Staphylococcus aureus.

Punción transtraqueal Hemocultivo

Senos

paranasales

Muestras obtenidas a

través de

fibrobroncoscopia

Cavidad oral Muestras obtenidas por

Tracto Respiratorio

Método

•Se obtiene la secreción faríngea.

•Paciente sentado, abre la boca, baja la lengua y dice Ahhh.

• Introduce el hisopo evitando tocar la lengua, úvula

• Introduce el hisopo con la secreción en el medio de cultivo Ejemplo:

•El frotis faríngeo es un importante test para diagnosticar y tratar con una gran precisión las infecciones que causan los dolores de garganta, además puede prevenir la transmisión de estas enfermedades de una persona a otra.

•Por ejemplo:

•Coco gram(+) Streptococcus beta-hemolítico (S. pyogenes). (Agar sangre-azida)

•Neisseria gonorrhoeae, A. haemolyticum, C. diphteriaey H. influenzae (Epiglotitis (Agar Chapman)

•Enterobacterias: Agar Mc Conkey

•Levaduras.

Tracto Respiratorio

Secreción Ótica

Método:

•Si la pus sale al exterior, es preferible eliminarlo con algodón estéril.

•Introduce el hisopo en el CAE, en dirección oblicua de atrás hacia delante y de abajo hacia arriba.

•Introduce el hisopo con la muestra en el tubo estéril.

Secreción Vaginal

Método:

•La muestra es tomada del C. cervical.

•En gonorrea: antes o inmediatdespués de la menstruación.

•Coloca al paciente en posición ginecológica, entreabrir la vulva

• Introducir el espéculo humedecido en agua tibia en la vagina, no usar lubricante.

•Visualizar el cuello uterino •Introducir el hisopo estéril dentro del canal cervical rotándolo suavemente y en un tiempo de 10 a 30 seg, retirar y colocar en el tubo estéril.

Secreción Uretral

Método:

•Se toma la muestra a primera hora de la mañana, antes q el paciente haya orinado

•Limpiar el meato con algodón humedecido en sol. salina estéril.

•Aplicar al pene una ligera presión desde atrás, de manera que salga una gota de secreción (pus) por el meato.•Si la gota no aparece, introducir el hiposo estéril en el C.

uretral anterior hasta una profundidad de 2,5 cm aprox.

para obtener la muestra. Tomar la pus con el hisopo o asa

e introducir en el tubo con medio de transporte.

Ejem:Neiseria (Agar Thayer-Martin), Levadura (Agar-

glucosa Sabouraud, Agar selectivo para candida)

Exudados y/o heridasMétodo:

1)Muestra de Fluidos

•Lavar la lesión ulcerada con agua y jabón

•Pápula/alcohol/agua oxigenada/sol fisiológica

• Inyectar, aspirar el contenido, y retirar la jeringa

•Se inocula II a III gotas del material aspirado en tubos de medio de cultivo.

2)Muestra de Frotis

•Lavar la lesión ulcerada con agua y jabón,

desinfectar alcohol

•Presionar con firmeza los bordes de la lesión hasta q

palidezca: en el borde interno, hacer una incisión con

bisturí, levantando la piel, secar la sangre y raspar el

tejido.

Líquido Cefalorraquídeo

El LCR es un líquido producido en los ventrículos,

que son los espacios que hay dentro del SNC.

En los ventrículos hay una estructura especializada

que son los Plexos Coroideos donde se produce el

LCR.

Circula en el espacio que rodea a la médula espinal y

el encéfalo

Se produce y se reabsorbe continuamente a una

velocidad de 500 mL / día. Su volumen permanece

constante en situaciones fisiológicas.

Estudio químico del líquido

cefalorraquídeo

El estudio de química del LCR identifica químicos,

tales como las proteínas y los niveles de glucosa, que

pueden ayudar a diagnosticar ciertos trastornos y

enfermedades.

Llamado también Química del LCR.

Forma en que se realiza el examen

Una punción lumbar (espinal) es el medio más

común para recolectar una muestra de LCR y

generalmente se realiza de la siguiente manera: se

le solicita al paciente que se acueste de lado con las

rodillas encogidas hacia el abdomen y la barbilla

pegada al tórax.

Se inyecta anestesia local en la parte inferior de la

columna. Se inserta la aguja espinal generalmente

entre la tercera y cuarta vertebra lumbar y se extrae

el líquido para evaluarlo.

El paciente debe permanecer en posición horizontal

o casi horizontal durante por lo menos seis u ocho

horas después del examen.

Forma en que se realiza el examen

Si el paciente presenta un problema como deformidad lumbar

o infección, imposibilita la punción lumbar o hacerla no

confiable.

La punción cisternal implica la inserción de una aguja

debajo del hueso occipital (parte posterior del cráneo). Esto

puede ser peligroso porque la aguja se inserta cerca del

tronco encefálico.

La punción ventricular es aún menos común, pero se puede

recomendar cuando es necesario obtener la muestra de LCR

en personas con posible hernia cerebral inminente. Se realiza

generalmente en el quirófano. Se perfora un orificio en el

cráneo y se inserta una aguja directamente en el ventrículo

lateral del cerebro.

Posteriormente se lleva el LCR al laboratorio para su

evaluación.

Conteo de células de LCR

Valores normales

El valor normal de glóbulos blancos está entre 0 y 5.

El valor normal de glóbulos rojos es 0.

Significado de los resultados anormales

Un aumento en el conteo de leucocitos indica infección,

inflamación o sangrado dentro del líquido cefalorraquídeo.

Algunas de las causas son:

Absceso ,Infección aguda, Encefalitis , Hemorragia,,Esclerosis

Múltiple, Meningitis, ACV hemorrágico, Tumor,

Afecciones adicionales que este examen puede ayudar a Dx

abarcan:

Malformaciones arteriovenosa (cerebral), Delirio, Aneurisma

cerebral, Demencia,

Sindrome de Guillain-Barré, Epilepsia, Neurosífilis, Linfoma

cerebral primario, Tumor Espinal, ACV secundario a la sífilis,

Cultivo de LCR

Para detectar la presencia de bacterias, virus y hongos en el

LCR causantes de infección.

El LCR es un líquido claro que transporta productos de

neurosecreciones (químicos liberados por el tejido neural),

nutrientes, químicos en las células y cambios químicos en las

mismas.

El LCR generalmente se obtiene a través de una punción

lumbar (espinal).

El cultivo se realiza en el laboratorio.

El microbiólogo lo examina todos los días y en caso de

presentarse crecimiento (un "cultivo positivo"), se identifican los

microorganismos y se verifica la susceptibilidad a los

antibióticos, permitiendo la mejor selección de éstos.

Valores normales: Es normal la ausencia de crecimiento de

organismos (negativo).

LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO Meningitis bacteriana

LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO

ANTIBIOGRAMA

Definición:

•Es el procedimiento por el cual se determina el grado de resistencia de una bacteria al antibiótico.

•Consiste en poner en contacto al germen que hemos cultivado con distintos antibióticos para ver cual de ellos es el que mejor va con el tratamiento (selección del mejor antibiótico).

•Se cultivan en “discos” los cuales son unos receptáculos circulares con sustancias que favorecen el crecimiento de los microorganismos, pero al mismo tiempo contienen cada uno de ellos, un antibiótico conocido.

•En resumen:

•Se hace un antibiograma para ver que microorganismo ha provocado la enfermedad y como podremos vencerlo.

Método:

•Se distribuye sobre una placa el microorganismo previamente cultivado, en forma uniforme y abundante con una asa de siembra.

•Colocar los discos sobre este medio sólido con pinzas estériles, dejando 2 cm entre cada uno de ellos.

•Llevar a la estufa e incubar a 37ºC durante 12 – 18 horas.

ANTIBIOGRAMA

Antibiograma. Técnica del disco en medio sólido

Lectura:

•Se observan las zonas de inhibición ( donde no crecen los microorganismos) alrededor de los discos ( halo claro) que deben ser medidas con una regla en mm, en la parte exterior y reversa de la placa

•Una zona de inhibición indicará sensibilidad o resistencia del antibiótico, según las medidas obtenidas en mm.

•Se utilizan discos para determinados microorganismos, según sean muestras de: hemocultivo, urocultivo , coprocultivo y/ o secreciones

ANTIBIOGRAMA

Modo de acción Antibióticos

Inhibición de síntesis de la

pared

Penicilina,Bacitracina,

Novobiocina

Cicloserina,,Vancomicina,

Ristocetna,Grriseofulvina

Acción sobre la membrana Polipéptidicos básicos:

Polimixinas, Bacitracina

Tirotricina

Replicación del DNA Mitomicina, Acido nalidixico

Transcripción del DNA Actinomicina, Novobiocina

Traducción del RNAm

(síntesis de proteínas)

Inhibición de la síntesis

anomalías en la lectura del

código

Macrolidas, Sinergistina,

Lincomicina

Tetraciclina,Cloranfenicol etc.

Referencias Bibliográficas

GAW A, COWAN RA, O’REILLY D, STEWART MJ Y

SHEPHERD J. (2006): Bioquímica Clínica. 2ª Ed.

Editorial Harcourt - Elsevier, España.

http://perso.wanadoo.es/sergioram1/Microbiologia.htm

Muchas Gracias